目的:观察脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome，ARDS）大鼠的肺表面活性蛋白B（surfactant proteins B，SP-B）、纤溶酶原活化抑制因子（plasminogen activator inhibitor-1，PAI-1）、高迁移率族蛋白B1（high-mobility group box B1，HMGB1）和可溶性晚期糖基化终产物受体（soluble receptor for advanced glycation end products，sRAGE）等四项生物标志物的早期变化特点，为临床联合检测提供依据。方法:实验在中山大学心肺脑复苏研究所完成，36只雄性SD大鼠随机（随机数字法）分成LPS组和对照组,每组18只；LPS组采用肺内注射LPS 10 μg/mL诱导建立ARDS模型，对照组则肺内注射等量生理盐水，在造模后6 h、12 h、24 h留取血清、肺泡灌洗液及肺组织，每个时间点各6只大鼠，动脉血气及病理分析确认建模成功后用ELISA、免疫组化及Western blot检测SP-B、PAI-1、HMGB1和sRAGE的表达变化。采用成组 t检验和重复测量的方差分析比较两组间各指标的差异。 结果:LPS组PaO 2（mmHg）随时间进行性降低，且与对照组比较差异有统计学意义（80.38±1.74 vs 84.17±1.96；72.20±1.70 vs 81.26±1.57；68.52±2.45 vs 81.45±1.51， P<0.05），HE染色提示肺损伤程度持续恶化。LPS组血清中HMGB1（ng/mL） （0.34±0.08，0.43±0.12，0.50±0.03），SP-B（ng/mL）（2.21±0.11，2.74±0.15，3.07±0.28）和PAI-1（ng/mL）（40.38±3.06，50.02±4.82，57.34±4.67）进行性升高，与对照组比较差异统计学意义（均 P<0.05），但sRAGE（ng/mL）与对照组相比进行性下降（0.17±0.04，0.14±0.04，0.11±0.02），仅24 h与其他时点差异有统计学意义（ P<0.05）。LPS组肺泡灌洗液中HMGB1（ng/mL）（0.08±0.02，0.13±0.02，0.21±0.03）、PAI-1（ng/mL）（48.88±4.17，56.66±4.01，65.83±4.96）和SP-B（ng/mL）（0.68±0.13，0.80±0.17，1.12±0.14）进行性升高；而sRAGE（ng/mL）进行性下降（0.14±0.05，0.12±0.02，0.11±0.02），且与对照组比较差异有统计学意义（ P<0.05）。免疫组化分析提示6 h起PAI-1在肺间质逐步上调表达而HMGB1和SP-B则呈现肺泡内向肺实质扩散表达的趋势，但sRAGE则随时间呈下调表达趋势。Western blot提示SP-B、PAI-1和HMGB1表达量随时间升高，sRAGE表达量随时间逐渐降低。 结论:ARDS早期病程中，SP-B、PAI-1和HMGB1在血清、支气管肺泡灌洗液及肺组织中呈一致性变化，选择其一或组合检测均可协助临床早期识别ARDS。

