目的:比较两种不同钙离子载体A23187和离子霉素对卵母细胞的受精率、胚胎发育潜能和临床结局的影响。方法:采用回顾性队列研究方法，收集2010年5月至2019年12月期间在中山大学附属第六医院生殖医学研究中心、因既往卵胞质内单精子注射（intracytoplasmic sperm injection，ICSI）受精失败/受精率低或严重少弱畸形精子症而采用A23187或离子霉素行人工卵母细胞激活（artificial oocyte activation，AOA）的65名患者资料。根据激活剂的不同分为A23187-AOA组和离子霉素-AOA组；再根据不同精子来源分为两个亚组：射出精子组和睾丸精子组比较组间的受精率、胚胎发育潜能及临床结局。结果:离子霉素-AOA组的双原核（two pronuclei，2PN）受精率［55.0%（116/211）］、2PN卵裂率［97.4%（113/116）］及囊胚形成率［69.1%（38/55）］均显著高于A23187-AOA组［43.3%（135/312）， P=0.008； 90.4%（122/135）， P=0.023； 45.2%（14/31）， P=0.029］。在射出精子组，离子霉素-AOA组的2PN卵裂率［97.1%（68/70）］、第3日（day 3，D3）可移植胚胎率［92.6%（63/68）］均显著高于A23187-AOA组［85.8%（91/106）， P=0.013； 73.6%（67/91）， P=0.002］；在睾丸精子组，离子霉素-AOA组的2PN受精率［55.4%（46/83）］、囊胚形成率［93.3%（14/15）］、种植率［38.9%（7/18）］和累积临床妊娠率［66.7%（6/9）］均显著高于A23187-AOA组［37.7%（29/77）， P=0.024； 20.0%（1/5）， P=0.005； 5.6%（1/18）， P=0.041； 10.0%（1/10）， P=0.019］。入组的65名患者共活产婴儿20例，均未见出生缺陷与先天畸形。 结论:对于因既往ICSI受精失败/受精率低或严重少弱畸形精子症行AOA的患者，离子霉素可以获得比A23187更好的受精率及胚胎发育潜能；对于睾丸来源的严重少弱畸形精子，与A23187相比，离子霉素可以令患者获得更好的临床结局。

目的:研究小鼠附睾上皮表达的CD147对精子成熟的影响。方法:利用小鼠附睾4-5段主细胞特异表达的Lcn5-Cre小鼠和CD147 flox/flox繁育，获得24只CD147在附睾4-5段特异敲除的小鼠（CD147 cKO-Lcn5）和21只CD147 flox/flox对照小鼠。通过计算机辅助精子活力检测（computer-aided sperm analysis，CASA）、A23187诱导精子的顶体反应以及体外受精（ invitro fertilization，IVF）等方法评估CD147对小鼠精子功能的影响。 结果:小鼠附睾头部4-5段敲除CD147后，精子活力和顶体反应的差异均无统计学意义（均 P>0.05）。IVF实验结果显示，CD147 cKO-Lcn5小鼠2-细胞率（74.03%±2.93%）相较于CD147 flox/flox小鼠（90.59%±2.39%）显著降低（ P=0.012）。 结论:附睾头部4-5段敲除CD147后对精子活力和顶体反应无显著影响，IVF后2-细胞率显著被抑制。

