目的 探讨无需缝合的外科嵌入式方法在复制小鼠原位肝癌(HCC)肿瘤模型中的应用,并评估该模型在肿瘤生物学研究中的价值.方法 通过体外培养Hepa1-6细胞至适宜浓度,并采用小动物一体式麻醉系统对C57 BL/6J小鼠实施麻醉.该研究采用细胞法、挂线法和嵌入法复制原位肝癌移植瘤模型,并对手术时长、小鼠复苏时间及存活率进行比较.此外,通过MRI技术动态监测肿瘤的形成过程,并对比3种方法的肿瘤成瘤率、单瘤率及腹壁肿瘤种植率.通过病理学检测评估肿瘤组织的结构和病理特征.结果 细胞法组手术时间较挂线法组短(P＜0.05),嵌入法组手术时间较挂线法组短(P＜0.05),细胞法组与嵌入法组手术时间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).细胞法组复苏时间较挂线法组短(P＜0.05),嵌入法组复苏时间较挂线法组短(P＜0.05),细胞法与嵌入法复苏时间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).MRI结果显示,挂线法组肿瘤呈块状生长,可见分隔及类圆形伪影,局部观察受限.细胞法组肿瘤呈片状不规则生长,可见多发肿瘤.嵌入法组肿瘤呈团块状均匀生长,边缘较清.细胞法组模型复制后第7天平均肿瘤体积较挂线法组大(P＜0.05),嵌入法组模型复制后第7天平均肿瘤体积较挂线法组小(P＜0.05),细胞法组与嵌入法组模型复制后第7天平均肿瘤体积比较,差异无统计学意义(P＞0.05).各组模型复制后第21天平均肿瘤体积比较,差异无统计学意义(P＞0.05).各组平均肿瘤重量比较,差异无统计学意义(P＞0.05).各组单瘤率、腹壁肿瘤种植率比较,差异有统计学意义(P＜0.05),嵌入法组单瘤率较细胞法组高(P＜0.05).各组成瘤率比较,差异无统计学意义(P＞0.05).HE染色结果示,各组肿瘤细胞呈巢状分布,排列紧密,核深染呈分裂象,肿瘤浸润肝组织,符合肝癌病理学特点.结论 采用嵌入法复制的原位移植瘤小鼠模型操作简单,手术时间短,可重复性高,为肝癌的相关基础实验研究及在体动态监测提供了一种重要的实验工具.

目的:探讨索拉非尼抗肝癌的分子机制。方法:应用肝癌人源肿瘤异体移植（PDX）模型进行索拉非尼药效筛选和验证；采用小动物B型超声和活体激光共聚焦观察PDX 血管生成；采用免疫组化观察PDX组织增殖、血管生成相关蛋白的表达；采用实时定量PCR技术观察PDX组织Runt相关转录因子3（RUNX3）基因表达；采用SPSS 17.0统计软件进行统计学分析。结果:用4例PDX进行索拉非尼药效筛选，PDX1对索拉非尼有明显应答，抑制率为68.07%；与对照组相比，索拉非尼明显抑制PDX1相对肿瘤体积（5.76±2.14比11.71±2.87， P<0.05）；细胞分裂指数（39.50±7.72比67.10±9.14， P<0.05）以及Ki67表达明显降低（288.60±43.40比531.70±55.60， P<0.05）；小动物超声可以检测到PDX1肿瘤有明显血流信号；活体激光共聚焦结果显示索拉非尼能明显减低PDX1肿瘤的总血管长度（1 573.00±236.21比2 675.03±162.00， P<0.05）和面积（11 145.33±1 931.97比20 105.37±885.93， P<0.05）；免疫组织化学结果显示索拉非尼显著下调CD34（27.55±3.76比45.47±5.57， P<0.05）和血管内皮生长因子（VEGF）（16.33±2.86比22.77±3.20， P<0.05）蛋白表达以及减少微血管密度（38.75±6.01比55.50±8.61， P<0.05）；Real-time PCR结果显示索拉非尼明显上调RUNX3基因表达（2.14±0.71比1.00±0.36， P<0.05），索拉非尼组RUNX3基因表达量与VEGF阳性细胞比率呈负相关（ R2=0.5097）。 结论:索拉非尼可能通过调控RUNX3-VEGF通路抑制肝癌PDX血管生成进而抑制肝癌生长。

