目的:探索蛋白质二硫键异构酶（PDI）A3（protein disulfide isomerase A3，PDIA3）在肝细胞肝癌组织中表达的临床意义和PDIA3对肝癌细胞中IL6、IL17表达的影响。方法:用免疫组化检测88例肝癌患者组织及其癌旁组织标本中PDIA3的表达情况。将HepG2细胞分为实验组和对照组，实验组细胞转染PDIA3-siRNA质粒，对照组细胞转染MOCK-siRNA质粒，荧光定量PCR检测各组细胞PDIA3 mRNA含量，蛋白质印迹法（Western blot）检测各组细胞的PDIA3、IL6、IL17表达情况，CCK8检测各组细胞的增殖能力。结果:肝癌患者组织PDIA3阳性率为85.22%（75/88），癌旁组织组织中表达率为6.81%（6/88），PDIA3在肝癌组织中的表达率显著高于癌旁组织，差异具有统计学意义（ P<0.001）。转染siRNA后，实验组和对照组HepG2细胞中PDIA3 mRNA表达量分别为1.23±0.20和0.43±0.12，PDIA3蛋白表达量分别为1.19±0.11和0.23±0.08，IL6表达量分别为1.11±0.15和0.57±0.09，IL17表达量分别为1.19±0.14和0.45±0.08，IL6、IL17的表达显著下降（均 P<0.05）；实验组和对照组HepG2细胞CCK8实验120 h的吸光度分别为2.28±0.10和1.11±0.09，实验组细胞增殖能力明显下降（ P<0.05）。 结论:PDIA3在肝细胞肝癌中表达明显升高，可能与肝癌的恶性程度相关；且PDIA3通过调控IL6、IL17的表达影响肝细胞肝癌细胞的增殖能力。

目的:探讨蛋白质二硫键异构酶（PDI）在糖尿病缺血性心脏病中的作用机制。方法:利用H9c2大鼠心肌细胞建立高糖（HG，33 mmol/L葡萄糖）及缺氧/复氧损伤模型（H/G，提前30 min往密闭缺氧盒中灌注95%的氮气及5%的CO 2混合气体）和高糖+缺氧/复氧组（HG+H/R）组模型的过表达PDI腺病毒及下降PDI siRNA转染心肌细胞，检测各实验组大鼠乳酸脱氢酶（LDH）活性、丙二醛（MDA）及高分子量脂联素（HMW-APN）的浓度，心肌细胞PDI、脂联素（APN）、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Cleaved Caspase-3）及糖调节蛋白78（Grp78）的表达。 结果:在HG、H/R以及HG+H/R组细胞模型中PDI的表达与正常组（葡萄糖浓度5.5 mmol/L）相比均明显减少，LDH活性［（179.7±10.4）、（218.4±18.4）、（328.2±5.3）比（91.0±11.0） U/L］、MDA浓度［（7.0±0.4）、（10.0±1.0）、（11.7±1.0）比（4.2±1.8） μmol/L］及Cleaved Caspase-3、Grp78蛋白表达明显升高，同时，APN及HMW-APN的蛋白表达显著减少［（2.01±0.21）、（1.64±0.27）、（1.20±0.14）比（2.62±0.12） μg/L，均 P<0.05］。过表达PDI病毒干预后，H9c2细胞在高糖、缺氧/复氧条件下，APN及HMW-APN［（2.86±0.03） μg/L比（3.03±0.10） μg/L、（2.06±0.05） μg/L比（2.31±0.06） μg/L、（1.83±0.07） μg/L比（1.96±0.11） μg/L、（1.20±0.06） μg/L比（1.39±0.09） μg/L］的蛋白表达增加，细胞凋亡和氧化应激情况得到明显改善（均 P<0.05）。利用特异性siRNA下降PDI的蛋白后，H9c2细胞在高糖及缺氧/复氧损伤条件下，APN及HMW-APN［（0.75±0.09） μg/L比（0.59±0.09） μg/L、（0.62±0.04） μg/L比（0.53±0.05） μg/L、（0.55±0.14） μg/L比（0.51±0.12）μg/L、（0.48±0.12） μg/L比（0.35±0.08） μg/L］的蛋白表达减少，LDH活性、MDA浓度及Cleaved Caspase-3、Grp78蛋白表达明显升高，细胞凋亡及氧化应激损伤增加（均 P<0.05）。 结论:PDI可能通过调控APN及HMW-APN的蛋白表达，发挥对糖尿病缺血再灌注心肌细胞功能的影响。

