目的:阐明牙龈卟啉单胞菌(Pg)诱导食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞发生上皮间质转化(EMT)的分子机制.方法:KEGG分析Pg诱导的ESCC差异表达基因富集的生物学通路,WB和/或免疫荧光法检测Pg诱导的ESCC细胞中糖蛋白A重复优势蛋白(GARP)、TGF-β、pSMAD/SMAD、Snail、Oct4和EMT相关分子表达的变化,ELISA检测TGF-β1水平的变化,免疫组织化学法检测ESCC组织中GARP和TGF-β1的表达规律,Transwell实验和动物实验验证Pg对ESCC的促进作用.结果:ESCC细胞感染Pg后,TGF-β、Hippo、PI3K/Akt等信号通路被激活;Pg感染刺激ESCC细胞分泌总TGF-β1和活性TFG-β1的水平升高(均P<0.01),使SMAD2/3磷酸化并发生核转位,诱导N-cadherin、Snail、Oct4等蛋白表达升高、E-cadherin蛋白表达降低,由此促进ESCC细胞的迁移、侵袭和裸鼠皮下移植瘤的生长(均P<0.01).在ESCC细胞中沉默GARP表达后,逆转了Pg所诱导的上述ESCC细胞表型变化.Pg丰度高的ESCC组织中TGF-β1 和GARP蛋白表达高于低丰度的ESCC组织,且Pg丰度与TGF-β1、GARP表达存在正向关联(P=0.001 5).结论:Pg通过GARP激活TGF-β/SMAD轴促进ESCC细胞发生EMT,进而促进ESCC细胞的迁移、侵袭和生长,清除Pg或阻断TGF-β信号转导则可阻断上述Pg对ESCC的促进作用.

目的 探讨食管鳞癌(esophageal squamous cell carcino-ma,ESCC)中CBX4的表达情况,揭示CBX4对ESCC细胞增殖的影响及其潜在机制.方法 TCGA数据库中分析CBX4在不同肿瘤中的表达情况;GEO在线数据库对ESCC及其对应癌旁组织CBX4的表达水平进行t检验分析;过表达或敲低CBX4后,通过MTT、菌落集成实验和流式凋亡术检测CBX4对ESCC细胞活力的影响;裸鼠皮下成瘤和免疫组化法验证CBX4对瘤体增殖的影响;qRT-PCR和Western blot方法验证凋亡相关基因PARP、Bcl-2、Bax的mRNA和蛋白表达水平;筛选转录组测序结果推测CBX4可能的作用机制,并通过qRT-PCR和Western blot进行验证.结果 CBX4在多种肿瘤中高表达;ESCC组织中CBX4表达高于正常组织.敲低CBX4后ESCC细胞凋亡增加,增殖被抑制(P＜0.05);同时,被剪切的PARP和Bax抑癌基因mRNA和蛋白表达水平升高,促癌基因Bcl-2表达水平降低.体内裸鼠成瘤结果表明,过表达CBX4后,瘤体体积和Ki67表达明显增加(P＜0.05).转录组测序结果表明CBX4与p38 MAPK通路基因相关性高,敲低CBX4后,p38 MAPK通路被激活,其下游转录因子表达量增加(P＜0.05),从而诱导ESCC细胞凋亡.结论 CBX4在ESCC中高表达,发挥促癌作用,可能通过调控p38 MAPK信号通路影响ESCC细胞增殖.

