目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)调控Kruppel因子5(Klf5)在预防移植静脉术后狭窄的作用及机制。方法:建立新西兰大白兔(海军军医大学动物实验中心提供)静脉动脉化动物模型，按完全随机分为造模组(A、B、C组分别为饲养2、4、8周)和ATRA组(D、E、F组分别为饲养2、4、8周，鼻饲ATRA10 mg/d)、空白对照组(G组)，各6只。分别获取移植静脉标本，行苏木精-伊红染色及免疫组化检验。建立人脐静脉平滑肌细胞(SMC)KLF5过表达细胞模型，以ATRA干预，划痕实验、细胞增殖实验(CCK-8)明确SMC增殖及迁移情况；免疫共沉淀明确ATRA对Klf5-RARa结合的阻断作用。两组间计量资料采用两独立样本 t检验，多组间计量资料采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD- t检验方法。 结果:各组管径：A组(107.58±18.11) μm，B组(144.65±26.10) μm，C组(160.28±28.06) μm，D组(78.42±9.00) μm，E组(102.75±16.47) μm，F组(117.47±38.06) μm，G组(35.73±6.04) μm。组间比较，建模组各组(A、B、C各组)明显高于空白对照组(G组)( t＝5.81、8.81、10.08， P<0.01)，同期建模组各组明显高于ATRA组( t＝2.06、2.96、3.03， P<0.05)。以染色指数法计算免疫组化结果，建模各组细胞核增殖抗原(Ki-67，2周3.07±0.64，4周3.67±0.81，8周1.93±0.41)表达明显高于对照组( t＝6.93、9.37、4.16， P<0.01)，也高于同期ATRA组(2周2.87±0.52，4周3.60±1.21，8周2.10±0.24， t＝4.91、6.66、2.14， P<0.05)。实验组Klf5表达(2周4.43±0.70，4周5.67±1.18，8周3.03±0.98)明显高于对照组( t＝7.27、9.09、3.83， P<0.01)，建模组与ATRA组间KLF5(2周4.43±0.70，4周5.67±1.18，8周3.03±0.98)表达差异无统计学意义( t＝0.49、0.17、0.42， P>0.05)。CCK-8实验：72 h Klf5组吸光度( A)值(1.54±0.20)高于其余3组( t＝5.62、5.84、8.31， P<0.01)，Klf5+ATRA组(1.02±0.14)高于ARTA组(0.80±0.07， t＝2.47， P<0.05)，对照组(1.04±0.13)高于ATRA组( t＝2.70， P<0.05)。划痕实验：以迁移前后划痕距离的比值，klf5组0.098±0.006，对照组0.404±0.009，ATRA组0.597±0.014，Klf5+ATRA 0.265±0.012，组间比较ATRA组高于其余3组( t＝4.81、6.12、8.41， P<0.01)，Klf5组低于其余3组( t＝-8.37、-10.16、-12.25， P值均<0.01)。免疫共沉淀发现Klf5-RARa可以结合形成复合物，以不同浓度ATRA电泳 A值进行统计分析，50 μmol/ml组 A值(1.38±0.15)及70 μmol/ml组 A值(1.19±0.12)明显低于其余各组(对照组1.88±0.16、10 μmol/ml组1.81±0.10、30 μmol/ml组1.76±0.13， t＝-5.60、-5.10、-4.80、-7.10、-6.80、-6.40， P<0.01)。 结论:ATRA可以通过对KLF5-RARa结合的阻断作用来抑制平滑肌细胞增殖及迁移，进而预防静脉移植术后血管狭窄。

