目的:探讨ras-相关结构域家族(ras-association domain family,RASSF)10在非小细胞肺癌中的表达,分析其与非小细胞肺癌临床病理特征和预后的关系.方法:采用qRT-PCR和Western印迹检测RASSF10 mRNA和蛋白的表达;甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)检测RASSF10启动子甲基化状态,采用免疫组化和酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测石蜡组织和血液中RASSF10蛋白表达,Cox回归模型进行生存分析.结果:在非小细胞肺癌细胞株SPCA-1中RASSF10 mRNA及蛋白(z=21.38、33.14,均 P＜0.05)、在 NCI-H157 中 RASSF10 mRNA 及蛋白(z=56.73、56.34,均 P＜0.05)均低于非肿瘤细胞株.MSP 发现RASSF10在SPCA-1和NCI-H157细胞株启动子区甲基化,用5-氮杂-2'-脱氧胞苷处理后,RASSF10在SPCA-1和NCI-H157细胞株中mRNA和蛋白(t=18.14、56.13,均P＜0.05)的表达增加.RASSF10启动子甲基化状态与组织中和血清中RASSF10的低表达密切相关(x2=19.271、4.831,均P＜0.05).预后多因素分析石蜡组织中RASSF10表达(HR=0.508,P＜0.05)和N分期(HR=1.839,P＜0.001)为非小细胞肺癌患者预后独立因素,RASSF10表达与肿瘤直径(x2=4.787,P＜0.05)、气道内播散(=15.618,P＜0.001)和N分期(x2=11.588,P＜0.01)密切相关.结论:RASSF10在非小细胞肺癌中表达降低,与非小细胞肺癌肿瘤进展密切相关,是非小细胞肺癌早期诊断及预后有价值的肿瘤标志物.

目的:采用性状鉴别和聚合酶链式反应(PCR)技术对我国主要的海马养殖品膨腹海马Hippocampus abdominalis Leeson进行研究,为该品种鉴别技术开发提供数据支持.方法:通过查阅文献资料并结合样品统计观察,总结膨腹海马的性状鉴别特征;根据膨腹海马及其他海马的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因序列,筛选出膨腹海马的特异性单核苷酸多态性(SNP)位点,设计专属膨腹海马的引物PFHM-Primer-F和PFHM-Primer-R.通过优化PCR体系反应条件,考察最佳的PCR反应体系.结果:膨腹海马的核心性状特征主要包括有较多的体环、尾环和背鳍条数,背鳍覆盖 4 个体环+1 个尾环;眼周和鳃盖部具有明显的大而黑的斑点等.基于COⅠ序列展开的PCR鉴别方法研究表明,当退火温度为 65℃,循环 30 次时,膨腹海马样品在 100～250 bp呈现单一明亮条带,而其他品种均无此条带.结论:建立的性状鉴别和特异性PCR鉴别方法可快速鉴别膨腹海马,为我国海马新资源的鉴别和后续开发提供参考.

目的:开发一种针对水牛角的特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴别方法,快速、准确地鉴别水牛角与其他混伪品.方法:通过比对水牛、黄牛、牦牛、山羊等动物的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(CO Ⅰ)基因序列差异,筛选水牛的特异性单核苷酸多态性(SNP)位点,设计出相应的鉴别引物,并对影响PCR体系的相关条件进行优化,考察验证方法的耐受性和适用性.结果:PCR条件为扩增体系 20 μL、退火温度 60℃、循环次数 32 次、DNA模板量为 100 ng、10 μmol·L-1 正反引物对各 0.8 μL时,使用设计的鉴别引物SN1 对水牛角进行PCR扩增,产物经琼脂糖凝胶电泳后出现约 358 bp的特异性条带,其他物种的样品均无条带出现.结论:该PCR鉴别方法特异性好,能迅速、准确地鉴别水牛角和其他常见动物角类样品,为水牛角的真伪鉴别提供参考.

目的:建立重组人甘露聚糖结合凝集素蛋白（M1蛋白）磁珠富集病原体结合重组酶辅助聚合酶链式反应（RAP）巢式核酸扩增技术检测血液中白色念珠菌和热带念珠菌的方法，以实现对白色念珠菌血症和热带念珠菌血症的早期诊断。方法:针对白色念珠菌和热带念珠菌的内转录间隔区的高度保守区域的设计引物探针，建立检测白色念珠菌和热带念珠菌的RAP检测方法；用梯度稀释的标准菌株核酸和临床常见的血流感染病原体核酸检验灵敏度、重复性、特异性；用模拟样本进行M1蛋白磁珠富集血浆白色念珠菌和热带念珠菌RAP和实时荧光PCR的检测，并对结果进行比较。结果:建立的双重RAP方法灵敏度为2.4~2.8拷贝/反应，重复性好，特异性高；M1蛋白磁珠富集病原体结合双重RAP方法可在4 h内完成对血浆中白色念珠菌和热带念珠菌的检测，<10 CFU/ml的病原体富集后进行RAP检测样本数较PCR检测样本数多。结论:本研究建立了检测血液中白色念珠菌和热带念珠菌的双重RAP方法，该检测方法具备准确、快速、减少污染物的优点，在念珠菌血症快速检测中具有较好的应用潜力。