单纯腹腔游离癌细胞阳性胃癌是目前胃癌研究的热点，其预后较差。腹腔游离癌细胞可能是在癌细胞迁移、侵袭和转移过程中形成的。研究显示，胃癌T分期、腹膜转移、淋巴结转移、组织学低分化、革囊胃、食管胃结合部癌以及手术操作等是腹腔游离癌细胞阳性胃癌的临床病理危险因素。目前，腹腔游离癌细胞的获取主要通过诊断性腹腔镜联合腹腔灌洗，细胞病理学检测被认为是其诊断的金标准。其治疗策略国内外目前尚不完全一致，包括术前化疗联合胃癌根治性切除、手术后化疗、腹腔内局部治疗等，均可延长患者生存期。现阶段我国多采用手术后化疗的治疗策略，最佳治疗方案有待进一步研究。

目的:探讨环状RNA 0004390(CircRNA_0004390)在食管鳞状细胞癌中的表达及对细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。方法:选择50例食管鳞癌细胞患者为研究对象。食管鳞状细胞癌和人正常食管上皮细胞购自美国典型培养物保藏中心。构建CircRNA_0004390-shRNA沉默载体转染至ECA-109食管鳞状细胞癌细胞(CircRNA_0004390-shRNA组)，同时设置shRNA阴性对照组(NC-shRNA组)和空白对照组(Control组)。采用反转录实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测CircRNA_0004390表达。溴化-3-(4，5-二甲基-2-噻唑)-2，5-二苯基四氮唑(MTT)检测细胞增殖活性。流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。Transwell检测细胞迁移及侵袭。两组间比较行 t检验，多组间比较采用单因素方差分析(组间比较采用LSD- t检验)。 结果:食管鳞状细胞癌患者肿瘤组织CircRNA_0004390表达显著高于癌旁组织(4.14±0.67比1.23±0.25)，差异有统计学意义( t＝10.282， P<0.05)。食管鳞状细胞癌细胞ECA-109、TE-1、EC9706及YES-2细胞CircRNA_0004390表达水平显著高于正常食管上皮细胞HET-1A(5.62±0.45、3.42±0.38、4.27±0.44、3.11±0.36比1.08±0.05)，差异有统计学意义( F＝31.205， P<0.05)。CircRNA_0004390-shRNA组ECA-109食管鳞状细胞癌细胞CircRNA_0004390表达水平、48、72、96 h细胞吸光度值、S期、G 2/M期、凋亡率、细胞迁移及侵袭数目显著低于NC-shRNA组及Control组[CircRNA_0004390基因表达分别为0.12±0.04比1.05±0.06、0.99±0.05，48 h吸光度值分别为0.32±0.04比0.73±0.08、0.71±0.07，72 h吸光度值分别为0.57±0.06比0.91±0.07、0.93±0.09，96 h吸光度值分别为0.71±0.06比1.22±0.09、1.24±0.11、S期分别为(15.27±2.07)%比(24.96±3.88)%、(26.45±3.39)%，G 2/M期分别为(11.35±2.62)%比(20.79±3.15)%、(22.39±3.24)%，迁移数目分别90.28±6.22比288.14±12.43、290.09±13.75，迁移数目分别71.13±5.29比213.26±10.39、216.77±15.71]，G 0/G 1期及凋亡率显著高于NC-shRNA组及Control组[G 0/G 1期分别为(73.67±5.55)%比(55.36±5.63)%、(57.84±4.12)%，凋亡率分别为(32.16±2.33)%比(18.46±2.01)%、(18.51±2.42)%]，差异有统计学意义( F＝24.177、10.138、19.241、24.156、20.178、16.345、25.167、41.233、37.239、19.211、11.235， P<0.05)。 结论:CircRNA_0004390在食管鳞状细胞癌表达显著升高，沉默CircRNA_0004390表达可促进细胞凋亡并抑制细胞增殖、迁移及侵袭。

