霍乱（Cholera）是由霍乱弧菌（ Vibrio cholerae）感染引起的急性肠道传染病，主要通过霍乱弧菌产生的霍乱毒素（Cholera Toxin，CT）引起腹泻。典型病例以急性水样腹泻为主要症状，严重者可在短时间内出现脱水、电解质失衡、代谢性酸中毒，可迅速发展为循环衰竭，并导致死亡。霍乱是《中华人民共和国传染病防治法》规定的甲类传染病。为进一步规范霍乱临床诊疗工作，结合国内外研究进展和诊疗经验，制定本诊疗方案。

目的:了解烟台地区非O1/O139群霍乱弧菌致病性现状。方法:分别于2020年7月和11月、2021年的1月和4月对烟台市某两条河入海口采集样本32份，获得22株非O1/O139群霍乱弧菌分离菌株，采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对分离菌株进行分子分型，采用聚合酶链式反应（PCR）方法对该22株分离菌株的毒力基因 ctxA、 ctxB、 ace、 cep、 zot、 rtxA、 hlyA、 toxR、 tcpA和 cri进行检测分析。 结果:22株非O1/O139群霍乱弧菌菌株间的条带相似度为23.0%~100.0%，分为17个PFGE型，呈高度的多态性带型分布。22株非O1/O139群霍乱弧菌分离株主要携带3种毒力基因（ rtxA、 tcpA和 zot），其中携带 rtxA和 tcpA最多，均为17株，其次是 zot，共14株。14株菌株同时携带 rtxA、 tcpA和 zot，5株不携带上述毒力基因。 结论:烟台地区入海口流行的非O1/O139群霍乱弧菌株污染情况多样化，主要携带具有黏附、毒素以及损伤小肠表皮细胞等方面的致病基因。

目的:探索基于不同黏膜佐剂的艰难梭菌类毒素B( Clostridium difficile toxoid B，CdtB)疫苗的微针经皮免疫效果，为艰难梭菌感染的防治提供思路。 方法:纯化的艰难梭菌B毒素(TcdB)经甲醛脱毒制备成CdtB疫苗，采用不同剂量的疫苗单独或加入黏膜佐剂的方法，于0 d、7 d、14 d、28 d、42 d微针经皮免疫雌性BALB/c小鼠，定期检测小鼠特异性血清IgG和粪便中IgA的效价水平变化，通过细胞中和试验和艰难梭菌人工感染免疫小鼠的方法来评价疫苗的免疫保护效果。结果:(1)CdtB疫苗单独微针免疫小鼠后，随着剂量与免疫次数的增加，产生了较好的血清特异性抗体IgG，粪便中也出现较高水平的IgA；(2)用含有热不稳定肠毒素(LT)佐剂、霍乱毒素B亚单位(CTB)佐剂的CdtB微针免疫小鼠，各组的血清特异性IgG效价趋势随着免疫剂量增加而提高，含有LT佐剂的免疫组效价变化趋势明显较好；与不加佐剂组比较，各组粪便中特异性IgA效价抗体水平变化趋势差异有统计学意义，但佐剂效应不明显；(3)分别用10 μg CdtB单独微针免疫小鼠和腹腔注射小鼠，虽然微针免疫与腹腔注射后小鼠血清IgG效价差别不大，但微针免疫可明显提高粪便中特异性IgA水平；(4)细胞中和试验和小鼠攻毒保护试验结果说明CdtB疫苗微针免疫可产生一定的保护效力。结论:CdtB疫苗微针经皮免疫小鼠的黏膜免疫效果较好，黏膜佐剂LT和CTB对CdtB疫苗的微针经皮免疫的佐剂效应不显著。