男，27岁，尿毒症拟行肾移植。患者母亲，49岁，拟供肾者。本研究通过天津市第一中心医院伦理委员会审查(BL202302)，受试者均签署临床研究知情同意书于2022年4月21日纳入本研究。患者为B(A)型血型，其父、母亲血型分别为O型与AB亚型伴抗B抗体，经典试管法血型鉴定结果见表1。患者及其母亲不规则抗体筛查呈阴性。基于聚合酶链式反应-序列特异性引物(polymerase chain reaction-sequence specific primer，PCR-SSP)人类红细胞 ABO-cisAB与 B(A)基因检测结果显示：患者为B(A) 02/O型，患者母亲为A/B(A) 02型。患者及其母亲 ABO基因PCR-SSP结果，见表2。患者及其母亲ABO基因第1~7外显子Sanger测序结果显示：患者为 ABO*BA.02/ABO*O.01.02[B(A) 02/O 02]杂合子，其母亲为 ABO*A1.02/ABO*BA.02[A 102/B(A) 02]杂合子，第7外显子均发生700C>G变异(图1)，导致第234位脯氨酸替换为丙氨酸(Pro234Ala)，符合B(A) 02分子生物学特征。

目的:探讨砷及其主要代谢产物对人肺腺癌细胞系A549细胞凋亡及促凋亡基因 Bad和 Bik表达的影响。 方法:于2020年10月，复苏培养A549细胞，利用细胞计数试剂CCK-8检测细胞活力，确定亚砷酸钠（NaAsO 2）染毒A549细胞的浓度和时间。研究分为NaAsO 2染毒组和代谢产物染毒组：NaAsO 2染毒组染毒剂量为0（对照组）、20、40、60 μmol/L；代谢产物染毒组包括60 μmol/L一甲基胂酸（MMA）染毒组、60 μmol/L二甲基胂酸（DMA）染毒组。采用Hoechst33342/碘化丙啶双染法（Ho/PI）观察细胞凋亡情况，采用实时荧光定量聚合酶链式反应法（qRT-PCR）检测染毒后细胞Bad和Bik mRNA表达水平，采用蛋白免疫印迹法（Western blotting）检测Bad蛋白、磷酸化Bad（P-Bad-S112）蛋白、Bik蛋白、裂解Bik蛋白及下游蛋白多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP1）和细胞色素C（Cyt-C）的相对表达情况，采用分光光度法检测半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）3、6、8、9的活性变化。 结果:与对照组比较，20、40、60 μmol/L NaAsO 2染毒组凋亡细胞占比明显增加，差异均有统计学意义（ P<0.01）。与对照组比较，2.0、4.0、6.0 μmol/LNaASO 2染毒组Bad mRNA表达水平、Bik mRNA表达水平升高，Bad蛋白、磷酸化Bad蛋白、Bik蛋白、裂解Bik蛋白、PARP1蛋白、Cyt-C蛋白相对表达量均升高，差异均有统计学意义（ P<0.05），Caspase 3、6、8、9活性明显上调，差异均有统计学意义（ P<0.05）。与对照组比较，DMA染毒组Bad mRNA表达水平为1.439±0.173，差异有统计学意义（ P=0.024），Bik mRNA表达水平差异无统计学意义（ P=0.788）；MMA染毒组Bad和Bik mRNA表达水平差异无统计学意义（ P=0.085、0.063）。与对照组比较，MMA染毒组Bad、Bik、PARP1、Cyt-C蛋白相对表达量（0.696±0.023、0.707±0.014、0.907±0.031、1.032±0.016）差异无统计学意义（ P=0.469、0.669、0.859、0.771）；DMA染毒组Bad、Bik、PARP1、Cyt-C蛋白相对表达量（0.698±0.030、0.705±0.022、0.908±0.015、1.029±0.010）差异均无统计学意义（ P=0.479、0.636、0.803、0.984）。 结论:NaAsO 2可通过引起Bad和Bik蛋白过表达，启动磷酸化Bad的负反馈调节以及Bik的降解，激活下游蛋白PARP1、Cyt-C和Caspase途径，介导A549细胞凋亡。

目的:开发一种基于重组酶介导的等温扩增（RAA）和成簇的规律间隔短回文重复序列（CRISPR）及其相关蛋白（Cas13a）系统的幽门螺杆菌核酸检测体系。方法:选取2021—2022年于应急总医院收集的30株幽门螺杆菌以及大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、阴沟肠杆菌和肺炎克雷伯菌各2株。针对幽门螺杆菌UreC基因保守区序列，设计RAA-Cas13a 核酸检测体系所需的特异性引物及CRISPR RNA（crRNA）。再通过琼脂糖凝胶电泳筛选出产生非特异性产物最少的引物对，并应用Cas13a切割荧光探针产生的荧光强度筛选出切割效率最高的crRNA序列，构建了RAA-Cas13a核酸检测体系，通过检测梯度浓度稀释的幽门螺杆菌ATCC 43504基因组DNA以及5种不同的临床常见病原体基因组DNA，评价基于RAA-Cas13a核酸检测体系的最低检测限及特异性。通过RAA-Cas13a核酸检测体系与已建立的荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）方法同时检测临床菌株，得到该方法与qPCR方法的一致性。采用双侧配对 t检验对两组间的荧光值进行比较， P<0.05为差异有统计学意义。 结果:建立的RAA-Cas13a核酸检测系统可以在1 h内检测出低至10拷贝/μl的靶标DNA（ t=11.05， P<0.01），且与其他5种临床常见菌株无交叉反应。RAA-Cas13a方法与传统的qPCR方法具有良好的一致性，Kappa系数为1。 结论:建立了一种将RAA与CRISPR-Cas13a结合进行幽门螺杆菌检测的方法，可用于快速且灵敏的识别幽门螺杆菌感染。

