目的 通过探讨苦参及其炮制品对湿热型溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型小鼠的治疗作用及其可能的作用机制,为苦参炮制品的临床合理应用提供参考.方法 在持续高温高湿环境下,配合高糖高脂饲料及蜂蜜水,建立湿热型小鼠模型,进而通过自由饮用含3％葡聚糖硫酸钠(DSS)的蒸馏水,建立湿热型UC小鼠模型.实验分为空白组、模型组、阳性药组(美沙拉嗪300 mg/kg)、生苦参组、麸炒苦参组、米泔制苦参组(均按5 g/kg剂量给药)、麦麸辅料组、米泔水辅料组,UC造模同时给予灌胃给药,连续10 d.每日观察小鼠的一般情况、体质量、粪便性状及隐血情况,进行一般疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分,给药结束后处死小鼠,摘取结肠并测量长度,苏木精-伊红(HE)染色观察病理切片,酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清中巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1 β(in-terleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)以及结肠组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR,RT-PCR)和 Western blot 法检测结肠组织中 Toll 样受体 4(toll-like receptor 4,TLR4)、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、核因子 κB p65(nuclear factor-κB p65,NF-κB p65)mRNA 及蛋白表达.结果 与模型组比较,苦参及其炮制品组DAI评分降低;结肠长度缩短程度减小(P＜0.01),结肠病变程度减轻,淋巴细胞浸润程度减轻;血清中MIF、TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-8含量降低(P＜0.01),IL-10含量升高(P＜0.01);结肠组织中 MDA 含量降低(P＜0.01),SOD 水平升高(P＜0.01);TLR4、MyD88,NF-κBp65 mRNA 及蛋白表达降低(P＜0.01).麦麸辅料和米泔水辅料组较模型组差异无统计学意义(P＞0.05).麸炒苦参组、米泔制苦参组较生苦参组作用更明显(P＜0.05,P＜0.01).结论 苦参及其炮制品具有治疗湿热型UC的作用,经麸炒或米泔制后效果更好,其作用机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路,抗氧化应激、抗炎有关.

目的 观察电针对慢性前列腺炎大鼠前列腺Toll样受体4/核转录因子κB/NOD样受体蛋白3(TLR4/NF-KB/NLRP3)通路的影响,探讨电针治疗慢性前列腺炎的可能机制.方法 将40只SPF级健康雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、电针组、抑制剂组、激动剂组,各8只.除空白组外,其余各组采用前列腺蛋白提取及免疫注射法制备大鼠慢性前列腺模型,于造模后1 d对电针组、抑制剂组及激动剂组大鼠行电针干预,穴取"白环俞""会阳",连续波,频率2 Hz,每日1次,每次20 min,7 d为1个疗程,每疗程后休息1 d,共治疗2个疗程.基于开野实验和糖水消耗实验开展行为学测试;取大鼠前列腺组织,计算前列腺湿重及前列腺指数;HE染色观察大鼠前列腺组织形态学变化;TUNEL法观察前列腺细胞凋亡;Western blot法检测前列腺组织中TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白表达.结果 与空白组比较,模型组大鼠水平运动评分、垂直运动评分和糖水消耗量均显著下降(P＜0.05);与模型组比较,电针组大鼠水平运动评分、垂直运动评分和糖水消耗量显著增加(P＜0.05);与电针组比较,抑制剂组大鼠水平运动评分、垂直运动评分和糖水消耗量显著增加,而激动剂组大鼠水平运动评分、垂直运动评分和糖水消耗量显著下降(P＜0.05).与空白组比较,模型组大鼠前列腺湿重和前列腺指数显著升高(P＜0.05),前列腺细胞凋亡升高(P＜0.05);与模型组比较,电针组大鼠前列腺湿重和前列腺指数显著下降(P＜0.05),前列腺细胞凋亡显著下降(P＜0.05);与电针组比较,抑制剂组大鼠前列腺湿重和前列腺指数显著下降(P＜0.05),而激动剂组大鼠前列腺湿重和前列腺指数显著升高(P＜0.05),且抑制剂组大鼠前列腺细胞凋亡进一步下降(P＜0.05),而激动剂组大鼠前列腺细胞凋亡升高(P＜0.05).与空白组比较,模型组大鼠前列腺组织中TLR4、p-NF-κB/NF-κB、NLRP3蛋白表达显著增加(P＜0.05),与模型组比较,电针组大鼠前列腺组织中TLR4、p-NF-κB/NF-κB、NLRP3蛋白表达显著减少(P＜0.05);与电针组比较,抑制剂组大鼠前列腺组织中TLR4、p-NF-κB/NF-κB、NLRP3蛋白表达显著下降(P＜0.05),而激动剂组大鼠前列腺组织中TLR4、p-NF-κB/NF-κB、NLRP3蛋白表达显著升高(P＜0.05).结论 电针白环俞、会阳可明显改善慢性前列腺模型大鼠症状,降低细胞凋亡水平,其机制可能与下调TLR4/NF-κB/NLRP3通路蛋白表达,进而抑制前列腺细胞凋亡有关.

