目的:探讨微小RNA(miR)-146b-5p对甲状腺癌细胞增殖的影响及其作用机制。方法:收集河南科技大学第一附属医院2018年1月至2020年10月72对病理确诊为甲状腺癌患者手术标本，反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-146b-5p在甲状腺癌及癌旁组织、正常人甲状腺上皮细胞TEC、甲状腺癌细胞TPC-1、FTC133中的表达。双荧光素酶报告实验验证miR-146b-5p对靶基因Smad4的直接靶向调控作用；甲状腺细胞中过表达或沉默miR-146b-5p表达，细胞计数试剂盒(CCK-8)、蛋白质印迹法(Western blot)实验检测miR-146b-5p的不同表达对甲状腺癌细胞TPC-1、FTC133细胞增殖能力的影响及细胞核增殖抗原(Ki-67)、Smad4蛋白表达变化。两组间比较采用独立样本 t检验、 χ2检验，多组间差异检验采用方差分析。 结果:状腺癌组织中miR-146b-5p表达明显高于癌旁组织( t＝5.028， P<0.05)，并与性别、肿瘤大小、TNM分期显著相关( χ2＝5.445、4.531、4.589， P<0.05)。miR-146b-5p在甲状腺癌细胞TPC-1、FTC133中表达明显高于正常人甲状腺上皮细胞TEC( t＝3.723、5.332， P<0.05)。双荧光素酶实验结果显示，Smad4是miR-146b-5p的靶基因。CCK-8、Western blot实验结果显示，miR-146b-5p mimic组的细胞增殖能力、Ki-67蛋白表达水平明显高于mimic-NC组，Smad4蛋白表达水平明显低于mimic-NC组；而miR-146b-5p inhibitor处理的细胞增殖能力、Ki-67蛋白表达水平明显低于inhibitor-NC组，Smad4蛋白表达水平明显高于inhibitor-NC组( F＝6.202、5.324， P<0.05)。 结论:miR-146b-5p在甲状腺癌组织及细胞中表达上调，且其可能通过靶向Smad4促进甲状腺癌细胞增殖。

目的:探讨微小RNA(miR)-133b靶向调控多聚嘧啶通道结合蛋白1(PTBP1)调控乳腺癌细胞生物学的行为机制。方法:选取乳腺癌及癌旁组织标本83例，收集患者临床病理资料，同时选取乳腺癌细胞系(MCF-7)、正常乳腺上皮细胞系(MCF-10A)，实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-133b和PTBP1 mRNA表达，分析与临床病理特征的关系，MCF-7细胞分为阴性对照组、miR-133b模拟物(mimic)组、miR-133b inhibitor组、miR-133b mimic+PTBP1沉默组和miR-133b inhibitor+和PTBP1沉默组，噻唑蓝(MTT)实验与流式细胞术分别检测MCF-7细胞增殖及周期的变化，划痕实验和Transwell小室检测细胞迁移及侵袭，蛋白质印迹法(Western blot)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)和PTBP1蛋白表达，双荧光素酶实验验证miR-133b对PTBP1的靶向调控机制。多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD- t检验，计数资料采用 χ2检验和Fisher精确检验进行分析。 结果:miR-133b和PTBP1 mRNA在乳腺癌组织(0.94±0.18、4.28±0.27)及乳腺癌细胞的表达水平(1.09±0.22、3.65±0.19)分别明显低于和高于癌旁组织(2.12±0.09、 t＝4.343， P<0.05；1.37±0.21、 t＝6.006， P<0.05)及MCF-10A细胞(1.99±0.11、 t＝5.223， P<0.05；1.15±0.09、 t＝5.774， P<0.05)。miR-133b和PTBP1均与TNM分期(1.204±0.057、3.865±0.172， χ2＝6.217， P<0.001)和淋巴转移(0.489±0.041、1.632±0.147， χ2＝7.031， P<0.001)等明显相关，而与年龄(0.601±0.052、2.008±0.187， χ2＝0.261， P>0.05)、分化程度(0.592±0.057、1.994±0.187， χ2＝0.274， P>0.05)和病理分级无关(0.587±0.059、1.921±0.172， χ2＝0.257， P>0.05)。与阴性对照组比较，miR-133b mimic组增殖率[(35.43±1.74)%、(8.43±0.35)%， F＝166.465， P<0.05]、迁移、侵袭细胞数(109±10.562、77±5.751， t＝4.663， P<0.05；128±11.624、81±7.251， t＝7.453， P<0.05)、bcl-2(2.78±0.32、0.76±0.11， t＝4.122， P<0.05)和PTBP1表达(3.45±0.33、0.89±0.26， t＝3.154， P<0.05)明显降低，G 1期阻滞明显延长( F＝276.872， P<0.05)，bax表达明显增加(1.22±0.12、3.39±0.46， t＝9.123， P<0.05)，miR-133b mimic+PTBP1沉默组变化更为明显(1.22±0.12、7.71±0.23， t＝6.009， P<0.05)，miR-133b inhibitor组明显逆转上述指标变化(1.22±0.12、0.76±0.11， t＝3.334， P<0.05)，miR-133b inhibitor+PTBP1沉默组逆转更为明显(1.22±0.12、0.33±0.11， t＝5.098， P<0.05)。双荧光素酶实验显示miR-133b可靶向调控PTBP1。 结论:miR-133b靶向调控PTBP1从而抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭并促进细胞凋亡。

