目的:探索小鼠心肌细胞中哺乳动物不育系20样激酶1（mammalian sterile 20-like kinase 1，Mst-1）调控缺氧复氧（hypoxia reoxygenation，HR）诱导的心肌细胞自噬及凋亡机制。方法:采用酶消化法结合差速贴壁的方法培养小鼠乳鼠心肌细胞，通过缺氧24 h复氧6 h的方法建立HR模型。实验分组：对照组：正常培养的心肌细胞；Mst-1空病毒组：用重组慢病毒空载体转染心肌细胞48 h；Mst-1敲低组：用携带Mst-1小干扰RNA（siRNA）的重组慢病毒转染心肌细胞48 h；Mst-1过表达组：用携带Mst-1基因的重组慢病毒转染心肌细胞48 h；HR组：建立心肌细胞HR模型；Mst-1敲低+HR组：用携带Mst-1 siRNA的重组慢病毒转染心肌细胞后48 h建立心肌细胞HR模型；Mst-1过表达+HR组：用携带Mst-1基因的重组慢病毒转染心肌细胞后48 h建立心肌细胞HR模型。采用实时荧光定量RCR（qPCR）以及Western blot检测细胞中Mst-1 mRNA及蛋白相对表达量，免疫荧光染色检测心肌细胞标志物心肌肌钙蛋白T（cTnT），及细胞自噬体与自噬溶酶体变化，脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）法检测心肌细胞凋亡水平，Western blot检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3）Ⅱ/LC3Ⅰ，P62及凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸酶剪切体（cleaved-caspase）9、半胱氨酸天冬氨酸酶前体（pro-caspase）9、cleaved-caspase-3、pro-caspase-3，以及髓细胞白血病1基因（MCL-1）的表达情况达。予以MCL-1抑制剂A1210477做回复实验，验证Mst-1通过调控MCL-1参与心肌细胞凋亡及自噬。结果:免疫荧光检测发现培养细胞表达心肌细胞特异性标志物cTnT；HR情况下心肌细胞中Mst-1表达增加，慢病毒转染可有效抑制或过表达细胞中Mst-1。HR组与Mst-1过表达+HR组心肌细胞内自噬体及自噬溶酶体含量低于对照组，而Mst-1敲低+HR组心肌细胞内自噬体及自噬溶酶体含量高于HR组（ P均<0.05）。TUNEL结果显示，HR组及Mst-1过表达+HR组中TUNEL阳性细胞比例高于对照组，而Mst-1敲低组+HR组中TUNEL阳性细胞比例低于HR组（ P均<0.05）。Western blot结果显示，与对照组比较，HR组及Mst-1过表达+HR组细胞中LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ值较低，P62与 cleaved-caspase-9、cleaved-caspase-3表达水平较高（ P均<0.05）；与HR组比较，Mst-1敲低+HR组中LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ值较高，P62与cleaved-caspase-9、cleaved-caspase-3表达水平较低（ P均<0.05）。HR与Mst-1过表达+HR组心肌细胞中磷酸化（P）MCL-1蛋白表达水平低于对照组，Mst-1敲低+HR组的P-MCL-1蛋白表达水平高于HR组（ P均<0.05）。回复实验显示抑制细胞中MCL-1可阻断Mst-1 siRNA 对细胞自噬及凋亡的调节作用。 结论:抑制心肌细胞中Mst-1的表达，可促进HR诱导的心肌细胞自噬，改善心肌细胞凋亡，该作用可能与其调控MCL-1表达相关。

