目的:通过HPLC法建立猕猴桃根饮片、标准汤剂、配方颗粒的特征图谱，并同时测定指标成分含量。以标准汤剂中出膏率、儿茶素含量及特征图谱为基准，研究配方颗粒的量值传递规律。方法:收集15批猕猴桃根饮片，制备标准汤剂，测定出膏率。建立猕猴桃根饮片、标准汤剂和配方颗粒的HPLC指纹图谱，标定特征峰，对特征峰进行归属。测定猕猴桃根饮片、标准汤剂及配方颗粒中儿茶素含量，计算转移率。以出膏率、指纹图谱共有峰传递数、儿茶素含量及转移率为主要评价指标，分析其量值传递规律。结果:15批猕猴桃根标准汤剂的出膏率在3.9%～6.3%范围内；特征图谱标定了6个特征峰，指认峰2为原儿茶酸、峰4为儿茶素；猕猴桃根饮片、标准汤剂及配方颗粒均检测出6个特征峰，且相对保留时间均在规定范围内；猕猴桃根饮片中儿茶素含量为0.4%～1.4%，猕猴桃根配方颗粒中儿茶素含量为3.8%～4.9%；其饮片-标准汤剂转移率为13.6%～38.3%，饮片-配方颗粒转移率为15.5%～21.2%。结论:猕猴桃根饮片、标准汤剂及成品颗粒之间的质量传递具有较好的移行性，配方颗粒与标准汤剂也具有良好的相关性和一致性，表明猕猴桃根的制备工艺合理可行。

[目的]鉴定分析了猕猴桃的小热休克蛋白(HSP20s/sHSPs)基因家族,为猕猴桃AcHSP20 基因的生物学功能研究和猕猴桃的抗性育种奠定基础.[方法]基于猕猴桃全基因组数据,利用生物信息学方法对猕猴桃AcHSP20基因家族进行鉴定,并分析了家族成员的理化性质、系统进化、染色体定位、基因结构、亚细胞定位及启动子.同时利用荧光定量PCR技术分析了猕猴桃AcHSP20 基因在非生物胁迫和激素处理后的表达变化情况.[结果]鉴定获得 34 个AcHSP20 基因家族成员.其编码蛋白的氨基酸数目为 85-371,分子量介于 9.93-40.18 kD,等电点介于 4.4-9.3,AcHSP20s多定位于细胞质和叶绿体.34 个基因分布在 17 条染色体上,多数没有或只有一个内含子.基因的启动子含有植物激素和非生物胁迫响应元件.所有测定的AcHSP20 基因在猕猴桃的根茎叶中均有表达且在高温及其他多种非生物胁迫和植物激素处理下差异表达显著.[结论]AcHSP20基因家族成员在猕猴桃的高温、ABA、MeJA、NaCl等逆境胁迫响应中发挥重要作用.

目的:研究软枣猕猴桃根内生真菌C15(Trichoderma sp.)发酵提取物中的总皂苷成分对2种肝癌细胞HepG 2和Huh-7细胞的凋亡作用与初步作用机制.方法:采用CCK-8细胞计数(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法检测软枣猕猴桃根总皂苷(AARTS)和内生真菌C15总皂苷(C15TS)对HepG 2和Huh-7细胞的细胞活力的影响;采用细胞划痕实验和Transwell小室实验对细胞的迁移和侵袭能力进行检测;采用蛋白质印记法(Western Blot,WB)检测P53信号通路中3种凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、Caspase-3)的表达水平;采用Annexin V-FITC/PI染色检测HepG 2和Huh-7细胞的凋亡时期.结果:根据细胞活力测试得出浓度为50～400μg/mL时AARTS和C15TS对HepG 2和Huh-7细胞的活力有抑制作用,且呈现剂量依赖性;细胞划痕实验表明浓度为200、400μg/mL时AARTS和C15TS可以降低HepG 2和Huh-7细胞的迁移能力;在Transwell小室实验中,浓度为200、400 μg/mL时AARTS和C15TS均可抑制对HepG 2细胞和Huh-7细胞的侵袭能力;在WB实验中,AARTS和C15TS经200、400 μg/mL孵育24 h后,HepG 2和Huh-7细胞胞内Bax和Caspase-3蛋白表达量增加,Bcl-2蛋白表达量减少;在Annexin V-FITC/PI染色实验中,浓度为200、400 μg/mL时AARTS组和C15TS组均具有促进HepG2和Huh-7细胞凋亡的能力,且多为早期凋亡.结论:C15TS与AARTS的作用效果相似,也可抑制HepG 2和Huh-7细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,其机制可能与P53信号通路有关.

