目的:基于血清小分子核糖核酸（microRNA，miRNA）构建阿尔茨海默病（Alzheimer′s disease，AD）预测诊断模型。方法:从高通量基因表达数据库下载1 021例AD患者和288名健康对照者血清miRNA芯片数据，共1 309个样本。按年龄匹配AD患者和健康对照者，筛选出494例样本用于训练和验证诊断模型。将miRNA表达值从高到低排序选取前1 000个探针进入下一步研究。按照7∶3的比例将494例样本分为训练组和验证组。采用LASSO回归筛选miRNA，结合性别、载脂蛋白E4基因型和miRNA数据，采用逐步回归进一步筛选自变量并构建多因素诊断模型。采用受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic，ROC）和校准曲线，在训练组、验证组、训练组+验证组以及1 309例总样本中验证模型的准确性，并绘制诺莫图进行实际案例预测。结果:多因素诊断模型在训练组、验证组、训练组+验证组以及1 309例总样本的ROC曲线下面积分别为0.870、0.831、0.842和0.826，具有较高的预测效力。诺莫图显示，1例男性患者的预测值总分521分（ P=0.022 8），提示该样本为AD，和实际结果一致。 结论:基于11个血清miRNA、性别以及载脂蛋白E4 基因型的诊断模型能较好地预测AD。

观察性研究中往往存在未知或未测量的混杂因素，是流行病学因果关联研究中的重大挑战。本文介绍一种可以应用在观察性研究中的一种对未知/未测量混杂因素进行识别和效应评估的工具——“探针变量”。其主要可以分为暴露探针变量、结局探针变量以及中介探针3种形式，前2种不仅可以对未知/未测量混杂因素进行识别，也可以对其效应量进行估计，从而揭示真实的暴露与结局之间的关联。而中介探针则是针对“中介因子”进行控制，从而识别暴露和结局之间是否存在未测量混杂因素。该理论实践过程中最大的困难在于“探针变量”的选择和确定，不恰当的“探针变量”可能引入新的混杂，导致未测量混杂因素识别不准确。“探针变量”可以推荐作为观察性研究报告中的一项敏感性分析内容，有助于读者真实理解暴露与结局之间的关联，增加观察性流行病学研究中的证据力度。

目的:探讨溴结构域和超末端结构域蛋白（BET）家族编码基因胚系罕见变异与中国部分地区人群恶性肿瘤易感性的关系。方法:针对溴结构域蛋白2（BRD2）、BRD3、BRD4基因设计捕获探针，利用Illumina高通量测序平台，对2015年10月至2018年7月解放军总医院、广西医科大学第二附属医院、湖北省麻城市人民医院以及北京吉因加科技有限公司募集的1 673例恶性肿瘤患者和1 661例非肿瘤对照者的外周血白细胞基因组DNA进行靶向测序。根据基因组分析工具包（GATK）最佳实践指南进行变异检测分析，采用ANNOVAR、VEP软件进行注释，筛选BET家族中胚系罕见变异。为了确定潜在致病性胚系罕见变异，在ClinVar数据库中检索其致病性的临床和实验证据，并采用SIFT和PolyPhen-2软件预测变异的致病性。以Fisher′s 精确检验比较病例组和对照组变异率的差异，采用SKAT软件将性别、年龄作为协变量进行多因素回归分析。结果:1 673例肿瘤患者中，男911例，女762例；年龄（57.9±11.7）岁；肺癌1 111例（66.4%），肠癌266例（15.9%），乳腺癌186例（11.1%），食管癌或胃癌110例（6.6%），同期招募非肿瘤对照1 661例，其中男821例，女840例；年龄（44.5±13.9）岁。BRD2基因中共有4个潜在致病性胚系罕见变异，且这4个变异仅存在于17例肿瘤患者中。从肿瘤患者和非肿瘤对照中共筛选出5个存在于BRD3基因上的潜在致病性胚系罕见变异，以及8个存在于BRD4基因上的潜在致病性胚系罕见变异。BRD2基因在肿瘤患者中的潜在致病性胚系罕见变异率为1.02%（17/1 673），高于非肿瘤对照［0（0/1 661）； OR=+∞，95% CI：4.81~+∞， P<0.001］。BRD3基因在肿瘤患者中的潜在致病性胚系罕见变异率为0.24%（4/1 673），与非肿瘤对照相比，差异无统计学意义［0.12%（2/1 661）； OR=1.99，95% CI：0.46~10.47， P=0.690］。BRD4基因在肿瘤患者中的潜在致病性胚系罕见变异率为0.18%（3/1 673），与非肿瘤对照相比，差异无统计学意义［0.36%（6/1 661）； OR=0.50，95% CI：0.14~2.08， P=0.340］。进一步将“华表计划”中国人群全外显子测序数据集用作对照，BRD2基因在肿瘤患者中的变异率为17/3 346（0.51%），明显高于对照［0.07%（3/4 154）； OR=7.07，95% CI：2.32~22.83， P<0.001］。17例携带BRD2基因4个潜在致病性胚系罕见变异患者中，肺癌9例，肠癌6例，乳腺癌1例，食管癌或胃癌1例。BRD2基因在肺癌患者中的潜在致病性胚系罕见变异率为0.81（9/1 111），高于非肿瘤对照［0（0/1 661）； OR=+∞，95% CI：3.95~+∞， P<0.001］；BRD2基因在肠癌患者中的潜在致病性胚系罕见变异率为2.26%（6/266），明显高于非肿瘤对照［0（0/1 661）； OR=+∞，95% CI：9.03~+∞， P<0.001］。携带BRD2基因罕见变异的患者具有更早的肠癌发病年龄［（47.0±7.4）比（57.2±12.1）岁， P=0.017］。 结论:BRD2基因可能是肺癌、肠癌的候选遗传易感基因，携带BRD2基因潜在致病性胚系罕见变异具有更高的肺癌、肠癌发病风险以及更早的肠癌发病年龄。

