目的:探讨高浓度草酸刺激对人动脉内皮细胞（human arterial endothelial cells，HAECs）的损伤作用及相关分子机制。方法:按照是否用草酸干预将HAECs分为干预组和对照组，分别用30、100、200、300 μmol/L浓度草酸干预细胞不同的时间。采用MTT比色法检测HAECs增殖；流式细胞术检测细胞周期；荧光检测技术检测细胞内钙含量；Western印迹、实时定量PCR检测细胞周期、阴离子转运体相关蛋白和mRNA的表达；Western印迹法检测JAK2/STAT3信号通路相关蛋白的表达。结果:MTT实验结果显示，高浓度草酸（100、200、300 μmol/L）干预可显著抑制HAECs增殖，与对照组比较差异均有统计学意义（均 P<0.05）。荧光检测结果显示，高浓度草酸（100、200、300 μmol/L）干预48 h后，HAECs胞内钙含量较对照组均显著升高（分别 P<0.05、 P<0.001、 P<0.001）。流式细胞术结果显示，200 μmol/L草酸干预24 h后细胞S期占比较对照组显著增加（ P<0.05）。Western印迹、实时定量PCR结果显示，不同浓度草酸干预24 h后细胞阴离子转运体相关蛋白slc26a1、slc26a5、slc26a11蛋白和mRNA的相对表达量较对照组显著上调（均 P<0.05）；Western印迹结果显示，不同浓度草酸干预24 h后，细胞的p-JAK2和p-STAT蛋白相对表达量均显著高于对照组（均 P<0.05）。 结论:高浓度草酸可能通过转运体slc26a1、slc26a5、slc26a11进入HAECs发挥抑制内皮增殖、升高细胞内钙含量的作用，其机制可能与JAK2/STAT3信号通路的激活有关。草酸可能为导致动脉粥样硬化的尿毒症毒素之一。

近年来，单基因肾结石疾病发病率逐年升高，随着全基因组学分析和全外显子组测序技术的应用，单基因突变导致泌尿系结石发生发展的病因得到大量的验证。本文通过回顾国内外泌尿系结石相关遗传疾病研究，介绍转运蛋白和通道；离子、质子和氨基酸；钙敏感受体信号通路以及维生素D、草酸盐、胱氨酸、嘌呤和尿酸在遗传相关性泌尿系结石中的作用，总结基因检测在此类疾病中的意义，提高临床医生对遗传相关性泌尿系结石的认识。

