目的:探讨外泌体微小RNA(miR)-183-5p在肺腺癌(LUAD)中作用。方法:通过定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)验证LUAD患者外周血miR-183-5p的表达，通过5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)增殖、侵袭试验和淋巴管形成试验探讨其在LUAD中的作用。利用生物信息学预测和荧光素酶报告基因实验，确定miR-183-5p的靶基因。采用 t检验或单因素方差分析进行统计分析。 结果:miR-183-5p在LUAD患者血浆表达高于健康组(2.746±1.111比1.346±0.474， t＝8.195， P<0.05)，且在淋巴结(LN)转移中表达高于LN阴性者(3.503±1.304比2.320±0.706， t＝4.174， P<0.05)，在LUAD血浆外泌体中表达也高于健康组(2.071±0.931比0.830±0.633， t＝6.039， P<0.05)。EdU增殖实验表明miR-183-5p mimic及其对照组和miR-183-5p inhibitor及其对照组个数分别为83.000±4.000、55.670±5.508、25.330±5.508、50.330±5.132，差异有统计学意义( F＝65.180， P<0.05)，4组中淋巴管形成实验结果分别为1.400±0.141、0.983±0.080、0.733±0.103、1.006±0.030，差异有统计学意义( F＝24.150， P<0.05)，Transwell各组穿膜细胞数分别为84.000±6.557、53.000±4.000、40.670±6.429、59.000±7.000，差异有统计学意义( F＝26.710， P<0.05)。C端小磷酸酶类似物(CTDSPL)是miR-183-5p的靶点，上调或下调人淋巴内皮细胞(HLEC)中miR-183-5p，CTDSPL的表达呈相反改变(1.010±0.076比0.383±0.025，1.540±0.098比0.983±0.071， F＝127.300， P<0.05)。 结论:外泌体miR-183-5p在LUAD癌组织和血浆中均高表达，并可能通过靶向CTDSPL诱导淋巴管生成，可能成为LUAD的标志物。

目的:探讨坐骨神经损伤后长链非编码RNA（LncRNA）差异表达的基因，以及LncRNA MX1对大鼠雪旺细胞迁移、增殖能力的影响。方法:选取10周龄无特定病原体级雄性SD大鼠24只，随机分为0 d（T0）、3 d（T1）、7 d（T2）和14 d（T3）4组，每组6只，建立坐骨神经损伤动物模型。分别于模型建立后第0、3、7、14天取相应组大鼠坐骨神经损伤处的残端组织提取RNA，制备RNA基因芯片进行Heatmap聚类分析，筛选出各个时间点发生差异表达的基因，并选择其中差异表达显著的基因LncRNA MX1。培养iCell-r030大鼠雪旺细胞，分为对照组、Control siRNA组（siRNA组）和LncRNA MX1 siRNA组（siRNA-MX1组），使用相应试剂进行转染。转染后采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测3组雪旺细胞的LncRNA MX1mRNA表达情况，采用Transwell小室检测雪旺细胞的迁移能力，采用5-乙炔基-2'-脱氧尿苷（EDU）实验检测雪旺细胞的增殖能力。结果:各组大鼠均造模成功，实验过程中无大鼠死亡。大鼠损伤坐骨神经组织LncRNA差异基因Heatmap聚类分析的热图显示，与T0组比：T1组共3 066个LncRNA基因发生差异性表达，其中1 634个LncRNA基因表达上调，1 432个LncRNA基因表达下调；T2组共2 498个LncRNA基因发生差异性表达，其中1 634个LncRNA基因表达上调，864个LncRNA基因表达下调；T3组3 567个LncRNA基因发生差异性表达，其中有1 643个LncRNA基因表达上调，1 924个 LncRNA基因表达下调。各组差异表达的LncRNA基因中LncRNA MX1的差异倍数数值较大，差异表达显著。大鼠雪旺细胞qRT-PCR结果显示，转染LncRNA MX1 siRNA后，siRNA-MX1组LncRNA MX1的相对表达量为1.0±0.2，低于对照组的2.3±0.2和siRNA组的2.2±0.2，差异有统计学意义（ F=78.47， P<0.001）；而对照组和siRNA组组间差异无统计学意义（ P>0.05）。迁移、增殖试验结果显示，siRNA-MX1组细胞迁移数量为（24.1±4.2）个、EDU阳性细胞与DAPI阳性细胞的比率为27.5%±2.8%，低于对照组的（50.3±7.8）个、44.1%±7.2%和siRNA组的（49.2±6.2）个、41.8%±7.0%，差异均有统计学意义（ F=93.15、121.26， P值均<0.001）；而对照组和siRNA组间差异均无统计学意义（ P值均>0.05）。 结论:大鼠坐骨神经损伤后LncRNA MX1差异表达显著，下调LncRNA MX1在大鼠雪旺细胞中的表达可显著降低细胞的迁移、增殖能力。

