环孢子虫病是一种肠道寄生虫病，人体通过食入被环孢子虫卵囊污染的水和食物而感染，摄入的卵囊通过侵犯小肠上皮细胞进入人体，尤以空肠为主，进而出现慢性肠炎的临床表现。本例患者以腹水为主要表现，血、腹水和骨髓检查结果均提示嗜酸性粒细胞水平增高明显，曾拟诊为"嗜酸细胞性胃肠炎"，并予以糖皮质激素治疗，患者腹胀症状一度出现好转，但在停药3个月后再次出现腹水，最终通过小肠黏膜病理和粪便直接涂片法在光学显微镜下找到环孢子虫卵囊确诊，服用复方磺胺甲噁唑得以痊愈。

患者女性，57岁，无诱因左眼眼红、眼磨伴视力下降病史1年。2个月前初诊为病毒性角膜炎，按病毒性角膜炎治疗2个月后病情加重，角膜出现溃疡。行角膜刮片细胞学检查，角膜刮片行荧光染色可见较多蓝色椭圆形孢子样结构，行齐-内染色可见较多红色椭圆形孢子样结构，确诊为左眼微孢子虫性角膜炎。局部给予氧氟沙星眼膏、伏立康唑滴眼液等抗炎抗感染治疗效果不佳，后行穿透性角膜移植术，术后患者病情平稳。

目前糖皮质激素（以下简称激素）仍是治疗抗中性粒细胞胞质抗体相关性血管炎（AAV）的基石，但激素相关不良反应，尤其是感染会导致AAV不良预后。如何更精准地应用激素治疗AAV，在保证疗效的同时尽可能减少副作用是临床实践的难点，亦是近年国际AAV指南关注及更新的重点。本文结合近年国际AAV指南关于激素治疗AAV，尤其是肉芽肿性多血管炎和显微镜下多血管炎的更新，强调诱导缓解期快速激素减量、维持期尽量减停激素及预防感染（尤其是肺孢子虫病）的理念，并提出未来激素治疗的趋势（如低剂量诱导缓解，甚至无激素诱导及维持缓解）及目前激素治疗尚待解决的问题（如激素冲击的指征、具体剂量）。

目的 寄生虫感染与癌症的关系已成为研究热点之一.目前胃肠癌患者肠道单一原虫感染已有报道,但共感染报道较少见.本研究旨在明确胃肠癌患者肠道原虫共感染情况.方法 根据人五毛滴虫、十二指肠贾第虫、微小隐孢子虫、人芽囊原虫、脆弱双核阿米巴和毕氏肠微孢子虫特异的基因序列设计引物进行巢氏PCR扩增,检测195例临床胃肠癌患者肠道原虫共感染情况.结果 巢氏PCR检测结果显示胃肠癌患者肠道原虫总感染率为48.72％(95/195).其中2种原虫共感染23例(8例:人五毛滴虫+人芽囊原虫;11例:人五毛滴虫+微小隐孢子虫;3例:人五毛滴虫+十二指肠贾第虫;1例:十二指肠贾第虫+微小隐孢子虫),占肠道原虫感染的24.21％.3种原虫共感染为3例(1例:人五毛滴虫+微小隐孢子虫+人芽囊原虫;2例:人五毛滴虫+十二指肠贾第虫+微小隐孢子虫),占原虫感染的3.16％.1种原虫感染67例(56例:人五毛滴虫;9例:微小隐孢子虫;1例:人芽囊原虫;1例:脆弱双核阿米巴),占原虫感染的70.52％,未检测到毕氏肠微孢子虫感染.结论 胃肠癌患者存在肠道原虫共感染且感染率较高.单因素方差分析发现人五毛滴虫单独感染病例显著高于含人五毛滴虫的2种原虫共感染(P=0.0022)以及3种原虫共感染病例(P=0.0019),而2种和3种原虫共感染病例的感染率间无明显差异(P=0.2775),表明胃肠道癌症患者中人五毛滴虫单独感染病例高于2种或以上原虫共感染病例.BLAST和单核苷酸多态性分析发现,不同感染原虫的基因序列除个别与GenBank参考序列同源性为100％外,其他基因序列在不同位点出现不同程度的碱基突变、插入或丢失现象.该研究结果为今后胃肠癌患者病因学以及诊断和防治提供了重要参考.