目的 探讨microRNA-933(miRNA-933)对人肝星状细胞系LX-2细胞凋亡和增殖的调控作用及其机制.方法 首先以人肝组织为研究对象,利用基因芯片技术,检测肝硬化与慢性乙型肝炎肝组织相较于正常肝组织中差异表达的基因,并从中筛选差异表达显著的miRNA,从而确定研究对象为miRNA-933.进而以人肝星状细胞系LX-2为研究对象,利用miRNA-933分子模拟剂(miRNA-933 mimic)与抑制剂(miRNA-933 siRNA),构建LX-2过表达与敲减模型,并以转染mimic-NC(过表达)或siRNA-NC(敲减)的细胞作为阴性对照.使用实时荧光定量PCR(qPCR)和Western Blot技术,检测miRNA-933与活化标志蛋白的表达水平;随后采用细胞增殖实验、流式细胞术等技术,检测miRNA-933对细胞凋亡、增殖和活化的影响,并探讨其机制.计量资料两组间比较采用成组t检验,多组间比较采用单因素方差分析,并经过Bonferroni校正.结果 基于基因芯片检测结果,最终筛选出18个显著差异表达的miRNA,其中miRNA-933表达显著下调(P<0.05).miRNA-933 mimic与siRNA转染LX-2细胞后,结果显示,与阴性对照组相比,miRNA-933 siRNA显著下调miRNA-933的表达(P=0.000 7),而miRNA-933 mimic显著上调miRNA-933的表达(P=0.000 3);Western Blot和qPCR检测结果表明,miRNA-933 siRNA显著上调胶原蛋白Ⅰ(Collagen Ⅰ)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达(P值均<0.001),而miRNA-933 mimic显著抑制Collagen Ⅰ和α-SMA的表达(P值均<0.05).流式细胞术检测结果显示,与阴性对照组相比,miRNA-933 siRNA显著下调LX-2细胞凋亡率(P=0.031 9),miRNA-933 mimic显著上调LX-2细胞凋亡率(P=0.005 5);Western Blot检测结果表明,与阴性对照组相比,miRNA-933 siRNA可以抑制LX-2细胞中胱天蛋白酶3(Caspase-3)和多聚ADP核糖聚合酶1(PARP-1)的表达(P值分别为0.006 7、0.003 0),上调B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达(P=0.002 0),而miRNA-933 mimic可显著上调Caspase-3(P=0.011 8)和PARP-1(P=0.049 5)的表达,下调Bcl-2的表达(P=0.002 1).细胞增殖实验结果显示,与阴性对照组相比,miRNA-933 siRNA可促进LX-2细胞增殖(P=0.011 5);相反miRNA-933 mimic可抑制LX-2细胞增殖(P=0.001 2).Western Blot和qPCR检测显示,miRNA-933 siRNA显著抑制Kruppel样因子6(KLF6)的表达,进而下调活化转录因子4(ATF4)、活化转录因子3(ATF3)、C/EBP同源蛋白(CHOP)蛋白的表达,而miRNA-933 mimic会促进以上蛋白的表达(P值均<0.05).结论 miRNA-933可能通过促进LX-2细胞中KLF6/ATF4/ATF3/CHOP/Bcl-2信号轴的激活,进而促进细胞凋亡,抑制细胞的活化和增殖.

目的 观察多囊卵巢综合征(PCOS)患者血清Kruppel样因子7(KLF7)、分泌型卷曲相关蛋白 5(SFRP5)的表达水平,并分析其与代谢、性激素指标的相关性.方法 将喀什地区第一人民医院自2022 年12 月至2023 年12 月收治的100 例PCOS患者纳入PCOS组,另将同期30 名健康成年女性纳入非PCOS组.比较两组的血清KLF7 和SFRP5 水平,以及代谢、性激素指标;采用Pearson法分析PCOS患者血清KLF7、SFRP5 水平与代谢、性激素指标的相关性.结果 PCOS组血清KLF7水平高于非PCOS组,SFRP5 水平低于非PCOS组,差异有统计学意义(P<0.05).PCOS组总胆固醇、低密度脂蛋白、甘油三酯、空腹胰岛素、2h胰岛素、空腹血糖、2h血糖水平均高于非PCOS组,高密度脂蛋白水平低于非PCOS组,差异有统计学意义(P<0.05).PCOS组催乳素、促黄体生成素、雌二醇水平均高于非PCOS组,促卵泡生成素水平低于非PCOS组,差异有统计学意义(P<0.05).PCOS患者血清KLF7 水平与总胆固醇、低密度脂蛋白、甘油三酯、空腹胰岛素、2h胰岛素、空腹血糖、2h血糖、催乳素、促黄体生成素、雌二醇水平呈正比(P<0.05),与高密度脂蛋白、促卵泡生成素水平呈反比(P<0.05);SFRP5 水平与总胆固醇、低密度脂蛋白、甘油三酯、空腹胰岛素、2h胰岛素、空腹血糖、2h血糖、催乳素、促黄体生成素、雌二醇水平呈反比(P<0.05),与高密度脂蛋白、促卵泡生成素水平呈正比(P<0.05).结论 PCOS患者KLF7 高表达,SFRP5低表达,两者表达水平与代谢、性激素指标密切相关.

