目的 研究火把花根片(CRT)对高糖诱导的肾小管上皮细胞(HK-2)上皮-间充质转化(EMT)的影响并探讨其可能的作用机制.方法 体外培养HK-2,将HK-2分为以下5组:对照组(CON组)、高渗组(MA组)、高糖组(HG组)、高糖+火把花根片组(HG+CRT组)、高糖+PI3K抑制剂组(HG+LY29400组)、高糖+火把花根片+PI3K抑制剂组(HG+CRT+LY29400组).采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测各组E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、磷酸酶和张力蛋白同系物(PTEN)mRNA表达水平;采用Western blot检测各组PTEN、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、E-cadherin、α-SMA的蛋白表达水平.结果 与CON组比较,HG组细胞α-SMA的蛋白及mRNA表达水平、p-Akt的蛋白表达水平、p-Akt/Akt比值升高,E-cadherin、PTEN的蛋白及mRNA表达水平降低,差异有统计学意义(P＜0.05).与HG组比较,HG+CRT组细胞中α-SMA的蛋白及mRNA表达水平降低,E-cadherin的蛋白及mRNA表达水平相对增加,差异有统计学意义(P＜0.05);与HG组比较,HG+LY29400组PI3K、p-Akt、α-SMA蛋白表达水平和p-Akt/Akt比值降低,PTEN的蛋白及mRNA表达水平、E-cadherin的蛋白表达水平升高,差异有统计 学意义(P＜0.05).与HG+CRT组比较,HG+CRT+LY29400组E-cadherin、α-SMA、PTEN、PI3K、Akt的蛋白表达水平及p-Akt/Akt比值差异均无统计学意义(P＞0.05),而p-Akt蛋白表达升高(P＜0.05).结论 在体外,CRT可以通过PTEN/PI3K/Akt信号通路逆转高糖诱导的肾小管上皮细胞 EMT.

目的 探讨二十碳五烯酸(EPA)通过调控p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路对肥胖大鼠骨骼肌胰岛素抵抗的改善作用.方法 将50只雄性Wistar大鼠随机分组为对照组、模型组、抑制剂组、EPA组、抑制剂+EPA组,每组10只,共干预6周.造模后抑制剂组灌胃1 mg/kg p38 MAPK抑制剂SB203580,EPA组灌胃70 mg/kg EPA,抑制剂+EPA组灌胃SB203580+EPA,模型组和对照组灌胃等体积生理盐水.测定大鼠空腹血糖、空腹血清胰岛素水平、骨骼肌组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平,采用腹腔葡萄糖耐量实验(IPGTT)和胰岛素耐受实验(ITT)评价大鼠胰岛素抵抗程度,采用Western blot法和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定大鼠骨骼肌组织中磷酸化p38(p-p38)蛋白及p38 mRNA表达情况.结果 与对照组相比,模型组大鼠体重、附睾脂肪湿重、空腹血糖、空腹胰岛素水平、IPGTT血糖水平、ITT血糖水平、MDA水平明显升高,GSH-Px和SOD活性明显降低,骨骼肌组织中p-p38蛋白表达和p38 mRNA表达明显升高(P＜0.05).与模型组相比,EPA组和抑制剂+EPA组大鼠的体重和附睾脂肪湿重明显降低,抑制剂组和EPA组大鼠空腹血糖、空腹胰岛素水平、IPGTT血糖水平、ITT血糖水平、MDA水平明显降低,GSH-Px和SOD活性明显升高,骨骼肌组织中p-p38蛋白表达明显降低(P＜0.05),但骨骼肌组织中p38 mRNA表达无明显改变(P＞0.05).结论 EPA可能是通过抑制p38 MAPK信号通路减轻氧化应激反应,从而改善肥胖大鼠骨骼肌胰岛素抵抗.