目的:探讨微小RNA(miR)-135a对骨肉瘤干细胞(OSCs)迁移、侵袭和自我更新的影响。方法:微球体筛选移植瘤原代细胞的OSCs(P-OSCs)和Saos-2的OSCs(S-OSCs)。实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测分化群(CD)CD133、CD44、CD24和BMI1的转录水平，蛋白质印迹法(Western blot)检测CD133、CD44、CD24、BMI1和B细胞淋巴瘤2(bcl-2)的蛋白水平。构建miR-135a过表达的P-OSCs或S-OSCs为miR-135a组，相应的阴性病毒转染P-OSCs或S-OSCs为对照组(NC)。划痕、Transwell和球体形成实验分别检测细胞的迁移、侵袭和自我更新能力。采用GraphPad Prism 8.4.2进行分析。结果:miR-135a组P-OSCs和S-OSCs的伤口愈合率[(46.33±11.25)%比(73.46±2.24)%和(31.25±2.61)%比(47.20±1.94)%， t＝3.346、8.489，均 P<0.05]、穿膜细胞数[(287.00±34.29)个比(401.33±14.66)个和(255.67±17.02)个比(574.67±31.58)个， t＝4.336、12.570，均 P<0.05]、成球率[(1.89±0.44)%比(3.72±0.21)%和(1.57±0.17)%比(2.65±0.05)%， t＝5.360、6.789，均 P<0.01]和球体直径均低于NC组[(97.21±8.89) μm比(184.91±15.32) μm和(90.68±7.02) μm比(163.75±14.14) μm， t＝7.003、6.546，均 P<0.01]。CD44和bcl-2蛋白在骨肉瘤组织中表达高于骨组织(分别为0.87±0.11比0.46±0.08和1.96±0.69比0.41±0.13， t＝4.286、3.126，均 P<0.05)，细胞中的表达趋势与组织一致。miR-135a组P-OSCs和S-OSCs中CD44(0.68±0.02比1.02±0.06和0.29±0.01比1.03±0.01， t＝9.311、90.630)和bcl-2(0.46±0.01比0.95±0.01和0.41±0.02比0.84±0.01， t＝60.010、33.310)的蛋白表达量低于NC组，均 P<0.01。 结论:miR-135能够通过抑制CD44和bcl-2抑制OSCs的迁移、侵袭和自我更新。