目的运用磁共振扩散张量成像技术(diffusion tensor imaging,DTI)评估电针与干细胞移植在急性周围神经损伤疾病中的治疗效果.材料与方法将48只造模成功的成年SD大鼠随机平均分为电针组、干细胞组和对照组,每组16只.电针组大鼠接受环跳和足三里的电针治疗.干细胞组大鼠于损伤处神经外膜下微量注射3μL含有约5×105个骨髓间充质干细胞的生理盐水悬浊液.对照组显微注射同体积的生理盐水.使用多参数磁共振成像技术[包括DTI和磁共振T2加权脂肪饱和序列(T2-weighted fat saturation,T2WI-FS)、组织学评估、免疫组化分析监测神经结构的变化(包括神经直径、髓鞘厚度及形态改变、轴突连续性的恢复).运用坐骨神经功能指数(somatic functional index,SFI)和步行轨迹分析方法评估神经的运动功能.采用重复测量单因素方差分析不同实验组间大鼠磁共振横向弛豫时间(T2值)、DTI指标[各向异性分数(fractional anisotropy,FA)和径向扩散率(radial diffusivity,RD)]、SFI值的差异性.运用Bonferroni检验校正不同时间节点下多重检验的阈值结果.结果急性周围神经损伤后第1周,所有组大鼠的FA值显著下降,随后逐渐升高,直至第4周恢复至接近正常水平;而RD值在手术后1周内显著上升,随后逐渐下降,同样于第4周时恢复至接近正常水平.电针组和干细胞组大鼠在术后不同时间点(2～4周)的恢复均优于对照组,且电针组的恢复最为显著(P<0.001).T2WI-FS显示在术后的1、2、4周,电针组及干细胞组大鼠与对照组大鼠相比在神经水肿消退速度方面具有显著差异(P<0.001);神经直径与T2值在手术后1周内显著升高,此后逐渐下降,在第4周时恢复至接近正常水平;甲苯胺蓝染色与SPRR1A轴突染色均指向电针组的神经纤维连续性恢复最快,其次是干细胞组.结论电针在急性周围神经损伤疾病中的治疗效果可与干细胞移植治疗相当,并在减轻水肿及炎性反应方面极具优势.DTI参数FA和RD值是髓鞘完整性的成像标志物.

目的:探讨精神分裂症(schizophrenia,SZ)的髓鞘和脑组织间液(interstitial fluid,ISF)相关发病机制,探究熊果酸(ursolic acid,UA)对SZ中髓鞘损伤及其继发的ISF异常引流的治疗效果.方法:使用30只6～8周雌性C57BL/6J小鼠,体质量(20±2)g,随机分为UA治疗组、SZ模型组、对照组3组,每组10只:(1)对照组:腹腔注射(intraperitoneal injection,ip)生理盐水,灌胃(intragastric,ig)给予 1％(质量分数)羧甲基纤维素钠(carboxymethyl-cellulose sodium,CMC-Na);(2)SZ 模型组:ip 给与 2 mg/kg 的地卓西平(dizocilpine maleate,MK-801),ig 给与 1％(质量分数)CMC-Na;(3)UA治疗组:ig给与25 mg/kg的UA,ip给与2 mg/kg的MK-801.治疗组先ig给药UA预治疗一周,然后对3组小鼠进行为期两周的药物干预.在造模完成后依次通过旷场测试和前脉冲抑制实验对小鼠进行行为学评价.行为测试后,通过向脑区注射荧光示踪剂来探究各组ISF分区引流的改变;通过免疫荧光探究各组脑内水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)极性分布的改变以及蛋白表达的变化;通过激光共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope,LSCM)髓鞘反射光成像研究鼠脑内髓鞘的变化.采用单因素方差分析(one-way ANO-VA)对计量数据进行组间比较,使用TukeyHSD进行组间两两比较.结果:旷场测试发现,模型组在旷场中运动的总路程[(7 949.39±1 140.55)cm vs.(2 831.01±1 212.72)cm,P＜0.001]和中央区域停留时间[(88.43±22.06)svs.(56.85±18.58)s,P=0.011]显著高于对照组,而治疗组在旷场中运动总路程[(2 415.80±646.95)cm vs.(7 949.39±1 140.55)cm,P＜0.001]和中央区域停留时间[(54.78±11.66)s vs.(88.43±22.06)s,P=0.007]较模型组显著降低.前脉冲抑制实验发现,模型组给与预脉冲时对震惊反射的抑制率均显著低于对照组(P均＜0.001);治疗组上述指标较模型组显著增加(P均＜0.001).髓鞘反射光检测发现,模型组小鼠脑内存在显著的脱髓鞘,治疗组脑内脱髓鞘情况得到逆转.荧光示踪发现,模型组示踪剂向头侧皮层区的扩散面积和向尾侧丘脑区的返流面积均显著大于对照组[(13.93±3.35)mm2 vs.(2.79±0.94)mm2,P＜0.001;(2.48±0.38)mm2 vs.(0.05±0.12)mm2,P＜0.001],且脑区间引流分区明显破坏;治疗组示踪剂向头侧皮层区的扩散面积和向尾侧丘脑区的返流面积均较模型组显著减小[(7.93±2.48)mm2 vs.(13.93±3.35)mm2,P＜0.001;(0.50±0.30)mm2 vs.(2.48±0.38)mm2,P＜0.001].免疫荧光染色发现,模型组小鼠脑内AQP4极性分布遭到破坏,且模型组AQP4蛋白表达量较对照组明显下降[(3 663.88±733.77)p.m2 vs.(13 354.92±4 054.05)μm2,P＜0.001];治疗组较模型组 AQP4 极性分布得到改善,AQP4蛋白表达量较模型组显著升高[(11 104.68±3 200.04)μm2vs.(3 663.88±733.77)μm2,P＜0.001].结论:一定剂量的UA干预可以改善SZ小鼠的行为学表现,这种改善表现为运动亢进和焦虑症状得到缓解,感觉运动门控功能得到恢复;其机制可能是通过改善SZ小鼠的脱髓鞘病理改变及ISF分区引流紊乱.