目的:观察失笑散联合胃复春治疗慢性萎缩性胃炎的疗效及对血清Toll样受体4（TLR4）、白细胞介素-4（IL-4）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平的影响。方法:选取2019年9月至2022年4月深圳市罗湖区人民医院收治的慢性萎缩性胃炎患者92例，根据不同治疗方式分为观察组（n=46）和对照组（n=46），对照组采用胃复春治疗，观察组在对照组的基础上联合失笑散治疗。比较两组治疗有效率、血清TLR4、IL-4、TNF-α水平、木村-竹本分型评分及不良反应发生率。结果:治疗3个月后，观察组的治疗有效率显著高于对照组、中医证候评分均低于对照组（P<0.05）；观察组血清TLR4、IL-4、TNF-α[（12.76±2.38）μg/mL、（32.62±6.18）ng/L、（1.16±0.34）pg/mL]水平均显著低于对照组[（23.16±5.36）μg/mL、（38.34±6.15）ng/L、（1.38±0.22）pg/mL]（P<0.05）；观察组木村-竹本分型评分均显著低于对照组（P<0.05）；观察组的不良反应发生率低于对照组（P<0.05）。结论:失笑散联合胃复春能够有效缓解机体氧化应激反应，缓解症状，避免不良反应的发生，提高治疗有效率。

目的 探讨凉血解毒化瘀方对慢加急性肝功能衰竭(acute-on-chronic liver failure,ACLF)模型小鼠的治疗作用及其对受体Toll样受体4(TLR4)/c-Jun氨基末端激酶(JNK)/核因子κB(NF-κB)通路的影响.方法 采用四氯化碳、细菌脂多糖(LPS)和D-氨基半乳糖(D-GalN)联合诱导法构建慢加急肝衰竭小鼠模型;生化分析检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)肝功能指标.肝组织病理学检查.荧光定量PCR检测肝组织白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1 β)、TLR4的mRNA表达.CCK8筛选凉血解毒化瘀方对Raw264.7细胞的干预浓度,酶联免疫吸附法检测巨噬细胞上清TNF-α、IL-6、IL-1β含量.蛋白免疫印迹法检测TLR4/JNK/NF-κB通路相关蛋白(TLR4、NF-κB、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)、p-ERK1/2、p-JNK、JNK)的表达.结果 与ACLF模型组比较,凉血解毒化瘀方可降低血清ALT、AST、TBIL含量,减少肝组织细胞坏死、纤维化、炎症细胞浸润程度,及肝组织TNF-α、IL-6、IL-1β、TLR4的mRNA表达,并降低肝组织TLR4/JNK/NF-κB通路相关蛋白表达.细胞实验进一步发现凉血解毒化瘀方可抑制巨噬细胞TNF-α、IL-6、IL-1β分泌,下调TLR4/JNK/NF-κB通路相关蛋白表达.结论 凉血解毒化瘀方能有效改善ALCF小鼠肝功能、抑制其炎症反应的疗效,其机制与其下调TLR4/JNK/NF-κB通路有关.

