目的 观察心康冲剂含药血清对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖的影响,基于GAS5-miR-21探讨其抑制CFs增殖的作用机制.方法 取SD乳鼠心肌,差速贴壁法分离CFs,采用血管紧张素Ⅱ诱导CFs增殖,在转染微小RNA-21(miR-21)过表达慢病毒、生长阻滞特异性转录本5(GAS5)沉默慢病毒后,分别用心康冲剂含药血清干预24 h.CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期,免疫荧光染色检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,RT-qPCR检测GAS5、miR-2l、磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)mRNA表达,Western blot检测PTEN、Akt、周期蛋白D1(Cyclin D1)和周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)蛋白表达.结果 与空白组比较,模型组CFs细胞活力增强,G0/G1期细胞比例减少,S期细胞比例增加,α-SMA阳性表达升高,GAS5、PTEN mRNA及PTEN蛋白表达降低,miR-21 mRNA及Akt、Cyclin D1、CDK4蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05).与模型组比较,心康冲剂组CFs细胞活力减弱,G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,α-SMA阳性表达降低,GAS5、PTEN mRNA及PTEN蛋白表达升高,miR-21 mRNA及Akt、Cyclin D1、CDK4蛋白表达降低;miR-21过表达组和GAS5沉默组CFs细胞活力增强,G0/G1期细胞比例减少,S期细胞比例增加,α-SMA阳性表达升高,GAS5、PTEN mRNA及PTEN蛋白表达降低,miR-21 mRNA及Akt、Cyclin D1、CDK4蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05).与miR-21过表达组、GAS5沉默组比较,miR-21过表达+心康冲剂组、GAS5沉默+心康冲剂组CFs细胞活力减弱,G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,α-SMA阳性表达降低,GAS5、PTEN mRNA及PTEN蛋白表达升高,miR-21 mRNA及Akt、Cyclin D1、CDK4蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 心康冲剂含药血清可抑制沉默GAS5所致miR-21、Akt表达升高,对抗过表达miR-21所致GAS5和PTEN表达降低,抑制CFs增殖周期,促进GAS5发挥"分子海绵"作用,改善血管紧张素Ⅱ诱导的CFs过度增殖.

目的:探索葛根素抑制膀胱癌(bladder cancer,BLCA)T24及5637细胞系的作用机制.方法:利用Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测法证实葛根素抑制BLCA T24及5637细胞的能力.通过串联质谱标签(Tandem Mass Tags,TMT)技术获得差异表达蛋白列表,并进行功能富集分析.通过生物信息分析筛选关键蛋白并对其进行表达分析、生存分析和上游转录因子预测.分子对接及Western blotting实验用于上游转录因子的验证.结果:CCK-8检测结果显示葛根素对T24和5637细胞系的IC50分别为218 μmol·L-1和198 μmol·L-1.功能富集分析显示差异表达蛋白主要富集在细胞周期和DNA复制通路.筛选出的关键蛋白为CDK1、CCNB1和PLK1.CHEA3网站预测关键蛋白上游转录因子为着丝粒蛋A(centromere protein A,CENPA.分子对接显示葛根素与 CENPA 的结合能为-6.3 kcal·mol-1(1 cal=4.184 0 J),Western blotting显示葛根素可显著降低CENPA的表达.结论:葛根素可能通过抑制CENPA的表达来影响蛋白CCNB1和PLK1,从而调控BLCA细胞的细胞周期或DNA复制以抑制其增殖.

目的 探讨非典型梭形细胞脂肪瘤样肿瘤(atypical spindle cell lipomatous tumour,ASLT)的临床病理学特征.方法 回顾性分析8例ASLT的临床病理、免疫表型及分子特征,采用免疫组化EnVision两步法和FISH对8例ASLT进行检测,并复习相关文献.结果 8例均可见不同比例的梭形细胞、脂肪细胞混杂分布,细胞无或轻度异型,无坏死.免疫表型:8例肿瘤细胞CD34、S-100不同程度阳性,RB均表达缺失,MDM2、CDK4阴性或灶阳性,Ki67增殖指数低.FISH检测示6例MDM2无扩增.结论 ASLT是新近命名的良性脂肪源性肿瘤亚型,具有独特的形态学、免疫表型及分子特征,预后好,正确诊断可避免临床过度治疗.