目的 了解该院压疮感染患者标本中分离的金黄色葡萄球菌的人群分布、生物膜形成情况及耐药情况等流行病学特征,为临床提供重要依据.方法 2019年5月至2022年5月该院共收集到与压疮感染相关的金黄色葡萄球菌126株,采用Vitek MS质谱仪进行细菌鉴定,药敏试验采用纸片扩散法(K-B法),按美国临床实验室标准化协会2016-M100的标准进行药敏结果分析,用结晶紫染色法检测金黄色葡萄球菌生物膜并对生物膜形成能力进行判定,生物膜中分别加入葡萄糖和银离子粉末,观察其对生物膜形成的影响.结果 该院共收集到与压疮感染相关的金黄色葡萄球菌126株,各年龄段及各级压疮均有检出.形成生物膜的菌株占73.00％,其中Ⅳ期压疮分离的菌株形成生物膜的菌株比例(81.81％)高于其他分期(Ⅱ、Ⅲ期)分离的菌株(63.33％),差异有统计学意义(P＜0.05);不同生物膜形成能力的菌株对青霉素G、四环素、环丙沙星、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的耐药率较高,对替考拉宁、左氧氟沙星的耐药率较低,未检出对万古霉素耐药的革兰阳性菌,不同生物膜级别金黄色葡萄球菌的耐药性比较,差异无统计学意义(P＞0.05);11.10 mmol/L葡萄糖可促进生物膜的形成,10.00 μg/mL银离子抗菌凝胶对生物膜的形成有一定抑制作用.结论 导致Ⅳ期压疮感染的金黄色葡萄球菌生物膜形成的能力较强,生物膜的形成与压疮的分期进程有一定的关系;产生物膜的金黄色葡萄球菌的抗菌药物耐药性与生物膜的级别无明显关系;使用银离子和降低血糖水平对生物膜形成有一定的抑制作用.

目的 构建阿替利珠单抗修饰二氢丹参酮Ⅰ纳米粒(ATEZODHTNP),优化其制备工艺,并进行体内外药效评价.方法 采用乳化溶剂扩散法制备载二氢丹参酮Ⅰ聚合物纳米粒(DHT NP),以包封率为评价指标,单因素实验联合正交设计优化制备工艺;阿替利珠单抗疏基化后与DHTNP表面马来酰亚胺基反应,制备ATEZODHTNP,BCA法测定单抗的偶联率和载药量;粒度仪考察纳米粒粒径和电位,透射电镜观察纳米粒形貌,并考察稳定性和体外释药情况;在胃癌细胞模型上,激光共聚焦显微镜评价细胞摄取情况,MTT法考察细胞毒性,流式细胞术考察细胞凋亡情况;在胃癌裸鼠模型上,通过肿瘤体积变化、HE和TUNEL染色法评价药物抗肿瘤药效,生理生化检测和正常组织HE染色评价药物安全性.结果 ATEZODHTNP的最佳制备工艺为:有机相浓度为1.5％,水相为2％胆酸钠溶液,有机相与水相体积比为1∶1.8,药物与载体质量比为1∶2;DHTNP的二氢丹参酮Ⅰ载药量和包封率分别为11.73％和54.49％;ATEZODHTNP的阿替利珠单抗偶联率和载药量分别为56.93％和14.43％,粒径246.9 nm,Zeta电位-19.57 mV,形态近似球形,具有良好的稳定性和缓释特性.在胃癌细胞模型上,ATEZO DHT NP有效提高原药细胞增殖抑制能力和诱导细胞凋亡能力;在胃癌裸鼠模型上,ATEZO DHT NP诱导肿瘤细胞凋亡,显著抑制肿瘤生长,给药期间裸鼠体重无明显下降,血浆生化指标均在正常范围,主要器官形态学无变化,没有明显的毒副作用.结论 本研究成功构建了 ATEZO DHT NP,能有效增强二氢丹参酮Ⅰ的体内外抗肿瘤作用且安全性良好.