目的:探讨唑尼沙胺（zonisamide, ZNS）对创伤性脑损伤（traumatic brain injury, TBI）糖氧剥夺（oxygen-glucose deprivation, OGD）细胞模型的保护作用及其机制。方法:体外培养人神经母细胞瘤（human neuroblastoma cells, SH-SY5Y）细胞，按随机数字表法分为对照组（Control组）、糖氧剥夺组（OGD组）和给药组（OGD+ZNS组）。采用糖氧剥夺法建立创伤性脑损伤细胞模型。造模后，检测细胞活性；检测细胞乳酸脱氢酶（LDH）释放情况；β-半乳糖苷酶试剂盒对细胞染色，观察细胞衰老情况；线粒体红色荧光探针（Mito Tracker Red）、JC-1线粒体膜电位试剂盒对线粒体染色，观察线粒体形态及膜电位变化；检测细胞ATP浓度；从SH-SY5Y细胞中提取蛋白，用蛋白质印迹法（Western blot）法检测内质网应激相关指标：葡萄糖调节蛋白78（glucose-regulated protein 78，GRP78），增强子结合蛋白同源蛋白（C/EBP-homologous protein antibody，CHOP）、蛋白二硫键异构酶（protein disulfide isomerase, PDI）以及内参β-肌动蛋白（β-actin）的表达变化。结果:OGD组细胞存活率较Control组明显减少（ P<0.01），OGD+ZNS组细胞存活率较OGD组明显增加（ P<0.01）；OGD组LDH释放率较Control组明显增加（ P<0.01），OGD+ZNS组LDH释放率较OGD组明显减少（ P<0.01）。细胞染色结果显示，与Control组和OGD+ZNS组相比，OGD组细胞明显受损衰老严重，染色更深。线粒体染色结果显示，与Control组和OGD+ZNS组相比，OGD组线粒体线性连接明显减少，线粒体活性明显下降。与Control组和OGD+ZNS组相比，OGD组细胞线粒体染色红色荧光明显减弱，绿色荧光明显增强，线粒体膜电位明显下降；OGD组ATP浓度较Control组明显下降（ P<0.01），OGD+ZNS组ATP浓度较OGD组明显上升（ P<0.01）。Western blot结果显示OGD组GRP78、CHOP、PDI表达较Control组明显增加（ P均<0.05），OGD+ZNS组GRP78、CHOP、PDI较OGD组明显下降（ P均<0.05）。 结论:唑尼沙胺可以通过保护线粒体活性以及抑制内质网应激保护创伤性脑损伤糖氧剥夺细胞模型。

目的:探讨miRNA-4686（miR-4686）和蛋白质二硫键异构酶A4（PDIA4）在食管癌组织和细胞中的表达，以及miR-4686体外对食管癌细胞增殖和迁移能力的影响及可能机制。方法:采用miRWalk version 3在线网站预测到miR-4686与PDIA4 mRNA互补结合。利用从加州大学圣克鲁兹分校基因组（UCSC）数据库获得的miR-4686和PDIA4 mRNA的表达谱，分析食管癌组织和癌旁组织中miR-4686和PDIA4 mRNA相对表达量。从UCSC数据库获得miR-4686在人体细胞中的定位。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测食管癌细胞Eca109、TE-13、EC9706、KYSE-510与正常食管上皮细胞HET-1A中miR-4686和PDIA4 mRNA的相对表达量。选择miR-4686相对表达量最低的Eca109细胞进行后续研究。将Eca109细胞分为miR-4686组（转染miR-4686模拟物）和miR-NC组（转染miR-4686阴性对照序列模拟物）。通过克隆形成实验检测两组Eca109细胞增殖能力，划痕愈合实验检测Eca109细胞迁移能力，双萤光素酶报告基因实验验证miR-4686与PDIA4 mRNA的靶向关系；蛋白质印迹法检测PDIA4蛋白和PI3K-AKT-mTOR信号通路相关蛋白的表达。