目的:研究微小RNA-144-3p(miRNA-144-3p)靶向调控配对盒基因8(PAX8)对甲状腺癌细胞顺铂耐药性的影响。方法:体外培养人甲状腺癌细胞株FTC-133，并构建对顺铂耐药的人甲状腺癌细胞株FTC-133，采用反转录PCR(RT-PCR)检测FTC-133细胞和顺铂耐药FTC-133细胞中miRNA-144-3p相对表达量。将顺铂耐药FTC-133细胞分为A组、B组、C组，A组不作任何处理，B组转染空质粒，C组转染pCDNA3. 1＋miRNA-144-3p质粒，采用RT-PCR检测各组miRNA-144-3p、PAX8相对表达量，采用MTT法检测各组顺铂耐药细胞的半数抑制浓度(IC 50)值；采用CCK-8法检测各组增殖率，采用流式细胞术检测各组凋亡率。 结果:顺铂耐药FTC-133细胞中miRNA-144-3p相对表达量显著高于FTC-133细胞[(0.93±0.24) vs (0.26±0.04), P<0.05]；B组顺铂耐药FTC-133细胞IC 50值、增殖率、凋亡率及miRNA-144-3p、PAX8相对表达量与A组比较差异无统计学意义( P>0.05)；C组顺铂耐药FTC-133细胞IC 50值、增殖率及miRNA-144-3p相对表达量显著高于B组( P<0.05)，细胞凋亡率、PAX8相对表达量显著低于B组( P<0.05)。 结论:miRNA-144-3p过表达可能通过下调PAX8基因表达而增加甲状腺癌细胞的顺铂耐药性，促进甲状腺癌细胞增殖并抑制其凋亡。

目的:探讨微小RNA(miR)-133b对烟草提取物(CSE)诱导的人小气道上皮细胞间充质转化的影响及其调控机制。方法:基因表达数据库(GEO数据库)中搜索慢性阻塞性肺疾病患者气道上皮细胞miR的表达谱芯片，寻找差异表达的miR并用实时荧光定量聚合酶链反应法(qRT-PCR)验证；小气道上皮细胞(HSAEpiC)根据干预方式不同分为对照组、CSE组、CSE＋miR-133b抑制剂转染组(抑制剂组)，CSE＋miR-133b抑制剂对照转染组(抑制剂对照组)。观察各组细胞形态变化，qRT-PCR法检测各组miR-133b、转化生长因子(TGF)-β1 mRNA、Smad2 mRNA、钙黏附蛋白E(E-cadherin)mRNA与波形蛋白(Vimentin)mRNA，酶联免疫吸附法(ELISA)及免疫印迹法(Western blot)检测细胞上清液及细胞E-cadherin与Vimentin蛋白水平。结果:在GSE53519发现9个差异表达的miR，验证后发现miR-133b在HSAEpiC细胞模型中表达差异最为显著。CSE诱导HSAEpiC细胞形态改变，miR-133b抑制剂能部分逆转细胞形态变化。CSE诱导HSAEpiC细胞上皮表型标志物E-cadherin mRNA及蛋白表达减少、间质表型标志物Vimentin mRNA及蛋白表达增多( F＝9.09、12.35、7.57、101.87， P＝0.015、0.007、0.023、0.000)；miR-133b抑制剂能部分逆转E-cadherin Vimentin mRNA及蛋白表达( F＝40.59、27.74、15.87、20.42， P＝0.000、0.001、0.004、0.002)。CSE诱导HSAEpiC细胞TGF-β1 mRNA、Smad mRNA表达增多，miR-133b抑制剂部分逆转TGF-β、mRNA、Smad mRNA的改变( F＝17.25、64.15， P＝0.003、0.000)。 结论:miR-133b可能通过TGF-β/Smad通路调控CSE诱导的HSAEpiC细胞上皮间充质转化。

目的 探讨子宫动脉超声多普勒血流参数联合血清微小RNA-133b(miR-133b)预测早发型子痫前期的应用价值.方法 选取2021年 1月—2022年4月在锦州医科大学附属第一医院孕检的孕妇648例,在孕34周前诊断为早发型子痫前期纳入观察组(32例),未诊断为早发型子痫前期则纳入对照组(616例).在孕16～20周应用超声检测两组子宫动脉血流参数,采用实时定量PCR法检测血清miR-133b相对表达量.结果 观察组的阻力指数(RI)、子宫动脉收缩期与舒张期血流速度比值(S/D)、搏动指数(PI)以及血清 miR-133b 相对表达量分别为(0.58±0.13)、(2.21±0.54)、(0.97±0.18)、(1.58±0.22),均高于对照组[(0.47±0.15)、(1.91±0.52)、(0.81±0.13)、(1.21±0.24)],差异均有统计学意义(t=4.069,3.176,6.644,8.536,均 P＜0.05).观察组孕妇血清 miR-133b 与 RI、S/D、PI 均呈正相关(均 P＜0.05).血清 miR-133b、RI、S/D、PI预测早发型子痫前期的ROC曲线下面积分别为0.812、0.707、0.645、0.744,其中血清miR-133h的预测价值最高.miR-133b联合PI预测早发型子痫前期的灵敏度、特异度、约登指数分别为84.38％、82.14％、0.665.结论 在孕16～20周时血清miR-133b的相对表达量异常升高,预示早发型子痫前期的发生风险增大,对早发型子痫前期有一定的预测价值,且血清miR-133b联合PI可进一步提升预测价值.

