目的:探讨lncRNA HCP5 靶向mlR-409-3p对皮肤鳞状细胞癌(CSCC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法:采用qRT-PCR法检测CSCC细胞(SCC13、A431、HSC-5)中HCP5 和miR-409-3p的表达情况,筛选用于实验的CSCC细胞.将抑制 HCP5 表达的质粒si-HCP5 及其对照(si-NC)、过表达miR-409-3p的miR-409-3p模拟物及其对照(miR-NC)、抑制HCP5 和miR-409-3p的si-HCP5+anti-miR-409-3p及其对照(si-HCP5+anti-miR-NC)分别转染SCC13 细胞.采用CCK-8 法和Transwell 实验检测SCC13 细胞增殖、迁移、侵袭能力,Western blot法检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9 蛋白表达水平.通过双荧光素酶报告基因实验验证HCP5 和miR-409-3p的靶向关系.结果:SCC13 细胞中HCP5 表达最高,miR-409-3p表达最低(P<0.05).抑制HCP5 表达后SCC13 细胞增殖能力降低,细胞迁移数和侵袭数减少,CycIinD1、MMP2、MMP9 蛋白表达水平降低(P<0.05).过表达miR-409-3p后SCC13 细胞增殖能力降低,细胞迁移数和侵袭数减少,CycinD1、MMP2、MMP9 蛋白表达水平降低(P<0.05).双荧光素酶报告基因实验结果显示 lncRNA HCP5 和miR-409-3p存在靶向关系.抑制miR-409-3p表达可减弱HCP5 低表达对SCC13 细胞增殖以及迁移、侵袭能力的影响(P<0.05).结论:抑制HCP5 可通过靶向促进miR-409-3p表达来抑制CSCC细胞增殖、迁移和侵袭.

目的:探讨连翘苷对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及其对环状RNA_0054537(circ_0054537)/微小RNA(miRNA，miR)-409-3p的调控作用。方法:体外培养肝癌细胞Hep3B，使用不同剂量(5、10、20 μmol/L)的连翘苷处理Hep3B细胞；采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡率；Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭能力；采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测circ_0054537、miR-409-3p的表达量；双荧光素酶报告实验检测circ_0054537、miR-409-3p的靶向关系；Hep3B细胞中分别转染si-circ_0054537、pcDNA-circ_0054537，采用上述方法检测细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭。组间比较采用独立样本 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:连翘苷可明显降低细胞活力[(1.276±0.110)个比(1.031±0.090)、(0.637±0.050)、(0.507±0.040)个， F＝244.841， P<0.05]，增高凋亡率[(7.34±0.62)%比(12.44±1.03)%、(22.86±2.12)%、(28.16±2.71)%， F＝244.841， P<0.05]，减少迁移细胞数[(154.15±12.76)个比(124.06±10.04)、(78.05±7.25)、(61.13±5.83)个]及侵袭细胞数[(112.04±10.08)个比(89.43±8.13)、(57.11±5.12)、(43.08±4.05)个， F＝186.018、166.514， P<0.05]，抑制circ_0054537的表达[(1.00±0.10)比(0.40±0.04)， t＝16.713， P<0.05]，促进miR-409-3p的表达[(1.02±0.11)比(3.42±0.31)， t＝21.889， P<0.05]；转染si-circ_0054537可明显抑制细胞活力[(1.264±0.10)比(0.686±0.06)]、迁移[(151.96±11.17)比(79.03±7.21)]及侵袭能力[(115.28±11.05)比(68.14±6.43)， t＝14.869、16.457、11.062， P<0.05]，增高凋亡率[(7.26±0.71)%比(23.79±2.06)%， t＝22.759， P<0.05]；双荧光素酶报告实验证实circ_0054537可靶向结合miR-409-3p；转染pcDNA-circ_0054537可明显逆转连翘苷对Hep3B细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的调控作用。 结论:连翘苷可通过下调circ_0054537的表达而上调miR-409-3p的表达从而抑制肝癌细胞增殖、迁移、侵袭及促进细胞凋亡。

