目的:采用定量蛋白质组学技术分析高度近视患者房水中的蛋白质组谱。方法:纳入2019年1—8月在天津医科大学眼科医院于白内障手术中用1 ml注射器采集伴或不伴高度近视的年龄相关性白内障患者房水标本各34例34眼(每例100 μl)，分别作为高度近视白内障组和单纯白内障组。各组分别选取16例16眼房水标本，采用BCA法进行蛋白定量并比较，采用非标记液相色谱串联质谱分析得到2个组的差异表达蛋白。进一步将生物大数据用基因本体功能富集和京都基因与基因组百科全书通路富集分析差异表达蛋白的功能和信号转导通路。各组分别选取18例18眼房水标本采用酶联免疫吸附实验(ELISA)进行质谱检测结果的扩大样本量验证。结果:高度近视白内障组房水标本平均蛋白质量浓度为(1 134.91±104.78)ng/L，明显高于单纯白内障组的(706.71±85.43)ng/L，差异有统计学意义( t＝11.977， P<0.01)。2个组患者房水标本中共鉴定出463个可定量蛋白质，其中86个差异表达蛋白质，包括49个表达上调蛋白和37个表达下调蛋白。这些差异表达蛋白的分类主要包括蛋白结合活性调节因子、细胞外基质蛋白、载体蛋白、细胞间信号分子、蛋白质修饰酶等，分别占32.70%、14.50%、9.10%、9.10%和7.30%。生物信息学分析表明，86个差异表达蛋白主要富集在补体激活及其调节、急性炎症反应、细胞外基质组织重塑等生物学过程。其中21个差异表达蛋白富集于补体和凝血级联通路，15个差异表达蛋白富集于细胞外基质-受体相互作用通路，8个差异表达蛋白富集于PI3K-Akt信号通路。ELISA结果表明，随机选取的3个差异表达蛋白在2个组之间表达变化趋势均与非标记定量蛋白质组学分析结果一致。 结论:高度近视白内障与单纯白内障之间房水蛋白质表达谱有显著变化，高度近视与炎症和免疫相互作用以及细胞外基质的重塑密切相关。

目的:观察病理性近视（PM）患者房水标本中蛋白质表达谱的变化。方法:横断面研究。2019年1~8月在天津医科大学眼科医院收集32例老年性白内障患者的房水样本进行质谱检测。其中，男性11例，女性21例；年龄58~76岁，平均年龄（68.41±6.09）岁。将合并PM的16例作为PM组，不合并近视的16例作为对照组。所有患者在白内障手术操作之前从手术眼收集100~150 μl前房水。采用蛋白定量和非标记液相色谱串联质谱分析，得到差异表达蛋白。随机选取5个差异蛋白进行ELISA验证。然后用基因注释功能富集、京都基因和基因组百科全书通路富集等生物信息学分析方法分析差异表达蛋白的功能。结果:两组房水标本中共鉴定出583个可定量蛋白质，其中101个蛋白存在差异表达，包括63个上调蛋白和38个下调蛋白。ELISA验证结果显示，5个差异表达蛋白在PM组和对照组之间的表达变化趋势均与非标记定量蛋白质组学分析结果相一致。这些差异表达蛋白的分类主要包括蛋白结合活性调节因子、防御／免疫蛋白、蛋白质修饰酶、代谢物间转换酶、细胞外基质蛋白等。生物信息学分析表明，PM与炎症和免疫相互作用以及细胞外基质的重塑密切相关。结论:PM患者房水标本中蛋白质表达谱较对照组有明显变化，这些差异变化提示PM与炎症和免疫相互作用以及细胞外基质的重塑密切相关。