目的:分析重症急性胰腺炎（SAP）肠道菌群特征，探讨早期肠内营养联合应用微生态制剂的临床价值。方法:选择前瞻性队列研究方式，选取2021年1月至2022年12月在沧州市人民医院治疗的SAP患者80例作为观察组，按照随机数字表法分为观察A组（40例）和观察B组（40例），选择同期体检健康人群的20例为对照组，以16S rDNA V3-V4区段实施PCR扩增，采取Illumina Miseq高通量测序平台评价肠道菌群特征。观察A组给予早期肠内营养，观察B组给予早期肠内营养联合应用微生态制剂治疗，评价治疗后的临床疗效，对比治疗前后的腹内压、胃肠功能、血清炎症因子以及血清脂肪酶、淀粉酶等指标。结果:α多样性分析结果提示：观察组在Shannon指数上明显低于对照组（P<0.05），在Chao指数方面差异则无统计学意义（P>0.05）。在肠道菌群门水平上，观察组在变形菌门相对丰度较高，厚壁菌门相对丰度明显较低；在属水平上，观察组在大肠志贺菌属和类杆菌相对丰度较高，布劳特菌属、双歧杆菌属及链球菌相对丰度较低。观察B组临床疗效好于观察A组（P<0.05）。治疗7 d、14 d，观察B组淀粉酶、脂肪酶、乳酸脱氢酶、白介素-6、肿瘤坏死因子-α、降钙素原、腹内压、胃肠功能评分均明显低于观察A组（P<0.05）。结论:在SAP患者肠道菌群中致病性菌群多样性和丰度增加、有益菌多样性和丰度减少。早期肠内营养联合微生态制剂应用于SAP治疗能够提高疗效，促进血清指标恢复。

目的 评估来曲唑片(在达英-35治疗的基础上)对多囊卵巢综合征患者性激素调节及排卵改善的效果.方法 选择2020年1月至2022年12月西安市人民医院(西安市第四医院)收治的多囊卵巢综合征患者80例,按随机数字表法分组分为对照组(40例,接受常规治疗+达英-35治疗)、观察组(40例,接受联合来曲唑片治疗).2组均治疗3个疗程,随访6个月,分析比较2组临床疗效,血清催乳激素(PRL)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、睾酮、抗苗勒管激素(AMH)、人体抑制素B(INHB)、丝氨酸蛋白酶抑制剂(Vaspin)水平,排卵率、妊娠率、成熟卵泡、最大卵泡直径、子宫内膜厚度,不良反应发生情况.结果 观察组总有效率较高;治疗后2组血清PRL、FSH、LH、睾酮、AMH、INHB、Vaspin水平降低,且观察组较低;观察组子宫内膜厚度较厚,排卵率、妊娠率较高,最大卵泡直径较长,成熟卵泡数量较多,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 应用来曲唑片有助于调节多囊卵巢综合征性激素及疾病相关因子水平,改善排卵功能,提高妊娠率,且不易增加不良反应发生风险,效果显著.

目的 探讨中药活性成分异鼠李素(isorhamnetin,ISO)对结肠癌肝转移和肿瘤外泌体分泌的干预作用,并进一步揭示其潜在作用机制.方法 使用CCK-8法检测ISO对小鼠结肠癌细胞MC38细胞增殖的影响.使用NanoSight-NS300系统检测ISO对MC38细胞外泌体释放的影响.通过实时荧光定量检测系统(quantitative PCR detecting system,qPCR)检测ISO对MC38细胞对中性鞘磷脂酶-2(neutral sphingomyelinase 2,nSMase2)、Rab27a等外泌体生成、分泌相关基因表达的影响.将12只C57BL/6小鼠随机分为对照组、MC38-外泌体组、ISO组、阳性对照组(外泌体抑制剂GW4869组),造模4周后检测小鼠肝脏转移灶数量及肝脏重量.通过qPCR检测肝转移灶中nSMase2、Rab27a等外泌体生成、分泌相关基因的表达情况.结果 ISO能够抑制MC38细胞增殖,且在20 μmol/L浓度以下时,抑制率低于10％,为无毒剂量;ISO能够减少MC38细胞外泌体的分泌,且具有时间依赖性(P＜0.05);ISO能够抑制MC38细胞中外泌体生成相关基因nSMase2 mRNA的表达(P＜0.001),而对外泌体分泌相关基因表达无明显抑制作用.与对照组比较,ISO组小鼠的肝脏重量明显降低(P＜0.05),转移瘤数目明显减少;ISO能明显抑制小鼠结肠癌肝转移灶中外泌体生成相关基因nSMase2 mRNA的表达(P＜0.001).结论 ISO可能通过nSMase2依赖途径抑制小鼠结肠癌细胞外泌体生成,进而抑制结肠癌肝转移.