目的:探究完全腹腔镜下近端胃切除双通道重建食管空肠π形吻合术治疗食管胃结合部腺癌的可行性，并总结初步技术经验。方法:采用描述性病例系列研究的方法。回顾分析2021年1月至2021年6月在解放军总医院第一医学中心普通外科医学部接受完全腹腔镜下近端胃切除术双通道法食管空肠π形吻合的12例食管胃结合部腺癌患者临床资料。12例患者中，肿瘤长径中位数2.0（1.5~2.9） cm，病理分期均为T1-3N0-3aM0。所有患者常规在完全腹腔镜下行根治性近端胃切除术淋巴结清扫，游离食管下段约5 cm，游离胃大弯、胃小弯侧拟切除位置，至少保留1/2远端胃，以直线切割闭合器切断远端胃体。手术适应证：（1）经内镜及病理检查诊断食管胃结合部腺癌（SeiwertⅡ~Ⅲ型）；（2）术前评估近端胃R 0切除后能够保留至少1/2的远端胃。禁忌证：（1）经评估存在肿瘤远处转移或其他脏器侵犯；（2）术中评估腹段食管较短或存在膈肌食管裂孔疝者；（3）空肠系膜过短或张力过高；（4）术前存在严重合并症；（5）术前评估仅行姑息性手术；（6）营养状态不佳者。在完全腹腔镜下行双通道法食管空肠π形吻合消化道重建：（1）食管空肠π形吻合：处理距屈氏韧带25 cm处空肠系膜，于该处肠壁对系膜缘及食管右侧壁各取一长约1 cm切口，插入直线切割闭合器两臂，击发完成食管空肠侧侧吻合，使用直线切割闭合器于吻合口下缘离断并闭合共同开口，完成食管空肠π形吻合；（2）残胃空肠侧侧吻合：距食管空肠吻合口15 cm处空肠对系膜缘及残胃大弯侧各取一长约1 cm切口，置入直线切割闭合器，击发完成胃空肠侧侧吻合；（3）空肠空肠侧侧吻合：距食管空肠吻合口40 cm处近远端空肠对系膜缘取一长约1 cm切口，直线切割闭合器两臂分别置入，击发完成空肠空肠侧侧吻合。取上腹正中切口，长4~6 cm，取出标本，留置腹腔引流管，逐层关腹。主要观察指标为手术时间、术中出血量、术后并发症、术后排气时间和进食时间以及住院时间、手术费用等。符合正态分布的连续变量资料用 ± s表示，不符合正态分布的连续变量资料采用 M（ Q1， Q3）表示。 结果:所有患者均成功实施完全腹腔镜下近端胃切除术双通道法食管空肠π形吻合，术后病理示上切缘均未见癌细胞。手术时间（247.9±62.4） min，术中中位出血量100.0（62.5，100.0） ml，所有患者均未术中输血，切口长度（4.9±1.0） cm，手术费用（55.5±0.7）万元，首次进食时间中位数1.0（1.0，2.0） d，排气时间（3.1±0.9） d。所有患者顺利出院，围手术期内仅1例出现术后麻痹性肠梗阻和感染性肺炎，Clavien-Dindo分级均为Ⅱ级，予以保守治疗痊愈，无手术相关死亡。术后住院天数（8.3±2.1） d。结论:完全腹腔镜下近端胃切除双通道重建食管空肠π形吻合术手术创伤小，安全可行。

目的:探讨微小RNA(miRNA，miR)-25过表达对食管癌TE1、KSYE-150细胞增殖与侵袭的影响。方法:实验样本均来自青岛市中医院2016年1月至2017年6月45例食管癌患者肿瘤组织、癌旁正常组织(距肿瘤边缘>5 cm，且病理检查无癌细胞浸润)。实验分为空白对照组、阴性对照组、模拟物转染组、抑制物转染组，分别将miR-25模拟物、抑制物转入食管癌TE1、KSYE-150细胞株，检测miR-25表达水平、TE1、KSYE-150细胞增殖能力及细胞周期变化。多组间比较行单因素方差分析，两组比较行配对 t检验。 