2023年5月在浙江省金华市永康市西溪镇寨口村附近林地中(120°17′02″E,28°58′09″N,海拔273 m)捕捉到2只雌性蝙蝠.它们体型较小,前臂长分别为30.66 mm和30.79 mm,无鼻叶,耳廓似漏斗,呈卵圆形,耳屏略呈披针形,较为细长.头骨颅全长分别是14.51 mm和14.67 mm,齿式:2.1.3.3/3.1.3.3=38,具有强壮的上颌犬齿.以上特征与暗褐彩蝠(Kerivoula furva)基本相符.基于线粒体COI基因部分序列的系统发育数据分析支持形态鉴定结果,故将这两个浙江样本鉴定为暗褐彩蝠,为浙江省翼手目分布新记录种.

目的:应用心血管磁共振成像特征追踪(cMRI-FT)技术评估长期马拉松运动对双侧心室结构和功能的影响.方法:对31名跑龄大于2年的业余马拉松运动员[年龄(40.94±4.90)岁,跑龄(5.97±0.76年)]和16名年龄和性别相匹配的健康志愿者[年龄(41.94±5.31)岁]进行cMRI检查,获得左室长轴位两腔心、三腔心、四腔心及心室短轴位电影序列图像,采用CVI42后处理软件分析和测量心脏结构和功能等相关参数,包括左、右心室舒张末期容积(EDV)、舒张末期容积指数(EDVi)、收缩末期容积(ESV)、收缩末期容积指数(ESVi)、心输出量(CO)、心输出量指数(COi)、每搏输出量(SV)、每搏输出量指数(SVi)、左室射血分数(LVEF)及左心室质量指数(LVMI).采用FT技术分析双侧心室的心肌应变参数,包括左、右心室整体及节段(基底段、中间段、心尖段)的纵向应变(LS)、周向应变(CS)和径向应变(RS).采用问卷调查形式获得马拉松运动的相关参数(跑步年限、每周跑步时长及每周跑步距离)及临床参数[静息心率和体表面积(BSA)等].采用独立样本t检验和非参数检验等方法比较2组间各项心脏定量参数的差异,并采用Spearman相关性分析对运动员组的心功能及跑步参数与心肌应变参数的相关性进行分析.结果:马拉松组的静息心率和BSA显著低于对照组(P<0.05).与对照组相比:马拉松组的左室质量分数(LVMI)、左心室舒张末期容积指数(LVEDVi)、右心室舒张末期容积指数(RVEDVi)、左心室收缩末期容积指数(LVESVi)、右心室收缩末期容积指数(RVESVi)均显著升高(P<0.001);左心室整体径向应变(LV-GRS)、左心室整体周向应变(LV-GCS)和右心室整体纵向应变(RV-GLS)均显著减低(P<0.05);左心室基底段及中间段的径向应变,左心室基底段、中间段及心尖段的周向应变均显著减低(P<0.05);但左心室整体及各节段的纵向应变无显著差异(P>0.05);两组间LVEF无显著差异(P>0.05).每周跑步距离与LVEDV(r=0.528,P=0.003)和RV-EDV(r=0.503,P=0.005)呈中度正相关.结论:在左室射血分数正常的情况下,业余马拉松运动员左、右心室的部分收缩及舒张功能升高,而左、右心室心肌应变力减低,这可认为是心室对耐力运动的良好适应.业余马拉松运动员的每周训练量与双心室容量有一定相关性.

目的:了解青海省自然疫源性病区小型兽类空间分布，并以线粒体细胞色素C氧化酶亚基I（COI）基因作为分子标记，对捕获的小型兽类进行分子水平的物种鉴定。方法:2009 - 2016年，在青海省6个州的16个市（县），采集小型兽类标本为研究对象，分析小型兽类地区分布、不同海拔分布、生态环境类型分布；采用PCR扩增小型兽类的COI基因部分片段序列（长度约650 bp），并进行同源性比较、遗传距离和系统发育分析。结果:共捕获小型兽类1 631只，分别隶属于3目7科21属30种；其中啮齿动物926只，分别隶属于5科19属25种，占56.78%。格尔木市采集的小型兽类数量最多（313只），2 800 ~ < 3 000 m的海拔段为小型兽类分布最高峰（532只），沙地草原捕获数量最多（612只）。共成功扩增292只小型兽类COI基因，同源性比对与目标序列一致。种内遗传距离为0.01% ~ 2.90%，种间遗传距离为4.00% ~ 12.00%，种间遗传距离大于种内遗传距离；属间遗传距离为13.00% ~ 21.00%，科间遗传距离为22.00% ~ 25.00%。邻接法（NJ）系统发育树显示，同种个体聚为有很高支持度的单一分支共形成20个，置信度为98% ~ 100%。结论:青海省小型兽类空间分布受地区、海拔、生态环境等自然地理因素的综合影响，且分子鉴定法可弥补形态学鉴定中的不足。