目的 观察肾炎汤联合西药对急性肾小球肾炎(AGN)患者组织型纤溶酶原激活物(t-PA)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)、可溶性凋亡相关因子(sFas)及可溶性凋亡相关因子配体(sFasL)的影响.方法 AGN患者92例按奇偶数分组法设为对照组与研究组各46例.对照组行西医常规治疗,研究组在此基础上联合肾炎汤治疗,两组均治疗14 d.比较两组疗效及临床指标恢复时间,并对两组肾功能及血清t-PA、PAI-1、sFas、sFasL水平进行对比.结果 研究组总有效率为95.65％,高于对照组的80.43％(P＜0.05).研究组血尿消退时间、血沉恢复时间、水肿消退时间及血压恢复时间短于对照组(P＜0.05).治疗后,两组24 h尿蛋白定量、血尿素氮、血肌酐比治疗前低,且研究组比对照组低(P＜0.05).治疗后,两组t-PA较治疗前升高,PAI-1、sFas、sFasL较治疗前降低,且研究组改善优于对照组(P＜0.05).结论 肾炎汤联合西药治疗AGN患者可有效缩短其临床指标恢复时间,提升疗效,可能与上调t-PA水平及下调PAI-1、sFas、sFasL水平有关.

目的 探讨阿帕替尼联合卡培他滨及替莫唑胺治疗转移性胃肠胰神经内分泌肿瘤的有效性及安全性.方法 选取2020年1月至2023年6月中国人民解放军联勤保障部队第九八O医院收治的28例转移性胃肠胰神经内分泌肿瘤患者为研究对象,根据治疗方案的不同分为试验组(n=13)和对照组(n=15).试验组给予阿帕替尼联合卡培他滨及替莫唑胺治疗,对照组给予卡培他滨及替莫唑胺治疗,直至疾病进展(PD)或不良反应不可耐受,主要观察指标为中位无进展生存(PFS)时间,次要终点包括客观缓解率(ORR)、疾病控制率(DCR)及不良反应情况.结果 试验组完全缓解(CR)0例,部分缓解(PR)6例,疾病稳定(SD)4例,PD3例,ORR为46.15％,DCR为76.92％,中位PFS时间为10.8个月.对照组CR 0例,PR 5例,SD 4例,PD 6例,ORR为33.33％,DCR为60.00％,中位PFS时间为9.2个月.试验组较对照组PFS时间延长1.6个月,PD或死亡风险下降58％(HR=0.42,95％CI:0.19～0.93,P=0.009 4).试验组发生化疗药物相关不良反应,同时也出现抗血管生成靶向药相关不良反应,但两组不良反应均为1～2级,予以治疗后可耐受.结论 阿帕替尼联合卡培他滨及替莫唑胺治疗转移性胃肠胰神经内分泌肿瘤有效、安全.

目的 探讨右旋体紫草素(shikonin)抗奥密克戎毒株的药理作用和对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性.方法 使用奥密克戎毒株BA.2.2转染的Vero细胞模型检测shikonin的抗病毒活性;利用体外主蛋白酶荧光偏振模型测试shikonin对于新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性,实验以奈玛特韦为阳性对照化合物.结果 Vero细胞模型药理活性测试发现shikonin具有抑制奥密克戎毒株核酸复制的作用;而在体外荧光偏振模型活性测试实验中,shikonin在20、50 μM药物浓度并未表现出对主蛋白酶的显著抑制活性.结论 紫草素(shikonin)在细胞水平的实验中表现出抗奥密克戎毒株的药理活性,但其可能是主蛋白酶的非特异性抑制剂,抗病毒的作用机理极可能为抑制新型冠状病毒RNA聚合酶.