目的 探讨黄芪甲苷对慢性间歇性缺氧诱导的遗尿症大鼠Toll样受体4(Toll-like receptor-4,TLR4)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)信号通路的影响.方法 将SD大鼠随机分为对照组、模型组、黄芪甲苷低剂量组、黄芪甲苷中剂量组、黄芪甲苷高剂量组、去氨加压素组、脂多糖组、黄芪甲苷高剂量+脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)组,每组12只.除对照组外,其他组均需采用慢性间歇性缺氧诱导的方法构建遗尿症大鼠模型,各组大鼠每天于进入动物舱前1 h进行给药处理,1次/d,持续4周.末次处理24 h后,检测各组大鼠24 h排尿量及膀胱漏尿点压(bladder leak point pressures,BLPP)值的变化;ELISA法检测大鼠血清中抗利尿激素(antidiuretic hor-mone,ADH)含量;HE染色检测大鼠膀胱组织病理变化;比色法检测大鼠膀胱组织中超氧化物歧化酶(superoxide dis-mutase,SOD)活性、丙二醛(malonic dialdehyde,MDA)含量;Western blot 检测大鼠膀胱组织中 P2X3、TLR4、p-p38 蛋白表达.结果 与对照组比较,模型组大鼠膀胱组织病理损伤严重,24 h排尿量增多,BLPP值变小,ADH含量、SOD活性降低,MDA含量和P2X3、TLR4、p-p38蛋白表达升高(P＜0.05);与模型组比较,黄芪甲苷低剂量组、黄芪甲苷中剂量组、黄芪甲苷高剂量组、去氨加压素组大鼠膀胱组织病理损伤减轻,24 h排尿量减少,BLPP值变大,ADH含量、SOD活性升高,MDA含量和P2X3、TLR4、p-p38蛋白表达降低,LPS组大鼠膀胱组织病理损伤加剧,24 h排尿量增多,BLPP值变小,ADH含量、SOD活性降低,MDA含量和P2X3、TLR4、p-p38蛋白表达升高(P＜0.05);与黄芪甲苷高剂量组比较,黄芪甲苷高剂量+LPS组大鼠膀胱组织病理损伤严重,24 h排尿量增多,BLPP值变小,ADH含量、SOD活性降低,MDA含量和P2X3、TLR4、p-p38蛋白表达升高(P＜0.05).结论 黄芪甲苷可能通过抑制TLR4/p38MAPK信号通路改善慢性间歇性缺氧诱导的大鼠遗尿症.

目的 探讨麦冬多糖(OJP)对烟曲霉菌性角膜炎(AFK)小鼠的治疗作用及机制.方法 通过对小鼠角膜注射烟曲霉菌(AF)悬浮液建立AFK模型,将54只建模成功的AFK小鼠随机分为5组:模型组(n=11)、低剂量组(n=11)、中剂量组(n=11)、高剂量组(n=11)和激动剂组(n=10);取未建模的小鼠作为对照组(n=10).低剂量组、中剂量组和高剂量组小鼠分别用50 μL浓度为5,10,20 g/L的OJP溶液滴眼.激动剂组小鼠用50μL浓度为20g/L的OJP溶液滴眼,同时用0.25 mg/kg的Toll样受体4(TLR4)激动剂CRX-527溶液灌胃.对照组和模型组小鼠分别用50 μL生理盐水滴眼.各组小鼠均给药1周.治疗结束24 h后,在裂隙灯显微镜下进行角膜炎症评分.采用苏木素伊红(HE)染色观察角膜形态;采用ELISA法检测角膜组织上清液中促炎因子白介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6水平;采用qRT-PCR分析角膜IL-1 β、TNF-α、IL-6、TLR4、髓样分化因子 88(MyD88)、核因子-κB(NF-κB)p65 的 mRNA 水平;采用 Western blot分析角膜 TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白相对表达.结果 与对照组比较,模型组大鼠的角膜炎症评分升高(P＜0.05),角膜出现明显病变,角膜IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白表达和mRNA水平均升高(P＜0.05),角膜TLR4、MyD88和NF-κB p65的mRNA水平和蛋白表达均升高(P＜0.05).与模型组比较,低剂量组、中剂量组和高剂量组大鼠的角膜炎症评分降低(P＜0.05),角膜病变减轻,角膜IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白表达和mRNA水平均降低(P＜0.05),角膜TLR4、MyD88和NF-κB p65的mRNA水平和蛋白表达均降低(P＜0.05).与低剂量组比较,中剂量组和高剂量组大鼠的角膜炎症评分降低(P＜0.05),角膜病变减轻,角膜IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白表达和mRNA水平均降低(P＜0.05),角膜TLR4、MyD88和NF-κB p65的mRNA水平和蛋白表达均降低(P＜0.05).与高剂量组比较,激动剂组大鼠的角膜炎症评分升高(P＜0.05),角膜病变加重,角膜IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白表达和mRNA水平均升高(P＜0.05),角膜TLR4、MyD88和NF-κB p65的mRNA水平和蛋白表达均升高(P＜0.05).结论 OJP可能通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路减轻AFK小鼠角膜炎症损伤.