目的:近年来菌群成为研究热点，而口腔菌群的一些背景状况，如年龄的差异化表现尚有待澄清。本研究拟对少年期与成年期的唾液菌群差异开展前瞻性研究。方法:本研究为前瞻性研究，纳入来自北京大学口腔医院的52例门诊患者，在平衡了性别、民族、地区、症状、压力、口腔伴随疾病等因素后，组成少年组26例，年龄的中位数(上下四分位数距)为14(1)岁，男性比例26.9%；成年组26例，年龄的中位数(上下四分位数距)为35(7)岁，男性比例15.4%。两组研究对象均除外深龋、有窦型慢性根尖周炎、重度牙周炎、严重牙列拥挤、明显腺样体或扁桃体肥大、口腔黏膜疾病，颞下颌关节紊乱病诊断情况、关节调查Fonseca记忆指数(Fonseca anamnestic index, FAI)、压力状态水平、睡眠质量即匹兹堡睡眠质量指数(Pittsburgh sleep quality index, PSQI)在两组间无统计学差异。在清晨非刺激条件下采集口腔唾液，进行16S rRNA基因测序分析，对两个年龄组的结果分析比较。结果:少年组和成年组的唾液菌群 α多样性差异没有统计学意义，然而 β多样性呈现明显区别(Bray-Curtis距离 F值＝3.044， P＝0.001；Jaccard距离 F值＝1.670， P＝0.001)，菌群构成上的丰度差异比较明显，差异具有统计学意义。属水平的显著富集菌群，在少年组是普雷沃菌属、放线菌属、奇异菌属、乏养菌属、乳杆菌属，在成年组是嗜血杆菌属、卟啉单胞菌属、隐蔽菌_(SR1)_[G-1]、密螺旋体属、小单胞菌属、土地杆菌属、坦纳菌属、毛螺菌科_[G-8]、厌氧球形菌属、毛螺菌科_[G-3]。功能预测在两组间亦有区别，少年组涉及半胱氨酸与蛋氨酸代谢、半乳糖代谢、磷酸肌醇代谢、淀粉和蔗糖代谢以及光合作用通路，成年组涉及生物素代谢、丁酸代谢、硫辛酸代谢、甲烷代谢、蛋白质外排、RNA降解以及霍乱肠毒素致病循环。 结论:少年组的特异菌群含有常驻菌、益生菌，成年组与感染相关致病菌的种类增加。今后在进行口腔菌群分析时须区分少年与成年。

目的 为了研究藏猪致病性大肠杆菌疫苗以及评价其免疫保护情况.方法 从病死藏猪体内分离致病性大肠杆菌,经生化及分子分型鉴定;用临床菌株经培养离心,收集菌体,灭活后,用生理盐水洗涤后,离心收集菌体,用生理盐水调整细菌浓度作为疫苗原液,佐剂疫苗在疫苗原液中加入重组霍乱毒素B亚单位蛋白,最后在疫苗原液中加入甘露糖,分装后冻干为不同组分的疫苗.用KM小鼠,分口服和肌注2个免疫途径,再按高、低2个剂量的佐剂疫苗和不合佐剂的疫苗结合每个免疫途径分4组,其中高剂量为9.0×1010 CFU/ml、低剂量为9.0×106 CFU/ml,对照组接种生理盐水,分别于0、14、12、42 d免疫后于不同时间检测特异抗体,免疫后用2倍LD50的临床菌株攻击.结果 小鼠免疫后,肌注组高剂量含佐剂组与高剂量不含佐剂组免疫效果相当,低剂量含佐剂组比不含佐剂组免疫效果好;口服组无论是高、低剂量含佐剂组免疫效果均好于高、低剂量不含佐剂组,且高剂量免疫效果好于低剂量免疫效果.从免疫次数看,无论是肌注还是口服组免疫4次的抗体水平明显好于免疫1、2、3次的抗体水平.结论 藏猪致病性大肠杆菌佐剂疫苗能刺激小鼠产生特异抗体,对临床致病性大肠杆菌攻击具有很好保护性,特别是口服高剂量含佐剂疫苗对致病性大肠杆菌攻击可达到100％保护,这对研究方便、可行的预防藏区仔猪腹泻的新疫苗提供了科学依据.

儿童和婴幼儿接种口服肠道疾病疫苗后,免疫应答情况会受到多种因素的影响,如年龄、接种疫苗前曾接触( 感染) 过相关微生物、母乳喂养等.本项研究旨在通过不同临床样本,确定最佳时间点,评估口服肠道疫苗的免疫应答状况.应答状况的确定,是通过检测接种后不同天数的抗体分泌细胞( ASC) 应答和粪便抗体应答来完成,所用疫苗为一种已获批的模式疫苗———口服霍乱疫苗Dukoral,其中包含重组霍乱毒素B 亚单位( rCTB) 和灭活霍乱弧菌菌体.

通过基因工程方法,将含霍乱毒素B亚单位(CTB)和前列腺特异性膜抗原(PSMA)表位肽的重组质粒pET28a-CTB-PSMA624-632,转化表达宿主菌BL21 (DE3).CTB蛋白的表达有利于开发粘膜佐剂和霍乱弧菌基因工程疫苗,同时抗原肽疫苗也是肿瘤免疫治疗的理想候选.本研究采用正交实验法,优化条件以增加大肠杆菌中CTB-PSMA624-632蛋白的表达量.选取了5个单因素作为考察因子,分别为:预诱导时间、诱导时间、诱导温度、IPTG浓度、诱导转速.先做了4水平的实验L16(45).根据极差分析的数据对影响较大的3个因素又做了细调型的3水平实验L9(33).结果表明,在早期指数生长期的诱导能得到相对高水平的包涵体形式的CTB-PSMA624-632蛋白,并且此蛋白的表达随着诱导温度升高到37℃而逐渐增加;相比于使用正常浓度的IPTG诱导得到的蛋白表达量,用100 μmol/L诱导足以诱导蛋白的表达,这比通常使用的IPTG浓度小10倍;此外,诱导时间5h与7h对蛋白的表达量差距甚微,因此选定较短时间的5h,240 r/min的诱导转速也被认为是能诱导目的蛋白CTB-PSMA624-632具有高表达量的最优条件.