目的:利用Slit排斥导向迁移和丝素蛋白,探索建立简便可行、经济实惠、作用持久的神经元导向迁移模型新方法.方法:提取SD新生鼠海马组织,以专用细胞培养片体外培养神经元,分为空白对照组、单纯丝素蛋白、单纯Slit 2N和Slit 2N与丝素蛋白混合物组(以下简称混合物组),分别随机选择不同视野下50个神经元,用显微镜拍照记录胞体坐标及突起状态,除空白对照组外,其他3组均距每个神经元100 μm处添加相应诱导物,共观察30 min,再次记录后,用免疫荧光染色法鉴定细胞性质及其阳性率.结果:单纯Slit 2N组和混合物组均可见突起向浓度低处迁移或弯曲,且长度有所缩短,空白对照组和单纯丝素蛋白组未见明显变化.突起变化的平均持续时间及平均长度差从大到小依次为混合物组、单纯Slit 2N组、单纯丝素蛋白组(P＜0.05),单纯丝素蛋白组和空白对照组间无明显变化(P＞0.05).四组神经元MAP-2阳性率均达到90％以上.结论:丝素蛋白对Slit 2N诱导大鼠海马神经元迁移作用无明显影响,可有效减缓Slit 2N扩散速度,使作用时间延长,为治疗中枢神经系统疾病建立三维神经定向修复提供有利的体外实验构建基础.

目的:通过观察薯蓣多糖体外对精子膜及DNA完整性的影响.为少弱精子症的治疗提供新的途径. 方法:正常已生育成年男性,禁欲3～5d手淫法取精液.分为6组,每组各取0.2ml精液;对照组为精液原液,其他5组分别加入等量的生理盐水、维生素C溶液及不同浓度薯蓣多糖溶液(0.25、1.0、5.0 mg/ml).通过伊红-Y染色试验、精子低渗肿胀实验(HOS)以及精子染色质扩散(SCD)实验,观察不同浓度薯蓣多糖体外对精子存活率、精子膜完整性以及精子核DNA的影响. 结果:6份精液样本孵育24 h及48 h后各组的精子存活率均有降低.维生素C组精子存活率分别为(28.5±3.1)％、(6.5±1.2)％;薯蓣多糖低、中、高剂量组的精子存活率分别为(31.3±3.5)％、(6.5±2.2)％,(37.1±3.5)％、(9.5±2.8)％,(38.3±3.3)％、(9.0±3.2)％,均显著高于生理盐水组[(13.4±4.1)％、(3.1±2.0)％,P＜0.01],中、高剂量薯蓣多糖组显著高于维生素C组(P＜0.05及P＜0.01).精子DNA碎片率低剂量薯蓣多糖组为(29.4±2.6)％,与维生素C组[(30.5±2.5)％]无明显差异,但显著低于对照组[(41.7±2.2)％]和生理盐水组[(42.1±3.3)％];中、高剂量薯蓣多糖组精子DNA碎片率分别为(28.5±2.3)％和(27.9±1.9)％,显著低于对照组、生理盐水组及维生素C组(P＜0.05及P＜0.01). 结论:薯蓣多糖具有体外提高精子存活率和保护精子DNA完整性的作用.