目的:比较先天性胫骨假关节(congenital pseudarthrosis of tibia，CPT)和正常儿童血清外泌体中蛋白的表达差异，寻找CPT的可能致病机制。方法:收集湖南省儿童医院6例CPT患儿和4例正常儿童的静脉血，通过分离出静脉血清、提取血清外泌体，使用串联质谱标签(tandem mass tag，TMT)标记定量蛋白组学技术，确定CPT患儿和正常儿童血清外泌体中的差异表达蛋白，并对差异蛋白进行GO分析、KEGG分析、DisGeNET富集分析及PPI分析。结果:与正常儿童血清中外泌体蛋白相比，CPT来源的血清外泌体中表达上调的蛋白共121个，表达下调的蛋白共289个。KEGG分析结果显示，差异蛋白在补体系统富集最为显著；糖代谢在GO分类中的生物进程中富集；DisGeNET富集分析结果显示，排名前五的疾病中有3种和骨质疏松症有关；PPI富集分析结果显示糖代谢为差异蛋白富集模块之一。结论:补体系统紊乱和细胞能量代谢异常可能是CPT的潜在致病机制。本研究为探索先天性胫骨假关节的病因及发病机制提供了新的思路。

目的:基于蛋白质组学技术探讨麻疹减毒活疫苗191株(MV-Hu191)在体内外对三阴性乳腺癌MDA-MB-231、4T1细胞的影响及其作用机制.方法:采用CCK-8法检测MV-Hu191对MDA-MB-231和4T1细胞增殖的影响;液相色谱-质谱联用技术分析MV-Hu191处理对MDA-MB-231细胞中蛋白质谱的影响,多重数据库筛选蛋白质谱中的典型差异蛋白质并进行GO、KEGG、亚细胞定位与功能注释.瘤内注射1×106 TCID50 MV-Hu191干预4T1细胞移植瘤模型小鼠,流式细胞术检测小鼠脾组织中T细胞亚群,ELISA法检测小鼠血清TNF-α和IL-6含量.结果:体外实验结果表明,MV-Hu191具有抑制MDA-MB-231和4T1细胞增殖的作用,差异均具有统计学意义(P<0.01).蛋白质组学分析结果显示,MV-Hu191作用MDA-MB-231细胞后明显上调蛋白质有38个、下调有12个;差异表达的蛋白质主要参与细胞黏附、信号受体激活、细胞代谢、应激反应等生物学过程,22个差异蛋白质亚细胞定位位于细胞外,KEGG功能分类显示与免疫调节功能相关的差异蛋白质最多且均为上调蛋白,包括C4A、C8B、SERPINF2、A2M、SERPINC1、CTSB、SERPING1、C5;PPI预测发现免疫相关差异蛋白与CD4、CD8、TNF-α及IL-6相互关联.体内实验结果显示,MV-Hu191干预组小鼠脾组织中CD4+ T细胞数量略高于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05),CD4+/CD8+ T细胞比值明显高于对照组(P<0.05),血清TNF-α和IL-6含量显著上升(均P<0.01).结论:MV-Hu191显著抑制MDA-MB-231、4T1细胞增殖及拮抗4T1细胞荷瘤小鼠成瘤性,其机制可能是MV-Hu191通过激活免疫效应分子实现抗肿瘤作用.

该研究以新疆本地审定且大面积推广应用的陆地棉品种'新陆早33'、'新陆早36'、'新陆早50'种子为研究材料,采用高温高湿(40℃,RH100%)人工老化方法获得不同活力种子,双向电泳分离'新陆早50'活力劣变种子总蛋白并对差异蛋白点进行二级质谱(MALDI-TOF/TOF)鉴定分析,以明确棉花种子活力劣变过程中蛋白质组表达的变化,探讨棉花种子老化的分子机制.结果显示:(1)经人工老化获得不同活力水平的种子,经生活力检测发现'新陆早50'的种子活力随老化时间的延长呈线性下降,可作为蛋白质组研究材料.(2)T C A-丙酮法分别提取'新陆早50'对照和劣变种子的总蛋白,经2-DE分离,获得了分辨率和重复性较好的蛋白质组差异表达图谱,在等电点4~7、分子量14.4~97.4 kD之间发现约350个肉眼可辨的蛋白点,其中上调2倍以上且达到99%统计学显著水平的差异表达蛋白点30个.(3)二级质谱分析发现,有29个蛋白点被成功鉴定,生物信息学分析和功能分类结果表明,与贮藏相关的蛋白有13个,免疫相关蛋白2个,脂代谢相关蛋白1个,能量代谢相关蛋白1个,肌动蛋白2个,功能未知蛋白5个,调控相关蛋白2个,次级代谢物1个,细胞修复防御相关蛋白1个,分泌性蛋白1个.研究认为,分离鉴定的29个差异蛋白的变化可能与棉花种子活力劣变有关.