[目的]探讨沙利度胺联合强的松治疗溃疡性结肠炎(UC)的临床疗效及对患者肠屏障功能、炎症指标的影响.[方法]回顾性分析2021年4月至2023年3月本院收治的92例UC患者的临床资料,根据治疗方案不同将其分为对照组(在常规治疗的基础上给予强的松治疗)和观察组(在对照组的基础上给予沙利度胺治疗),每组46例.治疗8周后,比较两组疗效、病情相关评分[梅奥内镜(Mayo)评分、UC内镜严重程度指数(UCEIS)评分]、肠屏障功能相关指标[二胺氧化酶(DAO)、血乳酸(LAC)、细菌脂多糖(LPS)、D乳酸(D-LA)]、炎症相关指标[Toll样受体4(TLR-4)、核因子κB(NF-κB)、可溶性晚期糖化终末产物受体(sRAGE)]及不良反应发生率.[结果]观察组总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).治疗后,两组Mayo评分、UCEIS评分均低于治疗前,且观察组低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);两组血清DAO、LAC、LPS、D-LA水平低于治疗前,且观察组低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);两组NF-κB、TLR-4、sRAGE低于治疗前,且观察组低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P＞0.05).[结论]沙利度胺联合强的松治疗UC效果较好,可减轻肠黏膜炎症,改善肠屏障功能,且安全性较高.

多囊卵巢综合征(PCOS)是涉及多系统多环节的一组综合紊乱症候群,稀发排卵、高雄激素血症和肥胖是其主要临床特征,已严重影响女性生活质量及身心健康.而PCOS性代谢紊乱是加重高雄激素血症及肥胖的重要环节,中医针刺技术在改善PCOS代谢紊乱方面疗效显著.通过文献研究,笔者发现针刺可能通过局部穴位效应改善脾虚水湿停滞及肾虚水泛的病理状态,从而促进机体细胞代谢,作用机制可能与影响IRS-1/PI3K/Akt/GLUT4、下丘脑NFκB及Toll样受体信号通路转导有关.现就研究内容进行详尽阐述,以期为PCOS代谢病因研究提供理论思路.