Background:The sensitivity of breast cancer cells to radiation is a key cause of locoregional recurrence after postoperative radiother-apy.Several studies have reported that microRNAs (miRNAs) are involved in the radiosensitivity of human breast cancer cells.One miRNA microarray study showed that miR-450b-5p was overexpressed 13.3-fold in patients with estrogen receptor-positive (ER+) and human epidermal growth factor receptor 2-negative (HER2-) breast cancer and no local relapse compared with local relapse patients.However,its underlying mechanism of action remains unknown.Methods:The predicted target mRNAs of miR-450b-5p were screened using the TargetScan,miRDB,and miRWalk databases.West-ern blotting,quantitative polymerase chain reaction,and dual-luciferase reporter assays explored the association between cyclin-dependent kinase 6 (CDK6) and miR-450b-5p.The cell counting kit-8 assay and flow cytometry detected the proliferation of transfected MCF7 cells.Colony formation and xenograft tumors detected the radiosensitivity of the transfected MCF7 cells.Results:Bioinformatics analysis,Western blotting,quantitative polymerase chain reaction,and dual-luciferase reporter assays demon-strated that CDK6 was the target gene of miR-450b-5p.Furthermore,in vitro and in vivo experiments showed that miR-450b-5p inhibited MCF7 cell proliferation and cell cycle progression,increased the sensitizer enhancement ratio,and decreased the volume of xenograft tu-mors after irradiation by regulating CDK6.Conclusions:This study demonstrates that miR-450b-5p enhances the radiosensitivity of hormone receptor-positive (HR+) and HER2-breast cancer cells and elucidates its mechanism.miR-450b-5p may be considered a therapeutic target in HR+and HER2-breast cancer treated with radiotherapy.

目的:探究circ-NDRG1 在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及其通过靶向miR-1271 对口腔鳞状细胞癌HSC-3 细胞恶性生物学行为的影响.方法:利用TCGA数据库分析口腔鳞状细胞癌组织中circ-NDRG1 的表达水平,分析circ-NDRG1 表达与患者预后生存期的相关性.实时荧光定量PCR(qPCR)检测circ-NDRG1 在永生化口腔角质细胞(HOK)和口腔鳞状细胞癌HSC-3、SCC-25、CAL-27、Tca-8113 细胞中的表达水平.利用Lipofectamine 2000 将NC inhibitor、circ-NDRG1 inhibitor分别转染HSC-3 细胞,分别为Anti-NC组和Anti-circ-NDRG1 组.MTT法和Transwell小室实验分别检测各组HSC-3 细胞增殖和侵袭能力.Western blot检测各组HSC-3 细胞增殖蛋白(CDK3、Cyclin C)和上皮间质转化(EMT)蛋白(ZLF8、Notch、SIX1)表达.利用TCGA数据库分析口腔鳞状细胞癌组织中circ-NDRG1 与miR-1271 表达的关系.双荧光素酶报告实验验证circ-NDRG1 和miR-1271 的靶向关系.qPCR检测各组HSC-3 细胞中miR-1271 的表达.结果:TCGA数据库显示口腔鳞状细胞癌组织中circ-NDRG1 的表达高于癌旁组织(P<0.01).口腔鳞状细胞癌患者预后生存期与circ-NDRG1 表达水平呈负相关(P<0.01).与HOK细胞相比,HSC-3、SCC-25、CAL-27、Tca-8113 细胞中circ-NDRG1 呈高表达(P<0.01).与 Anti-NC组相比,低表达 circ-NDRG1 能够抑制HSC-3 细胞的增殖能力(P<0.05)和侵袭能力(P<0.01).与Anti-NC组相比,低表达circ-NDRG1 能够下调HSC-3 细胞中CDK3、Cyclin C、ZLF8、Notch、SIX1 蛋白的表达(P<0.01).口腔鳞状细胞癌组织中circ-NDRG1 表达水平与miR-1271 表达水平呈负相关(P<0.01).circ-NDRG1 能够靶向结合miR-1271(P<0.01).与Anti-NC组相比,低表达circ-NDRG1能够上调HSC-3 细胞中miR-1271 的表达(P<0.01).结论:口腔鳞状细胞癌组织中circ-NDRG1 呈高表达,沉默circ-NDRG1 通过靶向调控miR-1271 表达抑制口腔鳞状细胞癌细胞的增殖、侵袭和EMT进程.