目的:探讨蛋白质非标记(label-free)定量技术与同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术两种尿液蛋白组学技术在IgA肾病(IgA-N)中的应用价值.方法:选取正常人(健康对照组)和IgA-N患者(IgA-N组)各12例,均留取新鲜晨尿,组内混合,预实验判断样品质量,初步确定蛋白质鉴定数量,FASP酶解后分两部分进行:一部分iTRAQ标记分级后与另一部分进行label-free的LC-MS/MS质谱、数据分析.比较两种实验方法蛋白覆盖情况、实验重复性及差异蛋白数量.结果:经过质谱鉴定,label-free经质谱鉴定到的肽段长度7～26,高峰10～18,各肽段长度范围内的数目最多达800种.iTRAQ实验经质谱鉴定到的肽段长度6～26,高峰分布6～l6,各肽段长度范围内的数目最多达1400种.iTRAQ计算组内变异系数(CV)为5.7％～l1.2％,组间CV为7.9％～22.0％(CV＜0.3).Label-free实验计算组内CV为3.7％～13.2％,组间CV为5.9％～19.0％(CV＜0.3).Label-free鉴定到624种蛋白,iTRAQ鉴定到621种蛋白.通过火山图分析两种实验方法均可以很好筛选出差异蛋白,且聚类效果好;经GO分析两种实验方案均显示出相似度较高的生物分类功能.结论:iTRAQ标记可检测到更多的蛋白,且在低分子量检测中占优势,而label-free实验得到的CV相对较小,需要依据实验目的优化实验方案.

目的 肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的发生具有显著的性别差异,但其分子机制尚不清楚.本研究通过检测Hras12V转基因小鼠雌雄肝肿瘤组织的蛋白质组学表达差异,探讨肝肿瘤发生的性别差异机制.方法 采用双向荧光差异凝胶电泳(two dimension difference gel electrophoresis,2D-DIGE)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)技术检测Hras12V雌雄小鼠肝肿瘤组织的蛋白质组学差异表达谱,分离并鉴定差异表达蛋白,应用蛋白质印迹法验证2 D-DIGE结果,并对差异表达蛋白进行生物信息学分析,包括蛋白功能注释、分类(gene ontology,GO)分析、京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路分析.结果 经双向荧光差异凝胶电泳-图像分析得到1313个蛋白点,其中差异倍数≥1.5(P<0.05)的蛋白点553个.从中选择94个差异蛋白点进行MALDI-TOF-MS鉴定,得到56种差异性表达的蛋白质.其中,与雌鼠相比,雄鼠肝肿瘤组织中高表达的蛋白有43种,低表达的蛋白有13种.选取4个差异蛋白FABP1、Albumin、Prdx6和CALR进行了蛋白质印迹法验证,其中FABP1在雄鼠肝癌中显著上调,Albumin和Prdx6在雄鼠肝癌中显著下调,CALR在雌雄小鼠肝癌中差异无统计学意义,结果与质谱数据基本一致,证明了2D-DIGE结果的可靠性.对雌雄鼠肝肿瘤组织中的差异蛋白进行GO分析,细胞组分分析显示,差异蛋白主要分布在细胞质、细胞溶质、线粒体和细胞核中;分子功能分析显示,差异蛋白主要承担poly(A)RNA结合、ATP结合和酶结合等功能;生物过程分析显示,差异蛋白主要参与运输、脂代谢过程和凋亡过程的负调控等.KEGG通路分析结果表明,差异蛋白涉及9条信号通路,主要通路包括代谢途径、内质网加工过程和细胞色素P450的异物代谢等通路.结论 Hras12V转基因小鼠雌雄肝肿瘤组织的差异性蛋白表达的检测,为研究性别差异性肝癌发生分子机制提供了基础生物学信息和有益的线索.