目的 探讨经密度梯度离心结合上游法处理前后精子DNA碎片率的变化以及对体外授精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)结局的影响.方法 收集107例行IVF助孕患者的精液,按照WHO标准对处理前精液行精液常规分析,采用精子染色质扩散试验(sperm chromatin dispersion,SCD)检测处理前和处理后精液的精子DNA碎片率,并收集IVF实验室及临床结局.根据处理前精子DNA碎片率将患者分为两组:精子DNA碎片率≤20％的患者为A组,精子DNA碎片率＞20％的患者为B组.结果 处理后精子DNA碎片率显著低于处理前精子DNA碎片率(3.49±3.38％ vs18.69±10.89％,P＜0.001);处理前和处理后精子DNA碎片率均与精子总活动率、前向运动率及受精率有显著负相关关系(Spearman相关系数:-0.508、-0.629、-0.283、-0.299、-0.399、-0.329,P＜0.05)与男方年龄、精液量、精子密度、正常形态率及卵裂率无显著相关关系;B组处理后精子DNA碎片率高于A组,差别有统计学意义(P＜0.05);B组的精子总活动率、前向运动率和受精率均低于A组,差别有统计学意义(P＜0.05);两组男方年龄、女方年龄、不孕年限、获卵数、精液量、精子密度、正常形态率、卵裂率、种植率和妊娠率之间的差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 密度梯度离心加上游法处理精液后可以显著降低精子DNA碎片率,精子DNA碎片率与精子活力最密切相关,碎片率升高会降低受精率,但对种植率、妊娠率等临床结局没有显著影响.

目的:研究季铵盐包裹溴化银纳米复合物(AgBr/BHPVP)改性玻璃离子水门汀(GIC)的抗菌性能及细胞毒性.方法:分别制备含3%、4%、5%不同质量百分数的AgBr/BHPVP-GIC试件作为实验组,同时制备不含AgBr/BHPVP的富士Ⅱ型GIC试件作为对照组.采用琼脂扩散法检测各组试件对变异链球菌的抗菌能力,并利用活/死菌染色法及激光共聚焦显微镜(CLSM)观察各组试件表面的细菌活力;制备各组试件浸提液,并采用CCK-8法检测其对人牙髓细胞(hDPCs)的细胞毒性.结果:含不同质量百分数 AgBr/BHPVP的GIC各组对变异链球菌均具有一定的抗菌性,且其抑菌圈直径随着 AgBr/BHPVP 添加量的增加而增大(P<0.05);各实验组的抑菌圈直径在1、7、14 d各时间点均大于对照组(P<0.05);同一组内相比,各组的抗菌性均未随时间而减弱(P>0.05).CLSM观察结果显示,各改性GIC组试件表面粘附的活细菌数均明显少于对照组.细胞毒性实验结果显示,3% AgBr/BHPVP细胞相对增殖率与对照组无统计学差异(P>0.05),AgBr/BHPVP添加量为4%、5%时,细胞相对增殖率(%)为84.4 ± 0.8、80.8 ± 1,与对照组相比P<0.05.结论:在富士Ⅱ型玻璃离子中添加季铵盐包裹溴化银纳米复合物后,可增强其对变异链球菌的抗菌性能,添加量4%和5%时对hDPCs的细胞毒性为1级.

目的:分析与探讨不明原因复发性流产与精子DNA完整性的相互关系.方法:精子DNA完整性的检验选用精子染色质扩散实验(sperm chromatin dispersion,SCD),以精子DNA碎片指数(DNA fragmentation index,DFI)表示.将符合条件的65例男性患者作为实验组,随机选取配偶有正常妊娠史且无流产史的65例男性患者作为对照组,并分别测定两组男性精液相关参数和精子DFI.结果:实验组与对照组比较,在年龄、禁欲时间、精液量、精子活率、精子密度差异无统计学意义(P＞0.05).实验组的DFI为(40.89±14.50),对照组的DFI为(22.89±6.94),差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:不明原因复发性流产与精子DNA损伤存在一定的关系.