目的:探讨伴有脑膜上皮细胞样旋涡特征的去分化脂肪肉瘤（dedifferentiated liposarcomas with meningothelial-like whorls,DDLMW）的组织形态学、免疫组织化学及分子遗传学特征。方法:收集江苏省人民医院（南京医科大学第一附属医院）2012年3月至2018年8月诊断为DDLMW的患者6例病历资料及存档切片，采用免疫组织化学染色检测MDM2、CDK4、p16等，应用荧光原位杂交（FISH）法检测MDM2基因扩增情况，并复习相关文献。结果:患者男性3例，女性3例；4例发生于后腹膜，2例发生于纵隔，发病年龄范围40~77岁（中位年龄58岁）。大体表现为巨大单发或多发结节状肿块，镜下除了可见高分化脂肪肉瘤成分之外，均可见具有特征性的旋涡样结构，形态类似脑膜瘤；旋涡小体肿瘤细胞梭形或卵圆形，同心圆状致密排列，轻-中度异型性；此外，4例在旋涡小体的周围或中间可见化生性骨组织。免疫表型：肿瘤组织表达MDM2、CDK4、p16，不表达S-100蛋白、平滑肌肌动蛋白、SOX10、上皮细胞膜抗原、CD21、CD23、CD35；肿瘤细胞Ki-67阳性指数低。6例经FISH检测均显示肿瘤细胞伴有MDM2基因的扩增。结论:DDLMW是一种罕见的去分化脂肪肉瘤的组织学亚型，特征性的旋涡状结构并不预示其有神经束膜或滤泡树突细胞的分化，认识并熟悉其存在结合免疫组织化学及MDM2基因FISH检测有助于其诊断与鉴别诊断。

目的:评价不同浓度罗哌卡因对肺癌细胞生长和迁移能力的影响。方法:人肺腺癌细胞株A549细胞和人肺鳞癌细胞株H520细胞，采用随机数字表法分别分成4组( n＝24)：对照组(C组)和不同浓度罗哌卡因组(Ⅰ～Ⅲ组)。C组正常培养，Ⅰ～Ⅲ组分别加入罗哌卡因3、5和7 mmol/L进行处理。分别于处理24 h(T 1)、48 h(T 2)和72 h(T 3)时，采用CCK-8法测定细胞存活率；于T 1时采用流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况；采用Western blot法检测细胞周期素D1(Cyclin D1)、细胞周期调节蛋白依赖性激酶4(CDK4)、cleaved多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)和cleaved caspase-3的表达；采用划痕实验检测细胞迁移距离；分光光度法检测RhoA和Rac1活性。 结果:C组、Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组T 1～3时A549和H520细胞存活率依次降低，G0/G1期比例和凋亡比例依次增加，T 1时Cyclin D1和CDK4表达依次下调，cleaved PARP-1和cleaved caspase-3表达依次上调，细胞迁移距离、RhoA和Rac1活性依次降低( P<0.05)。 结论:罗哌卡因可浓度依赖性地抑制肺癌细胞生长和迁移能力，与诱导细胞周期阻滞和凋亡有关。

目的:探讨野黄芩素通过miRNA-496（miR-496）、基质细胞衍生因子1（SDF-1）对子宫颈癌细胞株HCC94细胞增殖及迁移能力的影响。方法:取对数生长期的HCC94细胞，分别加入20 μmol/L野黄芩素溶液（野黄芩素组）和二甲基亚砜（DMSO）（对照组）。分别采用CCK-8法和Transwell实验检测两组HCC94细胞增殖和迁移能力，实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-496和SDF-1 mRNA的相对表达量。采用生物信息学软件TarBase预测miR-496的靶基因，并用双荧光素酶报告基因实验进行验证。采用蛋白质印迹法检测相关蛋白的表达情况。结果:与对照组比较，培养第3、4、5天，野黄芩素组HCC94细胞增殖能力均降低（均 P<0.05）。野黄芩素组和对照组HCC94细胞的穿胶细胞数分别为（25±5）个和（134±19）个，野黄芩素组细胞迁移能力较对照组降低（ t=5.61， P<0.01）。对照组和野黄芩素组miR-496相对表达量分别为1.07±0.12和11.24±2.75，差异有统计学意义（ t=3.68， P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验结果证实SDF-1是miR-496的下游靶基因。野黄芩素组和对照组HCC94细胞中SDF-1 mRNA相对表达量分别为0.29±0.05和1.01±0.07，差异有统计学意义（ t=7.22， P<0.01）。与对照组比较，野黄芩素促进miR-496表达后，SDF-1蛋白、细胞增殖蛋白细胞周期蛋白依赖激酶3（CDK3）、细胞迁移蛋白Slug和Zeb-2表达均降低。 结论:野黄芩素可通过miR-496-SDF-1轴抑制子宫颈癌HCC94细胞的增殖及迁移。