结果:与癌旁组织比较，食管癌组织中miR-4686呈低表达、PDIA4 mRNA呈高表达（均 P<0.01）。与正常食管上皮细胞HET-1A（0.98±0.15）比较，食管癌细胞Eca109（0.11±0.04）、TE-13（0.58±0.10）、EC9706（0.34±0.05）、KYSE-510（0.69±0.06）中miR-4686相对表达量均降低（均 P<0.05）。与miR-NC组比较，miR-4686组Eca109细胞miR-4686相对表达量升高（9.4±2.1比1.0±0.4， t＝3.88， P＝0.008），克隆形成数减少[（38±9）个比（114±18）个， t＝3.78， P＝0.009]，划痕愈合率降低[（27.13±0.91）%比（45.05±3.89）%， t＝4.48， P＝0.004]，PDIA4 mRNA相对表达量降低[1.0±0.5比6.3±0.9， t＝5.04， P＝0.002]。与野生型（WT）-PDIA4+miR-NC组比较，WT-PDIA4+miR-4686组Eca109细胞相对荧光素酶活性下降（0.31±0.08比0.99±0.08， t＝5.96， P<0.001）。与miR-NC组比较，miR-4686组Eca109细胞中PDIA4、p-PI3K、p-AKT、p-m-TOR蛋白表达均降低。 结论:食管癌组织中miR-4686呈低表达，PDIA4 mRNA呈高表达。miR-4686可能通过靶向调控PDIA4表达而抑制食管癌Eca109细胞增殖和迁移。

目的:研究转录激活因子6（ATF6）与需肌醇酶1-X-框结合蛋白1（IRE1-XBP1）在氧糖剥夺/复氧（OGD/R）损伤小鼠海马神经元（HT22）细胞中的交互作用。方法:复制OGD/R损伤HT22细胞模型，观察OGD/R后不同时间点（0、3、6、12、24 h）内质网应激（ERS）、细胞活性和凋亡的变化。将对数生长期的HT22细胞分为空白对照组、对照+ATF6激动剂AA147组、对照+IRE1抑制剂4μ8c组、OGD/R模型组、OGD/R+AA147组、OGD/R+4μ8c组（AA147组和4μ8c组于全程添加10 μmol/L AA147或16 μmol/L 4μ8c）。采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测各组HT22细胞ERS相关蛋白〔葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、磷酸化需肌醇酶1（p-IRE1）、磷酸化真核细胞翻译起始因子2α（p-eIF2α）〕以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）、活化caspase-3的表达；采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测ERS相关基因以及ATF6〔同型半胱氨酸内质网应激泛素样结构域1（Herpud1）、蛋白二硫键异构酶家族成员4（Pdia4）、Lin-12样抑制子/增强子（Sel1L）〕和剪接型X-框结合蛋白1〔XBP1s，包括DnaJ热休克蛋白成员B9（Erdj4）、Sec24相关基因家族成员D（Sec24d）、信号受体序列3（Ssr3）〕介导的转录反应相关基因的mRNA表达；采用细胞增殖与毒性检测试剂盒（CCK-8）检测细胞活性；采用免疫荧光法检测活化caspase-3表达。结果:与空白对照组比较，ERS相关蛋白p-IRE1和p-eIF2α的蛋白表达量分别在OGD/R 12 h、OGD/R 3 h升高（p-IRE1/β-actin：2.09±0.10比1.00±0.00，p-eIF2α/β-actin：1.39±0.11比1.00±0.00，均 P<0.01），ERS相关基因ATF6、XBP1s、非剪接型X-框结合蛋白1（XBP1u）、转录激活因子4（ATF4）、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）的mRNA表达量在OGD/R后不同时间点也明显升高，表明ERS在OGD/R作用的HT22细胞中被激活。