目的:了解国内人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)30型(HPV30)的感染情况及型下系(lineage)分类。方法:收集就诊于中国人民解放军总医院妇产科，并在30 d内进行新柏氏薄层液基细胞学检测女性患者宫颈脱落细胞样品，从中提取DNA并进行HPV30型特异性聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)检测；对HPV30阳性样本进行病毒基因组全长PCR扩增和序列分析。结果:1 600例受试者中，共获得HPV30阳性样品9例(0.56%, 9/1 600)，其中6例HPV30基因组全长PCR扩增成功；9例HPV30毒株在型下系分类上都属于A，其中A1占66.7%(6/9)、A4占22.2%(2/9)、A5占11.1%(1/9)。结论:国内女性中存在HPV30感染，型下系分类上全部HPV30毒株都属于A。

目的:观察大黄素对精索静脉曲张缺氧模型精原细胞的保护作用。方法:选用小鼠GC-1精原细胞，设置对照组(A组)、对照＋大黄素组(B组)、模型组(C组)、模型＋大黄素组(D组)。C组和D组加入氯化钴(CoCl 2)至终质量浓度为100 μmol/L，然后培养细胞24 h构建精索静脉曲张缺氧模型。B组和C组加入大黄素至终质量浓度为40 μmol/L。采用细胞计数试剂-8(CCK-8)法及流式细胞仪测定细胞凋亡水平，采用蛋白质印迹法(Western blot)检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase-3)和B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)的蛋白质表达水平，采用实时定量反转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测细胞Caspace-3和bax的基因表达水平，组间比较采取 t检验。 结果:CCK-8实验示C组和D组细胞存活率低于A组[(51.70±3.52)%、(77.84±5.18)%比(100.00±0.00)%， t＝23.767、7.410， P值均<0.05]，差异有统计学意义，且D组细胞存活率高于C组[(77.84±5.18)%比(51.70±3.52)%， t＝7.229， P<0.05]，差异有统计学意义。流式实验示D组凋亡细胞比例低于C组[(10.54±0.68)%比(21.23±1.01)%， t＝15.207， P<0.05]，差异有统计学意义。Western blot结果示D组Caspace-3和bax蛋白表达水平低于C组(0.713±0.020、0.819±0.022比1.134±0.025、1.271±0.019， t＝22.722、26.813， P值均<0.05)，差异有统计学意义。RT-qPCR结果示D组Caspace-3和bax表达水平低于C组(1.52±0.18、1.80±0.21比3.53±0.23、4.27±0.31， t＝11.920、11.426， P值均<0.05)，差异有统计学意义。 结论:大黄素通过抑制细胞凋亡对精索静脉曲张缺氧模型的精原细胞起保护作用。

目的:探究埃可病毒11型(echovirus 11, E11)感染人横纹肌肉瘤细胞(human rhabdomyosarcoma cells, RD)后细胞内宿主因子在转录水平上的变化，初步了解Polo样激酶1(polo-like kinase 1, PLK1)对E11复制的影响及可能的分子机制。方法:利用转录组测序(RNA-Seq技术)对E11感染RD细胞组和RD细胞对照组进行差异表达基因分析。使用基因本体论(gene ontology, GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG)富集分析显著差异表达基因，利用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time PCR, qPCR)对代表性差异基因的表达水平进行验证，并初步探究抑制PLK1对E11复制的影响。结果:E11感染RD细胞后，共鉴定出3 726个差异表达基因，感染组(感染后12 h、24 h和48 h)共同显著差异表达基因484个，这些显著差异表达基因主要富集在免疫反应、细胞内信号转导、转录因子活性、序列特异性DNA结合、蛋白激酶活性、核、膜的组成成分、PI3K-Akt信号通路等。使用qPCR对6个靶基因(CXCL14、IFITM1、OAS1、SAMD9、MX1和PLK1)的表达情况进行验证，均与RNA-Seq结果一致，其中CXCL14、IFITM1、OAS1、SAMD9、MX1表达上调倍数在1.2~104.97倍之间，PLK1表达下调倍数在0.99~5.79倍之间。抑制PLK1后，E11复制能力增加。结论:炎症反应、PI3K-Akt、MAPK等通路可能在E11感染抗病毒免疫过程中发挥重要作用，此外，宿主因子PLK1可能通过调节细胞周期在E11感染中起到关键作用。