目的:建立肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)结肠黏膜屏障损伤类器官模型,并对该模型进行评价.方法:取20～22 g雄性C57BL/6小鼠结肠段,分离并提取结肠隐窝,在基质胶中培养,使其增殖和分化成具有结肠上皮样结构的3D空腔球体,进而开展以下实验:(1)进行结肠类器官(colonoids)及小鼠结肠组织免疫荧光检测,鉴定结肠类器官.(2)异硫氰酸荧光素葡聚糖(fluorescein isothiocyanate dextran 4,FD4)评估结肠类器官上皮屏障功能.(3)探索不同浓度、不同时点干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)诱导下结肠类器官上皮屏障的变化,运用FD4和HE染色评价屏障功能,RT-qPCR检测结肠类器官类器官闭合蛋白(occludin)和闭锁小带蛋白1(zonula oc-cludens-1,ZO-1)的mRNA表达水平,免疫荧光检测occludin和ZO-1蛋白的分布与定位.结果:(1)结肠类器官与小鼠结肠组织的5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(5-ethynyl-2'-deoxyuridine,EdU)增殖和肠上皮细胞谱系标记表达一致.(2)对照组未见FD4渗透进结肠类器官腔内,而乙二醇双(2-氨基乙基醚)四乙酸[ethylene glycol-bis(β-aminoethyl ether)-N,N,N',N'-tetraacetic acid,EGTA]诱导后FD4明显渗透进结肠类器官腔内(P<0.05).(3)从18 h起,60、100、200和240 ng/mL的IFN-γ均显著可见FD4渗透进结肠类器官空腔内(P<0.05),HE染色可见结肠类器官屏障损伤.18 h各浓度IFN-γ都可诱导occludin和ZO-1的mRNA表达水平显著下降(P<0.05),且occludin和ZO-1的荧光显著减弱(P<0.05).结论:(1)所培养的类器官为结肠类器官,具有完整的上皮屏障.(2)IFN-γ可诱导结肠类器官上皮紧密连接occludin和ZO-1的转录水平降低,相应蛋白的表达减少及定位分布改变,由此增加结肠类器官上皮通透性.该模型与IBS结肠黏膜屏障损伤这一病理生理状态拟合度较高,为开展IBS结肠黏膜屏障损伤方向研究提供了新的工具和方法.

目的 探讨红景天苷调控miR-20a-5p/金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP2)轴对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)功能和活化的影响.方法 以HFLS-RA细胞为研究对象,将HFLS-RA细胞分为肿瘤坏死因子-α(TNF-α)组、对照组、红景天苷组、miR-20a-5p抑制物阴性对照(in-hibitor NC)组、miR-20a-5p抑制物组、红景天苷+miR-20a-5p模拟物阴性对照(mimic NC)组、红景天苷+miR-20a-5p模拟物组.实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测HFLS-RA细胞中miR-20a-5p表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HFLS-RA细胞上清液中白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;细胞计数试剂盒8(CCK-8)法、5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)染色检测HFLS-RA细胞增殖;划痕实验检测HFLS-RA细胞迁移;免疫印迹实验(Western blot)检测HFLS-RA细胞中TIMP2、细胞周期素D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白表达;双荧光素酶验证miR-20a-5p与TIMP2的关系.结果 与对照组比较,TNF-α 组miR-20a-5p表达、IL-1β、IL-6水平、吸光度(OD450)值、EdU阳性细胞率、划痕愈合率及CyclinD1、MMP-9蛋白上调,TIMP2蛋白下调(P<0.05);与TNF-α组相比,红景天苷组miR-20a-5p表达、IL-1β、IL-6水平、OD450值、EdU阳性细胞率、划痕愈合率及CyclinD1、MMP-9蛋白下调,TIMP2蛋白上调(P<0.05);与inhibitor NC组、TNF-α组相比比较,miR-20a-5p抑制物组miR-20a-5p表达、IL-1β、IL-6水平、OD450值、EdU阳性细胞率、划痕愈合率及CyclinD1、MMP-9蛋白下调,TIMP2蛋白上调(P<0.05);与红景天苷+mimic NC组、红景天苷组相比,红景天苷+miR-20a-5p模拟物组miR-20a-5p表达、IL-1β、IL-6水平、OD450值、EdU阳性细胞率、划痕愈合率及Cy-clinD1、MMP-9蛋白表达升高,TIMP2蛋白表达降低(P<0.05).miR-20a-5p与TIMP2存在靶向调控关系.结论 红景天苷可能通过调控miR-20a-5p/TIMP2抑制TNF-α诱导的HFLS-RA细胞增殖、迁移及炎症反应.