目的:利用分子分型及基质辅助激光解析串联飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术对现有的荚膜组织胞浆菌( Histoplasma capsulatum)和球孢子菌属( Coccidioides sp.)复核鉴定并聚类分析。 方法:通过多位点序列分型(multilocus sequence typing, MLST)对10株荚膜组织胞浆菌进行系统发育分析；利用特异性片段( Coi区)明确7株球孢子菌的种归属；MALDI-TOF MS技术建立荚膜组织胞浆菌和球孢子菌的MALDI-TOF MS自建数据库，并从蛋白质指纹图谱角度对两类真菌进行同源性分析。 结果:通过MLST分析，可以将10株荚膜组织胞浆菌分为3个进化支：欧洲型(Eurasia clade)、澳洲型(Australia clade)和北美2型(North American class 2 clade)，且质谱聚类分析亦将10株荚膜组织胞浆菌分为3个簇；利用特异性片段( Coi区)鉴定7株球孢子菌为波萨达斯球孢子菌，同时MALDI-TOF-MS蛋白质指纹图谱同源性分析将其归为两个簇。两类真菌MALDI-TOF MS建库后验证符合率为100%。 结论:分子鉴定后所有球孢子菌明确为波萨达斯球孢子菌，与美国流行情况一致；国内分离的荚膜组织胞浆菌归于欧洲型、北美2型和澳洲型这3个型别；MALDI-TOF MS建库数据可靠且质谱同源性分析可作为分子分型的补充，成为荚膜组织胞浆菌和波萨达斯球孢子菌鉴定和溯源的另一手段。

隐种A和隐种B是桉树枝瘿姬小蜂Leptocybe invasa两种重要的全球入侵隐种,对多国林业生产造成了严重危害.由于桉树枝瘿姬小蜂体型微小,且无法从形态上区分隐种类型,给该害虫的防治造成困难.本研究基于线粒体DNA细胞色素C氧化酶亚基1(mtDNA COI)基因序列的种特异性(species-specific COI,SS-COI)PCR方法,研究桉树枝瘿姬小蜂隐种快速分子检测技术.基于隐种A、B的COI序列分别设计特异性SS-COI引物各1对(AF/AR和BF/BR).使用这两对引物扩增同一桉树枝瘿姬小蜂样品DNA,即可有效进行隐种鉴定,同时两对引物也能互相验证鉴定结果.引物鉴定灵敏性检测结果显示,AF/AR与BF/BR均具有较高的鉴定灵敏性,其对DNA的有效鉴定浓度阈值分别为11.42 pg/μL和28.32 pg/μL.本研究开发的桉树枝瘿姬小蜂隐种A、B的快速鉴定方法解决了桉树枝瘿姬小蜂入侵地区隐种鉴别的难题,极大缩短鉴定时间、降低鉴定费用,为进一步探究桉树枝瘿姬小蜂隐种A、B的生物学差异以及它们对不同抗性品种桉树的适应能力提供技术参考.

目的 建立一种龟甲配方颗粒高分辨熔解曲线(HRM)技术鉴别方法.方法 根据乌龟Chinemys reevesii及其混伪品的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(cytochrome oxidase subunitⅠ,COI)基因序列上的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)位点设计鉴别引物,扩增产物直接进行HRM分析,并优化反应体系,根据最佳条件进行适用性验证.结果 在模板DNA质量浓度为0.62～374.88 ng/μL、引物浓度为0.1～0.4 μmol/L、退火温度为62℃、循环数为45个的条件下,龟甲饮片和配方颗粒的熔解曲线为单峰,其Tm均值分别为(82.39±0.09)、(82.38±0.05)℃,而混伪品和醋龟甲配方颗粒未有扩增.结论 该研究建立的高分辨熔解曲线鉴别方法可快速鉴别龟甲原料和配方颗粒的真伪,以及区分其生品和炮制品配方颗粒,为龟甲配方颗粒的质量标准研究提供了理论依据.

为探究茶树害虫山香圆平背粉虱(Crenidorsum turpiniae)的遗传多样性,掌握山香圆平背粉虱的遗传分化现状及精准防控提供理论依据,通过基因组DNA提取、PCR扩增与测序,测定贵州省 11 个不同地理区域的山香圆平背粉虱种群mtDNA COI基因序列片段,开展基因序列特征、单倍型及遗传多样性、遗传分化与基因交流、分子变异和单倍型系统发育分析.结果表明,山香圆平背粉虱mtDNA COI基因序列片段扩增长度均为 658 bp,序列具有明显的A+T偏倚性,共定义 10 个单倍型.贵州茶园山香圆平背粉虱总群体遗传多样性较高,表现出高单倍型多样性(Hd=0.800)和高核苷酸多样性(Pi=0.0670).11 个地理种群的山香圆平背粉虱总群体遗传分化程度高(Fst = 0.9203),基因交流水平低(Nm= 0.04).AMOVA 分析显示,山香圆平背粉虱的遗传变异主要来自组间(FCT= 0.9129);中性检验与错配分布分析综合表明,山香圆平背粉虱近期未发生过明显扩张现象;单倍型系统发育分析及中介网络图聚类结果均表明,山香圆平背粉虱聚为 3 分支,分化枝可能已达物种水平.