本研究旨在解析东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae的腺苷酸激酶(Adenylat kinase,ADK)NcADK的理化性质和分子特性,并检测NcADK基因在东方蜜蜂微孢子虫侵染意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica工蜂过程中的表达特征,以期丰富NcADK相关信息,并为进一步的功能研究提供依据.利用相关生物信息学软件预测和分析NcADK的理化性质、信号肽、磷酸化位点、二级结构和三级结构.使用MEME软件和Batch CD-Search工具分别预测东方蜜蜂微孢子虫和其它7种微孢子ADK蛋白的保守基序和保守结构域.通过Mega 11.0软件基于ADK氨基酸序列构建进化树.采用RT-qPCR检测东方蜜蜂微孢子虫侵染过程中NcADK的相对表达量.结果表明,NcADK的CDS含有540个核苷酸,可编码179个氨基酸;NcADK的分子量约为20.66 kDa,分子式为C903H1488N258O278S8,脂肪系数为100.61,平均亲水系数为-0.502,等电点为6.83,含29个负电荷氨基酸和29个正电荷氨基酸;NcADK可同时定位于细胞质、线粒体、细胞核、囊泡和过氧化物酶体;NcADK含20个磷酸化位点,不含典型的信号肽;NcADK含88个a-螺旋,24条延长链,17个β-转角,50个无规则卷曲,与模板A0A0F9WEU7.1.A之间的序列同源性为100％;在东方蜜蜂微孢子虫、东方赤孢子虫Hamiltosporidium tvaerminnensis、肠脑炎微孢子虫Encephalitozoon intestinalis、按蚊微孢子虫 Anncaliia algerae 和角膜条孢虫 Vittaforma corneae ADK 中均鉴定到 1 个相同的结构域和5个相同的保守基序;东方蜜蜂微孢子虫与蜜蜂微孢子虫Nosema apis的ADK在进化树上聚为一支.相较于接种后1 d(1 day post inoculation,1 dpi),NcADK的表达量在2 dpi上调但无显著差异(P＞0.05),在3 dpi和4 dpi均显著上调(P＞0.05).研究结果明确了NcADK的理化性质和分子特性,并揭示NcADK是潜在的亲水性蛋白和胞内蛋白,不同微孢子虫的ADK具有较强的保守性,东方蜜蜂微孢子虫及其姐妹种蜜蜂微孢子虫的ADK具有高同源性,NcADK在3 dpi和4 dpi被激活表达.

目的 了解上海市宠物犬、猫毕氏肠微孢子虫和卡耶塔环孢子虫感染情况及分子特征,评估人兽共患传播风险.方法 2021年11月一2022年6月,采集上海市某宠物医院犬和猫的新鲜粪样,提取粪样基因组DNA,巢式PCR扩增毕氏肠微孢子虫核糖体内转录间隔区(ITS)和卡耶塔环孢子虫小亚基核糖体RNA(SSU rRNA)序列,阳性产物经双向测序后在GenBank数据库中进行BLAST比对.使用MEGA 11.0软件基于邻接法构建系统进化树.结果 本研究共采集145份粪样(犬粪样99份、猫粪样46份),毕氏肠微孢子虫总阳性率为4.1％(6/145),卡耶塔环孢子虫总阳性率为4.8％(7/145);犬的毕氏肠微孢子虫和卡耶塔环孢子虫阳性率分别为3.0％(3/99)和6.1％(6/99),猫的毕氏肠微孢子虫和卡耶塔环孢子虫阳性率分别为6.5％(3/46)和2.2％(1/46).6条毕氏肠微孢子虫ITS序列与人源基因型A(GenBank登录号:MK982500)的序列一致性均为100％,归在组1;7条卡耶塔环孢子虫SSU rRNA序列与人源卡耶塔环孢子虫(GenBank登录号:KJ569533)的序列一致性均为100％.系统进化树分析结果显示,毕氏肠微孢子虫分离株与已报道的人源毕氏肠微孢子虫基因型A分离株归为同一分支,卡耶塔环孢子虫的分离株与已报道的人源卡耶塔环孢子虫分离株归为同一分支.结论 上海市宠物犬、猫中存在毕氏肠微孢子虫和卡耶塔环孢子虫感染,均为人兽共感染型虫株.

