目的:探讨外周血中REG3α、sST2、TNFR1对儿童异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)术后aGVHD危险分层及预后评估的价值.方法:选取2020年1月至2022年3月在郑州大学第一附属医院儿科行allo-HSCT后发生aGVHD的70例患儿作为研究对象,将并发Ⅰ-Ⅱ度aGVHD的50例患儿作为轻度aGVHD组,并发Ⅲ-Ⅳ度aGVHD的20例患儿作为重度aGVHD组,选取同期本院健康体检儿童30例作为对照组,通过Luminex平台检测aGVHD发生时REG3α、sST2、TNFR1蛋白表达水平,采用单因素方差分析比较3组间差异;根据aGVHD治疗28 d内病情转归情况将患儿分为预后良好组58例,预后不良组12例,利用ROC曲线分析REG3α、sST2、TNFR1对aGVHD患儿预后的评估价值.结果:与对照组相比,轻度aGVHD组、重度aGVHD组外周血中REG3α、sST2、TNFR1水平均显著升高(P＜0.05),且重度aGVHD组显著高于轻度aGVHD组(P＜0.05);与预后良好组相比,预后不良组aGVHD患儿外周血中REG3α、sST2、TNFR1水平均显著升高(f=9.27,3.33,2.97;P＜0.01);ROC曲线分析结果表明,REG3α、sST2和TNFR1联合检测评估aGVHD患儿预后的曲线下面积(AUC)、灵敏性、特异性均高于各项指标单独检测及各指标两两组合检测.结论:REG3α、sST2、TNFR1表达水平与aGVHD严重程度相关;REG3α、sST2和TNFR1联合对于aGVHD患儿预后评估有较高的临床价值,有望为临床上评估aGVHD患儿预后提供可靠参考.

目的:构建具有损伤再生能力的新型小肠类器官，体外模拟肠道损伤、再生和修复过程。方法:分离6～8周龄、18～24 g无特定病原体动物级C57BL/6小鼠回肠黏膜隐窝结构，设计ENR、ENR＋肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和8C培养体系，分别构建肠道稳态、炎症损伤和损伤再生条件下的小肠类器官并观察形态。通过免疫荧光染色检测类器官包含的细胞类型和空间排布，以及损伤再生基因凝集素蛋白( Clu)、膜联蛋白A1( Anxa1)、干细胞抗原1( Sca1)和小鼠再生胰岛衍生蛋白3β( Reg3 b)的蛋白质表达情况。通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测 Clu、 Anxa1、 Sca1、 Reg3 b的mRNA表达情况。统计学方法采用独立样本 t检验。 结果:8C和ENR培养体系下的小肠类器官均包含肠道干细胞、杯状细胞、潘氏细胞和肠道内分泌细胞，细胞空间排布与肠上皮基本一致。8C培养体系下的新型小肠类器官的扩增能力较ENR、ENR＋TNF-α培养体系下的小肠类器官明显增强，生长速度更快，结构更大、更复杂。qRT-PCR结果显示，8C培养体系下的新型小肠类器官再生基因 Clu、 Anxa1和 Sca1的mRNA相对表达水平均高于ENR和ENR＋TNF-α培养体系(0.68±0.31比0.20±0.07、0.36±0.19，0.48±0.13比0.07±0.02、0.18±0.11，0.56±0.20比0.02±0.01、0.08±0.04)，差异均有统计学意义( t＝4.82、2.77，8.62、4.89，8.58、7.50；均 P<0.05)。免疫荧光检测显示，8C培养体系下的新型小肠类器官再生基因 Clu、 Anxa1、 Sca1和 Reg3 b的蛋白质表达水平均高于ENR、ENR＋TNF-α培养体系(31.62±1.69比9.73±2.39、15.11±2.16，42.65±1.85比19.70±1.18、24.97±2.82，63.80±2.73比37.10±1.59、43.27±2.53，53.26±1.84比27.75±3.78、33.16±3.50)，差异均有统计学意义( t＝12.95、10.41，18.13、9.09，14.63、9.56，10.51、8.80；均 P<0.001)。 结论:新型培养体系下建立的小肠类器官具备损伤再生特征，为研究上皮组织器官再生提供了新的体外模型。