目的:探讨微小RNA(miR)-5590-3p对转化生长因子βⅡ型受体(TGFBR2)基因表达的抑制作用及对胃癌细胞HS-746T侵袭和增殖的影响。方法:体外培养胃癌细胞系，实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测胃癌组织和细胞系中miR-5590-3p的表达。采用脂质体转染法分别转染miR-NC和miR-5590-3p模拟物至胃癌细胞HS-746T中，分别命名为miR-5590-3p组和miR-NC组。qRT-PCR检测转染效果。Transwell实验和CCK-8实验检测转染后胃癌细胞HS-746T侵袭和增殖能力。生物信息学软件预测和双荧光素酶报告基因系统验证miR-5590-3p的靶基因。qRT-PCR和Western blot检测转染后细胞中TGFBR2及下游蛋白的表达。结果:miR-5590-3p在胃癌组织的表达明显低于癌旁组织( P<0.01)。miR-5590-3p在胃癌细胞系的表达明显低于正常胃黏膜上皮细胞( P<0.05)，在HS-746T细胞中表达最低( P<0.01)。转染后miR-5590-3p组miR-5590-3p的表达(11.76±0.21)明显高于miR-NC组(1.06±0.21)，差异有统计学意义( P<0.01)。miR-NC组和miR-5590-3p组侵袭细胞数量分别为(101.20±15.47)个和(26.53±6.53)个，miR-5590-3p组细胞侵袭能力明显下降( P<0.01)。与miR-NC组比较，miR-5590-3p组细胞增殖能力明显降低( P<0.05)。生物信息学软件显示miR-5590-3p的靶基因是TGFBR2。双荧光素酶报告基因系统证实miR-5590-3p可靶向结合TGFBR2基因( P<0.01)。Western blot结果显示，与miR-NC组比较，miR-5590-3p组HS-746T细胞中TGFBR2的表达明显降低( P<0.01)。肿瘤侵袭相关蛋白ZEB-1、ZEB-2表达降低，细胞周期相关蛋白CDK1和Cyclin B表达降低。 结论:miR-5590-3p可通过靶向结合并调控TGFBR2基因的表达，抑制胃癌细胞HS-746T的侵袭和增殖能力。