目的 通过病例-对照关联研究的方法,在包头地区汉族人群中探讨哺乳动物不育系 20 样激酶 1(Mammalian sterile 20-like kinase 1,MST1)基因多态性及其单体型与结直肠癌、直肠癌和结肠癌发病风险的关联性.方法 收集经病理学确诊的结直肠癌患者390 例和正常体检人群413 例,留取2ml外周血用于后续基因分型;根据美国国家生物技术信息中心-人类单体型图数据库提供的中国汉族人群遗传多态性数据筛选MST1 基因的单核苷酸多态性(SNP);采用Taqman探针法进行基因分型;Logistic回归计算各SNP在共显性、显性、超显性、隐性四种遗传模型下与结直肠癌、直肠癌和结肠癌发病风险之间的关联性.结果 共筛选出 4 个MST1 基因SNP,即rs8000、rs2234197、rs2267853、rs6073629,其中SNP rs2234197 与直肠癌发病风险有关,相对于 GG+AA基因型,AG基因型可降低直肠癌发病风险,OR[95%置信区间(CI)]=0.657(0.442～0.976);SNP rs8000 与结肠癌发病风险有关,相对于TT+GT基因型,GG基因型可降低结肠癌发病风险[OR(95%CI)=0.425(0.182～0.992)].结论 MST1 基因SNP rs2234197 AG基因型和SNP rs8000 GG基因型可能分别是直肠癌和结肠癌的保护性因素.

目的 分析剖宫产术后感染产妇炎症因子和T淋巴细胞亚群水平变化及对Hippo信号通路的影响.方法 纳入2020年9月-2022年9月于河南省生殖妇产医院、河南省妇幼保健院就诊的剖宫产术后感染产妇158例和术后未感染产妇173例,分别纳入感染组与非感染组,分析剖宫产术后感染病原菌分布及对炎症因子和T淋巴细胞亚群及Hippo信号通路基因水平的影响.结果 158例剖宫产术后感染产妇共分离出病原菌171株,其中革兰阴性菌118株,革兰阳性菌44株,真菌9株,占比分别为69.01％、25.73％、5.26％;与非感染组比较,感染组血清白细胞介素(IL)-1β、IL-2、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、可溶性髓系细胞触发受体-1(sTREM-1)水平及外周血Hippo信号通路基因哺乳动物不育系20样激酶1(mst 1)、Tafazzin蛋白(taz)、Yes相关蛋白(yap)表达水平均升高(P＜0.05),外周血CD3+、CD4+、CD3+CD8+水平降低(P＜0.05);与普通感染产妇比较,严重感染产妇血清IL-1β、IL-2、IL-6、TNF-α、sTREM-1水平与外周血Hippo信号通路基因mst1、taz、yap表达水平更高(P＜0.05),外周血CD3+、CD4+、CD3+CD8+水平更低(P＜0.05).结论 剖宫产术后感染病原菌以革兰阴性菌为主,感染可导致血清IL-1β、IL-2、IL-6、TNF-α、sTREM-1及外周血Hippo信号通路基因mst1、taz、yap表达水平升高,外周血CD3+、CD4+、CD3+CD8+水平降低.

目的 探究在肥胖合并妊娠期糖尿病产妇中,高血糖、高血脂促进胎盘滋养层细胞凋亡的机制.方法 留取天津医科大学第二医院产科2020年1月至2023年1月收治的健康(NC)产妇、妊娠期糖尿病(GDM)产妇、肥胖(OB)产妇和肥胖合并妊娠期糖尿病(OB+GDM)产妇各20例的胎盘,分别予HE染色、免疫组化检测胎盘病理变化及凋亡相关蛋白的表达,通过Western印迹检测哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、Bcl-2相关X蛋白(BAX)、B细胞淋巴瘤-2基因(BCL-2)、半胱氨酸蛋白水解酶3(CASP3)等凋亡相关蛋白的表达.结果 胎盘HE染色发现,高血糖、高血脂可导致胎盘合体滋养细胞和细胞滋养细胞相对减少且大小不一;TUNEL法发现,高血糖和高血脂导致滋养层细胞凋亡增加,以合体滋养细胞凋亡为主,OB+GDM组凋亡最为严重;免疫组化检测发现,高血糖、高血脂可以诱导胎盘凋亡相关蛋白MST1、JNK的表达增加;Western印迹检测发现,MST1-JNK-BAX-CASP3凋亡调控通路可能参与胎盘滋养层细胞凋亡过程.结论 肥胖合并妊娠期糖尿病产妇的胎盘滋养层细胞可能在高血糖、高脂血症形成的内环境下,过度产生活性氧,通过MST1-JNK-BAX-CASP3凋亡调控通路介导胎盘滋养层细胞的凋亡,从而影响胎盘功能.