目的:探讨外周血中人再生胰岛衍生蛋白(REG3α)、可溶性抑瘤因子2(sST2)、肿瘤坏死因子受体1(TNFR1) 3种生物蛋白标志物表达水平对儿童异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)术后肠道急性移植物抗宿主病(aGVHD)诊断和疗效评估的临床应用价值。方法:回顾性分析2020年1月至2021年2月在郑州大学第一附属医院儿科接受allo-HSCT患儿50例的临床资料，男39例，女11例；中位年龄8.5(1~13)岁。在移植前，移植后1周、2周、3周、5周、7周、9周、11周、13周，出现肠道aGVHD时，治疗后检测上述3种生物蛋白表达水平，将发生肠道aGVHD患儿作为观察组，无肠道aGVHD患儿作为对照组，分析2组患儿外周血中3种生物蛋白表达水平的差异是否有统计学意义。采用受试者工作特征曲线(ROC)评价上述3种生物蛋白对肠道aGVHD的诊断价值，采用独立样本 t检验比较肠道aGVHD患儿治疗前后3种生物蛋白表达差异。 结果:1．观察组外周血中的REG3α、sST2、TNFR1水平分别为(33 985.42±24 631.33) ng/L、(139 899.66±115 825.65) ng/L、(3 041.65±2 418.72) ng/L，均高于对照组[(7 457.39±4 547.49) ng/L、(32 059.57±23 452.85) ng/L、(1 944.51±1 170.35) ng/L]，差异均有统计学意义( t＝6.04、5.19、2.17，均 P<0.05)。2.REG3α联合sST2诊断肠道aGVHD的ROC曲线下面积(AUC)为0.952(95% CI: 0.851~0.992， P<0.001)，Youden指数最大值为0.894，对应灵敏度为83%，特异度为99%；其诊断价值优于REG3α、sST2、TNFR1单个指标( Z＝1.763、1.332、3.001，均 P<0.05)；3.肠道aGVHD患儿治疗有效组治疗前外周血中REG3α、sST2、TNFR1水平分别为(31 343.01±25 364.71) ng/L、(146 629.52±110 501.04) ng/L、(2 489.00±859.70) ng/L，治疗后下降[(12 104.37±11 704.60) ng/L、(93 539.55±81 920.93) ng/L、(2 048.15±813.47) ng/L]，REG3α、sST2表达水平显著降低，差异均有统计学意义( t＝ -3.23、-2.10，均 P<0.05)，TNFR1表达水平变化差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:REG3α、sST2可作为临床辅助诊断肠道aGVHD的重要参考指标，具有较好的辅助诊断价值，也可作为评价临床治疗肠道aGVHD疗效的客观指标。

目的:探讨粪菌移植（FMT）治疗糖皮质激素耐药胃肠道急性移植物抗宿主病（GI-aGVHD）的临床疗效。方法:纳入2017年3月至2022年3月期间在徐州医科大学附属淮安医院行异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后发生糖皮质激素耐药GI-aGVHD的29例血液病患者，其中19例行FMT治疗（FMT组），10例未接受FMT治疗（对照组）。观察疗效及安全性，分析FMT治疗前后肠道菌群丰度、淋巴细胞亚群比例、外周血炎症因子及GVHD生物标志物的变化。结果:①13例患者（68.4%）在FMT后临床症状达到完全缓解，对照组2例患者（20.0%）达到完全缓解，差异有统计学意义（ P<0.05）。FMT后肠道微生物群多样性增加，并逐渐恢复至正常水平，未发生FMT相关感染。②与对照组比较，FMT组治疗后CD3 +、CD8 +细胞占比降低，CD4 +、调节性T细胞（Treg）及CD4 +/CD8 +细胞比值升高（ P值均<0.05），IL-6浓度低于对照组[4.15（1.91~5.71）ng/L对6.82（2.40~8.91）ng/L， P=0.040]，IL-10浓度高于对照组[12.11（5.69~20.36）ng/L对7.51（4.10~9.58）ng/L， P=0.024]。胰岛衍生蛋白3α（REG3α）在发生GI-aGVHD时明显升高，FMT组治疗后REG3α水平低于对照组[30.70（10.50~105.00）μg/L对74.35（33.50~139.50）μg/L， P=0.021]。 结论:FMT是糖皮质激素耐药GI-aGVHD的有效、安全治疗方法。FMT可促进肠道菌群多样性的恢复、调节炎症因子和上调Treg细胞表达。