目的 探讨微小RNA(miRNA)在右归丸对激素型肾阳虚证肾组织与正常肾组织中的表达差异,并用生物信息学方法分析其意义,为右归丸干预肾阳虚证的进一步机制研究奠定基础.方法 15只SD大鼠随机分为正常组(5只)和造模组(10只),正常组注射2 mL生理盐水,造模组后肢肌注氢化可的松注射液.成模后将造模组随机分为模型组和右归丸组,每组5只.右归丸组给予右归丸汤剂灌胃,模型组和正常组给予生理盐水灌胃.麻醉处死后使用TRIzol法提取肾组织中RNA,使用NanoDrop ND-1000对总RNA进行质量检测,用标记后的RNA与Agilent Rat 8 ×60k miRNA芯片进行杂交.收集原始数据进行标准化处理,进行聚类分析和火山图分析.利用生物信息学方法,预测差异miRNA富集的基因本体论(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路.结果 筛选出右归丸干预肾阳虚证相关差异表达miRNA 18 条(|log2FC|≥ 1.5,P≤0.05),其中包括 5 条上调 miRNA,分别是 rno-miR-149-3p、rno-miR-188-5p、rno-miR-221-5p、rno-miR-762、rno-miR-877;13 条下调 miRNA,分别是 rno-miR-101b-5p、rno-miR-125a-3p、rno-miR-125b-2-3p、rno-miR-3085、rno-miR-344a-5p、rno-miR-347、rno-miR-34b-3p、rno-miR-351-3p、rno-miR-3573-3、rno-miR-370-3p、rno-miR-409a-3p、rno-miR-448-3p、rno-miR-503-3p.GO分析显示差异表达miRNA主要参与DNA、RNA转录的正调控进程且与ATP的结合显著相关.KEGG分析显示差异表达miRNA显著富集于cAMP通路和FoxO信号通路,这两条通路与线粒体功能密切相关.结论 右归丸通过干预miRNA的表达,改善肾阳虚证大鼠线粒体功能,调节能量代谢异常,进一步为右归丸干预肾阳虚证的机制研究提供理论依据.

Objective:Gastrointestinal stromal tumors(GISTs)can rapidly proliferate through angiogenesis.Previous studies indicated the potential influence of microRNA on the progression of tumor immature angiogenesis.This study aimed to explore the specific mechanism by which microRNA-409-5p(miR-409-5p)contributes to GIST.Methods:To identify genes potentially involved in the development and progression of GIST,the differences of miR-409-5p between tumors and adjacent tissues were first analyzed.Following this analysis,target genes were predicted.To further investigate the function of miRNA in GIST cells,two GIST cell lines(GIST-T1 and GIST882)were transfected with lentiviruses that stably expressed miR-409-5p and scrambled miRNA(negative control).Later,the cells were subjected to Western blotting and ELSA to determine any differences in angiogenesis-related genes.Results:In GISTs,there was a decrease in the expression levels of miR-409-5p compared to the adjacent tissues.It was observed that the upregulation of miR-409-5p in GIST cell lines effectively inhibited the proteins hypoxia-inducible transcription factor 1β(HIF1β)and vascular endothelial growth factor A(VEGF-A).Further investigations revealed that miR-409-5p acted as an inhibitor of angiogenesis by binding to the 3'-UTR of Lysine-specific demethylase 4D(KDM4D)mRNA.Moreover,the combination of miR-409-5p with imatinib enhanced its inhibitory effect on angiogenesis.Conclusion:This study demonstrated that the miRNA-409-5p/KDM4D/HIF1β/VEGF-A signaling pathway could serve as a novel target for the development of therapeutic strategies for the treatment of imatinib-resistance in GIST patients.

恶性肿瘤是一种高危疾病,发病率在我国逐年上升,死亡率约占全球的四分之一.患者早期以接受手术治疗为主.但多数恶性肿瘤由于早期临床症状不明显,发现时病情已进展,此时主要给予放疗和化疗,分子靶向治疗等.而多药耐药(multi-drug resistance,MDR)的存在使得相关的肿瘤化疗失败率明显增加,还有分子靶向治疗所带来的巨大费用.这使得寻找新的分子靶点,抑制肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移等成为治疗和预防这些疾病的主要挑战.miR-409-3p是一种小型非编码多功能RNA分子,它因在胚胎干细胞中表达被首次报道[1].近年来发现miR-409-3p作为肿瘤抑制因子参与调控肿瘤细胞的多个生物过程,如细胞增殖、生长、迁移、侵袭及凋亡等[2-11].miR-409-3p在多种恶性肿瘤中起着重要作用,如胃癌[2-3]、结肠直肠癌[4-5]、乳腺癌[6-7]、膀胱癌[8]、骨肉瘤[9]以及肺腺癌[10]等.主要通过与靶序列特异性结合,实现对目标基因的降解,并通过在翻译水平上抑制靶基因的表达来发挥作用.越来越多的证据表明,在恶性肿瘤中miR-409-3p的下调或上调是控制癌相关基因表达及信号通路调节的重要机制.