目的:探讨左卡尼汀对草酸钙诱导肾小管上皮细胞(HK-2)铁死亡的影响。方法:采用蛋白质印迹法检测不同浓度(0、2、4、8 mmol/L)草酸钙对HK-2细胞铁死亡相关蛋白长链脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)、胱氨酸转运蛋白系统(XCT)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)表达的影响，筛选实验最适的草酸钙浓度。将HK-2细胞分为4组：①对照组，细胞贴壁后用正常培养基培养12 h，然后继续用正常培养基；②左卡尼汀组，细胞贴壁后用含5 mmol/L左卡尼汀的培养基预处理12 h，然后更换为含有5 mmol/L左卡尼汀的培养基；③草酸钙组，细胞贴壁后用正常培养基培养12 h，然后更换为含有最适浓度草酸钙的培养基；④草酸钙+左卡尼汀组，细胞贴壁后用含5 mmol/L左卡尼汀的培养基预处理12 h，然后更换为含有5 mmol/L左卡尼汀和最适浓度草酸钙的培养基。4组更换培养基后继续培养24 h，收集细胞或上清液，采用蛋白质印迹法检测铁死亡相关蛋白醌氧化还原酶(NQO1)、ACSL4、XCT、GPX4蛋白表达水平。采用相应试剂盒分别检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛水平；活性氧试剂盒检测细胞活性氧水平；二价铁离子探针检测细胞内铁离子蓄积情况。采用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞损伤程度。采用透射电镜观察线粒体损伤情况。对细胞行DAPI染色观察细胞核损伤情况；行苏木素染色观察草酸钙晶体黏附情况。结果:蛋白质印迹法检测结果显示，0、2、4、8 mmol/L草酸钙组的ACSL4蛋白表达分别为0.37±0.16、0.68±0.16、0.73±0.09、0.89±0.03，XCT蛋白表达分别为1.11±0.10、0.91±0.14、0.83±0.09、0.80±0.07，GPX4蛋白表达分别为1.23±0.13、0.99±0.17、0.81±0.05、0.72±0.06，与0 mmol/L组相比，2、4、8 mmol/L组ACSL4蛋白表达升高，XCT、GPX4蛋白表达降低，差异均有统计学意义( P<0.05)，其中4 mmol/L组与0 mmol/L组比较差异更显著( P<0.01)，故将4 mmol/L作为最适浓度进行后续实验。对照组、左卡尼汀组、草酸钙组、草酸钙+左卡尼汀组的NQO1水平分别为0.36±0.06、0.54±0.05、0.76±0.07、0.90±0.03，左卡尼汀组与对照组比较差异有统计学意义( P<0.05)，草酸钙组与对照组比较差异有统计学意义( P<0.01)，草酸钙+左卡尼汀组与草酸钙组比较差异有统计学意义( P<0.05)；ACSL4水平分别为0.66±0.10、0.58±0.08、0.99±0.03、0.77±0.09，XCT水平分别为0.93±0.08、0.85±0.07、0.76±0.06、0.99±0.05，GPX4水平分别为1.10±0.09、1.09±0.09、0.85±0.03、0.99±0.02，左卡尼汀组与对照组比较差异无统计学意义( P>0.05)，草酸钙组与对照组比较差异有统计学意义( P<0.01)，草酸钙+左卡尼汀组与草酸钙组比较差异有统计学意义( P<0.05)。对照组、左卡尼汀组、草酸钙组、草酸钙+左卡尼汀组SOD水平分别为(100.00±5.79)%、(105.80±3.26)%、(44.74±7.60)%、(85.01±5.15)%，GSH水平分别为(100.00±4.73)%、(107.10±5.48)%、(53.49±3.98)%、(81.18±5.48)%，丙二醛水平分别为(100.00±2.36)%、(98.00±11.10)%、(129.11±2.59)%、(113.35±5.79)%，左卡尼汀组与对照组比较差异无统计学意义( P>0.05)，草酸钙组与对照组比较差异有统计学意义( P<0.01)，草酸钙+左卡尼汀组与草酸钙组比较差异有统计学意义( P<0.05)。对照组、草酸钙组、草酸钙+左卡尼汀组活性氧荧光强度分别为(63.98±9.41)AU、(145.41±8.39)AU、(85.37±4.51)AU，亚铁离子荧光强度分别为(39.77±0.68)AU、(68.40±3.14)AU、(48.60±4.30)AU，草酸钙组与对照组比较差异有统计学意义( P<0.01)，草酸钙+左卡尼汀组与草酸钙组比较差异有统计学意义( P<0.01)。对照组、左卡尼汀组、草酸钙组、草酸钙+左卡尼汀组LDH水平分别为(100.00±5.37)%、(99.50±6.38)%、(153.77±6.06)%、(132.50±5.58)%，左卡尼汀组与对照组比较差异无统计学意义( P>0.05)，草酸钙组与对照组比较差异有统计学意义( P<0.01)，草酸钙+左卡尼汀组与草酸钙组比较差异有统计学意义( P<0.05)。透射电镜检查结果显示，相较于对照组，草酸钙组的线粒体皱缩，嵴断裂或消失，可见明显的双层膜结构；相较于草酸钙组，草酸钙+左卡尼汀组线粒体皱缩情况减轻，嵴相对增多，个别可见双层膜结构。DAPI染色结果显示，相较于对照组，草酸钙组部分细胞核损伤明显加重；相较于草酸钙组，草酸钙+左卡尼汀组细胞核损伤明显减轻。晶体黏附实验结果显示，相较于对照组，草酸钙组草酸钙晶体呈黑色颗粒状黏附于细胞，汇聚成团；相较于草酸钙组，草酸钙+左卡尼汀组黑色颗粒黏附于细胞的情况明显减轻。 结论:左卡尼汀能够减轻草酸钙诱导HK-2细胞的氧化应激和铁死亡，从而减轻细胞损伤和晶体黏附。