目的 探究益景汤对早期糖尿病视网膜病变(DR)大鼠视网膜组织中微小RNA(miRNA)表达的影响,筛选出益景汤干预早期DR的靶点miRNA.方法 将20只2月龄雄性SD大鼠使用链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,随机分为模型组(MG)和益景汤组(YJG),另将常规喂养的大鼠设为对照组(CG),每组10只.YJG组大鼠每日灌胃益景汤12.50 g/kg,CG、MG组大鼠灌胃等体积0.9%氯化钠注射液,均干预16周.给药完成后记录大鼠体质量,摘除双侧眼球剥离视网膜,提取总RNA,PCR扩增构建小RNA文库,采用高通量测序技术对该文库进行测序.对差异miRNA进行靶基因预测,并对靶基因进行基因本体论(GO)、Pathway分析,选择差异倍数较大的miRNA进行PCR验证.结果 (1)已知miRNA差异:筛选出644个已知miRNA,其中差异miRNA共59个.与CG组比较,MG组35个miRNA上调、6 个miRNA下调,YJG组20个miRNA上调、4个miRNA下调;与MG组比较,YJG组6个miRNA上调、13个miRNA下调,差异均有统计学意义(均P＜0.05);其中,1个上调miRNA,11个下调miRNA为益景汤干预DM大鼠后,3组共同差异性表达miRNA.(2)新发现miRNA差异:3组筛选出242个新发现的miRNA,其中差异miRNA共105个.与CG组比较,MG组50个miRNA上调,15个miRNA下调;与CG组比较,YJG组55个miRNA上调,20个miRNA下调;与MG组比较,YJG组16个miRNA上调,6个miRNA下调,差异均有统计学意义(均P＜0.05).(3)差异miRNA生物学功能和通路:差异基因主要涉及生物学过程方面的多种蛋白的转录调节;靶基因关联的通路主要是肿瘤相关的信号通路和糖脂代谢相关通路.(4)PCR验证:MG组大鼠视网膜miR-673-3p表达低于CG组,余11个miRNA表达均高于CG组;YJG组大鼠视网膜miR-673-3p、miR-23b-5p表达均高于MG组,余10个miRNA表达均低于MG组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).除miR-23b-5p外,其余11个miRNA与上述RNA检测结果一致.结论 miR-673、miR-1、miR-133、miR-214、miR-23b、miR-31a、miR-451等可能是益景汤干预早期DR微血管损害的靶点miRNA.