目的:通过中华猕猴桃花药培养获得单倍体或双单倍体再生植株,以期创新猕猴桃种质,为猕猴桃育种提供材料.方法:以中华猕猴桃栽培品种'桂海四号'雄株花药为外植体,研究不同培养基对愈伤组织诱导、体细胞胚诱导、继代及植株再生的影响,采用流式细胞仪鉴定再生植株倍性.结果:花药在添加1 mg/L 2,4-D和5 mg/L 6-BA培养基上诱导率最高,为58.48%,愈伤组织为淡黄色、结构致密.上述愈伤组织在添加2,4-D的培养基中未形成体细胞胚,而其它激素配比均可产生体细胞胚,在体视镜下可观察到球形胚、心形胚和鱼雷胚阶段.体细胞胚在添加0.05 mg/L NAA、1 mg/L 6-BA 和 0.5 mg/L IBA的培养基上增殖率最高,为53.30%,且状况良好.在添加不同浓度IBA和ZT培养基上,体细胞胚均可分化产生丛生芽,当IBA为0.05 mg/L、ZT为3 mg/L时其再生率最高,为40%.再生植株在添加0.5 mg/L IBA的培养基上生根效果最佳,根多且粗壮.经流式细胞仪鉴定出单倍体、双倍体、三倍体、四倍体和五倍体多种倍性再生植株.结论:该研究初步建立花药—愈伤组织—体细胞胚—植株再生的培养体系,可为中华猕猴桃或其它猕猴桃物种的花药培养提供借鉴,再生单倍体或双单倍体植株是猕猴桃新种质,可为猕猴桃育种提供重要材料.

[背景]植物内生菌往往产生与植物相同、相似或新颖的次生代谢产物,丁香具有广谱优异的抗菌活性,可从中分离到强抑菌作用的内生细菌.[目的]筛选抑制姜瘟病菌的丁香内生细菌并分离其活性成分.[方法]牛津杯法筛选拮抗内生细菌;根据 16S rRNA基因序列鉴定菌株;有机溶剂萃取、硅胶柱层析和薄层制备色谱分离活性成分;测定 1H NMR、13C NMR和DEPT(135°)并对分离的活性成分进行结构鉴定;滤纸片法和菌丝生长速率法测定活性成分抑菌活性.[结果]共分离到 112 株丁香内生细菌,从叶中分离最多,占 37.4%.其中 17 株对姜瘟病菌有抑制,DX78 菌株抑制作用最好,经鉴定为死亡谷芽孢杆菌,并从其发酵液中追踪分离到邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate,DBP).DBP对姜瘟病菌、猕猴桃溃疡病菌的MIC分别为 0.3 mg/disc、0.25 mg/disc;其还可抑制多种植物病原真菌,特别对苹果炭疽叶枯病菌、番茄灰霉病菌和苹果腐烂病菌的抑制EC50仅分别为 3.751、18.568 和 22.019 μg/mL.以苹果炭疽叶枯病菌为靶标菌,戊唑醇抑制毒力约为DBP抑制毒力的 4.5 倍,DBP抑制毒力约为多菌灵抑制毒力的 12.5 倍.[结论]丁香抗病内生细菌丰富,从死亡谷芽孢杆菌DX78 中分离的DBP对苹果炭疽叶枯病菌抑制作用强,值得进一步研究.

目的 克隆获得灰毡毛忍冬Lonicera macranthoides MADS-box家族基因SHORT VEGETATIVE PHASE(SVP),并对其进行生物信息学、时空表达特异性和蛋白原核表达等特性分析.方法 根据灰毡毛忍冬转录组数据设计特异性引物,通过PCR技术克隆LmSVP基因全长;运用生物信息学方法分析其编码蛋白的序列特征;利用实时荧光定量技术(reverse-transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)分别检测该基因在灰毡毛忍冬2个品种"龙花"和"金翠蕾"叶片、花早期和晚期中的表达水平;最后构建pTOPO-D1-LmSVP原核表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行蛋白表达.结果 LmSVP基因全长1472 bp,开放阅读框(open reading frame,ORF)长720 bp,编码239个氨基酸,蛋白质相对分子质量为26 712.63.进化树分析表明,LmSVP蛋白与中华猕猴桃、小粒咖啡的SVP蛋白亲缘关系最近.qRT-PCR结果显示,LmSVP基因在"龙花"和"金翠蕾"品种中的表达均存在组织特异性表达,其在叶中的表达量显著高于花中;而在花发育不同时期,LmSVP基因表达量没有明显差异.LmSVP在大肠杆菌中成功表达出蛋白,蛋白表达结果显示其相对分子质量约为26 710,与预测相符合.结论 通过对LmSVP基因的全长克隆、序列分析和表达特性鉴定,为进一步研究该基因在调控花蕾型灰毡毛忍冬蕾期长及花冠不开放的功能提供实验基础.