目的:检测子宫内膜样腺癌组织中微小RNA-181c-5p(miR-181c-5p)和Kruppel样因子 6(KLF6)的表达,探讨其相关性及临床意义.方法:选择 49 例子宫内膜样腺癌行手术治疗的患者作为观察组,选择 49 例增生期子宫内膜组织作为对照组.应用实时荧光定量 PCR 法检测术后组织中 miR-181c-5p 的表达,应用免疫组化方法检测KLF6 的表达.应用线性相关分析观察 miR-181c-5p 和 KLF6 的关系,应用 K-M 生存分析观察 miR-181c-5p 和KLF6 与术后生存时间的关系.结果:观察组 miR-181c-5p表达量明显低于对照组(P<0.05),KLF6 的阳性率明显低于对照组(P<0.05).观察组 miR-181c-5p与KLF6 表达与肿瘤肌层浸润深度、宫颈管累犯及病理分级密切相关(均P<0.05),且两者具有正相关性,两者的表达与术后生存时间相关(均 P<0.05).结论:子宫内膜样腺癌中miR-181c-5p和KLF6 均异常表达且具有正相关性,联合检测 miR-181c-5p和KLF6 的表达对判断肿瘤预后可能有一定价值.

目的:探讨 O-GlcNAc转移酶(OGT)通过 O-GlcNAc 糖基化修饰稳定 Kruppel 样因子 5(KLF5)蛋白并上调细胞周期素D1(CCDN1)表达参与结直肠癌(CRC)发生、发展的分子机制.方法:采用生物信息学方法分析KLF5 mRNA和蛋白在CRC组织中的表达.采用实时荧光定量 PCR(RT-qPCR)检测 CRC 细胞中 KLF5 的表达水平,CCK-8 法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期.通过生物信息学方法分析KLF5 的靶基因和潜在结合位点,并通过双荧光素酶实验证实 KLF5 蛋白可与 CCDN1 结合,采用 RT-qPCR 检测 KLF5 对 CCDN1 mRNA 的影响.抑制KLF5 并过表达CCDN1,分析KLF5 是否通过正调控CCDN1 促进细胞增殖和促进细胞进入 G1 期.采用生物信息学分析KLF5 蛋白是否存在 O-GlcNAc 糖基化位点,OGT mRNA 和蛋白在结直肠癌组织中的表达以及OGT和KLF5 表达的相关性.使用 OGT 抑制剂 OSMI-1 处理 CRC 细胞,蛋白质免疫印迹法(Western blot)分析KLF5 蛋白表达,O-GlcNAc糖基化蛋白表达水平通过免疫荧光实验检测.并用 Western blot法检测 OSMI-1 和放线菌酮(CHX)处理后KLF5 蛋白的稳定性.最后抑制 OGT并过表达 KLF5,分析 OGT 是否通过正调控 KLF5 促进CCDN1 表达.结果:KLF5 mRNA和蛋白在CRC中高表达.KLF5 在CRC细胞中高表达并可促进细胞增殖和促进细胞进入 G1 期.CCND1 是KLF5 的靶基因并可与CCND1 靶向结合.KLF5 通过正调控 CCND1 促进细胞增殖和促进细胞由 G1 期向S期转化.生物信息学分析证实KLF5 蛋白存在O-GlcNAc糖基化位点.OGT mRNA和蛋白在CRC中高表达,并且 OGT 和 KLF5 表达水平呈正相关.抑制 OGT 表达可降低 O-GlcNAc 糖基化蛋白和KLF5 蛋白水平,并可降低KLF5 蛋白的稳定性.OGT 通过正调控 KLF5 上调 CCND1 表达.结论:KLF5 通过正调控CCND1 促进CRC细胞增殖,并促进细胞进入 G1 期.OGT 通过 O-GlcNAc 糖基化修饰稳定 KLF5 并上调CCND1表达.

