目的:评价腕踝针对七氟烷诱发老龄大鼠认知功能障碍及海马磷酸化磷脂酶Cγ(p-PLCγ)表达的影响。方法:SPF级健康老龄雄性SD大鼠15只，18月龄，体质量530～600 g，采用随机数字表法分为3组( n＝5)：假手术组(S组)、认知功能障碍组(CD组)和腕踝针组(A组)。采用吸入3%七氟烷与空气混合气体的方法制备大鼠认知功能障碍模型，A组麻醉前取右侧后肢下1-3区行腕踝针，针刺时间30 min，S组行假刺激。2 d后采用Morris水迷宫实验评价大鼠认知功能，随后麻醉大鼠处死取海马组织，HE染色和尼氏染色法观察病理学结果，采用Western blot法检测p-PLCγ、磷酸化钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(p-CaMKⅡ)和磷酸化肌醇-1，4，5-三磷酸受体(p-IP3R)的表达。 结果:与S组比较，CD组和A组逃避潜伏期延长，穿越原平台位置次数减少，海马p-PLCγ、p-CaMKⅡ和p-IP3R表达上调( P<0.05)；与CD组比较，A组逃避潜伏期缩短，穿越原平台位置次数增加，海马p-PLCγ、p-CaMKⅡ和p-IP3R表达下调( P<0.05)。A组大鼠海马病理学损伤程度较CD组减轻。 结论:腕踝针可减轻七氟烷诱发老龄大鼠认知功能障碍，机制与其抑制海马p-PLCγ表达有关。

目的:探讨1，25二羟维生素D 3［1，25（OH） 2D 3］对柯萨奇病毒B3（CVB3）诱导小鼠心肌炎症反应的影响及机制。 方法:将雄性野生型（WT）小鼠和1α羟化酶基因敲除［1（OH）ase -/-］小鼠分为WT组、WT+CVB3组、1（OH）ase -/-+CVB3组和1（OH）ase -/-+CVB3+VD 3组，每组8只。实时荧光定量PCR测定促炎症因子白细胞介素（IL）1β、IL-6、干扰素γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）mRNA水平；HE染色观察心肌组织病理学改变；TUNEL染色及流式细胞仪检测心肌细胞凋亡；Fluo-4/AM荧光探针检测心肌细胞内的钙离子含量；Western印迹法检测钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）及内质网应激相关葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）的表达水平。 结果:与WT组相比，WT+CVB3组小鼠心肌中促炎症因子IL-1β（14.88±3.32比1.03±0.02， P=0.009）、IL-6（7.00±1.09比1.81±0.18， P=0.005）、IFN-γ（4.70±1.11比1.34±0.34， P=0.006）、TNF-α（17.20±3.22比1.02±0.12， P<0.001）mRNA水平均升高，炎症细胞浸润增多，心肌细胞凋亡率增加（16.66%±1.09%比7.85%±1.12%， P=0.012），心肌细胞胞质中游离Ca 2+增加（2.98±1.05比0.96±0.10， P=0.006），磷酸化CaMKⅡ（pCaMKⅡ）（1.97±0.34比1.00±0， P<0.001）、GRP78（1.78±0.19比1.00±0， P=0.005）及CHOP（1.62±0.09比1.00±0， P=0.002）蛋白表达增加；上述心肌细胞损伤指标在1，25（OH） 2D 3缺乏的1（OH）ase -/-+ CVB3组更显著；而在给予1，25（OH） 2D 3补充的1（OH）ase -/-+CVB3+VD3组，上述心肌细胞损伤指标均改善（均 P<0.05）；此外，CaMKⅡ特异性抑制剂可同样降低CVB3感染小鼠的心肌损伤和细胞凋亡率。 结论:1，25（OH） 2D 3缺乏可通过CaMKⅡ过度活化加重小鼠心肌炎症反应。

目的:探讨电针"四白"和"颧髎"对小鼠躯体感觉皮层和初级运动皮层神经元的激活状态及其分型的影响.方法:雄性 C57BL/6J小鼠随机分为空白组和电针组,每组6只.电针组电针"四白"和"颧髎",干预 30 min.采用免疫荧光染色法观察躯体感觉皮层和初级运动皮层即刻早期基因c-Fos的阳性细胞密度,以及c-Fos阳性细胞和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)/γ-氨基丁酸(GABA)共表达细胞的百分比,分析电针后躯体感觉皮层和初级运动皮层c-Fos神经元的类型.另取10只小鼠,采用光纤钙成像技术分别观察电针前后躯体感觉皮层和初级运动皮层兴奋性神经元钙活动的变化.结果:在躯体感觉皮层和初级运动皮层中,电针组的c-Fos阳性细胞密度显著高于空白组(P<0.05).在躯体感觉皮层和初级运动皮层中,电针组c-Fos和CaMKⅡ共表达细胞百分比显著高于空白组(P<0.01).光纤记录钙成像结果显示,与电针前相比,电针期间躯体感觉皮层和初级运动皮层兴奋性神经元的自发钙活动显著上升(P<0.01);电针后,其自发钙活动较电针期间显著降低(P<0.05).结论:在生理状态下,针刺"四白"和"颧髎"能够有效激活躯体感觉皮层和初级运动皮层的兴奋性神经元.