目的:建立良好的肝癌裸鼠异位种植瘤不完全消融模型，探索残余癌分子景观的改变。方法:将8只免疫缺陷BALB/c裸鼠以MHCC97-H肝癌细胞系建立异位种植瘤模型，简单随机分为实验组和对照组，每组4只。实验组进行模拟临床肝癌不完全消融，对照组仅进行假消融。通过超声诊断仪、热成像相机、大体病理、HE染色、高通量全转录组测序评估模型间的差异性改变。结果:肝癌裸鼠异位种植瘤全部获得成功。实验组热成像相机监测针尖周围肿瘤温度位于50~73.9 ℃。与对照组相比，实验组HE染色大多显示为坏死区域-变性区域-肿瘤细胞区域共存的现象，坏死区域为(23.75±13.77)%，变性区域为50%(30%)。高通量全转录组测序显示体内外不完全消融模拟模型中存在数百个交集稳定分子景观。结论:通过成功建立肝癌不完全消融残余癌的裸鼠异位种植模型，可为分子层面上研究不完全消融残余癌的生物学特性提供条件。

肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，病死率常年居高不下，因此，对肝癌进行科学研究非常必要。本文针对肝癌模型构建新方法与肝癌研究新技术进行总结，肝癌模型构建新方法主要涉及基因工程模型、细胞谱系示踪模型、水动力模型、人源性肝癌模型、肝癌类器官模型；除此之外也阐述了一些新兴前沿实验技术，包括单细胞测序、空间转录组技术、单细胞质谱分析、全外显子组测序和纳米技术，供广大肝癌研究者参考。

目的:探讨建立肝细胞癌索拉非尼耐药细胞株鸡胚种植瘤模型的可行性。方法:采用药物连续诱导法，构建肝癌索拉非尼耐药细胞株；利用鸡胚动物模型，建立索拉非尼耐药细胞株的移植瘤；初步探讨耐药细胞株鸡胚种植瘤模型成瘤特点，分析相关靶点和信号通路的表达。采用 t检验。 结果:筛选到索拉非尼耐药的HepG2细胞(sHepG2)半数抑制浓度(IC 50)为(88.7±7.6) μmol/ml，显著高于HepG2( t＝16.416， P<0.01)；建立HepG2与sHepG2细胞株鸡胚种植瘤模型各5例，成功种植成瘤率为70%[(3+4)/(5+5)]；种植瘤肿瘤鲜重HepG2组[(0.093 2±0.012 2) g]低于sHepG2组[(0.141 1±0.019 4) g， t＝3.709， P<0.05]；成瘤组织蛋白质印迹法(Western blot)检测，sHepG2组磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)( t＝9.336， P<0.01)、磷酸化蛋白激酶(p-Akt/p-PKB)( t＝7.123， P<0.01)表达显著高于HepG2组，人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)( t＝6.164， P<0.01)、成纤维细胞生长因子受体1 (FGFR1)( t＝6.297， P<0.01)表达显著低于HepG2组。 结论:体外建立索拉非尼诱导的HepG2耐药细胞株，并在鸡胚移植瘤动物模型中成瘤，移植瘤生长以及瘤组织相关靶点与信号通路的差异性表明，鸡胚种植瘤模型可作为肝细胞癌索拉非尼耐药的在体研究方法。