目的 探讨Kruppel样转录因子9(KLF9)在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义.方法 搜集63例具有完整临床病理资料及5年以上随访资料的石蜡包埋上皮性卵巢癌组织及正常卵巢上皮组织,采用荧光定量PCR技术检测KLF9 mRNA在上皮性卵巢癌及正常卵巢组织中的表达水平,应用免疫组化法分析KLF9在上皮性卵巢癌组织和正常卵巢组织的表达情况,分析KLF9表达水平与临床病理参数和患者预后的关系.结果 63例癌组织中KLF9 mRNA的表达值为(0.597±0.332)显著低于正常卵巢组织中KLF9 mRNA的表达(1.354±0.471),差异有统计学意义(P＜0.01).上皮性卵巢癌组织中KLF9高表达15例(23.8％),低表达48例(76.2％);在正常卵巢组织中KLF9高表达18例(60.0％),低表达12例(40.0％),差异有统计学意义(P＜0.01).癌组织中KLF9低表达与上皮性卵巢癌患者的临床分期、淋巴结转移、腹腔积液明显相关(P＜0.05).KLF9mRNA高表达组中位生存时间46.8个月(95％ CI:26 ～83个月)显著高于低表达组32.6个月(95％ CI:12～74个月),差异有统计学意义(JP＜0.01).肿瘤组织中KLF9阳性细胞高表达组的中位生存时间为50.2个月(95％ CI:32 ～84个月)明显高于KLF9低表达组31.1个月(95％ CI:12～79个月),差异有统计学意义(P＜0.01).Cox多重回归分析表明KLF9 mRNA和KLF9阳性细胞低表达是影响上皮性卵巢癌预后不良的独立指标.结论 KLF9在上皮性卵巢癌组织中表达下调,与上皮性卵巢癌患者预后不良相关.

目的:研究神经母细胞瘤中KLF4、UBE2C表达水平与细胞黏附、迁移的相关性.方法:选择2014年5月~2017年2月期间在恩施土家族苗族自治州中心医院诊断为神经母细胞瘤的56例患儿作为研究的NB组并收集病灶组织,选择同期因严重肾盂积水在恩施土家族苗族自治州中心医院就诊的38例患儿作为研究的对照组并收集正常肾上腺组织.测定临床组织样本中KLF4、UBE2C的mRNA表达量及蛋白表达量以及细胞黏附分子、迁移分子的蛋白表达量.结果:NB组神经母细胞瘤组织内KLF4的mRNA表达量及蛋白表达量均显著低于对照组,UBE2C的mRNA表达量及蛋白表达量均显著高于对照组;NB组神经母细胞瘤组织内 PDLIM1、AMF、GPx1、L1CAM、Nrg1、RANK、RANKL、Inβ1、MTA1、MMP9的蛋白表达量均显著高于对照组且与KLF4的蛋白表达量呈负相关,与 UBE2C的蛋白表达量呈正相关.结论:神经母细胞瘤中低表达的KLF4以及高表达的UBE2C能够促进肿瘤细胞的黏附和迁移.

Kruppel样因子(Kruppel-like factor,KLF)家族是一类广泛存在于生物体内的具有锌指结构的转录因子蛋白,可以结合到目的DNA上,在细胞分化和增殖方面进行转录调节[1].KLF家族共有17个因子,按照发现的时间分别命名为KLF1～l7.KLF因子C-末端含有3个高度保守的Cys2/His2锌指结构,优先结合富含GC核苷酸的靶序列或CACCC片段,而KLF因子N-末端结构的不同导致功能也不尽相同[2].已有研究报道,KLF家族成员与许多肿瘤的发生相关,例如KLF2与结肠癌[3]、乳腺癌[4],KLF5与食管癌[5],KLF10与胰腺癌[6].通过综述文献我们发现KLF家族中5个因子(KLF2、KLF 4、KLF 5、KLF 6和KLF 8)与泌尿系肿瘤关系密切,本文就KLF与泌尿系肿瘤相关性的研究现状综述如下.