目的 探讨长链非编码RNA LINC00662对miR-409-5p表达的调控作用及对宫颈癌细胞增殖和侵袭的影响.方法 荧光实时定量聚合酶链式反应(qPCR)检测宫颈癌组织、宫颈癌细胞系中LINC00662的表达.转染载有LINC00662的质粒或阴性对照质粒至LINC00662表达最低的细胞系.细胞计数(CCK-8)法和Transwell侵袭实验分别检测高表达LINC00662对细胞侵袭能力的影响.采用生物信息学技术预测LINC00662的下游基因,qPCR检测miR-409-5p和DIRAS3 mRNA的表达量,Western Blot检测DIRAS3蛋白的表达量.结果 LINC00662在宫颈癌组织和宫颈癌细胞系中表达明显减少(P<0.05).高表达LINC00662明显抑制宫颈癌HCC94细胞的增殖能力(P<0.05)和侵袭能力(P<0.01).生物信息学技术显示LINC00662可靶向结合miR-409-5p,miR-409-5p可靶向结合DIRAS家族GTP酶3(DIRAS family GTPase 3,DIRAS3)基因.高表达LINC00662后,miR-409-5p表达减少(P<0.01),DIRAS3在mRNA和蛋白水平的表达均增加(P<0.01).结论 LINC00662在宫颈癌组织和细胞系呈低表达,高表达LINC00662可通过影响miR-409-5p的表达抑制宫颈癌HCC94细胞的增殖和侵袭,在宫颈癌中表现为抑癌基因的功能.

目的:探讨丹红注射液(DHI)对急性心肌梗死(AMI)模型大鼠基因表达谱的影响.方法:将雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和DHI组(0.76 mL/kg),每组10只.模型组和DHI组采用冠状动脉左前降支结扎法复制AMI模型.造模后,假手术组和模型组大鼠均肌内注射等容生理盐水,DHI组大鼠肌内注射相应药物,每日1次,连续14 d.末次给药后,分离大鼠梗死边缘区心肌组织,采用基因芯片技术检测基因表达谱的变化情况,以相对表达量差异倍数为指标,筛选差异表达微RNA(miRNA).在检索其对应基因的基础上,利用DAVID生物信息学资源数据库和KEGG通路数据库分别进行基因本体(GO)和KEGG通路富集分析;借助TargetScan数据库预测差异表达miRNA对应的靶基因信使RNA(mRNA),采用Cytoscape 3.6.1软件构建miRNA-mRNA网络并进行分析,采用Agilent GeneSpring GX v11.5软件筛选上述网络中与炎症相关的靶基因和miRNA.结果:与假手术组比较,模型组差异表达miRNA共22个,其中上调5个、下调17个;与模型组比较,DHI组差异表达miRNA共26个,均为上调;与DHI治疗AMI有关的差异表达miRNA包括rno-let-7a-5p、rno-let-7d-5p、rno-let-7f-5p、rno-miR-26b-5p、rno-miR-29b-3p、cel-miR-39-3p、cel-miR-39-5p、rno-miR-142-5p、rno-miR-191a-5p、rno-miR-409a-3p.GO和KEGG通路富集分析结果显示,差异表达miR-NA对应基因主要集中在膜结合细胞器、细胞质、内膜系统等细胞组分中,通过解剖结构发育、多细胞组织发育、发育过程等生物过程来发挥蛋白结合、离子结合等分子功能;其主要富集于钙信号通路,过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)信号通路,血管内皮生长因子(VEGF)信号通路,细胞凋亡,糖基磷脂酰肌醇锚定生物合成,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸降解等信号通路上.miR-NA-mRNA网络分析结果显示,与差异表达miRNA对应的靶基因mRNA共25个,与之关联的miRNA共24个;该网络中与炎症相关的靶基因共6个(IL6、IL1b、TNF、TLR4、CRP、CXCL12),涉及差异表达miRNA共19个.结论:DHI对AMI的治疗作用可能与调节相关miRNA的表达,影响钙离子、PPAR、VEGF等通路的信号转导,调控白细胞介素、趋化因子、C反应蛋白等炎症标志物的分泌有关.