结果:(1)食管癌组织miR-25表达(1.288±0.214)明显高于正常组织miR-25表达( t＝33.058， P<0.01)；(2)TE1细胞模拟物转染组miR-25表达(2.452±0.360)明显高于阴性对照组，抑制物转染组miR-25表达(0.576±0.110)明显低于阴性对照组( t＝8.212、7.553， P<0.05， P<0.01)；KSYE-150细胞模拟物转染组miR-25表达(3.124±0.450)明显高于阴性对照组，抑制物转染组miR-25表达(0.624±0.120)明显低于阴性对照组( t＝10.297、6.452， P<0.05， P<0.01)，差异有统计学意义；(3)转染24、48、72、96 h，模拟物转染组TE-1细胞活性(35.25±5.24、96.45±8.21、165.36±18.24、223.45±20.24)明显高于阴性对照组( t＝11.137、9.216、7.575、10.547， P<0.05， P<0.01)，抑制物转染组TE-1细胞活性(4.21±0.72、22.36±4.21、52.15±7.36、63.45±7.36)明显低于阴性对照组( t＝4.874、8.940、6.830、7.368， P<0.05， P<0.01)；模拟物转染组KSYE-150细胞活性(42.36±6.36、102.65±13.45、172.36±22.45、242.31±25.35)明显高于阴性对照组( t＝12.449、7.381、7.110、10.464， P<0.05， P<0.01)；抑制物转染组KSYE-150细胞活性明显低于阴性对照组(5.42±0.75、25.12±7.24、62.45±8.36、67.36±8.45)( t＝5.827、6.699、4.872、6.689， P<0.05)，差异均有统计学意义；(4)模拟物转染组TE-1细胞G 0/G 1期(46.52±6.20)明显低于阴性对照组，S期(46.96±7.12)明显高于阴性对照组( t＝4.096，5.044， P<0.05)，抑制物转染组TE-1细胞G 0/G 1期(84.52±7.54)明显高于阴性对照组，S期(6.05±0.78)明显低于阴性对照组( t＝4.352，13.715， P<0.05， P<0.01)；模拟物转染组KSYE-150细胞G 0/G 1期(44.36±6.32)明显低于阴性对照组，S期(49.25±6.58)明显高于阴性对照组( t＝4.544，5.009， P<0.05， P<0.01)，抑制物KSYE-150细胞G 0/G 1期(81.25±7.43)明显高于阴性对照组，S期(8.78±1.12)明显低于阴性对照组( t＝4.577，10.127， P<0.05， P<0.01)。 结论:miR-25过表达将促进食管癌细胞株TE-1、KSYE-150增殖与侵袭，抑制miR-2表达会抑制食管癌细胞株TE-1、KSYE-150增殖，促进癌细胞凋亡。

目的:探究miR-377-5p对食管癌细胞TE-1放射敏感性的影响及机制。方法:TE-1细胞转染miR-377-5pmimic和miR-377-5pmimic NC构建过表达miR-377-5p细胞。对转染后的TE-1细胞照射后采用平板集落形成实验检测细胞放射生物学参数(D 0、D q、SF 2)，Transwell小室法检测细胞侵袭能力，细胞划痕实验检测细胞迁移能力，CCK8法检测细胞活力，流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期，免疫印迹检测AKT1和GSK-3β磷酸化水平。 结果:2、4、6、8 Gy照射的集落形成率均显著下降( P<0.05)，且在同一剂量下miR-377-5pmimic组细胞集落形成率均显著低于miR-377-5pmimic NC组( P<0.05)。相比于miR-377-5pmimic NC组，miR-377-5pmimic组D 0、D q、SF 2均显著下降( P<0.05)，放射增敏比为1.34(D 0值比)；0 Gy照射后细胞侵袭、迁移、增殖能力显著下降，细胞凋亡水平显著上升，细胞周期被阻滞于G 1期，AKT1和GSK-3β磷酸化水平显著下降( P<0.05)；4 Gy照射后细胞侵袭、迁移、增殖能力下降，细胞凋亡水平显著上升，G 1期显著延长，AKT1和GSK-3β磷酸化水平亦显著下降(均 P<0.001)。 结论:miR-377-5p能够增加食管癌细胞TE-1的放射敏感性，其机制可能是抑制AKT1/GSK-3β信号通路。