目的:为早期筛查、获取有效诊治手段来提高肺腺癌(LUAD)患者的总体生存率,探索PIK3R1 基因低甲基化指标对肺腺癌诊疗及预后判断的影响.方法:使用大型公共数据库:TCGA、GEO、GEPIA2、UALCAN、KaplanMeier Plotter、LinkedOmics 和 TIMER 进行在线分析.在LUAD人群不同的临床特征亚组中构建单变量和多变量 COX 比例风险模型.结果:低表达的 PIK3R1 会导致LUAD患者的总生存期(OS)、首次进展后生存期(FP)和疾病进展后生存期(PPS)较差.性别、肿瘤分期、吸烟史、T分型、N分型和PIK3R1 低表达是LUAD发病的危险因素,低表达的 PIK3R1 是 LUAD 的潜在独立危险因素.DNA 甲基化分析显示,探针 ID(包括 cg01239651、cg24797508、cg16664523 和 cg25008444)的 PIK3R1 启动子内 CpGs 的低甲基化通过DNA甲基转移酶(DNMT1)降低PIK3R1 的表达.ROC曲线分析显示,PIK3R1 的甲基化和表达在LUAD的准确诊断中具有高灵敏度和特异度.免疫分析研究表明,PIK3R1 低甲基化和表达与免疫细胞(B细胞、CD8+ T细胞、CD4+ T细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和树突状细胞)浸润有关.此外,共表达基因(PGR、C5orf41、SCN7A、RBMS3、FAT4、RASSF2、A2M、ITGA8、FLI1 和RECK)通常与PIK3R1 具有相似的功能.结论:PIK3R1 的低甲基化及表达可视为肺腺癌的一种特异性诊断生物标志物和独立的预后因素,并可以预测免疫治疗的有效性.

目的 探讨转录因子7类似物2(transcription factor 7 analogue 2,TCF7L2)的单核苷酸多态性(single nucleotide poly-morphism,SNP)位点与2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)之间的相关性,为个体T2DM发病风险的预测及早期干预提供依据.方法 采用回顾性病例-对照研究,选取2020年新疆维吾尔自治区墨玉县医院维吾尔族150例T2DM患者为病例组,另选取同期健康体检者218例为对照组.采用MGB探针检测两组TCF7L2基因rs7901695位点的基因型,并进行相关问卷调查和生化指标检测.采用Logistic回归模型分析不同遗传模型中基因型与T2DM遗传易感性的关联性.结果 两组在空腹血糖和低密度脂蛋白胆固醇水平方面比较,差异有统计学意义(P＜0.05).两组间TCF7L2基因rs7901695位点的等位基因和基因型分布频率比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).多因素Logistic回归分析结果显示,在调整协变量后,TCF7L2基因rs7901695位点CC基因型与T2DM遗传易感性有相关性(P＜0.05).TCF7L2基因rs7901695位点与吸烟、饮酒和高甘油三酯在T2DM中未发现存在交互作用.结论 在新疆维吾尔自治区墨玉县维吾尔族人群中,TCF7L2基因rs7901695位点的多态性与T2DM遗传易感性存在相关性,即CC基因型可能会增加T2DM的发病风险.