目的 探究颈动脉支架植入术(CAS)后再狭窄的影响因素及冠心宁片的治疗作用.方法 回顾性分析2018年1月至2022年1月在浙江省丽水市第二人民医院住院的159例颈动脉重度狭窄患者资料,依据随访结果分为未狭窄组和再狭窄组.采用单因素分析及多因素Logistic回归分析探究血脂指标[总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、三酰甘油(TG)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)]、纤维蛋白原(FIB)、胱抑素C(CysC)、脂质代谢因子[脂肪酸合成酶(FASN)、硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD1)、胆固醇调节元件结合蛋白-1(SREBP-1)、胆固醇调节元件结合蛋白-2(SREBP-2)]和炎症因子[白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]水平对患者CAS术后再狭窄的影响.采用转录组测序探究2组差异基因谱和富集通路.并选取2022年3月至2023年3月住院的颈动脉重度狭窄患者80例,按随机数字表法分为观察组和对照组,各40例.对照组术后给予常规治疗,观察组加用冠心宁片治疗,于治疗前后检测上述指标,统计术后半年内再狭窄发生率.结果 再狭窄组患者IL-1β、IL-6、TNF-α、FIB、TG、TC、LDL-C、ox-LDL、FASN、SREBP-1、SREBP-2水平高于未狭窄组患者(P＜0.05),CysC高于未狭窄组患者(P＜0.05).转录组测序结果显示2组差异基因富集通路主要为脂质代谢、脂肪酸合成和炎症级联反应.多因素Logistic回归分析显示,ox-LDL、FIB、IL-6、TNF-α、SREBP-1、SREBP-2和FASN是CAS术后再狭窄的独立影响因素(P＜0.05).治疗后,观察组 TNF-α、FIB、TG、TC、LDL-C、ox-LDL、FASN、SREBP-1 和 SREBP-2 水平低于对照组(P＜0.05).对照组术后再狭窄发生率为12.5％,观察组再狭窄发生率为5.0％.结论 炎症因子IL-6、TNF-α、FIB和脂质代谢因子ox-LDL、SREBP-1、SREBP-2、FASN是CAS术后再狭窄的独立影响因素,冠心宁片治疗可进一步改善患者炎症和血脂水平.

目的 观察蕲艾(Artemisia argyi Levl.et Van.var.argyi cv.Qiai)挥发油对感染性皮肤创口愈合的作用并探索其机制.方法 将 30 只雄性昆明小鼠随机分为 5 组:空白对照组、膜剂基质组、阳性对照组(3 mL·kg-1 莫匹罗星软膏)、低剂量膜剂组(每贴含 7.3 mg蕲艾挥发油)和高剂量膜剂组(每贴含 57.6 mg蕲艾挥发油).小鼠麻醉后在背部剪一直径 10 mm的全层皮肤圆形伤口,止血后在创口处涂抹 100 μL金黄色葡萄球菌菌液(1.5×108 CFU·mL-1),各组采取前述方式处理伤口,每日换药并观察皮肤创面愈合情况.术后12 d处死小鼠取创面皮肤做HE和Masson染色,观察病理学特征;利用qPCR和Western blot检测创口皮肤组织愈合相关因子Col1a1、Col3a1、Fn1、VEGFA及炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA和PI3K/Akt信号通路蛋白的表达.在小鼠胚胎成纤维细胞NIH-3T3 利用PI3K抑制剂PI-103 探究蕲艾挥发油对PI3K/Akt信号通路活性的潜在影响.结果 动物实验表明,与空白对照组相比,低剂量和高剂量膜剂组的相对创口面积显著降低;创口组织的炎性细胞浸润减少,胶原纤维表达增加;qPCR显示,与空白对照组相比,低剂量和高剂量膜剂组的VEGFA、Col3a1 和Col1a1 mRNA的表达显著上升,炎症因子IL-1β和TNF-α mRNA表达降低;Western blot结果表明,与空白对照组相比,低剂量和高剂量给药组的p-PI3K/PI3K及p-Akt/Akt比值均显著上升并呈现剂量依赖性.细胞实验结果也证实,蕲艾挥发油对NIH-3T3 细胞的PI3K/Akt信号通路存在调控作用.结论 蕲艾挥发油可促进创口愈合,其机制可能与激活PI3K/Akt信号通路,抑制炎症因子表达及促进胶原表达有关.