目的 探讨血清微小RNA(miR)-146b-3p、miR-133a-3p检测在新生儿急性呼吸窘迫综合征(ARDS)病情评估和预后预测中的临床价值.方法 回顾性选取2020年4月至2021年8月该院新生儿科收治的108例新生儿ARDS患者,依据病情严重程度及入住24 h首次胸片结果分为轻度组70例、重度组38例;根据生存情况分为生存组73例与死亡组35例,收集患儿性别、胎龄、出生体质量、宫内窘迫、胎粪吸入综合征、新生儿窒息、母亲年龄及糖尿病等资料,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测各组血清中miR-146b-3p、miR-133a-3p水平.采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-146b-3p、miR-133a-3p水平对新生儿ARDS患者预后诊断价值;Pearson法分析新生儿ARDS患者血清miR-146b-3p与miR-133a-3p水平的相关性.结果 与生存组相比,死亡组血清miR-146b-3p显著降低,miR-133a-3p水平、SNAPPE-Ⅱ评分显著增加,差异有统计学意义(P＜0.05);与轻度组相比,重度组血清miR-146b-3p显著降低,miR-133a-3p水平显著增加,差异有统计学意义(P＜0.05).Pearson法分析显示新生儿 ARDS患者血清 miR-146b-3p与 miR-133a-3p水平呈负相关.ROC曲线显示血清miR-146b-3p、miR-133a-3p水平诊断新生儿ARDS患者死亡的曲线下面积(AUC)分别为0.883、0.829,灵敏度分别为82.86％、68.57％,特异度分别为83.56％、87.67％;二者联合诊断新生儿ARDS患者死亡的AUC、灵敏度、特异度分别为0.923、91.43％、78.08％.结论 新生儿ARDS患者血清miR-146b-3p降低,miR-133a-3p水平在增加,二者呈负相关,对ARDS患者预后有一定的预测价值.

目的:探讨精神分裂症患者及正常人群血浆外泌体微小RNA(miRNA)的差异表达,初步了解差异表达miRNA在精神分裂症病程发展中的作用.方法:采用高通量测序技术检测48 例精神分裂症患者和48 名健康对照者的血浆外泌体miRNA的表达水平,构建miRNA差异表达谱.预测表达差异显著的miRNA的靶基因,再对靶基因进行GO功能注释和KEGG通路分析,确定差异表达miRNA的主要生物学功能及其可能参与的信号通路.结果:与对照组相比,精神分裂症患者血浆外泌体共筛选出353 个miRNA显著异常表达,其中157 个表达上调,196 个表达下调.通过GO富集和KEGG分析,上述差异表达的miRNAs主要涉及神经元细胞体、谷氨酸能突触、神经元间突触、突触前和突触膜等细胞组成,并主要参与轴突新生、化学突触传递调节、跨突触信号调节等生物过程,可能通过MAPK信号通路、PI3K Akt信号通路、TNF信号通路、Wnt信号通路、FoxO信号通路、多巴胺能突触及Hippo等信号通路参与精神分裂症的发生和发展过程.结论:经药治疗精神分裂症患者血浆外泌体中miRNAs存在显著的差异性表达,miRNA-206、miR-142-5p、miR-139-5p、miR-133b等miRNA可能通过MAPK信号通路、PI3K Akt信号通路等在精神分裂症的发生发展过程中发挥重要作用.

目的 探讨微小 RNA(microRNA,miR)-133b、活性氧(Reactive oxygen species,ROS)对高龄孕妇子痫前期发病的影响.方法 选取 2020 年 1 月-2022 年 5 月在邯郸市第一医院产检并分娩的高龄孕妇 300 例,根据是否发生子痫前期分为子痫前期组、无子痫前期组.分析miR-133b、ROS对子痫前期发病的评估价值、两指标与子痫前期发病的独立关系及交互作用并比较两组妊娠结局.结果 miR-133b、ROS水平评估子痫前期发病风险的曲线下面积(Area under curve,AUC)分别为 0.816、0.754,二者联合检测的AUC 值为 0.888,高于 miR-133b、ROS 单独评估的AUC值(Z/P=2.402/0.016,3.356/＜0.001).调整混杂因素后,miR-133b、ROS高水平者子痫前期发病的风险分别是 miR-133b、ROS低水平者的 0.360 倍、2.860 倍(P＜0.05).miR-133b 与 ROS 对高龄孕妇子痫前期发病存在拮抗作用(RERI = 1.232,AP = 0.320,S＜1.000).与无子痫前期组比较,子痫前期组剖宫产(73.17%vs 41.70%)、产后出血(9.76%vs 1.16%)、胎膜早破(19.51%vs 7.72%)、低出生体质量(24.39%vs 10.04%)、胎儿窘迫(21.95%vs 8.49%)、新生儿窒息(24.39%vs 11.58%)发生率均升高(P＜0.05).结论 高龄子痫前期孕妇 miR-133b 低水平,ROS高水平,二者在高龄孕妇子痫前期发病中有拮抗作用,临床可通过检测 miR-133b、ROS水平判断子痫前期发病风险.