目的:了解草酸钙结晶肾损伤过程中肾组织基因及蛋白的动态变化，探讨草酸钙结晶肾损伤的可能机制。方法:采用10只8周龄雄性C57BL/6J小鼠，适应性饲养1周，按随机数字表法将其分为对照组和草酸钙结晶肾损伤组（模型组），应用乙醛酸（50%，9 mmol/L）腹腔注射（100 mg·kg -1·d -1，持续5 d）建立草酸钙结晶肾损伤小鼠模型，对照组小鼠予等体积0.9%氯化钠溶液腹腔注射。使用HE染色、PAS染色、Masson染色及Von Kossa染色观察模型组小鼠是否造模成功。对小鼠肾组织进行转录组学和蛋白组学测序，根据差异基因和差异蛋白结果筛选与草酸钙结晶肾损伤有关的基因和蛋白并进行基因本体（gene ontology，GO）及京都基因和基因组数据库（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）分析。采用主成分分析图、热图及火山图进行肾组织转录组学和蛋白组学分析。采用韦恩图分析差异基因和差异蛋白的重叠内容。 结果:模型组小鼠肾脏HE染色、PAS染色结果显示肾组织形态结构异常，Masson染色结果显示肾组织存在纤维化，Von Kossa染色结果显示皮髓交界处大量钙盐沉积，血肌酐、血尿素氮等肾损伤标志物显著升高，提示草酸钙结晶肾损伤小鼠模型构建成功。转录组学分析结果显示，相比对照组，模型组共存在2 815个显著差异基因，其中2 004个基因上调，811个基因下调；蛋白组学分析结果显示，模型组共存在1 197个差异蛋白，其中353个蛋白上调，844个蛋白下调。共有338个差异基因与差异蛋白相对应，其中324个差异基因与差异蛋白趋势一致。在表达上调及下调对应的差异基因和差异蛋白中均选取表达差异较大的5个差异分子，分别为血清淀粉样蛋白A1（SAA1）、微小染色体维持蛋白4（MCM4）、精氨酸酶2（ARG2）、S100钙结合蛋白A6（S100A6）、白细胞分化抗原14（CD14）、葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基（G6PC）、溶质转运家族22成员6（SLC22A6）、溶质载体有机阴离子转运蛋白家族成员1A1（SLCO1A1）、磷酸烯醇丙酮酸羧激酶1（PEPCK1）和吲哚胺N-甲基转移酶（INMT）。GO分析表明2个组学相关的差异分子富集的共同通路主要涉及线粒体功能、多种能量代谢通路及免疫失调；而KEGG富集分析显示2个组学相关的差异分子主要的富集通路包括转运体异常、线粒体功能障碍、神经退行性病变、氨基酸代谢通路异常、氧化磷酸化等能量代谢通路异常等。结论:草酸钙结晶肾损伤小鼠肾脏基因和蛋白层面均发生明显变化。线粒体功能障碍、多种能量代谢通路异常及免疫失调可能作为重要机制参与草酸钙结晶肾损伤的发病。

目的 研究甘草酸对蛇床子素溶解度和生物利用度的影响,并探讨甘草酸影响蛇床子素溶解度、改善其药代动力学的作用机制.方法 雄性SD大鼠单独口服蛇床子素(20 mg·kg-1)和配伍甘草酸(45 mg·kg-1)给药前后,在特定时间点采集血液和肝脏样本并用LC-MS/MS方法测定蛇床子素浓度配伍前后的变化.通过X射线衍射(XRD)、傅立叶变换红外光谱(FT-IR)等物理表征,研究甘草酸对蛇床子素溶解度的影响,揭示甘草酸的增溶机理.采用Caco-2细胞单层模型,研究蛇床子素在体外的吸收转运过程,以及甘草酸及其活性代谢物甘草次酸(GC)对蛇床子素在Caco-2 细胞吸收的影响.采用大鼠肠上皮细胞S9 和肝细胞S9 孵育系统,探讨甘草酸和甘草次酸对蛇床子素体外代谢的影响.结果 大鼠体内药代动力学结果表明甘草酸配伍蛇床子素可显著提高蛇床子素大鼠体内生物利用度.大鼠肝组织样本实验结果表明,甘草酸增加蛇床子素在肝组织中的分布.体外溶解度实验研究发现,甘草酸能显著提高蛇床子素在水中的溶解度,推测可能的原因为蛇床子素结晶度的降低以及蛇床子素与甘草酸之间形成氢键所致.Caco-2细胞单层模型结果显示甘草酸和甘草次酸均不能促进蛇床子素的吸收,体外孵育研究表明,甘草酸与甘草次酸对蛇床子素的体外I相代谢的影响较小.结论 通过甘草酸和蛇床子素二者配伍机制的探讨,配伍后蛇床子素生物利用度的提高和肝脏浓度的增加可能是由于甘草酸提高了蛇床子素的溶解度.对进一步研究以溶解度作为胃肠道吸收限速步骤的难溶性药物与天然增溶剂甘草酸配伍使用的合理性具有重要意义.