目的:探讨脂肪量和肥胖相关蛋白(FTO)在人近端肾小管上皮细胞(HK-2)缺血再灌注损伤(IRI)中的作用。方法:以HK-2细胞作为研究对象，用抗霉素A、A23187、2-脱氧葡萄糖构建HK-2细胞IRI模型。将细胞分为对照组及缺血再灌注组(I/R组)。实时荧光PCR(qPCR)法及Western blot法分别检测2组细胞FTO、B细胞淋巴瘤/白血病2相关X基因(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病基因2(Bcl-2)、剪切型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved Caspase-3)的mRNA及蛋白表达水平。流式细胞术检测细胞凋亡。比色法检测mRNA N 6-甲基腺苷(m 6A)甲基化水平。 结果:1．与对照组比较，I/R组细胞FTO mRNA(0.15±0.05比1.00±0.23)、Bcl-2 mRNA(0.14±0.07比1.02±0.25)相对表达量降低，Bax(3.10±0.35比1.00±0.13)、cleaved Caspase-3 mRNA(4.21±0.56比1.00±0.09)相对表达量增高，差异均有统计学意义( t＝6.28、5.84、-9.83、-9.84，均 P<0.01)。2.与对照组比较，I/R组FTO蛋白(0.69±0.14比1.37±0.02)、Bcl-2蛋白(0.50±0.12比1.25±0.21)降低，Bax蛋白(1.04±0.08比0.57±0.06)、cleaved Caspase-3蛋白(0.99±0.05比0.36±0.07)相关表达量增高，差异均有统计学意义( t＝8.10、5.49、-8.22、-12.09，均 P<0.05)。3.与对照组比较，I/R组HK-2细胞凋亡率[(61.70±1.01)%比(0.16±0.10)%]增高，差异有统计学意义( t＝63.80， P<0.01)。4.与对照组比较，I/R组总mRNA m 6A水平在总RNA中的百分比[(3.13±0.21)%比(1.10±0.26)%]增高，差异有统计学意义( t＝-10.61， P<0.01)。 结论:FTO介导的RNA m 6A修饰可能通过调控HK-2细胞凋亡影响肾脏IRI。

目的:分析Ca 2+载体A23187对卵胞质内单精子注射(ICSI)受精失败或受精低下患者受精及胚胎发育的影响。 方法:回顾性自身对照研究分析2010年1月至2018年1月期间在中山大学附属第六医院生殖医学研究中心，因前次ICSI受精失败或低下[双原核(2PN)受精率≤30%]，再次行ICSI助孕时采用Ca 2+载体A23187激活的43名患者资料。根据前次受精情况将患者分为受精失败和受精低下组、射出精子组和睾丸精子组，激活周期与既往ICSI周期自身对照。 结果:受精失败、受精低下、睾丸精子和射出精子各组激活周期的2PN受精率显著高于既往ICSI周期(分别为41.9%比0， P<0.001;44.3%比16.5%， P<0.001;36.5%比13.5%， P=0.004;43.1%比11.1%， P<0.001)；受精低下组和射出精子组激活周期每周期可移植胚胎数和优质胚胎数较既往周期提高( P均<0.05)；激活周期最终获得9例健康活产婴儿。 结论:Ca 2+载体A23187辅助激活能够提高既往ICSI受精失败或低下患者的受精率，并能改善使用射出精子ICSI患者的胚胎情况及临床结局。

目的 研究钙离子载体A23187对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激的肝星状细胞增殖、周期及凋亡蛋白caspase-3表达的影响.方法 将液氮保存下的肝星状细胞株,于37℃ 、50 mL/L CO2孵箱中进行复苏传代培养,同步化后将细胞分为5组:空白组、TGF-β1(5 ng/mL)组、TGF-β1+低、中、高剂量钙离子载体A23187组,即5 ng/mL TGF-β1刺激24 h,再分别加入1、2、4μmol/L不同剂量钙离子载体A23187作用24 h后,用M T T比色法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,蛋白免疫印记测定凋亡蛋白caspase-3表达.结果 不同浓度钙离子载体A23187均能显著抑制细胞增殖(P<0.05),且随着剂量的增加,细胞的相对增殖率(RGR)降低,低、中、高剂量组分别为85.93%、61.71%、48.43%,组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);不同处理组G1期细胞比例、S+G2期细胞比例差异均有统计学意义(P<0.05),钙离子载体A23187剂量越大,G1期细胞比例越高,S+G2期细胞比例越低(P<0.05).随着钙离子A23187浓度的增加,细胞内caspase-3蛋白表达明显增加(P<0.05).结论 钙离子载体A23187可能通过阻滞大鼠肝星状细胞由G1期进入S期和G2期,抑制细胞增殖,同时上调凋亡蛋白caspase-3的表达.