目的 采用Meta分析方法评价线性探针技术对耐药肺结核诊断的准确性.方法 通过检索中文数据库(中国知网、万方数据知识服务平台、中国生物医学文献服务系统、维普期刊中文期刊服务平台)和英文数据库(PubMed、Embase、Cochrane Library)获得2000年1月1日至2017年9月1日发表的线性探针技术对中国耐药肺结核患者诊断准确性的研究.使用诊断准确性研究质量评价标准-2(QUADAS-2)进行质量评价.通过Meta分析(双变量或单变量模型)合并各研究(金标准为传统药敏试验或耐药相关基因测序)的灵敏度和特异度,然后对亚组(GenoTypeMTBDRplus、GenoType MTBDRs1和反向斑点杂交技术)进行分析,并进行敏感性分析.结果 最终纳入24篇文献,共包括82项研究.线性探针技术诊断耐利福平肺结核的灵敏度为0.91 (0.88～0.94),特异度为0.98(0.97 ～ 0.99);诊断耐异烟肼肺结核的灵敏度为0.80(0.77 ～ 0.83),特异度为0.98(0.96～0.99);诊断耐多药肺结核的灵敏度为0.81 (0.76 ～ 0.85),特异度为0.99(0.99～ 1.00);诊断耐喹诺酮肺结核的灵敏度为0.92(0.88～0.95),特异度为0.94(0.91 ～0.97);诊断耐二线注射类(包括卡那霉素、卷曲霉素、丁胺卡那霉素)肺结核的灵敏度为0.79(0.58～0.91),特异度为0.98(0.90 ～ 1.00);诊断广泛耐多药肺结核的灵敏度为0.46(0.19～0.75),特异度为1.00(0.98 ～ 1.00).亚组分析显示GenoType MTBDRplus和GenoType MTBDRs1诊断准确性整体上高于反向斑点杂交技术.敏感性分析显示本研究结果较为稳定.结论 线性探针技术对耐药肺结核的诊断准确性较高.

目的 制备含天冬氨酸-谷氨酸-缬氨酸-天冬氨酸(DEVD)核心的多肽细胞凋亡分子探针99Tcm-CP3-peptide,研究其在肺腺癌细胞系A549化疗后体内外的生物学分布及SPECT显像.方法 采用双功能螯合法合成99Tcm-CP3-peptide,分别于标记后0、1、2、4、6h行高效液相色谱(HPLC)法检测放射性化学纯度.对经紫杉醇化疗的肺腺癌A549细胞进行体外细胞结合实验,对照组未经化疗,测量细胞内外放射性比值(Cin/Cout),并用流式细胞仪检测细胞凋亡率.经紫杉醇化疗的荷瘤裸鼠尾静脉注射99Tcm-CP3-peptide 3.7 MBq,分别于5、15、30、60、120、240 min测其生物学分布,并行SPECT静态显像,勾画感兴趣区(ROI),计算肿瘤/对侧正常肌肉组织的比值(T/NT).取显像后的肿瘤组织进行苏木精-伊红染色,观察肿瘤组织的形态学变化.两组比较采用t检验,相关性研究采用双变量相关分析.结果 99Tcm-CP3-peptide在0、1、2、4和6h的放射化学纯度均＞97％,合成率为(64.5±5.2)％.体外细胞结合实验结果表明,经紫杉醇化疗后24h,肿瘤细胞Cin/Cout为10.27±2.02,对照组Cin/Cout为1.09±0.03,化疗组为对照组的7.3倍.对同状态的肿瘤细胞行流式细胞检测,化疗组细胞凋亡率为(75.62±2.57)％,对照组细胞凋亡率为(3.42±0.32)％,化疗组和对照组Cin/Cout与流式细胞仪检测的凋亡细胞百分比呈明显正相关(r=0.970,P＜0.05).荷瘤裸鼠体内分布实验结果显示,99Tcm-CP3-peptide在血液中清除速度较快,且主要经肾脏代谢;心脏、脾脏、肺等重要器官放射性摄取值均较低;但在肝脏中摄取稍高且代谢速度较慢;肿瘤组织摄取值在注射后1h达到峰值[(4.26±1.03)％ID/g].荷瘤小鼠给药后1h即可获得清晰图像,勾画ROI显示:化疗组T/NT为3.83±0.11,显著高于对照组的1.57±0.09,两者间差异有统计学意义(t=16.19,P＜0.05).病理结果显示化疗组肿瘤组织见大量核固缩、核碎裂及凋亡细胞;对照组仅见少量核固缩、核碎裂及少量凋亡细胞.结论 99Tcm-CP3-peptide是一种靶向caspase-3的显像剂,具有较好的生物学分布,可应用于动物模型肿瘤组织凋亡显像,在监测化疗后肿瘤细胞凋亡方面有一定的临床潜在价值.