目的 从死亡的野生水鸟标本中分离、鉴定病原菌,评估迁徙鸟类传播人兽共患病原菌的风险.方法 采集的组织标本涂布营养琼脂平板,分别在需氧和厌氧的条件下培养.分离的菌株使用Phoenix100全自动微生物鉴定仪和16srRNA测序的方法鉴定细菌种属,随后通过PCR的方法检测病原菌携带主要毒力基因的情况.结果 从骨顶鸡、鸬鹚和红嘴鸥等鸟类的组织标本中分离鉴定出霍乱弧菌、沙门菌和产气荚膜梭菌等多种肠道感染相关的病原细菌.霍乱弧菌经PCR鉴定不属于O1和O139血清群,无霍乱毒素和毒素相关菌毛的编码基因,但是有溶血素的编码基因.结论 检测的死亡鸟类个体存在多病原细菌的感染.

目的 分析2013-2017年医院感染性腹泻的病原体特点和流行特征,为其防治提供科学参考依据.方法 收集2013年1月-2017年12月医院肠道门诊腹泻患者1 937例的粪便标本进行病原体检测,对其结果进行分析.结果 1937例粪便标本中阳性病例376例,阳性率为19.41％,其中致泻性大肠埃希菌110株占29.26％,副溶血性弧菌83株占22.07％,沙门菌11 9株占31.65％,志贺菌64株占17.02％;＜10岁患者无病原菌检出,21～30岁、41～50岁及51～60岁患者阳性检出率均≥15％,其余年龄组检出率均较低;1、2、11和12月病原菌检出率较低,而6～8月检出率较高,6月份检出231例,7月份检出493例,8月份检出462例;64株志贺菌中宋内志贺菌49株占76.56％,其余为F2a(12.50％)、F4c(7.81％)、F2b(3.13％);83株副溶血性弧菌以O3∶K6型为主,共60株占72.29％,其余血清型较分散;致泻性大肠埃希菌分为致病性大肠埃希菌和产肠毒素性大肠埃希菌,分别占65.45％和34.55％;沙门菌血清型分布中肠炎39株占32.77％,鼠伤寒28株占23.53％,猪霍乱21株占17.65％.结论 感染性病原菌主要以致泻性大肠埃希菌、副溶血性弧菌、沙门菌和志贺菌为主,且存在明显的季节性,应加强优势病原型别的变化.

目的 构建和表达细粒棘球绦虫成虫特异表达EgM123基因与霍乱毒素B的融合蛋白(CTB-EgM123);并确定CTB-EgM123蛋白的抗原性.方法 将合成EgM123基因序列连接到pET28a/CTB原核表达载体中,并转化至大肠杆菌BL21中.利用IPTG诱导目的基因的表达;用SDS-PAGE及Western-Blotting对表达蛋白进行分析和鉴定;用纯化蛋白免疫小鼠及犬,用ELISA方法对小鼠及犬的血清抗体效价和肠黏液的抗体亚类进行分析.结果 PCR和测序确定CTB-EgM123基因片段长度为804 bp,pET28a/CTB-EgM123原核表达阅读框序列正确.在37℃条件下,经IPTG 0.4 mmol/L诱导5h,获得CTB-EgM123高表达的包涵体蛋白,分子质量为37 kDa.免疫小鼠结果表明复性CTB-EgM123蛋白具较好免疫原性,抗体效价＞320 000;以IgG2a为主.检测免疫犬血清效价,结果发现用融合蛋白免疫后的犬血清抗体效价＞64 000,效价高于EgM123免疫组(t=0.0064,P＜0.05);且在4周时,抗体呈上升趋势,并能较长时间维持抗体水平.结论 原核表达载体pET28a/CTB-EgM123在大肠杆菌中成功表达,纯化蛋白接种小鼠和犬表明具有高的抗原性.表明CTB可以增强蛋白的免疫原性,并刺激小鼠和犬体内产生高水平的体液和黏膜免疫.本研究为研发犬用包虫病疫苗奠定了基础.