目的 基于网络药理学研究慈菇消脂方(Cigu Xiaozhi decoction,CXD)的主要活性成分、关键靶点及通路,分析其对非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)"炎癌"转化的作用机制,并进行动物实验验证.方法 基于网络药理学预测得到CXD治疗NASH"炎癌"转化的潜在作用靶点和信号通路.采用蛋氨酸-胆碱缺乏饮食(MCD)诱导小鼠NASH模型,给予CXD及表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂干预28 d,干预结束后处死小鼠,苏木精-伊红法(HE)观察各组小鼠肝脏组织形态学变化;Western blot检测各组小鼠肝组织EGFR、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)及蛋白激酶B(AKT)蛋白相对表达量;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组小鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1 β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;结果 经网络药理学筛选得到CXD潜在活性成分284个、潜在治疗靶点159个及关键靶点20个.CXD可影响细胞增殖、炎症反应等多个生物过程,涉及肿瘤、PI3K/AKT等多个信号通路.动物实验验证结果表明CXD能够降低NASH小鼠血清中IL-6、IL-1β、TNF-α的水平;降低肝组织中PI3K、AKT蛋白相对表达量,升高EGFR蛋白的相对表达量.结论 CXD可通过参与细胞增殖和炎症反应等生物过程,调控EGFR/PI3K/AKT信号通路,改善NASH小鼠的肝组织损伤.

目的 研究血必净注射液调控高迁移率族蛋白1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)通路对脓毒症小鼠肺损伤的保护作用.方法 雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组,模型组和低、中、高剂量血必净组,阴性对照(NC)组,NC+模型组,NC+高剂量血必净组,HMGB1+高剂量血必净组.采用盲肠结扎穿孔术建立脓毒症肺损伤模型,造模前给予NC慢病毒或HMGB1慢病毒尾静脉注射,造模当天给予血必净注射液(剂量5、10、15 mL/kg)腹腔注射,2次/d,连续3 d,末次给药后24 h进行取材和检测.比较各组间肺组织病理改变,湿重(W)/干重(D)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量,裂解型Caspase-3、HMGB1、TLR4、NF-κB表达水平的差异.结果 模型组小鼠肺组织出现肺损伤的病理改变,W/D、TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA的含量及裂解型Caspase-3、HMGB1、TLR4、NF-κB的表达水平均高于对照组,SOD的含量低于对照组(P＜0.05).不同剂量血必净组小鼠肺损伤的病理改变减轻,W/D、TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA 的含量及裂解型 Caspase-3、HMGB1、TLR4、NF-κB 的表达水平低于模型组,SOD的含量高于模型组(P＜0.05).HMGB1+高剂量血必净组小鼠肺损伤的病理改变加重,W/D、TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA的含量及裂解型Caspase-3、HMGB1、TLR4、NF-κB的表达水平均高于NC+高剂量血必净组,SOD的含量低于NC+高剂量血必净组(P＜0.05).结论 血必净注射液对脓毒症小鼠肺损伤具有保护作用,并减轻炎症反应、氧化应激、细胞凋亡,其相关的分子机制为抑制HMGB1/TLR4/NF-κB通路.