与OGD/R模型组比较，OGD/R+AA147组p-IRE1蛋白表达量无改变，但XBP1s和XBP1u的mRNA表达量明显下降〔XBP1s（2 -ΔΔCt）：0.76（0.71，0.92）比1.13（1.03，1.29），XBP1u（2 -ΔΔCt）：0.29±0.05比0.52±0.04，均 P<0.01〕，而XBP1s介导的转录反应相关基因表达量无明显改变。与OGD/R模型组比较，在使用4μ8c后短链ATF6（sATF6）和GRP78的蛋白表达量无明显改变，ATF6介导的转录反应相关基因的mRNA也无明显改变。提示ATF6的激活能抑制XBP1s和XBP1u的mRNA表达，但ATF6与XBP1s介导的转录反应无交互作用。与空白对照组比较，HT22细胞活性在OGD/R 3 h时显著降低〔（44.64±5.12）%比（99.13±5.76）%， P<0.01〕，凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2比值和活化caspase-3/caspase-3比值分别在OGD/R 3 h和OGD/R 0 h显著升高（Bax/Bcl-2比值：6.15±1.65比1.00±0.00，活化caspase-3/caspase-3比值：17.48±2.75比1.00±0.00，均 P<0.01），表明凋亡在OGD/R作用的HT22细胞中被激活。与OGD/R模型组比较，OGD/R+AA147组细胞活性显著下降〔（36.52±17.78）%比（69.90±9.43）%， P<0.01〕，Bax/Bcl-2比值和活化caspase-3/caspase-3比值明显升高（Bax/Bcl-2比值：2.06±0.31比1.10±0.25，活化caspase-3/caspase-3比值：3.35±0.59比0.55±0.09，均 P<0.01）。 结论:在OGD/R损伤HT22细胞中，ATF6和XBP1s介导的转录反应无明显交互作用，但AA147激活的ATF6能抑制XBP1s和XBP1u的mRNA表达并促进应激HT22细胞中死亡的发生。

目的:通过动物实验探讨机械通气（MV）诱导内质网应激（ERS）促进机械通气相关性肺纤维化（MVPF）的机制，明确血管紧张素受体1（AT1R）通路在该过程中的重要作用。方法:将C57BL/6小鼠按随机数字表法分为对照组（Sham组）、MV组、AT1R敲减组（AT1R-shRNA组）、AT1R敲减+MV组（MV+AT1R-shRNA组），每组6只。MV组和MV+AT1R-shRNA组小鼠气管插管后MV 2 h（参数设置：呼吸频率70次/min，潮气量20 mL/kg，吸入氧浓度0.21）以建立MVPF动物模型；Sham组和AT1R-shRNA组小鼠气管插管后自主呼吸。AT1R-shRNA组和MV+AT1R-shRNA组小鼠于制模前1个月经气管注射AT1R-shRNA-腺相关病毒悬液以抑制肺组织内AT1R基因表达。分别用免疫荧光和蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测肺组织AT1R、ERS标志性蛋白免疫球蛋白重链结合蛋白（BIP）、蛋白质二硫键异构酶（PDI），以及纤维化标志性蛋白Ⅰ型胶原蛋白（COL1A1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达情况；苏木素-伊红（HE）染色评估肺损伤情况，Masson染色评估肺纤维化程度。结果:与Sham组相比，MV组小鼠肺纤维化程度和肺损伤情况显著，肺组织AT1R、BIP、PDI、COL1A1、α-SMA蛋白表达水平明显升高（AT1R/β-actin：1.40±0.02比1，BIP/β-actin：2.79±0.07比1，PDI/β-actin：2.07±0.02比1，COL1A1/α-Tubulin：2.60±0.15比1，α-SMA/α-Tubulin：2.80±0.25比1，均 P<0.01），肺组织内E-cad +/AT1R +和E-cad +/BIP +细胞数量增加，COL1A1和α-SMA荧光强度增强。