目的 探讨依巴斯汀联合马齿苋治疗特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)的临床疗效及对miR-186-5p、miR-409-3p水平、免疫状态的影响.方法 2014年10月至2017年10月在新疆医科大学附属中医医院就诊的112例AD患者被随机分为对照组和观察组,每组56例.对照组口服依巴斯汀,观察组在对照组基础上进行马齿苋塌渍治疗.比较治疗前、治疗2周、4周的症状评分和临床有效率,比较治疗前后外周血Th17/Treg、IL17水平以及皮损边缘皮肤标本的miR-186-5p、miR-409-3p表达.结果 治疗前,2组各指标均无显著差异,治疗2,4周后,观察组症状评分显著低于对照组(P＜0.05);治疗2,4周时观察组的总有效率分别为66.07％,80.36％,显著高于对照组35.72％,57.14％(P＜0.05).治疗后2组Th17％、Th 17/Treg、IL-17均显著下降,且观察组显著低于对照组(P＜0.05);2组miR-186-5p、miR-409-3p表达均显著下降,且观察组显著低于对照组(P＜0.05).结论 依巴斯汀联合马齿苋能有效改善AD临床症状,提高疗效,下调皮肤中miR-186-5p、miR-409-3p的表达,降低血清Th17/Treg表达,改善炎症状态.

目的 研究血清微小RNA miR-32-5p、miR-409-3p在宫颈癌诊断和预后中的临床价值.方法 选择2015年1月至2016年12月在该院行宫颈癌手术切除的患者112例为宫颈癌组,选择同期在该院就诊确诊为子宫颈上皮内瘤变(CIN)患者72例为CIN组,选择体检健康者45例为健康对照组.观察各组血清miR-32-5p、miR-409-3p、人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)、血清糖类抗原(CA)125水平的变化,并分析血清miR-32-5p、miR-409-3p表达与临床指标、诊断和预后的关系.结果 宫颈癌组术前血清miR-32-5p、β-HCG水平明显高于CIN组和健康对照组(P<0.05),CIN组明显高于健康对照组(P<0.05),宫颈癌组术后血清miR-32-5p、β-HCG水平较术前明显降低(P<0.05).宫颈癌组的术前血清miR-409-3p水平明显低于CIN组和健康对照组(P<0.05),CIN组明显低于健康对照组(P<0.05),宫颈癌组术后血清miR-409-3p水平较术前明显升高(P<0.05).生存组血清miR-32-5p水平明显低于死亡组(P<0.05),而血清miR-409-3p水平明显高于死亡组(P<0.05).血清miR-32-5p、miR-409-3p水平诊断宫颈癌的效能明显优于β-HCG,miR-32-5p和miR-409-3p联合检测诊断和预测3年内出现死亡的效能明显优于单项指标.结论 miR-32-5p、miR-409-3p参与宫颈癌的发生、发展,在宫颈癌的诊断和预后判断中具有重要的临床意义.

目的 通过DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)与siRNA干扰改变乳腺癌细胞MCF-7中DNA甲基化水平,探讨DNA甲基转移酶3b(Dnmt3b)表达对乳腺癌细胞相关mRNA、微小RNA(miRNA)的影响.方法 通过5-Aza-CdR抑制乳腺癌细胞整体甲基化水平,免疫荧光染色检测其抑制效果,高通量测序检测乳腺癌细胞miRNA的表达,荧光定量PCR(qRT-PCR)检测乳腺癌细胞miRNA及乳腺癌相关基因的表达;通过siRNA干扰抑制乳腺癌细胞中Dnmt3b的表达,qRT-PCR和Western blotting检测siRNA干扰效率,细胞生长曲线反映细胞生长情况.结果 5-Aza-CdR降低细胞整体甲基化水平,siRNA干扰后Dnmt3b的表达下降,细胞生长显著抑制;高通量测序显示5-Aza-CdR作用后67个miRNA表达有统计学差异(均P<0.05);qRT-PCR结果显示5-Aza-CdR作用后乳腺癌细胞中miR-200a、miR-411、miR-382、miR-409、miR-493、miR-127、miR-520a、miR-654表达显著上调(P<0.05);siRNA干扰Dnmt3b后乳腺癌细胞中miR-29b、miR-506、miR-200a、miR-203b、miR-409、miR-520a、miR-654的表达显著上调(P<0.05),而miR-200b、miR-127的表达显著下调(均P<0.05);5-Aza-CdR作用后乳腺癌细胞WWOX、MMP7的表达下调,TCF21、TIMP1的表达上调(均P<0.05);siRNA干扰Dnmt3b后乳腺癌细胞抑癌基因BRCA1、BRCA2及癌基因MMP7、survivin的表达均下调(均P<0.05).结论 Dnmt3b可影响乳腺癌细胞相关基因WWOX、TCF21、BRCA1、BRCA2、MMP7、TIMP1、PKM2、survivin及miR-29b、miR-506、miR-200a、miR-200b、miR-203b、miR-409、miR-127、miR-520a、miR-654的表达.