聚乙炔是一类弱极性化合物,分布于人参、柴胡和党参等中药中,具有多种药理活性,近年来在中药学或天然产物研究领域得到了广泛关注.通过系统检索PubMed、Web of Science、ScienceDirect、Willy及中国知网等数据库中聚乙炔相关文献,聚焦当前研究现状及热点方向,总结了不同植物中聚乙炔类化合物分离纯化的主要技术手段,概括了聚乙炔类化合物在人参属植物中的植化分离、药理活性及含量测定相关的研究进展,为中药中聚乙炔类化合物的富集、分离与活性评价等提供参考.

该研究以"裂叶""狭长叶""卵圆叶"及"大圆叶"4种不同叶型北苍术为试验材料,建立北苍术根茎中苍术素、白术内酯Ⅰ、β-桉叶醇和苍术酮4种成分同时测定的方法;利用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGR)和法呢基焦磷酸合酶(FPPS)3种生物合成关键酶基因的表达量,采用HPLC比较不同叶型北苍术中4种有效成分含量差异,并探讨有效成分含量与生物合成关键酶基因表达量二者的相关性.结果表明,苍术素、白术内酯 Ⅰ、β-桉叶醇和苍术酮分别在 3.30～33.00 μg·mL-1(r=0.999 7),12.04～120.40 μg·mL-1(r=0.999 5),29.16～291.60 μg·mL-1(r=0.999 5),14.20～142.00 μg·mL-1(r=0.999 5)呈良好的线性关系,其平均回收率分别为99.77％(RSD=2.1％),98.56％(RSD=1.2％),103.0％(RSD=1.2％),100.6％(RSD=1.5％),该方法结果准确,重复性好,可用于苍术素、白术内酯Ⅰ、β-桉叶醇和苍术酮含量的同时测定.该研究结果表明,不同叶型北苍术中4种有效成分含量差异明显,裂叶苍术中苍术素、白术内酯Ⅰ、β-桉叶醇含量均最高,质量分数分别为1.341 9、5.237 2、12.084 3 mg·g-1;狭长叶苍术中苍术酮质量分数最高(5.470 1 mg·g-1);卵圆叶苍术中苍术素、白术内酯Ⅰ、β-桉叶醇和苍术酮含量均最低.4种有效成分总量由高到低依次为裂叶苍术＞狭长叶苍术＞大圆叶苍术＞卵圆叶苍术.裂叶苍术中关键酶ACC、HMGR、FPPS基因表达量最高(P＜0.05),卵圆叶苍术关键酶ACC、HMGR基因表达量最低(P＜0.05),大圆叶苍术关键酶FPPS基因表达量最低.不同叶型北苍术中,关键酶基因ACC与聚乙炔类成分苍术素呈极显著正相关(P＜0.01),关键酶基因HMGR、FPPS与倍半萜类成分白术内酯Ⅰ、β-桉叶醇和苍术酮均呈正相关关系.综上,不同叶型中裂叶北苍术品质最佳,且其药效成分苍术素的生物合成与关键酶ACC基因表达显著相关,这为筛选和优化北苍术种质资源,提高药材品质提供理论依据.

目的 运用UPLC-Q-TOF-MS法研究建昌帮蜜糠炒苍术炮制前后主成分变化差异.方法 采用ACQUITY UPLC BEH C18 色谱柱(2.2 mm×100 mm,1.7 μm),流动相为0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱.在负离子模式下检测,电子喷雾离子源(ESI),扫描范围m/z 100～1250,结合数据库及相关文献资源,运用Peak View 1.2软件对苍术生品和蜜糠炒制品进行化学成分分析.结果 从苍术炮制前后共鉴定出54种化学成分,其中有机酸类27个,萜类9个,糖苷类5个,聚乙炔类4个,黄酮类1个,其他类化合物8个.苍术生品中鉴定出27个独有成分,而蜜糠制品中只鉴定出4个独有成分.结论 该方法可以系统、准确地鉴定苍术中含有的成分.苍术经炮制后化学种类变化不大,主要含有萜类、有机酸类及聚乙炔类化合物.

[背景]内生固氮菌可以定殖于植物体内为植物提供营养物质,还能通过代谢促进植物生长,目前对于落地生根内生菌的研究鲜见报道.[目的]研究落地生根中内生固氮菌多样性.[方法]从表面消毒的植物组织中分离纯化内生菌,并通过乙炔还原法测定菌株的固氮酶活性.采用SDS-PAGE全细胞蛋白电泳和IS指纹图谱对菌株聚类,各类群代表菌株进行16S rRNA基因系统发育分析和生理生化鉴定.测定菌株固氮、分泌生长素和ACC脱氨酶、产铁载体、溶磷和解钾等促生特性.[结果]从落地生根中分离纯化出26株内生固氮菌,聚为5个类群,隶属于4个属的5个菌种,且各类群代表菌株具有多种促生功能.[结论]从落地生根中分离获得的内生菌具有丰富的遗传多样性和促生特性,并且存在新的微生物资源,有待开发利用.