目的 探讨金合欢素调节胰岛素受体底物-1(IRS-1)/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(AKT)信号通路对糖尿病大鼠胰岛素抵抗(IR)的影响.方法 选取6周龄,体质量220～235 g的SPF级SD雄性大鼠60只作为研究对象.随机选出12只大鼠作为对照组(NC组),其余48只大鼠构建2型糖尿病(T2DM)大鼠模型,造模成功后随机分为糖尿病组、金合欢素组、MG53组、金合欢素+MG53组,每组12只.检测所有大鼠空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、甘油三脂(TG)水平.采用酶联免疫吸附试验检测空腹胰岛素(FINS)水平以及胰腺组织白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,计算胰岛素敏感指数(ISI)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);计算口服葡萄糖耐量实验曲线下面积(AUC);采用苏木精和伊红(HE)染色检测 胰腺组织病理变化;采用 Western blot法检测IRS-1/PI3K/AKT通路蛋白表达水平.结果 与NC组相比,糖尿病组大鼠体质量、FBG、TC、TG、LDL水平均明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);与糖尿病组相比,金合欢素组大鼠体质量、FBG、TC、TG、LDL水平均明显下降,而MG53组均明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);与金合欢素组相比,金合欢素+MG53组大鼠体质量、FBG、TC、TG、LDL水平均明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).与NC组相比,糖尿病组FBG、FINS、HOMA-IR水平均明显升高,AUC明显增大,ISI水平明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.05);与糖尿病组相比,金合欢素组FINS、HOMA-IR水平均明显下降,AUC明显减小,ISI水平明显升高,而MG53组FINS、HOMA-IR水平均明显升高,AUC明显增大,ISI水平明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.05);与金合欢素组相比,金合欢素+MG53组FINS、HOMA-IR水平均明显升高,AUC明显增大,ISI水平明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).与NC组相比,糖尿病组TNF-α、IL-1β水平均明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);与糖尿病组相比,金合欢素组TNF-α、IL-1β水平均明显下降,而MG53组TNF-α、IL-1β水平均明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);与金合欢素组相比,金合欢素+MG53组TNF-α、IL-1β水平均明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).HE染色结果显示,NC组大鼠胰腺组织染色清晰,结构正常,可以观察到明显的外分泌腺泡和胰岛、小叶内导管和小叶间导管;与NC组相比,糖尿病组观察到血管充血、腺泡和小叶内导管聚集有炎症细胞;与糖尿病组相比,金合欢素组炎症细胞浸润现象减少,而MG53组小叶内和小叶间导管中观察到重度炎症细胞聚集;金合欢素+MG53组胰腺结构与糖尿病组相似.与NC组相比,糖尿病组p-IRS-1/IRS-1、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白水平均明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.05);与糖尿病组相比,金合欢素组p-IRS-1/IRS-1、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT 蛋白水平均明显升高,而 MG53 组 p-IRS-1/IRS-1、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白水平均明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.05);与金合欢素组相比,金合欢素+MG53组p-IRS-1/IRS-1、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白水平均明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 金合欢素可能通过上调IRS-1/PI3K/AKT信号通路发挥减轻糖尿病大鼠IR的作用.

抑郁症是目前高发的一种慢性和危及生命的精神疾病,逍遥散是其常用的治疗方剂,大量临床研究和动物实验已证实其有确切的抗抑郁效果,其抗抑郁的作用机制也在广泛研究当中.从逍遥散抗抑郁的临床应用、逍遥散抗抑郁的作用机制这两方面阐述逍遥散抗抑郁作用的研究现状,研究发现逍遥散可用于多种类型抑郁症的治疗或辅助治疗,比如产后抑郁症、轻中度抑郁症、围绝经期抑郁症等等,逍遥散的抗抑郁作用可能是通过调节单胺类神经递质的水平、调控下丘脑-垂体-肾上腺轴(hypothalamic-pituitary-adrenal axis,HPA)、调节细胞因子抑郁质免疫炎症反应、提高脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)表达水平、调节α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸(α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole-propionicacid receptor,AMPA)受体水平改善神经可塑性,以及调节"微生物-肠-脑"轴等多种途径实现.通过对近10年有关逍遥散治疗抑郁症的研究的总结和归纳分析,发现逍遥散抗抑郁的临床研究缺乏多中心、大样本、高质量的临床随机双盲对照试验,其次,逍遥散抗抑郁作用的机制研究太宽泛而不够深入,逍遥散对于每一条途径都有其调节作用,但能否影响多种途径间的相互作用,还有待于进一步深入研究和挖掘.故此,以期为逍遥散抗抑郁的深入研究提供更多思路,为逍遥散的研发提供更多方向和选择,充分展现中医药临床治疗的优势及特色.