目的 研究新生儿遗传罕见病的早期识别及诊断方法.方法 回顾性分析2014-2022年新乡医学院第一附属医院新生儿科、新乡市妇幼保健院新生儿科、泰安市中心医院新生儿科及佛山市妇幼保健院新生儿科收治的82例遗传罕见病病例的临床资料、实验室检查及基因检测结果.结果 82例遗传罕见病中肝脏疾病15例(鸟氨酸氨甲酰基转移酶缺乏症3例,氨甲酰磷酸合成酶I缺乏症2例,氨甲酰磷酸合成酶I缺乏症或鸟氨酸氨甲酰基转移酶缺乏症 1例,吉尔伯特综合征6例,钠牛磺胆酸共转运多肽缺陷病2例,低碱性磷酸酶血症1例),神经肌肉疾病17例(早发性脑病5例,良性家族性新生儿癫痫5例,钼辅因子缺乏症A型1例,先天性肌无力综合征5型1例,7型杆状体肌病1例,3型杆状体肌病1例,Miller-Dieker综合征1例;德朗热综合征1例,PURA综合征1例),呼吸系统疾病1例(先天性中枢低通气综合征),泌尿系统疾病5例(巴特综合征3型3例,先天性肾病综合征2例),遗传代谢病23例(甲基丙二酸血症12例,高草酸尿症2例,极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症1例,异戊酸血症2例,枫糖尿病1例,核基因变异所致新生儿原发性线粒体病4例,糖原累积症Ⅱ型1例),免疫缺陷7例(重症联合免疫缺陷1例,22q11.2微缺失综合征5例,湿疹-血小板减少伴免疫缺陷综合征1例),皮肤疾病2例(SAM综合征1例;色素失禁症1例),内分泌疾病4例(甲状腺激素合成障碍性先天性甲减2例,先天性肾性尿崩症2例),微缺失或微重复1例(16p11.2微缺失综合征),表观遗传病2例(Beckwith-Wiedemann综合征1例;Prader-Willi综合征1例),涉及多个系统疾病5例(复合型甘油酸激酶缺乏症1例,CHARGE综合征2例,努南综合征5型1例,努南综合征8型1例).结论 新生儿遗传罕见病涉及多系统,对体格检查、实验室检查、彩超及头颅MRI异常进行综合判断,积极给予血串联质谱、尿气相色谱-质谱筛查和基因检测有助于早期发现新生儿遗传罕见病.

目的 研究小儿黄龙颗粒对注意力缺陷多动障碍(ADHD)模型动物的干预作用及作用机制.方法 采用幼龄自发性高血压大鼠(SHR)作为ADHD模型大鼠,将 32 只健康SHR大鼠按体重随机分为 4 组,即SHR大鼠组,小儿黄龙颗粒 1.88、3.75 g·kg-1 组,哌甲酯组,另设WKY大鼠组、Wistar大鼠组,每组8只,连续灌胃给药21 d.以自主活动度、焦虑程度、社交偏好程度、易激惹程度、空间记忆能力、注意定势转移能力作为ADHD行为学指标;以超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS/MS)方法检测大鼠大脑内前额叶中多巴胺(DA)、高香草酸(HVA)的含量;以PCR方法检测大鼠前额叶内酪氨酸羟化酶(TH)、多巴胺转运体(DAT)mRNA的表达量.结果 3.75 g·kg-1 小儿黄龙颗粒可改善ADHD模型大鼠的行为学异常,显著提高大鼠前额叶DA含量(P＜0.01)、降低HVA含量(P＜0.05),明显促进前额叶TH mRNA、DAT mRNA的表达(P＜0.01).结论 小儿黄龙颗粒能改善ADHD模型大鼠的行为学障碍,其作用机制与改善多巴胺能神经功能有关.