目的 探讨BVT-14225(BVT)通过抑制11β-羟基类固醇脱氢酶1(11β-HSD1)的还原活性对神经干细胞(NSC)增殖、分化和迁移的影响.方法 取孕15 d SD胎大鼠的大脑皮质,分离培养原代NSC,采用免疫荧光染色法对NSC标志物巢蛋白和性别决定基因相关转录因子2(Sox2)进行染色,鉴定原代细胞;逆转录聚合酶链反应及核酸凝胶电泳法检测11β-HSD1 mRNA在NSC上的表达.细胞随机分为5组:细胞对照组(培养48 h)、溶剂对照组(0.1％DMSO孵育48 h)、DHC模型组(DHC 10.0μmol·L-1处理48 h)、BVT对照组(BVT 10.0μmol·L-1处理48 h)和BVT干预组(BVT 10μmol·L-1处理1 h后再给予DHC 10.0μmol·L-1,继续处理48 h).5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)细胞增殖试剂盒检测NSC的增殖能力;乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测细胞毒性;超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS)检测11β-HSD1酶的还原活性;Western印迹法检测11β-HSD1蛋白表达水平;胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元核抗原(NeuN)抗体免疫荧光染色检测NSC的分化能力;划痕实验检测NSC的迁移能力.结果 巢蛋白和Sox2免疫染色鉴定原代培养细胞为NSC,核酸凝胶电泳条带图证明11β-HSD1 mRNA在NSC定性表达.LDH释放实验结果显示,DHC 10.0μmol·L-1和BVT 10.0μmol·L-1对NSC均无毒性作用.UPLC-MS实验结果显示,BVT 10.0μmol·L-1能显著降低11β-HSD1的还原活性(P<0.01).Western印迹结果显示,DHC 10.0μmol·L-1和BVT 10.0μmol·L-1均不改变11β-HSD1蛋白表达水平.EdU实验结果显示,DHC 10.0μmol·L-1可抑制NSC增殖(P<0.01),但BVT 10.0μmol·L-1预处理可显著缓解DHC 10.0μmol·L-1对NSC增殖的抑制(P<0.05).GFAP和NeuN的免疫荧光染色实验结果表明,DHC 10.0μmol·L-1和BVT 10.0μmol·L-1均不影响NSC分化.划痕实验结果显示,DHC 10.0μmol·L-1不影响NSC的迁移,但BVT 10.0μmol·L-1预处理可显著促进NSC迁移(P<0.05).结论 糖皮质激素浓度显著升高时,BVT可通过抑制NSC 11β-HSD1的还原活性促进NSC增殖和迁移,但对分化无影响.

高秆野生稻(Oryza alta)是一种重要的种质资源,其组织内也蕴藏着非常宝贵的功能微生物资源.本实验采用无氮培养基,从高秆野生稻中分离到43株内生固氮菌,结合乙炔还原法测定其固氮酶活性.经固氮酶基因(nifH)的PCR扩增检测,43株内生固氮菌代表菌株均能扩增出固氮酶基因片段.利用IS-PCR DNA指纹图谱和SDS-PAGE全细胞蛋白电泳图谱将获得的菌株聚类为6个类群(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ).对各个类群的代表菌株(ZF3,ZF8,ZF13,ZF15,ZF24,ZF43)进行16S rRNA基因序列测定,结果表明,类群Ⅰ属于土生拉乌尔菌(Raoultella terrigena),类群Ⅱ属于类肺炎克雷伯氏菌类肺炎亚种(Klebsiella quasipnmoniae subsp.quasipneumoniae),类群Ⅲ属于越南伯克氏菌(Burkholderia vietnamiensis),类群Ⅳ的菌株代表肠秆菌属的一个类群(Enterobacter sp.),类群Ⅴ的菌株属于门多萨假单胞菌(Pseudomonas mendocina),类群Ⅵ归属于固氮植物菌(Phytobacter diazotrophicus).Biolog聚类结果与IS-PCR指纹图谱类型及SDS-PAGE全细胞蛋白聚类结果一致.Biolog板测定结果显示,来自不同类群的代表菌株对碳源的利用差异显著,说明野生稻内多样的内生固氮菌从环境中获取碳源和氮素的适应能力较强.