与MV组相比，MV+AT1R-shRNA组小鼠肺纤维化程度和肺损伤情况显著缓解，肺组织AT1R、BIP、PDI、COL1A1、α-SMA蛋白表达水平明显下降（AT1R/β-actin：0.53±0.03比1.40±0.02，BIP/β-actin：1.73±0.15比2.79±0.07，PDI/β-actin：1.04±0.07比2.07±0.02，COL1A1/α-Tubulin：1.29±0.11比2.60±0.15，α-SMA/α-Tubulin：1.27±0.10比2.80±0.25，均 P<0.01），肺组织内E-cad +/AT1R +和E-cad +/BIP +细胞数量减少，COL1A1和α-SMA荧光强度减低。AT1R-shRNA组各指标与Sham组比较差异均无统计学意义。 结论:MV可上调肺泡上皮细胞AT1R表达，活化AT1R通路而诱导ERS，促进MVPF进程。

目的:探索巨噬细胞在非酒精性脂肪性肝炎(NASH)中的作用、机制和治疗价值。方法:通过给予8周龄雄性Alms突变( foz/ foz)小鼠高脂饮食6、8和10周，给予8周龄雄性C57BL/6小鼠蛋氨酸胆碱缺乏(MCD)饮食7 d、3周和4周分别构建NASH小鼠模型，对照组小鼠分别给予普通饮食和MCD对照饮食。采用荧光定量聚合酶链反应方法检测NASH模型小鼠和对照组小鼠肝脏的 F4/80 mRNA水平，采用免疫荧光染色观察对照组小鼠和NASH模型小鼠肝脏中的巨噬细胞。lysM-Cre/DTR转基因小鼠予MCD饮食5周后，分为转基因实验组(给予白喉毒素清除巨噬细胞)和转基因对照组(给予磷酸盐缓冲液注射)。检测转基因实验组和转基因对照组小鼠肝脏中的甘油三酯水平和脂质过氧化物水平，并对小鼠的肝脏组织进行炎症评分。通过细胞因子分析实验和蛋白质印迹法分析巨噬细胞调节NASH中炎症的作用机制。通过AML-12肝细胞和RAW264.7巨噬细胞条件培养基与细胞共培养观察肝细胞和巨噬细胞的相互作用。通过氯膦酸脂质体清除野生型和NASH模型小鼠中的巨噬细胞，证实其在NASH预防中的价值。统计学方法采用独立样本 t检验。 结果:NASH模型 foz/ foz小鼠高脂饮食饲养6、8和10周时肝脏中的 F4/80 mRNA水平均高于对照组小鼠(1.49±0.19、1.70±0.15、1.93±0.04比1.05±0.22)，差异均有统计学意义( t＝3.06、4.92、7.92，均 P<0.05)；NASH模型小鼠MCD饮食饲养7 d和3周时肝脏中的 F4/80 mRNA水平均高于对照组小鼠(2.70±0.99和3.08±1.71比1.00±0.83)，差异均有统计学意义( t＝3.43、3.54，均 P<0.01)；免疫荧光染色结果显示，与对照组比较，NASH模型小鼠MCD饲养4周时肝脏中F4/80 +诱导型一氧化氮合酶(iNOS) +的M1型巨噬细胞增多，F4/80 +CD206 +的M2型巨噬细胞明显减少。巨噬细胞清除后转基因实验组小鼠的炎症评分、肝脏甘油三酯和脂质过氧化物水平均低于转基因对照组[(0.69±0.32)分比(1.95±0.74)分、(43.97±13.24) g/mg比(63.09±14.85) g/mg、(24.84±6.21) nmol/mg比(37.91±8.91) nmol/mg]，差异均有统计学意义( t＝3.14、2.72、2.41，均 P<0.05)。细胞因子分析实验结果显示，巨噬细胞清除可显著降低血液中白细胞介素(IL)-12和巨噬细胞炎症蛋白-1α的蛋白质水平(差异倍数分别为-3.98、-2.74，均 P<0.05)。转基因实验组小鼠细胞核中CCAAT/增强子结合蛋白β蛋白质减少。体外研究发现RAW264.7巨噬细胞条件培养基可促进AML-12肝细胞中脂肪聚集；MCD培养基处理的AML-12肝细胞条件培养基可促进RAW264.7巨噬细胞向M1型极化。经氯膦酸脂质体处理后的野生型小鼠肝脏中的甘油三酯和脂质过氧化物的蛋白质表达水平均低于MCD诱导的NASH模型小鼠[(45.33±14.59) g/mg比(63.10±16.02) g/mg、(2.11±0.48) nmol/mg比(2.73±0.17) nmol/mg]，差异均有统计学意义( t＝2.84、2.73，均 P<0.05)。