肠易激综合征患者的内脏高敏感发生机制尚未明确,通常认为可能与受体及通道的异常改变、神经递质的改变、肠道菌群的失调等多种因素有关.近年来大量研究发现,大麻素受体、瞬时受体电位香草酸受体1、5-羟色胺及其受体、囊泡谷氨酸转运体、肠道菌群紊乱以及钠离子通道在内脏高敏感的发生中起重要作用.此文就近年来有关内脏高敏感发生机制的研究进展作一综述.

目的:研究苦参碱和甘草酸在小肠各段和不同剂量下的吸收特征,探索两种成分联用时的吸收变化.方法:采用大鼠单向肠灌流模型,利用HPLC法测定灌流液中苦参碱和甘草酸的含量变化,计算其吸收速率参数(Ka)和有效渗透系数(Peff).结果:苦参碱在小肠各段均有吸收且空肠段吸收最好与十二脂肠和回肠的吸收参数差异有统计学意义(P<0.05);不同质量浓度下吸收差异有统计学意义(P<0.05).甘草酸在小肠吸收较差,不同肠段和质量浓度下的吸收差异无统计学意义(P>0.05).两种物质联用时,苦参碱和甘草酸的吸收与单用时相比差异有统计学意义(P<0.05).结论:苦参碱的吸收呈剂量相关性,随质量浓度的增加而增加.甘草酸的吸收不随质量浓度变化而改变,吸收方式可能为被动转运.两种物质联用时可以提高苦参碱的体内吸收和甘草酸的肠内浓度.

目的:研究芍药苷、辛弗林、甘草酸对内脏高敏感大鼠5-羟色胺(5-HT)信号通路的多靶点[色氨酸羟化酶1(TPH1)/5-羟色胺转运体(SE RT)/5羟色胺3受体(5-HT3R)/5-HT4 RI调控,探讨各成分间的协同交互作用,探索四逆散有效成分干预内脏高敏感状态的潜在机制.方法:SD大鼠随机分为正常组,模型组,匹维溴铵组(15 mg·kg-1),芍药苷组(50 mg·kg-1),辛弗林组(50 mg·kg-1),甘草酸组(50 mg·kg-1),芍药苷+甘草酸组(25 mg·kg-1 +25 mg·kg-1),芍药苷+辛弗林组(25 mg·kg-1+ 25 mg·kg-1),辛弗林+甘草酸组(25 mg·kg-1 +25 mg·kg-1),芍药苷+辛弗林+甘草酸组(16.7 mg·kg-1+16.7 mg·kg-1 +16.7 mg·kg-1),四逆散组(10 g·kg-1).采用复合应激法建立肠易激综合征(IBS)内脏高敏感大鼠模型;以大鼠一般状态评分和直肠扩张腹壁撤退反射(AWR)的最小容量阈值评价大鼠肠道敏感性程度;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠结肠组织5-HT,TPH1,SERT,5-HT3R,5-HT4R水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠结肠组织TPH1,5-HT3R,5-HT4R mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠结肠组织TPH1,5-HT3R蛋白水平.结果:与正常组比较,模型组大鼠一般状态评分和最小容量阈值显著下降(P＜0.01),结肠组织5-HT,TPH1,5-HT3R水平显著升高,SERT,5-HT4R水平明显降低(P ＜0.05,P＜0.01),TPH1,5-HT3R mRNA及蛋白表达显著升高,5-HT4R mRNA表达明显降低(P＜0.05,P＜0.01).与模型组比较,芍药苷+辛弗林+甘草酸组结肠5-HT,TPH1,5-HT3R水平明显降低,SERT,5-HT4R水平明显升高,TPH1,5-HT3R mRNA及蛋白表达明显降低,5-HT4R mRNA表达明显升高(P ＜0.05,P＜0.01);TPH1,5-HT3R,5-HT4R mRNA多靶点纠偏作用明显,最小容量阈值和一般状态评分明显升高(P ＜0.05,P＜0.01),组内成分之间存在协同交互作用.结论:芍药苷+辛弗林+甘草酸组合对内脏高敏感大鼠结肠5-HT合成限速酶(TPH1)和相关受体(5-HT3R,5-HT4R)具有协同增效的调控作用,有效成分组合对5-HT通路的多靶点纠偏效应可能是四逆散改善大鼠内脏高敏感状态的重要机制.