目的 探索Kruppel样转录因子2(KLF2)对肝窦内皮细胞(LSEC)体外迁移的影响及其机制.方法 采用慢病毒感染的方式构建过表达和干扰KLF2表达的LSEC(分别为LV5-KLF2和LV3-shKLF2),采用荧光定量PCR和蛋白印迹法检测病毒感染效率,未处理LSEC作为野生对照(WT)组.采用Transwell实验检测KLF2表达的改变对LSEC迁移能力的影响,荧光定量PCR和蛋白印迹法检测促迁移因子血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)的表达,蛋白印迹法检测迁移相关信号通路蛋白Src,P38 MAPK,P44/42 MAPK的表达.结果 Transwell实验计数12 h细胞迁移数,过表达KLF2可抑制LSEC的体外迁移能力,LV5-KLF2组LSEC细胞迁移数目较LV5-NC和WT组少[(35.6±1.4)、(71.3±2.4)和(69.3±1.6)],差异均有统计学意义(均P ＜0.001).而下调KLF2表达后,LV3-shKLF2组LSEC的细胞迁移能力较LV5-NC和WT组增强,细胞迁移数目较对照组多[(189.5±5.4)、(83.4±2.5)和(82.2±3.4)],差异均有统计学意义(均P＜0.001).荧光定量PCR和蛋白印迹法证实过表达KLF2可抑制LSEC中促迁移因子VEGFR2的mRNA和蛋白水平的表达,而干扰KLF2则上调VEGFR2的mRNA和蛋白表达水平.蛋白印迹结果提示过表达KLF2,抑制LSEC中信号通路蛋白p-Src、p-P38 MAPK及p-P44/42的表达,而干扰KLF2则促进LSEC中上述磷酸化蛋白的表达.结论 KLF2可能通过Src/MAPK通路抑制LSEC的体外迁移.

目的 研究汉防己甲素(TET)对先天性膈疝(CDH)大鼠模型胎仔肺内Kruppel样因子5(KLF5)和生存素(Survivin)表达的影响.方法 采用简单随机分组,11只SD雌性大鼠配种成功后随机分为3组:对照组(NC,3只)、膈疝组(MC,4只)、膈疝TET干预组(MT,4只).MC和MT组在孕9.5d给予除草醚(Nitrofen) 125 mg/只灌胃,MT组在孕18.5、19.5、20.5 d连续3d给予30 mg/kgTET灌胃,孕21.5 d对孕鼠剖宫产取胎鼠,观察3组胎鼠膈疝形成情况,记录肺重与体重比(Lw/Bw),苏木精-伊红(HE)染色观察各组胎肺发育情况,行免疫组化染色定性分析各组胎肺中KLF5、Survivin的表达,Western blotting法定量检测各组胎肺中KLF5、Survivin蛋白的表达.单因素方差分析用于比较3组数据的组间差异,卡方检验用于比较组间致畸率的差异.结果 MC组和MT组膈疝致畸率分别为56.1％ (37/66)、50.0％ (28/56),组间差异有统计学意义(x2=122.00,P＜0.05).NC、MC、MT 3组Lw/Bw差异无统计学意义(F=0.98,P=0.376).HE染色显示MC组肺血管及肺泡发育相关指标均较NC组差,MT组则介于NC与MC组之间.免疫组化显示KLF5在NC、MC、MT3组的阳性颗粒平均光密度值分别为0.194 8±0.007 4、0.212 1±0.004 9、0.1927±0.001 9,组间差异有统计学意义(F=14.53,P=0.002);Survivin在3组的阳性颗粒平均光密度值分别为0.185 2±0.008 7、0.209 2±0.003 6、0.192 8±0.007 5,组间差异有统计学意义(F=12.31,P=0.003).KLF5与Survivin阳性颗粒平均光密度间呈正相关(r=0.993,P=0.039).Western blotting结果显示KLF5和Survivin在3组胎鼠肺组织中表达差异均有统计学意义(F=4.29、10.13,均P＜0.05).结论 Nitrofen诱导的大鼠CDH动物模型,产前给予TET灌胃促进胎鼠肺实质和血管发育,可下调KLF5、Survivin在胎肺中的表达,这可能是TET改善CDH肺发育不良的机制.