目的 初步探究微小隐孢子虫微线体蛋白(MIC)糖蛋白900(GP900)829～1 099aa片段(GP900829～1099)通过核因子-κB(NF-κB)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对小鼠巨噬细胞(RAW264.7细胞)的免疫调节作用.方法 从NCBI数据库中获取微小隐孢子虫GP900829～1099氨基酸序列进行生物信息学分析.以微小隐孢子虫卵囊cDNA为模板,PCR扩增gp900829～1099基因片段,构建pET-32a-gp900829～1099重组质粒并转化至BL21感受态细胞中诱导表达.纯化、超滤浓缩重组蛋白并去除内毒素.采用0.16、0.80、4.00、20.00、100.00、500.00 μg/ml的GP900829～1099重组蛋白刺激RAW264.7细胞24 h后,CCK-8法检测其对RAW264.7细胞活力的调节作用.以0.16、0.80、4.00 μg/ml的GP900829～1099重组蛋白刺激RAW264.7细胞,以PBS为对照组,脂多糖(1 μg/ml)为阳性对照,24 h后流式细胞术检测CD86表达量,qPCR检测RAW264.7细胞中IL-6和TNF-α mRNA的相对转录水平,ELISA检测RAW264.7细胞培养上清中IL-6、TNF-α的表达水平.采用蛋白质免疫印迹分析NF-κB和MAPK信号通路中P65蛋白和细胞外调节蛋白激酶(ERK)蛋白磷酸化水平.结果 GP900829～1099蛋白二级结构中β转角占比9.23％,无规则卷曲占比64.58％,且含有较丰富的T、B细胞抗原表位.表达的GP900829～1099重组蛋白的相对分子质量约为49000.CCK-8结果显示,GP900829～1099对细胞没有毒性作用,后续实验采用0.16、0.80和4.00 μg/ml作为作用浓度.流式细胞术结果显示,CD86+的阳性表达率分别为(13.500±0.815)％、(18.670±0.657)％、(20.470±1.271)％,后两者均高于对照组的(14.500±0.872)％(t=3.818、3.872,P＜0.05).qPCR结果显示,0.16、0.80和 4.00 μg/ml组 RAW264.7 细胞的 IL-6 mRNA 相对转录水平分别为 1.409±0.050、2.052±0.098 和 3.284± 0.097,均高于对照组的 1.010±0.096(t=3.700、7.595、16.700,均P＜0.05);TNF-α mRNA相对转录水平分别为1.077±0.034、1.440±0.021 和2.378±0.037,后两者均高于对照组 1.000±0.025(t=13.380、30.850,均P＜0.05).ELISA检测结果显示,RAW264.7细胞培养上清中,0.16、0.80和4.00 μg/ml组IL-6的表达水平分别为(535.400± 17.230)、(572.800±8.286)、(555.600±23.940)mg/L,均高于对照组的(454.400±18.630)mg/L(t=3.193、5.809、3.339,P＜0.05);TNF-α细胞因子的表达水平分别为(351.800±12.270)、(386.400±10.250)、(489.800± 10.540)mg/L,后两者均高于对照组的(324.200±11.070)mg/L(t=4.125、10.830,P＜0.05).蛋白质免疫印迹结果显示,0.16、0.80和4.00 μg/ml组RAW264.7细胞p-P65、p-ERK蛋白的相对表达水平分别为2.294±0.254、1.714± 0.205、1.877±0.309,1.522±0.054、1.760±0.066、1.582±0.027,均高于对照组的 1.0±0.0(t=5.100、3.489、2.836,9.737、11.450、21.900,均P＜0.05).结论 不同浓度GP900829-～1099重组蛋白刺激巨噬细胞后,通过激活NF-κB和MAPK信号通路诱导巨噬细胞活化,通过促进TNF-α和IL-6 mRNA的转录参与巨噬细胞的免疫调节.