目的:体外研究协同抑制纤维蛋白原相关蛋白1(FGL1)-淋巴细胞活化基因3(LAG-3)与长链非编码RNA(lncRNA)-T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(Tim3)双免疫逃逸通路，联合增强T淋巴细胞活性，显著抑制HCC肿瘤细胞恶性增殖和肿瘤生长的效用及机制。方法:构建敲除、稳定转染的5组人肝癌细胞株HepG2、HepG2-FGL1-KO、HepG2-FGL1-KO-Tim3(－)、HepG2-LAG-3-KO、HepG2-LAG-3-KO-Tim3(－)，并以此构建5组细胞株移植瘤免疫系统人源化小鼠成瘤模型。通过质量细胞计数法测定淋巴细胞CD8 +T亚群表达水平，并测定肿瘤生长大小体积变化。采用 t和 χ2检验。 结果:实验期间，5组中位肿瘤生长速率分别为149、136、81、75、68 mm 3/d。5组中位肿瘤体积分别为1.18、0.91、0.37、0.45、0.29 g。与HepG2组比较HepG2-FGL1-KO组和HepG2-LAG-3-KO组动物瘤体积显著小于HepG2组( t＝7.582， P<0.05)，HepG2-FGL1-KO-Tim3(－)和HepG2-LAG-3-KO-Tim3(－)组动物肿瘤体积又显著小于单独敲除组( t＝3.953， P<0.05)。同时，5组中位CD8 +T细胞亚群表达量分别为2.1×10 7、2.9×10 7、3.8×10 7、7.7×10 7、13.2×10 7。HepG2-FGL1-KO-Tim3(－)和HepG2-LAG-3-KO-Tim3(－)组CD8 +T细胞亚群表达活性显著高于FGL1和LAG-3单抑制组( t＝2.988， P<0.05)，而两个单抑制组的CD8 +T细胞亚群表达活性又显著高于HepG2对照组( t＝6.416， P<0.05)。 结论:单一免疫检查点的抑制对于遏制肿瘤逃避免疫杀伤存在局限性，多个免疫检查点因子信号通路联合抑制相较于单一通路的单控，将显著调控细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的激活和对肿瘤细胞的敏感性毒性表达。

目的:建立三氯乙烯（TCE）慢性暴露诱导B6C3（F1代）小鼠肝癌动物模型，探讨肝组织中SET-CAN融合蛋白（SET）、乙酰化组蛋白H2AK9和组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）表达水平的改变，为TCE致肝癌的分子机制研究提供初步的线索。方法:以B6C3小鼠的F1代子鼠为受试对象，用500、1 000和2 000 mg/kg TCE对6周龄小鼠进行灌胃染毒，同时设置玉米油溶剂对照组和四氯化碳（CCI 4，1 250 mg/kg）阳性对照组。染毒56周后取小鼠血清、肝脏进行生化指标检测和病理学鉴定，并用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测SET、H2AK9乙酰化及HDAC1的水平。 结果:小鼠的存活率为90.4%（141/156），各组之间差异无统计学意义（ P>0.05）。与溶剂对照组比较，各TCE剂量组和阳性对照组中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、乳酸脱氢酶（LDH）活性及血尿素氮（BUN）水平升高，差异均有统计学意义（ P<0.01）；中、高TCE剂量组肌酐（CREA）水平升高（ P<0.05），各TCE剂量组患癌率及ALT、AST活性呈剂量依赖性升高（ P<0.01），中、高ECT剂量组SET、H2AK9ac水平升高，HDAC1表达降低，差异均有统计学意义（ P<0.05）。与肝脏癌旁组织比较，中、高TCE剂量组癌组织中SET表达升高、HDAC1降低，高剂量组中H2AK9乙酰化水平升高，差异均有统计学意义（ P<0.05）。 结论:本次研究建立TCE致B6C3F1代小鼠肝癌模型，伴随肝组织的组蛋白H2AK9乙酰化水平升高和SET上调。