目的 探究miR-149对大鼠坐骨神经慢性压迫损伤(CCI)引起的神经病理性疼痛(NP)的影响及分子机制.方法 将72只SD大鼠随机分为假手术组(sham)、CCI组、CCI+miR-149 agomir阴性对照(CCI+agomir-NC)组、CCI+miR-149 agomir组、CCI+miR-149 agomir+pc-NC组、CCI+miR-149 agomir+pc-CaMKⅡγ组,每组12只.采用CCI诱导建立NP大鼠模型,于建模前及建模后的第3天、第7天、第11天、第14天利用Von Frey检测大鼠的机械痛敏,热辐射法检测大鼠的热痛敏;建模后第14天用RT-qPCR法检测大鼠背根神经节(DRG)中miR-149和钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱγ(CaMKⅡγ)mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测DRG中CaMKⅡγ蛋白水平;尼氏(Nissl)染色观察DRG神经元尼氏小体变化;免疫荧光法检测脊髓神经元中CaMKⅡγ表达情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测DRG中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)和干扰素-γ(IFN-γ)含量;双荧光素酶报告基因实验验证miR-149与CaMKⅡγ的靶向关系.结果 与sham组比较,CCI组大鼠机械痛阈值和热痛阈、DRG中miR-149表达下降,DRG中CaMKⅡγ的mRNA和蛋白水平、CaMKⅡγ阳性表达神经元数量、TNF-α、IL-1β和IFN-γ水平升高,且DRG中尼氏小体减少,差异均有统计学意义(P<0.05).过表达miR-149可改善CCI大鼠机械痛阈和热痛阈,降低DRG中CaMKⅡγ的mRNA和蛋白水平、CaMKⅡγ阳性表达神经元数量以及TNF-α、IL-1β、IFN-γ水平,尼氏小体明显增多,差异均有统计学意义(P<0.05).与CCI+miR-149 agomir+pc-NC组比较,CCI+ miR-149 agomir+pc-CaMKⅡγ组机械痛阈值和热痛阈下降,DRG中CaMKⅡγ的mRNA和蛋白水平、CaMKⅡγ阳性表达神经元数量、TNF-α、IL-1β和IFN-γ水平升高,尼氏小体减少,差异均有统计学意义(P<0.05).双荧光素酶结果显示,过表达miR-149可降低CaMKⅡγ-WT的荧光素酶活性.结论 过表达miR-149可能通过靶向抑制CaMKⅡγ表达,缓解CCI大鼠的神经病理性疼痛.

目的:研究钙离子/钙调蛋白依赖性激酶γ(CaMKⅡγ)在破骨细胞分化中的表达规律,以揭示其作用.方法:用50 ng/mL核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导RAW264.7细胞向破骨细胞分化,于诱导后第0,1,3,5天收获细胞,用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色评价破骨细胞生成情况,并用RT-PCR、Western印迹、免疫荧光细胞化学法检测CaMKⅡγ mRNA和蛋白表达.结果:多核破骨细胞在诱导后第3天开始出现,第5天达到最多.分化第0,1,3,5天,CaMKⅡγ mRNA相对表达水平分别为(1.067±0.179),(1.840±0.070),(9.493±0.453)和(30.767±0.573);蛋白相对表达水平分别为(0.454±0.065),(0.613±0.021),(0.858±0.019)和(0.980±0.023);除第1天的蛋白相对水平外,其他时间点CaMKⅡγ mRNA和蛋白表达差异均有统计学意义,且呈时间依赖性增强(P＜0.01).免疫荧光细胞化学法检测也显示CaMKⅡγ蛋白表达在破骨细胞分化过程中逐步增加.结论:CaMKⅡγ表达随破骨细胞分化呈时间依赖性增加,提示其在破骨细胞分化中可能发挥关键调控作用.

目的 探讨钙调蛋白依赖性激酶Ⅱγ(CaMK Ⅱγ)在慢性粒细胞白血病患者从慢性期到急变期过渡的表达及其分子机制.方法 59例来自不同时期慢性粒细胞白血病患者的骨髓,通过Ficoll分离液分离单个核细胞,裂解蛋白进行Western blot检测CaMK Ⅱγ的表达,并初步探讨其分子机制.结果 CaMK Ⅱγ在慢粒加速和急变期患者中高表达,而慢性期患者表达量低或不表达,其表达与β-catenin基本一致.结论 CaMK Ⅱγ在慢性粒细胞白血病慢性期到加速期过渡中发挥重要作用,可通过调控β-catenin的表达影响白血病干细胞的自我更新.