目的:探讨四维自动左心房（左房）定量（4D Auto LAQ）分析技术在慢性肾脏病（CKD）患者的左房容积和应变功能改变评估中的作用，同时筛选出能够早期识别CKD患者左房功能受损的敏感参数。方法:回顾性队列研究。选取2022年8月—2023年3月在大连医科大学扬州临床医学院肾内科住院治疗的、未进行透析的CKD患者90例作为病例组，根据患者肾小球滤过率进行CKD分期，进而分别纳入CKD3、CKD4、CKD5组；另选取同期健康体检的志愿者34例作为对照组。采用单因素方差分析、 χ2检验和非参数检验分析基线资料的组间差异。采集并对比各组被试者左心室（左室）后壁厚度（LVPWD）、左室射血分数（LVEF）、左房前后径（LAD），左室收缩末期内径（LVESD）、左室舒张末期内径（LVEDD）、二尖瓣口舒张早期峰值流速（E峰）、二尖瓣口舒张晚期峰值流速（A峰）、二尖瓣环舒张早期运动速度峰值（e’峰）、E/A值和E/e’值等二维常规超声心动图参数，左房最小容积（LAVmin）、左房最大容积（LAVmax）、左房收缩前容积（LAVpreA）、左房最大容积指数（LAVImax）、左房射血容量（LAEV）；左房射血分数（LAEF）等4D Auto LAQ分析的左房容积参数，以及储存期纵向应变（LASr）和周向应变（LASr-c）、管道期纵向应变（LAScd）和周向应变（LAScd-c）、收缩期纵向应变（LASct）和周向应变（LASct-c）等4D Auto LAQ分析的左房应变参数。应用Pearson相关分析左房应变参数与LAEF和LAVImax的相关性，绘制受试者操作特征（ROC）曲线寻找评价左房功能的最优参数，并通过Pearson相关和Spearman相关探讨其相关性。 结果:（1）基线资料组间比较：与对照组相比，CDK3组、CKD4组和CKD5组患者血肌酐和脑钠肽水平均升高，CKD4组和CKD5组收缩压和舒张压均升高，差异均有统计学意义（ P值均<0.05）。与CKD3组相比，CKD4和CKD5组收缩压和血肌酐均升高，CKD5组脑钠肽升高，差异均有统计学意义（ P值均<0.05）；与CKD4组相比，CKD5组血肌酐和脑钠肽均升高，差异有统计学意义（ P值均<0.05）。各组被试者年龄、性别、体表面积、体质量指数比较，差异均无统计学意义（ P值均>0.05）。（2）二维常规超声心动图参数测量值组间比较：9个常规超声心动图参数中，LVEDD、LVESD、LVPWD、A峰、E/e’、LAD 4组间比较差异均有统计学意义（ P值均<0.05），LVEF、E峰、E/A 4组间比较差异无统计学意义（ P值均>0.05）。CKD4组和CKD5组LVEDD、LVPWD、A峰、E/e’、LAD均高于对照组；CKD5组LVESD低于对照组、CKD3组和CKD4组，CKD5组LVEDD高于CKD3组、E/e’高于CKD3组和CKD4组，差异均有统计学意义（ P值均<0.05）。（3）4D Auto LAQ参数测量值组间比较：CKD3组LAVmin、LAVpreA、LASr、LAScd、LASr-c、LAScd-c，以及CKD4组和CKD5组12个4D Auto LAQ参数与对照组比较差异均有统计学意义（ P值均<0.05）；CKD5组LAVmax、LAEV及LASct的绝对值高于CKD3组，LASr低于CKD3组，差异均有统计学意义（ P值均<0.05）。病例组各组LAVmax、LAVmin、LAVpreA、LAVImax、LAEV、LASct、LASct-c的绝对值均高于对照组，且随CKD分期增加而增加；LAEF及LASr、LAScd、LASr-c、LAScd-c的绝对值均低于对照组，且除LASr-c外，其他4个参数值随CKD分期增加而降低。以上各指标4组间总体比较，差异均有统计学意义（ P值均<0.05）。（4）相关性分析：LAEF与 LAScd、LASct、LAScd-c、LASct-c均呈负相关（ r=0.298、-0.219、-0.323、-0.293， P值均<0.05），与LASr、LASr-c均呈正相关（ r=0.466、0.574， P值均<0.001）；LAVImax与LASr、LASr-c呈负相关（ r=-0.322、-0.433， P值均<0.001），与LAScd-c呈正相关（ r=0.327， P<0.001）。（5）ROC曲线分析结果显示，左房应变参数LASr的ROC曲线下面积最大［AUC为0.922（95％ CI 0.877~0.967），灵敏度为67.80％，特异度为100.00％，截断值为0.175］，优于其他参数。（6）对基线资料与应变参数（LASr、LASr-c）的相关性进行分析，血肌酐、收缩压、脑钠肽与LASr的均呈负相关（ r=-0.589、-0.441， rs=-0.578， P值均<0.001）。在观察者内和观察者间进行重复性检验时，ICC>0.75，表示重复性较好。 结论:CKD患者左房容积增大，储备功能、管道功能降低，泵功能代偿性升高。LASr是早期识别CKD患者左房功能受损的敏感参数，血肌酐、收缩压和脑钠肽与左房功能受损相关。4D Auto LAQ技术是评估CKD患者左房功能的有效方法，在临床工作中具有一定的指导作用。