目的 探讨小豆蔻明(Cardamonin,CAR)对脑梗死大鼠模型血脑屏障(Blood-brain barrier,BBB)及 Hippo-p-Yes 相关蛋白(Yes associated protein,YAP)/转录共激活因子(Tafazzin,TAZ)信号通路的影响.方法 建立脑梗死大鼠模型,所有大鼠分为对照组[Control(CT)组]、[模型组(Model(M)组]、CAR低剂量组(CAR L 组,5 mg·kg-1·d-1 CAR)、CAR 高剂量组(CAR H 组,20 mg·kg-1·d-1 CAR)和 CAR 高剂量+PY60组(CAR H+PY60组,20 mg·kg-1·d-1 CAR+10 mg/mL PY60);给药期间各组大鼠做神经功能评分;给药结束后苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色观察脑组织病理变化,氯化三苯基四氮唑(Triphe-nyl-tetrazolium chloride,TCC)染色测定脑梗死体积,免疫组化检测脑组织闭合蛋白(Occludin)、紧密连接蛋白(Claudin-5)的表达水平,计算脑含水量和伊文思蓝(Evans blue,EB)渗透量,Western blot技术验证脑组织磷酸化(Phosphorylation,p)-哺乳动物 STE20 样蛋白激酶 1(Mammalian sterile20-like kinase1,MST1)、MST1、p-大肿瘤抑制因子 1(Large tumor suppressor factor 1,LATS1)、LATS1,p-YAP,YAP 蛋白表达水平.结果 与CT组比较,M组大鼠脑组织细胞间隙变大且有大量炎症细胞浸润及少量空泡变性,神经功能评分、脑梗死体积、脑含水量、EB渗透量及p-YAP/YAP蛋白表达水平升高,Occludin,Claudin-5,p-MST1/MST1,p-LATS1/LATS1蛋白表达水平降低(P＜0.05);与M组比较,CAR L,H组大鼠炎症细胞浸润、细胞空泡变性、细胞间隙减少,脑组织结构更完整,神经功能评分、脑梗死体积、脑含水量、EB渗透量及p-YAP/YAP蛋白表达水平降低,Occludin,Claudin-5,p-MST1/MST1,p-LATS1/LATS1 蛋白表达水平升高(P＜0.05);与CAR H组比较,CAR H+PY60组大鼠炎症细胞浸润和细胞空泡变性增加,神经功能评分、脑梗死体积、脑含水量、EB 渗透量及 p-YAP/YAP 蛋白表达水平升高,Occludin,Claudin-5,p-MST1/MST1,p-LATS1/LATS1蛋白表达水平降低(P＜0.05).结论 CAR可能通过抑制YAP/TAZ信号通路来改善脑梗死大鼠模型BBB功能.