采用系统溶剂提取法制备了猕猴桃根石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、水等5类提取物,并通过噻唑蓝法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)评价它们对 5种结肠癌细胞(SW480、HCT-116、HCT-15/Taxol、HCT-8/V、HCT-116/5-FU和人正常结肠上皮细胞(FHC)的抑制作用.结果显示,猕猴桃根石油醚提取物对SW480、HCT-8/V细胞的作用最突出,IC50分别为(16.13±1.22)μg/mL、(21.61±1.46)μg/mL,且具有较高的选择指数(SIsw480=16.93,SIHCT-8/v=12.64).同时,采用液质联用技术从石油醚提取物中分析鉴定出了 31种成分,其中包括20种萜类,5种香豆素和6种有机酸.

肿瘤目前是世界范围最常见的疾病之一,其发病率和致死率均逐年递增,已成为危害人类健康的头号杀手.中医学认为肿瘤多是本虚标实之证,恶性肿瘤发病的关键病理基础为火热之毒,因此,清热解毒法乃是治疗肿瘤的重要治疗法则之一,应贯穿治疗本病之始终.猕猴桃根是具有代表性清热解毒中药,具有抗肿瘤等生物活性,在抗肿瘤作用的临床研究中取得了显著疗效.近几年临床对猕猴桃根的研究较多,在广泛文献检索基础上,总结猕猴桃根有效部位筛选、有效成分以及不同肿瘤类型临床研究,对猕猴桃根抗肿瘤作用和临床应用以及药理活性成分进行综述,以证实猕猴桃根具有良好的抗肿瘤作用,开发以及应用前景优秀.

目的:探讨中华猕猴桃根氯仿提取部分(Actinidiachinensis planch extracted by chloroform,EC-ACP)对喉癌HEP-2的增殖抑制及诱导凋亡的作用,并探讨可能的机制.方法:运用CCK-8法检测EC-ACP对喉癌HEP-2的抑制作用及IC50值;流式细胞术检测EC-ACP对喉癌HEP-2的凋亡率及周期的影响;Western blot法检测EC-ACP对喉癌HEP-2细胞蛋白表达的影响.结果:24、48、36 h后不同浓度的EC-ACP作用于HEP-2细胞均能明显的抑制细胞增殖(P＜0.05),且存在时间-浓度依赖性.Annexin V-FITC/PI双染法结果提示EC-ACP作用于喉癌HEP-2细胞48 h后,随着浓度的增加,凋亡率逐渐增加.PI染色结果提示EC-ACP将HEP-2细胞周期阻滞于G1期.Western-blot结果显示随着加药浓度的增加,周期相关蛋白P53表达逐渐增大,周期相关蛋白CyclinD1表达减少.结论:中华猕猴桃根氯仿提取部分可以抑制HEP-2细胞的增值,其发生可能与其促进p53,抑制cyclinD1基因表达有关.

为了研究根际细菌的溶磷、产IAA及其抑菌作用,获得优良的菌种资源,本研究采用溶磷圈法,Spot、S2比色法,钼锑抗混合显色法等方法,定性定量测定了绞股蓝根际的9株根际细菌的溶磷、分泌植物生长激素(IAA)以及其对猕猴桃致病菌丁香假单胞菌DX118的抑菌能力.研究表明,根际细菌在溶磷效应上存在多样性,有些菌株同时具有溶解有机磷和无机磷的能力,如JDG127、JDG192、JDG223;有的菌株在溶解无机磷方面表现出较强溶解能力,但缺乏溶解有机磷的能力,如JDG122和JDG188;个别菌株对无机磷、有机磷均没有溶解能力,如JDG124、JDG126、JDG186、JDG191.9株根际细菌都具有分泌IAA的能力,分泌量在18.8～48.4 μg/mL,其中JDG188分泌能力最强,分泌量为48.4 μg/mL,定性测定中显色反应颜色最深,为深红色,其中JDG 124分泌能力最弱,分泌量为18.8μg/mL,定性测定中显色反应颜色最浅,为浅红色.通过抑菌试验可发现JDG127、JDG188、JDG223对猕猴桃致病菌丁香假单胞菌DX118有很好的抑菌活性,抑菌圈直径分别为17.6 mm、15.0 mm、14.1 mm,其他6株菌抑菌效果不明显.因此,JDG127、JDG188、JDG223有望作为防治猕猴桃溃疡病的优良菌株.