目的 在锂-毛果芸香碱(Lithium-Pilocarpine)致痫大鼠模型中,检测炎症小体的激活,观察小胶质细胞的活化和异常新生神经元的形成,探索炎症小体激活小胶质细胞促进异常新生神经元形成在癫痫发生发展中的作用机制.方法 通过腹腔注射氯化锂和毛果芸香碱建立癫痫大鼠模型,将大鼠分为Sham组(生理盐水对照组,n=12)、Pilo组(锂-毛果芸香碱致痫组,n=20)和Pilo+MCC950组[锂-毛果芸香碱致痫后给予核苷酸结合结构域富含亮氨酸重复序列和含热蛋白结构域受体3(NLRP3)抑制剂组,n=20],在急性期观察记录大鼠癫痫的行为学表现,通过病理切片确认脑组织损伤情况和细胞激活情况,借助分子检测确认炎症小体和其他分子的表达情况.采用体外细胞模型挽救实验验证炎症小体的作用.结果 Pilo组大鼠有6只出现V级,5只出现Ⅳ级,2只出现Ⅲ级的癫痫发作情况.相较之下,Pilo+MCC950组大鼠则没有出现Ⅴ级,6只出现Ⅳ级,8只出现Ⅲ级,2只出现Ⅱ级的癫痫发作情况.Pilo组强直痉挛发作的潜伏期短于Pilo+MCC950组,Ⅲ级以上癫痫发作的次数和持续时间大于Pilo+MCC950组.Pilo组NLRP3和pro-caspase-1的含量、4种促炎细胞因子的含量以及脑源性神经营养因子(BNDF)和细胞外调节蛋白激酶(ERK)均高于Pilo+MCC950组.免疫荧光检测显示,Pilo组小胶质细胞大量活化,出现大量异常新生神经元.体外细胞实验后,ELISA结果验证了炎症小体的作用.结论 在锂-毛果芸香碱致痫大鼠模型中,炎症小体NLRP3接受外界炎症刺激而活化聚集,进而大量产生多种促炎细胞因子,使得小胶质细胞活化,分泌BDNF并激活ERK信号通路,调控异常新生神经元的形成和聚集等生物学行为,参与癫痫的发生发展.

目的:探究多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]抑制剂尼拉帕利作为胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)放疗增敏剂的可行性及作用机制.方法:生物信息学分析PARP抑制剂奥拉帕利和他拉唑帕利在胶质瘤中的作用机制及其与放疗的相关性;CCK-8测定尼拉帕利在GBM细胞(A172、U251和U87)中的最适作用浓度和最适作用时间;克隆形成实验检测尼拉帕利对GBM细胞放疗敏感性的影响;流式细胞术检测尼拉帕利联合放疗对GBM细胞周期的影响,蛋白质印迹检测尼拉帕利联合放疗对DExD-box解旋酶(DExD-box helicase,DDX21)蛋白表达的影响,免疫荧光法研究尼拉帕利联合放疗对DDX21在GBM中细胞核定位的影响,以探讨尼拉帕利在GBM中放疗增敏的作用机制.结果:生物信息学分析表明,在519个肿瘤细胞系中,PARP抑制剂在胶质瘤中发挥作用的途径主要与核糖体生物合成和功能相关;在44个实体肿瘤细胞系中,同源重组修复能力与核糖体生物合成能力高度正相关.尼拉帕利在A172和U87细胞系中的IC5.值分别为(10.77±3.31)μmol/L和(32.37±2.84)μmol/L;在尼拉帕利浓度为348 nmol/L和1 044 nmol/L时A172细胞的辐射剂量增强因子(DEF37)分别为1.99和2.17,在1 056 nmol/L和3 169 nmol/L时U87细胞的DEF37分别为1.10和1.44,尼拉帕利对p53野生型的A172细胞和U87细胞具有放疗增敏作用,但对p53突变型的U251细胞无放疗增敏作用;在A172细胞和U87细胞中尼拉帕利联合放疗组的G2/M期细胞均明显多于对照组,尼拉帕利联合放疗可以使A172和U87细胞阻滞在对射线敏感的G2/M期,从而实现放疗增敏.最后,尼拉帕利联合放疗处理U87细胞后,DDX21蛋白表达无显著变化(P＞0.05),免疫荧光结果提示尼拉帕利联合放疗处理U87细胞后,DDX21从核仁到核质重新定位;敲低DDX21会引起U87细胞产生放疗抵抗,尼拉帕利对DDX21敲低后的U87细胞仍有放疗增敏作用.结论:尼拉帕利通过使DDX21从核仁到核质重新定位,影响核糖体生物合成,产生G2/M期细胞周期阻滞,从而增加U87细胞的放疗敏感性.