氧化苦参碱具有镇静、催眠、降体温、抗癫痫、改善认知功能、保护脑神经和外周神经作用.其作用机制可能是激活大麻素2型受体和上调电压门控钙离子N型通道表达,促进抑制性神经递质(γ-氨基丁酸、甘氨酸)合成与释放,下调γ-氨基丁酸转运体-1表达,使突触间隙γ-氨基丁酸浓度升高以及上调γ-氨基丁酸.A受体表达,从而增强γ-氨基丁酸能神经功能.γ-氨基丁酸能神经功能的增强可抑制兴奋性神经递质谷氨酸过度表达并下调N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体和蛋白激酶Cγ表达,从而下调电压门控钙离子L型通道的表达,抑制钙离子内流,阻滞钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ/c-AMP反应元件结合蛋白通路,抑制炎症反应,产生中枢抑制和神经保护作用.

目的:研究精氨酸加压素(AVP)对大鼠视前区γ-氨基丁酸(GABA)A型受体(GABAA受体)亚单位(α、β和γ2)表达和磷酸化的影响.方法:实验分为对照组、AVP组、V1a受体抑制剂+AVP组和V1a受体抑制剂组(均n=10);腹腔注射AVP或V1a受体抑制剂0.5 h后,采用RT-qPCR和Western blot法检测视前区GABAA受体亚单位(α、β和γ2)表达及磷酸化的变化.结果:与对照组相比,AVP或V1a受体抑制剂组大鼠视前区GABAA受体亚单位表达均无显著变化;AVP能显著上调视前区GABAA受体γ2亚单位的磷酸化水平(P<0.05);AVP显著增加蛋白激酶C(PKC)和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)表达和磷酸化(P<0.01).结论:外源性AVP不影响GABAA受体亚单位(α、β和γ2)表达,但主要通过V1a受体激活PKC和CaMKⅡ,影响γ2亚单位磷酸化水平,从而调制视前区GABAA受体介导的抑制性突触传递.

目的 探究敲减钙离子/钙调蛋白依赖性激酶Ⅳ(CaMKⅣ)基因对炎性培养条件下C2C12细胞免疫分子表达的影响.方法 采用慢病毒基因干扰技术敲减C2C12细胞的CaMKⅣ基因,以2％马血清将C2C12细胞分化成肌管,以干扰素-γ(IFN-γ)刺激C2C12细胞,采用Real-time PCR和Western blotting检测CaMKⅣ的表达,采用Western blotting和免疫荧光检测免疫分子主要组织相容性复合体(MHC) class Ⅰ(H-2Kb)、MHC classⅡ(H2-Ea)、Toll样受体3(TLR3)的表达,采用Real-time检测肌细胞分泌型促炎性细胞因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1α和单核细胞趋化因子(MCP)-1的基因表达.结果 IFN-γ可诱导成肌干细胞以及分化肌管表达或上调表达免疫分子MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、TLR3,同时上调C2C12细胞促炎性细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α、MIP-1α和MCP-1的基因表达量;敲减CaMKⅣ基因导致上述上调趋势被抑制.结论 敲减CaMKⅣ基因可有效抑制IFN-γ诱导的免疫分子的表达,可能提示CaMKⅣ参与调节肌细胞的免疫学特性.

目的 通过检测首次发病抑郁症患者外周血中miRNA-219和钙调蛋白激酶Ⅱγ亚基mRNA (γCaMKⅡmRNA)表达水平,分析探讨其与抑郁症之间的关系.方法 纳入符合DSM-5中抑郁发作诊断标准的41例抑郁症患者(抑郁组)和31名健康对照者(对照组),采用HAMD17评估患者的抑郁症状严重程度,采集受试者空腹外周血样本,采用实时荧光定量PCR法检测外周血白细胞中miRNA-219表达水平和γCaMKⅡmRNA表达水平,采用t检验进行组间比较;miRNA-219表达水平、yCaMKⅡmRNA表达水平、HAMD17评分两两之间相关性采用Pearson相关分析.结果 抑郁组外周血白细胞miRNA-219表达水平低于对照组(0.91 ±0.21与1.80±0.24,t=2.753,P=0.007 5),yCaMKⅡmRNA表达水平高于对照组(5.55±0.57与2.16±0.20,t=4.970,P＜0.01),差异均有统计学意义.并且抑郁组外周血白细胞γCaMKⅡmRNA表达水平与HAMD17评分呈正相关(r=0.460,P=0.002 5).结论 抑郁症患者外周血miRNA-219表达水平降低,γCaMKⅡmRNA表达水平升高,提示miRNA-219和γCaMKⅡ表达水平可能与抑郁症发病机制存在一定联系.