[目的]比较临床分离的亲缘关系近的多药耐药鲍曼不动杆菌MDR-ZJ06(blaNDM-1–)和ABC3229(blaNDM-1+)的差异蛋白质组,以期发现新德里金属(b)-内酰胺酶1(New Delhimetallo-β-lactamase-1,NDM-1)对鲍曼不动杆菌生长代谢的影响.[方法]利用2-DE联合MALDI-TOF MS/MS技术鉴定差异表达蛋白,并在GO注析的基础上,对差异蛋白进行通路分析、功能分类和富集分析,并作出蛋白与蛋白相互作用网络.[结果]发现ABC3299相对于MDR-ZJ06有51个差异表达蛋白,其中11个蛋白表达上调,40个蛋白表达下调,并且这些差异蛋白主要涉及降低碳代谢、氨基酸代谢、脂肪酸代谢和细胞壁合成,增加铁离子转运系统形成.[结论]这个结果揭示了NDM-1可能是通过减缓细菌自身的代谢,增加自身铁的摄取使细菌机体系统地抵抗抗生素从而达到耐药.

探讨脑栓通胶囊对人工寒潮促发高血压大鼠卒中的预防作用和机制.方法 130只雄性SD大鼠随机分为假手术组(n=30)、模型对照组(n=50)和脑栓通治疗组(n=50;脑栓通灌胃0.5 g/kg,2/d共7 d).应用双肾双夹法制作大鼠肾血管性高血压模型,在造模12周后进行人工寒潮处理3 d(温度22℃、光照12 h,温度4℃、黑暗12 h,共3个循环).在实验终点分别提取脑组织标本,采用差异蛋白组学技术对差异表达的蛋白质点进行鉴定、功能分类和初步分析,采用蛋白质印迹分析对部分关键蛋白质进行验证.结果 假手术组大鼠未发生卒中,模型对照组卒中发生率(36.00％,18/50)显著高于脑栓通治疗组(18.00％,9/50;x2 =4.110,P=0.043).双向凝胶电泳图谱从14个差异蛋白质点鉴定得到了6种差异表达蛋白质,其中表达上调的超氧化物歧化酶2(superoxide dismutase2,SOD2)和表达下调的B细胞淋巴瘤因子10(B-cell lymphoma 10,Bcl-10)处于多种蛋白质相互作用的中心位置,并通过蛋白质印迹分析得到验证.结论 脑栓通治疗能显著降低人工寒潮诱发的肾血管性高血压大鼠卒中发生率.SOD2上调和Bcl-10下调可能参与了其预防寒潮促发高血压性大鼠卒中的机制.

目的 :探索黄连温胆汤含药血清改善脂肪细胞胰岛素抵抗的可能机制.方法 :将3T3-L1成纤维细胞分为空白组 、模型组和中药组,对模型组和中药组3T3-L1成纤维细胞进行诱导分化,构建胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞模型.空白组 、模型组分别给予空白血清刺激,中药组给予黄连温胆汤含药血清.使用TM T标记 、液相色谱-质谱联用分析,并运用GO分析和KEGG pathway分析方法对获得的差异表达蛋白进行生物信息学分析.结果 :本实验中3组样本共鉴定到4982个蛋白质,其中4238个蛋白质具有定量信息.模型组与空白组间上调蛋白210个,下调蛋白399个;中药组和空白组间上调蛋白221个,下调蛋白98个;中药组和模型组组间比较上调蛋白310个,下调蛋白142个.GO分析结果示中药组/模型组间差异表达上调蛋白显著富集于DNA复制 、核染色质 、蛋白结合等分类中,下调蛋白显著富集于氧化还原 、脂肪酸 β 氧化等分类.KEGG pathway富集分析示,差异表达上调蛋白富集于10条通路中,富集较显著的通路为DNA复制 、细胞循环 、不匹配修复等通路;差异表达下调蛋白富集于25条通路中,富集较显著的通路为过氧化物酶体 、脂肪酸降解 、脂肪酸代谢等通路.结论 :黄连温胆汤含药血清改善胰岛素抵抗效果确切,其机制是通过多靶点 、多通路协同 、整体调控作用完成的.