目的:评价外周血红细胞源微粒对于急性冠状动脉综合征(ACS)诊断的临床意义.方法:2015-01至2016-09在我院心内科住院并符合本研究纳入标准的患者150例,分为非冠心病(Non-CAD)组(n=45)、ACS组(n=105);ACS组患者包括急性ST段抬高型心肌梗死患者(STEMI,n=37)、非ST段抬高型心肌梗死患者(Non-STEMI,n=31)和不稳定性心绞痛患者(UAP,n=37).收集研究对象外周静脉血,离心后加入钙离子载体A23187,得到微粒.用特异性红细胞源微粒抗体(glycophorine A CD235a)标记红细胞微粒,然后经流式细胞仪进行定性定量分析.结果:ACS组外周血中红细胞源微粒水平(％)为26.20[15.90,38.00],Non-CAD组红细胞源微粒水平(％)为14.00[4.35,36.35],ACS组高于Non-CAD组(P<0.05).ACS组STEMI、Non-STEMI和UAP患者的外周血红细胞源微粒水平(％)依次为27.20(17.25,24.25)、21.50(12.76,34.90)、30.20(17.10,39.65),这三类患者之间红细胞源微粒水平的差异并无统计学意义(P>0.05).结论:ACS患者外周血红细胞源微粒水平高于Non-CAD,提示外周血红细胞源微粒水平的升高可能参与ACS发生、发展过程,可能与ACS患者发生急性血栓事件相关.

目的 观察辅助激活技术对辅助生殖技术中受精低下或失败患者成熟卵母细胞的激活效果及其胚胎发育情况.方法 回顾性分析2014年10月至2016年10月在山西省儿童医院妇幼保健院生殖医学中心助孕治疗、至少有1次ICSI受精失败或受精低下(受精率＜30％),再次行ICSI助孕时采用成熟卵母细胞激活处理的12名患者资料.12名患者共收集105枚成熟卵母细胞,全部采用钙离子载体A23187联合6-甲基氨基嘌呤(6-DMAP)进行激活处理,观察卵母细胞激活后的原核形成及胚胎发育情况.结果 激活周期的受精率及卵裂率分别为63.81％(67/105)和88.06％(59/67),较既往周期的受精率[23.96％(23/96)]和卵裂率[69.57％(16/23)]均显著升高(P＜0.05);激活周期中可移植胚胎及优质胚胎数量较既往周期均显著提高,分别为(3.02±2.51)vs.(1.41±0.58)枚和(1.70±1.36)vs.(0.31±0.52)枚(P＜0.05);既往ICSI受精低下或失败的12例患者中,卵母细胞激活处理后5例患者获得临床妊娠.结论 辅助激活技术可以改善ICSI受精失败或受精低下患者的受精率及胚胎发育质量.

目的 探讨星形胶质细胞来源的微粒对脐静脉内皮细胞内游离钙离子浓度的影响.方法 取新生24h内SD大鼠,体外原代培养脑星形胶质细胞,加入钙离子超载剂A23187处理后分步离心法提取星形胶质细胞来源微粒并鉴定;将体外常规培养的脐静脉内皮细胞分为对照组、尼膜同组及低、中、高浓度微粒处理组,尼膜同组细胞加入10μL尼膜同(0.2 mg/mL)预处理10 min,后4组细胞分别加入1×108、0.5×108、1×108、2×108个/mL微粒,对照组加入等量培养基,继续孵育10min后负载钙离子荧光探针Fluo3-AM,分别应用激光共聚焦显微镜、流式细胞术观察脐静脉内皮细胞内游离钙离子的荧光强度. 结果 原代培养星形胶质细胞稳定可靠,分步离心法可提取其来源微粒;激光共聚焦显微镜观察显示对照组细胞内荧光强度最低,微粒刺激后细胞内荧光强度升高,且随着微粒浓度的升高,细胞内荧光强度也逐渐升高,加入尼膜同提前孵育可适度降低细胞内荧光强度,但仍高于对照组;流式细胞术检测显示:与对照组、尼膜同组比较,中、高浓度微粒处理组细胞内游离钙离子的荧光强度增加,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 星形胶质细胞来源的微粒可促进脐静脉内皮细胞内游离钙离子浓度升高,尼膜同可阻断其钙内流作用.