目的:观察重组肿瘤抑素T42肽对人肝癌干细胞(liver cancer stem cells，LCSCs)体外血管生成及小鼠体内荷瘤能力的影响。方法:培养人肝癌细胞系SMMC-7721，免疫磁珠法提取富集CD133 + (Cluster of Differentiation 133)肝癌干细胞LCSCs；构建稳定表达的LCSCs-Luc细胞系；人工合成T42肽。将LCSCs分为对照组、T42肽处理组和5-氟尿嘧啶组。体外血管形成实验检测3组LCSCs处理24 h后的成血管能力；建立免疫缺陷小鼠(中国科学院动物研究所)移植瘤模型( n＝9)，小动物活体成像检测成瘤能力；将9只成瘤小鼠分为3组( n＝3)，隔日注射生理盐水、T42肽(40 mmol/L)和5-氟尿嘧啶(40 mmol/L)，共注射7次，14 d后小动物活体成像检测3组小鼠的治疗作用。并记录瘤体体积变化。两组间比较予以 t检验，不符合正态分布的予以单因素方差分析。 结果:与对照组比较，T42肽、5-氟尿嘧啶处理组LCSCs的体外血管生成数[(3.51±1.64)、(4.53±2.17)个]显著低于对照组[(11.50±2.07)个]，差异有统计学意义( t＝11.112、8.978， P<0.05)。T42肽、5-氟尿嘧啶处理4周后，小鼠LCSCs异位荷瘤的瘤体的光子通量[(1.53±0.35)×10 6光子/s/cm 2、(1.87±0.31)×10 6光子/s/cm 2]显著低于对照组[(4.23±0.15)×10 6光子/s/cm 2]，差异有统计学意义( t＝12.213、12.004， P<0.05)。 结论:T42肽对LCSCs的体外血管生成能力及动物体内成瘤能力均有较强的抑制作用。

Mdr2基因敲除小鼠是因胆汁中磷脂缺乏而导致胆汁淤积的一种肝病模型。目前不仅用于其人类同源基因MDR3的研究，同时还作为原发性硬化性胆管炎、肝纤维化、进行性家族性肝内胆汁瘀积症、肝癌等多种肝病的动物模型而被广泛使用。在此我们对Mdr2基因敲除小鼠的生理特点及在肝病研究中的应用作一综述。

目的:研究CD68 ＋CD163 ＋M2型巨噬细胞促进肝癌肿瘤血管生成的作用。 方法:磁珠分选法分离得到人脾脏CD68 ＋M0巨噬细胞，体外采用IL-4和IL-13诱导为CD68 ＋CD163 ＋M2型巨噬细胞。将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分别与CD68 ＋M0和CD68 ＋CD163 ＋M2型巨噬细胞体外共培养。CCK-8法检测HUVEC的细胞活力，划痕试验检测细胞的迁移能力，体外成管试验检测血管形成的能力，Western blot检测HUVEC中血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)、Notch1、Dll4的表达水平，酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养基中血管内皮生长因子(VEGF)和IL-8的表达水平。采用BALB/c裸鼠构建HepG2移植瘤肝癌模型，分别注射CD68 ＋M0和CD68 ＋CD163 ＋M2型巨噬细胞，免疫组织化学法检测肿瘤组织中CD105的表达，Western blot检测VEGF、VEGFR2、Notch1、Dll4的表达水平。 结果:(1)IL-4和IL-13可以诱导CD68 ＋M0巨噬细胞向CD68 ＋CD163 ＋M2型巨噬细胞分化。(2)细胞实验中，CD68 ＋M0型巨噬细胞对HUVEC的成管能力无明显促进作用，细胞中VEGF、VEGFR2、Notch1、Dll4、IL-8水平的变化无统计学意义。CD68 ＋CD163 ＋M2型巨噬细胞可以促进HUVEC的体外成管，其作用与VEGF-VEGFR2-Notch1/Dll4信号激活有关。(3)动物实验中，CD68 ＋CD163 ＋M2型巨噬细胞可以促进CD105的表达和肿瘤血管的生成，同时可以提高VEGF-VEGFR2-Notch1/Dll4信号的表达。 结论:CD68 ＋CD163 ＋M2型巨噬细胞可以通过分泌VEGF等促血管生成因子，激活VEGF-VEGFR2-Notch1/Dll4信号促进肝癌中肿瘤血管的生成。