目的 利用COI序列对中药材蝉蜕Cicadae Periostracum及其混淆品进行DNA条形码鉴定研究,为蝉蜕药材的快速准确鉴定提供新的技术手段.方法 收集全国市售蝉蜕药材、基地自采蝉蜕及其混淆品总45份样本,同时采集江苏徐州黑蚱养殖基地不同树种中蝉卵样品5份作为对照.提取DNA,进行PCR扩增及双向测序,测序结果采用DNAMAN和SnapGene进行拼接校对,运用MEGA11.0进行比对分析,计算种内及种间Kimura2-Parameter(K2P)遗传距离并构建邻接法(neighbor-joining,NJ)系统发育树.结果 黑蚱种内遗传距离远小于种间最小遗传距离,NJ树结果显示,黑蚱蝉蜕样品全部聚集为独立的一支,支持率为99％.混淆品样品分别聚集为单独的一支,支持率均大于90％,表明基于COI序列的DNA条形码技术可以有效鉴别蝉蜕药材真伪.结论 应用COI序列作为DNA条形码能够准确有效地鉴别蝉蜕及其混淆品.

目的 以线粒体细胞色素C氧化酶亚基(COI)基因为目的基因,利用DNA条形码技术对未知鼠样本进行鉴定.方法 采用夹夜法对九江市武宁县宋溪镇某村的鼠密度进行调查,经形态学初步鉴定后,以捕获的 1 只无法明确鉴定的大型鼠样本为对象,提取基因组DNA并采用COI基因通用引物BatL5310 和R6036R进行PCR扩增及测序,将测序结果在NCBI网站进行BLAST比对,采用MEGA7 软件选择最大似然法构建系统发育树.结果 共捕获小型兽类7 只,密度为3.38%,经形态学鉴定有褐家鼠2 只,黑线姬鼠2 只,臭鼩鼱2只,形态学初步鉴定为青毛巨鼠或小泡巨鼠的未知鼠1 只,提取的未知鼠样本DNA通过PCR成功扩增出COI基因目的条带,与NCBI基因库中小泡巨鼠(KP995219)序列同源性高达 100%,系统发育树显示该鼠样本与小泡巨鼠(KP995219、KP995203)处于同一分支,遗传距离分别为 0、0.0016,而青毛巨鼠(NC_036730)单独处于另一分支,遗传距离较远.结论 赣北地区首次报道小泡巨鼠,采用COI基因的DNA条形码技术可快速、准确的进行鼠种鉴定,有助于弥补非常见鼠形态学鉴定困难的不足.

目的 建立蒙成药安神补心六味丸组成药材基原系统化的鉴定方法.方法 通过高通量测序技术对蒙成药安神补心六味丸进行总DNA的提取,并对其COI及ITS2序列进行PCR扩增,双端测序后进行序列的整理和聚类分析,并与组成安神补心六味丸中牛心的COI序列,木香、丁香、广枣、肉豆蔻药材的ITS2序列进行测序的结果利用邻接法构建系统树.利用薄层色谱方法以正己烷-石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-冰醋酸(6∶2∶3∶0.2)为展开剂.展开后烘箱烘干,置紫外光灯(254 nm)下检视.最后对蒙成药安神补心六味丸进行光学显微鉴定观察,确定其显微特征,并将显微特征与组成中药显微特征进行对应.结果 基于对蒙成药安神补心六味丸的ITS2序列进行高通量测序后得到高质量序列共138 633条,经过比对与安神补心六味丸组成药味相关的序列共584条,分别为木香(Aucklandia lappa)、南酸枣(Choerospondias axillaris)、丁香(Eugenia caryophyllata),均为木香、广枣、丁香药材的正品植物来源.在新鲜牛心中成功提取到COI序列,但未提取到安神补心六味丸成药及干燥牛心的COI序列,木香、丁香、广枣、肉豆蔻的ITS2序列成功扩增,扩增的ITS2序列与高通量测序比对后获得的OTU代表序列在系统树与木香、丁香、广枣分别聚为一支.安神补心六味丸与枫香脂及对照药材在相同条件下,薄层色谱同一处出现斑点.在对成药进行显微鉴定后发现与组成药味一致的显微特征.结论 结果表明以ITS2序列作为条形码,利用高通量测序的ITS2序列技术为主要鉴别手段,结合薄层色谱及对蒙成药显微特征观察,可以对安神补心六味丸中6种中药的基原进行准确的鉴别.