目的 观察柴胡皂苷d(SSd)预处理对大鼠肝缺血再灌注损伤(HIRI)炎性反应和Toll样因子受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)传导通路的影响.方法 随机数字表法将24只雄性SD大鼠分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)和SSd预处理组(SSd组),每组8只.SSd组在术前连续5 d腹腔注射2mg/kg SSd,Sham组和I/R组腹腔注射等量浓度的二甲基亚砜(DMSO).随后,I/R组和SSd组采用Pringle法阻断第一肝门1 h,Sham组只行开腹、关腹手术和肝门解剖等操作.术后6 h,采集大鼠的血清及肝标本.生化检测血清的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)值;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β水平;苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织细胞损伤和坏死情况;实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测肝脏TLR4、TNF-α及IL-1β的相对表达水平;蛋白质印迹法(Western blot)检测TLR4、MyD88和NF-κB在3组肝组织的表达差异.结果 血清学指标:I/R组ALT、AST、TNF-α及IL-1β 高于 Sham 组[(1 526.16±147.42)U/L 比(71.32±10.21)U/L、(2 705.17±127.81)U/L 比(189.78±20.04)U/L、(48.60±23.03)pg/ml 比(6.67±1.72)pg/ml、(119.18±40.35)pg/ml 比(5.55±3.61)pg/ml,t=27.85、54.99、5.13、7.93,P＜0.01];而 SSd 组上述指标低于 I/R 组[(402.79±67.54)U/L 比(1 526.16±147.42)U/L、(658.89±88.35)U/L 比(2 705.17±127.81)U/L、(11.38±5.08)pg/ml 比(48.60±23.03)pg/ml、(24.82±5.98)pg/ml 比(119.18±40.35)pg/ml,t=19.59、37.25、4.63、6.54,P＜0.01],差异有统计学意义.HE染色观察肝组织病理改变及评分:给予SSd干预后,SSd组肝脏组织损伤轻于I/R组,Suzuki评分差异有统计学意义(5.40±1.67 比 8.00±0.71,t=3.20,P＜0.01).进一步通过 RT-qPCR 结果发现,I/R 组 TLR4、TNF-α 及 IL-1β 的 mRNA 相对表达量明显高于 Sham 组(2.45±0.32 比 1.00±0.00、1.96±0.17 比1.00±0.00、1.63±0.19 比 1.00±0.00,t=4.63、7.93、5.74,P＜0.01),而 SSd 组 TLR4、TNF-α 及IL-1β 的 mRNA 相对表达量低于 I/R 组(1.92±0.20 比 2.45±0.32、1.55±0.05 比 1.96±0.17、1.24±0.07 比 1.63±0.19,t=3.45、3.97、3.36,P＜0.05),差异均有统计学意义.Western blot 结果提示,I/R 组的 TLR4、MyD88 和 NF-κB 蛋白的表达高于 Sham 组(t=27.95、8.67、4.26,P＜0.01),而SSd 组的 TLR4、MyD88 和 NF-κB 蛋白的表达水平则低于 SSd 组(t=3.69、9.43、2.86,P＜0.05),差异有统计学意义.结论 SSd预处理可以显著降低大鼠HIRI的炎症反应,其作用机制可能与下调TLR4/NF-κB信号转导通路蛋白的表达有关.

目的 研究 TLR4 与 miR-21-5p 对皮肤鳞状细胞癌细胞增殖的影响及两者的靶向关系.方法 通过免疫组化法检测皮肤鳞状细胞癌组织中的TLR4 表达,通过Toll样受体4(TLR4)质粒和miR-21-5p inhibitor转染过表达细胞中的TLR4 和抑制细胞中miR-21-5p,通过生物信息学分析TLR4 与miR-21-5p的关系,通过RT-qPCR检测细胞中TLR4 和miR-21-5p的表达,通过CCK8 检测A431 细胞生长情况,通过Western bloting检测细胞中TLR4 和增殖分子ki-67 的表达.结果 TLR4 在皮肤鳞状细胞癌癌旁组织中表达最高,且在低分化组织中表达低于高分化组织,差异有统计学意义(P<0.05),TLR4 在A431 人皮肤鳞状细胞癌细胞中表达低于HaCaT人永生化角质形成细胞,差异有统计学意义(P<0.05).miR-21-5p可能是TLR4 的潜在miRNA靶基因.A431 细胞过表达TLR4,发现细胞增殖抑制,差异有统计学意义(P<0.05),miR-21-5p表达降低,差异有统计学意义(P<0.05).A431 细胞抑制miR-21-5p表达,发现细胞增殖抑制,差异有统计学意义(P<0.05),TLR4 表达降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 miR-21-5p与TLR4 的相互调节影响A431 细胞的增殖,miR-21-5p与TLR4 的相互作用在皮肤鳞状细胞癌的细胞行为中发挥重要作用.