目的 探索微RNA-21(miR-21)在原发性痛风患者中的变化及意义.方法 收集急性期痛风(AG)35例、间歇期痛风(IG)50例,慢性期痛风(CG)25例和健康对照组39名患者外周血及实验室检查指标,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测PBMCs中miR-21(探针法)以及Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)mRNA(染料法)表达量;收集5名健康体检者外周血,以100μg/ml尿酸盐晶体(MSU)刺激1 h,等体积PBS为对照组,RT-qPCR检测miR-21、NLRP3以及IL-1βmRNA表达水平变化.组间差异采用秩和检验,变量间的相关关系采用Spearman相关分析.结果 在痛风患者PBMCs中,miR-21在AG[12×10-4(8.0×10-4)]、IG[9.4×10-4(6.9×10-4)]、CG[7.3×10-4(5.6×10-4)]组表达水平高于健康对照组[1.0×10-4(2.0×10-4)](Z=9.83,P=0.02),而NLRP3在AG[0.0444(0.0233)]、IG[0.0581(0.0326)]、CG[0.0314(0.0198)]组表达水平显著低于健康对照组[0.0886(0.0359)](Z=13.82,P<0.01);在原发性痛风IG组,miR-21与NLRP3 mRNA表达呈正相关(r=0.449,P=0.016);健康体检者外周血经100μg/ml MSU刺激1 h后,miR-21表达水平在刺激组[8.78×10-4(14×10-4)]高于对照组[6.25×10-4(6×10-4)](Z=-2.203,P<0.05),IL-1β表达水平在刺激组[3.06(2.00)]高于对照组[2.64(1.22)](Z=-2.203,P<0.05);miR-21在原发性痛风患者中表达量分别与尿酸、AST、ALT水平呈正相关(r=0.473,P<0.05;r=0.639,P<0.05;r=0.487,P<0.05).结论 原发性痛风患者中miR-21表达升高提示miR-21的异常表达可能参与了痛风的炎症反应.

目的 采用基因芯片技术筛选注意缺陷多动障碍(attention-deficit hyperactivity disorder,ADHD)患儿外周血清中的差异非编码小RNA(microRNA,miRNA).方法 收集ADHD患儿血清样本20例,正常儿童60例,根据性别相同、年龄、身高和体重相仿的标准配对形成1:3的病例组.采用含有2549种人类miRNA探针的安捷伦公司的人miRNA芯片V21.0(agilent human miRNA microarray V21.0)获取ADHD患儿与正常儿童的miRNA谱,将检测到的miRNA信号值进行配对T检验分析,筛选出表达差异有统计学意义的miRNA,然后通过实时荧光定量PCR技术验证芯片结果.结果 芯片筛选结果显示,和正常儿童比较,ADHD患儿血清中miR-30d-5p、miR-19b-3p、miR-6085、miR-19b-3p、miR-6749-5p、miR-6826-5p、miR-3960等61个miRNA比较,差异有统计学意义(P＜0.05),其中fold change＞2倍的有miR-30d-5p(fold change=0.48,P=0.002)、miR-4655-3p (fold change =0.43,P=0.002)和miR-7641(fold change=0.47,P=0.02),这些差异表达的miRNA在20例ADHD患儿外周血清中均降低,选择改变量超过两倍的miR-30d-5p,miR-4655-3p,miR-7641进行实时荧光定量PCR验证,结果与芯片一致.结论 与正常儿童比较,ADHD患儿外周血清中,miR-30d-5p,miR-4655-3p和miR-7641表达量降低,并且可能成为诊断ADHD的潜在指标.

目的 通过对CTLA-4基因(rs926169)多态性的检测分析,探讨其基因型及等位基因与长期接触有机磷农药相互作用对Ⅱ型糖尿病(T2DM)发生的影响.方法 研究对象共425例,采用TaqMan探针技术检测基因多态性,logistic回归和叉生分析探讨基因和长期接触有机磷农药与T2DM发生的关系.结果 (1)BMI、居住地为农村、长期接触有机磷农药、有糖尿病家族史为T2DM患病的危险因素;(2) CTLA-4基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡(P＞0.05);(3)调整协变量后显性模型病例组和对照组差异有统计学意义(P=0.04,95％ CI:1.021 ～2.443),提示携带G等位基因者较未携带者发生T2DM的风险增加;(4)叉生分析表明,CTLA-4基因(rs926169)与长期接触有机磷农药在相加模型(P=0.041)和相乘模型(P =0.006)上均有交互作用.结论 CTLA-4基因(rs926169) AG、GG基因型可能为T2DM发病的危险因素,该基因多态性与环境因素间的交互作用增加了T2DM发病的风险.