蛋白质印迹法结果显示，经氯膦酸脂质体处理后的NASH模型小鼠肝脏中的磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶、肌醇需求酶-1α、蛋白质二硫键异构酶、葡萄糖调节蛋白78、磷酸化真核起始因子2α的蛋白质相对表达量均低于未经氯膦酸脂质体处理的NASH模型小鼠(1.84±0.36比3.05±0.83、1.50±0.84比6.65±1.47、0.87±0.12比2.28±0.52、1.68±0.43比4.76±1.13、1.42±0.19比2.75±0.79)，差异均有统计学意义( t＝2.32、5.28、4.56、4.41、2.85，均 P<0.05)。 结论:NASH中巨噬细胞发生M1型极化，并与肝细胞相互作用促进炎症因子分泌、脂肪合成因子上调、氧化应激和内质网应激，引起NASH进展。巨噬细胞清除剂氯膦酸脂质体是预防NASH潜在的新途径。

目的:观察聚嘧啶束结合蛋白相关剪接因子（PSF）高表达对高浓度4-羟基壬烯醛（4-HNE）诱导下人视网膜微血管内皮细胞（hRMEC）内质网（ER）氧化应激损伤的保护作用。方法:体外培养的对数生长期hRMEC分为正常组、单纯4-HNE处理组（单纯4-HNE组），空载质粒联合4-HNE处理组（Vec+4-HNE组）、PSF高表达联合4-HNE处理组（PSF+ 4-HNE组）。单纯4-HNE组、Vec+4-HNE组、PSF+4-HNE组细胞培养基加入10 μmol/L 4-HNE，刺激12 h。其后，Vec+4-HNE组、PSF+4-HNE组应用转染试剂脂质体2000分别导入pcDNA空载体、pcDNA-PSF真核表达质粒，转染24 h。正常组细胞常规培养。流式细胞仪检测各组细胞凋亡率；2'，7'-二氯二氢荧光素双乙酸盐探针检测各组细胞内活性氧（ROS）表达水平。蛋白质免疫印迹法检测各组细胞内ER氧化物蛋白1（Ero-1）、蛋白质二硫键异构酶（PDI）、C/EBP同源转录因子（CHOP）、葡萄糖调节蛋白（GRP）78、蛋白激酶R样ER激酶（pERK）/磷酸化pERK（p-pERK）、真核起始因子（eIF）2α/磷酸化eIF（peIF）、活化转录因子4（ATF4）蛋白相对表达量。组间比较行单因素方差分析。结果:单纯4-HNE组、Vec+4-HNE组、PSF+4-HNE组细胞凋亡率分别为（22.50±0.58）%、（26.93±0.55）%、（11.70±0.17）%；细胞内ROS表达量分别为0.23±0.03、1.60±0.06、0.50±0.06。三组间细胞凋亡率比较，差异有统计学意义（ F=24.531， P<0.05）；Vec+4-HNE组ROS表达水平较单纯4-HNE组、PSF+4-HNE组显著升高，差异有统计学意义（ F=37.274， P<0.05）。正常组、单纯4-HNE组、Vec+4-HNE组、PSF+4-HNE组细胞ER中Ero-1、PDI蛋白相对表达量分别为1.25±0.03、0.45±0.03、0.63±0.03、1.13±0.09和1.00±0.10、0.27±0.10、0.31±0.05、0.80±0.06；CHOP、GRP78蛋白相对表达量分别为0.55±0.06、1.13±0.09、0.90±0.06、0.48±0.04和0.48±0.04、1.25±0.03、1.03±0.09、0.50±0.06。4组Ero-1（ F=43.164）、PDI（ F=36.643）、CHOP（ F=42.855）、GRP78（ F=45.275）蛋白相对表达量比较，差异均有有统计学意义（ P<0.05）。4组细胞ER p-pERK/pERK（ F=35.755）、peIF2α/eIF（ F=38.643）、ATF4（ F=31.275）蛋白相对表达量比较，差异均有统计学意义（ P<0.05）。 结论:PSF可抑制高浓度4-HNE诱导的细胞凋亡及ROS产生；其作用机制与恢复ER稳态平衡及下调pERK/eIF2α/ATF4通路的活化水平密切相关。