N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)是真核生物中分布广泛、含量丰富且作用关键的一类RNA修饰.东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae专性侵染成年蜜蜂导致微孢子病,给养蜂业造成很大损失.本研究对东方蜜蜂微孢子虫的甲基转移酶样蛋白 5(Methyltransferase-like protein 5,Mettl5)基因 NcMettl5 进行克隆,通过生物信息学预测 NcMettl5 蛋白的理化性质和分子特性,并通过RT-qPCR检测NcMettl5在东方蜜蜂微孢子虫侵染意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica工蜂过程的相对表达量,以期丰富NcMettl5的信息,并为探究东方蜜蜂微孢子侵染中NcMettl5的功能及调控机制提供基础.结果表明,扩增出约 600 bp的目的片段,与GenBank数据库收录的预测出的NcMettl5序列一致;NcMettl5 的分子量约为 22.64 kDa,分子式为 C1039H1645N269O284S6,理论等电点是9.37,脂溶系数是98.98,不稳定系数为13.96;包含196个氨基酸和20个磷酸化位点;平均亲水系数为-0.230,不含典型的跨膜结构域和信号肽,可同时定位于细胞骨架、细胞质和细胞核、细胞核、线粒体和过氧化物酶体;NcMettl5 含有 1 个超家族结构域:AdoMet_MTases superfamily;东方蜜蜂微孢子虫、家蚕微孢子虫Nosema bombycis CQ1 和颗粒病微孢子虫Nosema granulosis的Mettl5均含有 7 个相同的保守基序,序列一致性较高,且进化距离较近;NcMettl5 在东方蜜蜂微孢子虫接种后 1-4 d的意大利蜜蜂工蜂中肠内均有表达;相较于接种后 1 d(1 day post inoculation,1 dpi),NcMettl5 的表达量在 2 dpi和 3 dpi下调但差异不显著(P＞0.05),在 4 dpi显著下调(P＜0.05).研究结果表明成功克隆到东方蜜蜂微孢子虫的 NcMettl5 基因,明确了 NcMettl5 蛋白的分子特性,并揭示NcMettl5 可能为亲水性蛋白、非跨膜蛋白和胞内蛋白,Nosema 属的东方蜜蜂微孢子虫、家蚕微孢子虫和颗粒病微孢子虫的Mettl5 蛋白具有较高的保守性,NcMettl5 在东方蜜蜂微孢子虫增殖周期内真实表达且总体呈持续下降的表达趋势.

本研究以微小隐孢子虫甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Cryptosporidium parvum glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,CpGAPDH)为对象,研究其亚细胞定位和酶动力学特征.设计特异性抗原多肽并免疫家兔,获得多克隆抗体,利用亲和纯化法获特异性抗体;经Western blot方法验证该抗体特异性,再通过间接免疫荧光法(IFA)进行蛋白定位.通过原核表达获得GST重组蛋白(GST-CpGAPDH),基于GAPDH的酶促反应利用辅酶NAD(H)或NADP(H)为电子受体或供体的原理,通过吸光度比色法监测反应中NAD(H)/NADP(H)的增加或减少鉴定其酶活性.结果显示,成功获得并纯化抗 CpGAPDH 抗体;Western blot分析显示该抗体可识别条带大小为 40 kDa;IFA结果表明该蛋白主要分布于子孢子胞浆内,部分呈现颗粒状.利用重组蛋白确定了CpGAPDH的酶活性;在两种辅酶中,CpGAPDH更倾向于使用NAD(H)进行酶活反应.结果表明,本研究确定了CpGAPDH在虫体细胞的定位及酶活性检测,为进一步研究其生物学功能奠定了基础.

目的 了解浦东新区常见蝇种携带肠道传染病病原体情况,为蝇类防制和感染性腹泻病防控提供科学依据.方法 2021年4-11月每月下旬,采用网捕法,在农户、农贸市场、餐饮外环境3类场所采集家蝇,在公园、居民区、农贸市场3类场所采集丝光绿蝇和棕尾别麻蝇.对捕获的蝇种冷冻后分类鉴定,采用胃肠道感染微流体芯片V3进行感染性腹泻相关病原体筛查.采用Excel 2019和SPSS 22.0软件进行数据整理及统计分析.结果 共捕获家蝇1 544只、丝光绿蝇642只、棕尾别麻蝇509只,家蝇、丝光绿蝇和棕尾别麻蝇的病原体检出率分别为37.29％(44/118)、67.50％(27/40)和70.97％(22/31),差异有统计学意义(x2=17.936,P＜0.001).上述3个蝇种的细菌和病毒检出率差异均有统计学意义(x2=44.547,P＜0.001;x2=26.519,P＜0.001).家蝇共检出11种病原体(6种细菌、3种病毒和2种寄生虫),主要病原体为人芽囊原虫(占总检出病原体数量的42.37％)、札如病毒(占20.34％)和隐孢子虫(占10.17％);丝光绿蝇共检出12种病原体(7种细菌、3种病毒和2种寄生虫),主要病原体为产志贺毒素大肠埃希菌(STEC,占18.75％)、星状病毒(占13.75％)和札如病毒(占11.25％);棕尾别麻蝇共检出10种病原体(5种细菌、3种病毒和2种寄生虫),主要病原体为STEC(占22.22％)、星状病毒(占14.81％)和札如病毒(占14.81％).浦东新区家蝇携带病原体检出率最低,与另外2个蝇种的主要病原体有所差异.结论 浦东新区常见蝇种携带感染性腹泻病原体种类多样,且不同蝇种携带的病原体有所不同,应加强环境整治,科学制定蝇类防控策略.