目的 用LAD2肥大细胞系与金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)共培养,探讨SEB对肥大细胞非IgE机制的活化作用.方法 建立LAD2与不同浓度的SEB(0.01、0.1、1、10、100 μg/ml)以及A23187阳性对照、阴性对照的孵育体系,培养箱中培养30 min后,光镜下观察SEB对肥大细胞的细胞形态影响并收集各体系上清液,通过酶活性法检测肥大细胞分泌的类胰蛋白酶浓度,并通过ELISA法检测组胺水平.结果 LAD2与SEB共孵育30 min后,光镜下可见肥大细胞形态为细胞略增大、边缘模糊、突起增多,折光性下降,呈放射状毛刺样.LAD2与不同浓度SEB(0.01、0.1、1、10、100 μg/ml)共孵育30 min后,上清液检测类胰蛋白酶浓度分别为(4.116±0.651)、(5.344±0.874)、(3.806±0.459)、(1.309±0.247)、(0.310±0.199) ng/ml,SEB浓度在0.01、0.1、1μg/ml时,释放类胰蛋白酶浓度明显高于阴性对照组(P＜0.05),而SEB浓度继续增加则类胰蛋白酶浓度水平依次下降.不同SEB浓度下检测组胺水平分别为(242.409±63.915)、(522.491±73.466)、(550.926±84.466)、(334.397±33.640)、(226.527±5.678) ng/ml,SEB浓度在0.01、0.1、1μg/ml时,肥大细胞释放的组胺浓度随SEB浓度的增加而增高,明显高于阴性对照组(P＜0.05);而SEB浓度继续增加时,肥大细胞释放组胺浓度依次下降.结论 SEB可通过非IgE依赖机制直接作用于肥大细胞,使肥大细胞活化发生形态变化并释放类胰蛋白酶和组胺.

目的 探讨双黄连注射液(SHLI)对Ⅰ型超敏反应性炎症的作用.方法 以抗虾原肌球蛋白(ST)多抗血清致敏大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞RBL-2H3,次日加入SHLI 0.5％～2.0％孵育30 min,再以ST攻击诱导其脱颗粒,荧光法检测上清β-氨基己糖苷酶含量;以佛波酯(PMA)/A23187刺激人外周血嗜碱性白血病细胞KU812,用ELISA测定其分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和前列腺素E2(PGE2)等炎症介质的水平;建立抗ST多抗血清和ST诱导的小鼠Ⅰ型超敏反应足肿胀模型,观察ip给予0.5％,1.0％和2.0％SHLI 3 d对ST攻击后1 h(速发相)和24 h(迟发相)小鼠足容积的影响.结果 与模型组比较,0.5％,1.0％和2.0％SHLI均明显抑制ST所致RBL-2H3细胞β-氨基己糖苷酶的释放,荧光值分别下降16％,31％和51％(P<0.01),并显著减少PMA/A23187诱导的KU812细胞上清中炎症介质TNF-α,IL-6和PGE2的含量,TNF-α分别降低35％,55％和69％(P<0.01),IL-6分别降低29％,51％和74％(P<0.01),PGE2分别降低31％,40％和55％(P<0.01).体内实验结果显示,速发相时SHLI 2.5和5.0 mL·kg-1使足容积差分别降低69％和83％(P<0.01),迟发相时分别降低70％和100％(P<0.05,P<0.01).结论 SHLI可抑制Ⅰ型超敏反应性炎症.