目的 探讨平喘宁通过非折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)信号通路抑制内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)"细胞毒性"的机制以及对寒哮大鼠气道形态学及肺组织中蛋白二硫键异构酶(PDIA2)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)mRNA和激活转录因子6(ATF6)mRNA表达水平的影响.方法 将105只无特定病原体(SPF)级雄性SD健康大鼠随机分为空白组,模型组,平喘宁低、中、高剂量组,地塞米松组,桂龙咳喘宁组.以卵清蛋白及寒冷箱刺激实验大鼠复制大鼠寒哮模型,造模21 d后,空白组、模型组予以等量0.9％氯化钠溶液灌服,地塞米松组予以地塞米松片溶于0.9％氯化钠溶液的药液0.405 mg/(kg·d)灌胃给药,桂龙咳喘宁组予以桂龙咳喘宁片溶于0.9％氯化钠溶液的药液0.405 g/(kg·d)灌胃给药,平喘宁高、中、低剂量组分别予以平喘宁汤剂14.578、7.289、3.645 g/(kg·d)不同剂量灌胃给药.灌胃28 d后,在末次卵清蛋白激发后,予以解剖大鼠取出肺组织.取材后行苏木精-伊红(HE)染色法观察大鼠肺组织的病理改变;应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法、蛋白质免疫印迹(Western blot)法、酶联免疫吸附测定法(ELISA)分别检测 ATF6 mRNA、GRP78 mRNA 和 PDIA2、Nrf2 以及白细胞介素-17A(IL-17A)、白细胞介素-1β(IL-1 β)的表达水平.结果 HE染色:模型组大鼠的支气管黏膜褶皱增多,管腔狭窄;其他5组药物干预治疗组大鼠的病理形态学参照模型组均有不同改善.ELISA检测结果:参照模型组,其他5组药物干预治疗组大鼠肺泡灌洗液中IL-17A、IL-1 β的表达水平明显降低(P＜0.05);RT-PCR法检测:参照空白组,肺组织的GRP78 mRNA和ATF6 mRNA蛋白表达以模型组升高更为显著(P＜0.01);参照模型组,药物干预治疗组的5组大鼠肺组织中的GRP78 mRNA和ATF6 mRNA蛋白表达均有明显下调(P＜0.01).Western blot检测:参照空白组,肺组织中的PDIA2蛋白表达以模型组升高更为显著(P＜0.01),Nrf2蛋白表达以模型组下降更为显著(P＜0.01);参照模型组,药物干预治疗组的5组大鼠肺组织中的PDIA2蛋白表达均有明显下调(P＜0.01),Nrf2蛋白表达均有明显升高(P＜0.01).结论 平喘宁通过UPR信号通路抑制ERS的"细胞毒性"从而调节寒哮大鼠肺组织中PDIA2、Nrf2、ATF6 mRNA及GRP78 mRNA表达,抑制气道炎症,缓解气道重塑,使寒哮大鼠哮喘症状趋于好转.

目的 通过生物信息技术分析GSE72224 基因芯片数据,比较衰老小鼠与青年小鼠B细胞基因差异,探索关键基因,为衰老机制研究及药物研发提供思路.方法 通过NCBI提供的GEO数据库下载GSE72224,利用生物信息方法筛选衰老与青年小鼠B细胞差异表达基因,然后对差异表达基因进行基因本体论(GO)功能富集分析和京都基因组百科全书(KEGG)信号通路分析,并且构建蛋白质相互作用网络获得关键基因和关键模块.结果 共筛选出 87 个表达基因,包括其中66 个下调基因及 21 个上调基因.差异表达基因主要参与B细胞活化、内质网及内质网蛋白加工通路等.通过构建蛋白质相互作用网络从而筛选出H2A组蛋白家族成员(H2af)x、Zeste基因增强子人类同源物(Ezh)2、蛋白二硫化物异构酶(Pdi)A4、H2B组家族成员b(Hist2h2bb)、白细胞介素(IL)-10、Sel1l、Dnajb9、泛素样含PHD和环指域(Uhrf)1 这 8 个关键基因.并且筛选出两个重要模块,模块中的基因主要也与内质网蛋白加工通路等有关.结论 H2afx、Ezh2、Pdia4、Hist2h2bb、IL-10、Sel1l、Dnajb9、Uhrf1 此 8 个关键基因,主要参与B细胞发育、DNA甲基化和内质网的蛋白质调控等过程.但是有关基因的上下游作用点还需深入研究.