观察白藜芦醇(resveratrol,Res)通过调控Hippo信号通路对卵巢低反应(poor ovarian response,POR)小鼠卵巢功能的保护作用,探析Res抑制卵巢细胞凋亡的可能机制.将筛选后动情周期规律的雌性小鼠随机分成空白组,模型组以及Res低、高剂量组(20、40 mg·kg-1),每组20只.空白组给予等体积0.9％氯化钠溶液灌胃,模型组以及Res低、高剂量组小鼠给予雷公藤多苷混悬液(50 mg·kg-1)灌胃2周,造模完成后,Res低、高剂量组小鼠连续灌胃治疗2周,空白组和模型组给予等体积0.9％氯化钠溶液灌胃,于治疗结束次日对各组雌鼠进行促排操作.最后每组随机选取12只雌鼠进行取材,将每组剩余的8只雌鼠与雄鼠1∶1合笼.采用阴道脱落细胞涂片观察小鼠的动情周期变化,检测小鼠获卵数、卵巢湿重、卵巢指数和妊娠率,通过酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清中抗缪勒管激素(anti-Mullerian hormone,AMH)、促卵泡生成素(follicle-stimulating hormone,FSH)、雌二醇(estradiol,E2)、促黄体生成激素(luteinizing hormone,LH)的含量;通过苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色和脱氧核苷酸转移酶dUTP末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling,TUNEL)染色法观察卵巢组织形态和卵巢细胞凋亡情况;通过免疫组化法检测Yes相关蛋白(Yes-asso-ciated protein,YAP)1 和带有 PDZ 结合基序的转录共激活因子(transcriptional coactivator with PDZ-binding motif,TAZ)的蛋白表达,通过Western blot法检测哺乳动物Ste-20样激酶(mammalian sterile 20-like kinase,MST)1/2、大型肿瘤抑制因子(large tumor suppressor,LATS)1/2、YAP1、TAZ、B 淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2 关联 X的蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)蛋白表达水平的变化.结果发现,与空白组比较,模型组小鼠动情周期紊乱率升高,卵巢组织各级正常发育卵泡数量减少,闭锁卵泡增多,卵巢颗粒细胞凋亡量提高,获卵数下降,卵巢湿重与卵巢指数降低,血清中FSH和LH含量升高,AMH和E2含量下降,卵巢组织YAP1、TAZ蛋白表达水平降低,MST1/2、LATS1/2和Bax蛋白相对表达升高,YAP1、TAZ和Bcl-2蛋白相对表达降低,合笼后每胎胚胎数显著降低;与模型组比较,Res低、高剂量组小鼠动情周期紊乱率降低,卵泡数量和形态得到不同程度改善,卵泡闭锁量降低,卵巢颗粒细胞凋亡程度得到改善,获卵数升高,卵巢湿重与卵巢指数升高,血清中FSH和LH含量降低,AMH和E2含量升高,卵巢组织YAP1、TAZ蛋白表达水平升高,MST1/2、LATS1/2和Bax蛋白相对表达降低,YAP1、TAZ和Bcl-2蛋白相对表达升高,合笼后每胎胚胎数不同程度升高.综上,Res可以有效抑制小鼠卵巢细胞凋亡,改善卵巢反应性,其机制可能与调节Hippo通路中的关键分子有关.

目的 探究虎杖苷(PD)对缺氧性肺动脉高压(HPH)新生大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖与凋亡的影响及其作用机制.方法 将新生大鼠随机分为6组:对照组、模型组、PD低剂量组、PD中剂量组、PD高剂量组、PD高剂量+Hippo通路抑制剂(PD高剂量+XMU-MP-1)组,每组10只.缺氧2周后,检测各组大鼠右心室收缩压(RVSP)和右心室肥厚指数(RVHI),苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织病理学变化,并计算肺动脉管壁厚度占总厚度的百分比(WT％)和管壁面积占总面积的百分比(WA％).分离各组新生大鼠PASMCs,分为NC组、低氧(Hypoxia)组、PD低剂量组、PD中剂量组、PD高剂量组、PD高剂量+XMU-MP-1组.CCK-8和EdU检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫印迹(Western blot)检测肺组织和PASMCs中Yes相关蛋白1(YAP1)、PDZ结合域的转录共刺激因子信号通路(TAZ)、哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)蛋白表达.结果 与对照组相比,模型组大鼠肺动脉管壁明显增厚,管腔变窄,RVSP、RVHI、WT％、WA％、YAP1、MST1、TAZ蛋白表达显著升高(均P＜0.05);与模型组相比,PD低、中、高剂量组大鼠肺动脉增厚减少,管腔变大,RVSP、RVHI、WT％、WA％、YAP1、MST1、TAZ蛋白表达显著降低,且PD各组间差异存在剂量依赖性(均P＜0.05);XMU-MP-1可逆转这一结果.与NC组相比,Hypoxia组细胞A450nm值、EdU阳性率、YAP1、MST1、TAZ、Bcl-2蛋白表达显著升高,凋亡率、Bax蛋白表达显著降低(均P＜0.05);与Hypoxia组相比,PD低、中、高剂量组细胞A450nm值、EdU阳性率、YAP1、MST1、TAZ、Bcl-2蛋白表达显著降低,凋亡率、Bax表达显著升高,且PD各组间有剂量依赖性(均P＜0.05);XMU-MP-1可逆转这一结果.结论 PD可能通过抑制YAP1/TAZ信号通路抑制HPH新生大鼠PASMCs增殖,促进凋亡.

目的 制备髓系(包括巨噬细胞和粒细胞)特异敲除哺乳动物不育系20 样激酶 1(MST1)基因小鼠,为研究巨噬细胞MST1 在临床相关疾病发生中的作用及机制提供动物模型.方法 利用 MST1 基因携带 loxP 位点的小鼠(Mst1flox/flox)和髓系细胞特异表达LysM-Cre小鼠杂交构建巨噬细胞特异性敲除 MST1 小鼠(Mst1flox/floxLysM-Cre+,即Mst1ΔM/ΔM);通过聚合酶链式反应(PCR)分别扩增loxP位点和Cre基因进行基因型鉴定;通过定量PCR以及免疫荧光验证MST1 在巨噬细胞中的敲除效率;通过流式细胞术检测肝脏主要免疫细胞群.结果 Mst1flox/floxLysM-Cre+,即Mst1ΔM/ΔM为巨噬细胞特异性敲除 MST1 小鼠基因型;qPCR和免疫荧光检测表明骨髓来源的巨噬细胞和腹腔巨噬细胞的MST1 敲除效率达70%以上;流式检测表明敲除巨噬细胞MST1 基因对小鼠肝脏的主要免疫细胞群无明显影响.结论 成功构建巨噬细胞特异敲除MST1 小鼠模型,为进一步研究巨噬细胞 MST1 在临床相关疾病中的作用及机制奠定了基础.

在哺乳动物中,Hippo信号通路具有高度保守性,其在调节骨代谢、维持骨骼正常生理功能方面有重要作用.哺乳动物sterile 20样激酶(MST)1/2、大肿瘤抑制因子(LATS)1/2和Yes相关蛋白(YAP)/携带PDZ结合基序的转录辅助激活物(TAZ)为Hippo信号通路核心组件,在其上下游多种转录因子的介导下,Hippo信号通路调控成骨细胞、破骨细胞、软骨细胞等细胞的生理活动.本文就Hippo信号通路在骨代谢中的研究进展进行综述,为骨代谢相关疾病的研究和治疗提供可能的思路和策略.

目的 探讨哺乳动物ste20样激酶1(mammalian sterile20-like 1,MST1)基因的miRNAs对肝脏内脂质堆积的影响.方法 利用高脂诱导非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型小鼠与低脂对照组小鼠的肝脏及脂肪组织进行miRNAsequence分析,选取表达上调的miRNAs,通过数据库miRDB、starBase筛选出可能靶向MST1靶基因3'UTR区的miRNAs进行研究,利用Western blot及双荧光素酶报告基因实验检测miRNAs对MST1的靶向效应.并在NAFLD细胞模型内进行MST1过表达或干扰,进一步验证miRNAs对MST1的表达调控作用.结果 Western blot实验显示得到mmu miR 149-5p和mmu miR 499-5p抑制鼠MST1基因蛋白水平的表达,Luciferases实验证明mmu miR 149-5p和mmu miR 499-5p靶向MST1能够增加AML-12细胞内的脂质堆积.结论 mmu miR 149-5p、mmu miR 499-5p能够调控小鼠肝脏MST1表达并影响肝脏内脂质堆积.