目的:探讨微小RNA－17－5p(miR－17－5p)在食管鳞癌(ESCC)中的表达及其对ESCC细胞增殖和侵袭的影响。方法:采用实时荧光定量PCR(RT－qPCR)检测ESCC组织和细胞中miR－17－5p的表达。将miR－17－5p抑制剂和阴性对照转染食管鳞癌细胞EC9706和TE1，RT－qPCR检测转染后细胞中miR－17－5p的表达水平，细胞计数试剂盒8和EdU检测转染后细胞的增殖情况，Transwell小室检测细胞的侵袭能力。采用双荧光素酶报告实验分析miR－17－5p与成视网膜细胞瘤样蛋白2(RBL2)直接的相互作用，Western blot检测转染后RBL2蛋白的表达，RT－qPCR检测RBL2在ESCC组织中的表达，并分析其与miR－17－5p表达的相关性。结果:ESCC组织中miR－17－5p的相对表达水平为4.222±0.39，高于正常食管上皮组织(1.081±0.046， P<0.001)。ESCC细胞EC9706、Eca109、TE1、KYSE450、KYSE70和KYSE520中miR－17－5p的相对表达水平分别为13.84±1.266、6.453±0.293、11.41±0.520、2.613±0.548、5.251±0.239和4.251±0.195，均高于正常食管上皮细胞Het－1A(1.007±0.079，均 P<0.05)。Ⅲ＋Ⅳ期ESCC组织中miR－17－5p的表达水平(5.094±0.562)高于Ⅰ＋Ⅱ期患者(2.934±0.364)，差异有统计学意义( P<0.01)；有淋巴结转移患者中miR－17－5p的表达水平(5.523±0.634)高于无淋巴结转移患者(3.533±0.461)，差异有统计学意义( P<0.05)。miR－17－5p高表达患者的生存率低于miR－17－5p低表达患者，差异有统计学意义( P<0.05)。miR－17－5p抑制剂能下调EC9706和TE1细胞中miR－17－5p的表达，其表达下调抑制细胞的增殖和侵袭能力。双荧光素酶报告实验显示，无论是EC9706细胞还是TE1细胞，在RBL2 3′UTR－WT载体和miR－17－5p mimic共转染后，荧光素酶的活性显著降低( P<0.01)，RBL2是miR－17－5p的直接作用靶点。Western blot检测显示，miR－17－5p抑制剂组EC9706和TE1细胞中RBL2蛋白的表达量分别为0.936±0.055和0.923±0.048，明显高于对照组(分别为0.087±0.019和0.102±0.010)，差异均有统计学意义(均 P<0.001)。ESCC组织中RBL2的表达水平为0.219±0.510，低于正常食管上皮组织(0.983±0.324， P<0.001)。ESCC组织中miR－17－5p的表达水平与RBL2的表达水平呈负相关( r＝－0.462, P<0.001)。RBL2表达下调能逆转miR－17－5p抑制剂引发的细胞增殖和侵袭能力降低。 结论:miR－17－5p参与ESCC的发生、发展过程，有望成为ESCC潜在的分子治疗靶点。

目的:探讨微小RNA(miR)-203对食管癌化疗敏感性的影响及其机制。方法:采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析顺铂(DDP)耐药食管癌细胞株TE-8/DDP和亲本细胞株TE-8细胞中miR-203表达水平。将TE-8/DDP细胞株分为对照组和miR-203组，采用慢病毒感染建立对照和miR-203过表达细胞系。细胞计数试剂盒(CCK-8)分析对照组和miR-203组细胞对DDP的敏感性；流式细胞术分析两组细胞凋亡水平；生物信息学和双荧光素酶实验分析miR-203靶基因。蛋白质免疫印迹分析miR-203靶蛋白表达水平。计量资料比较采用 t检验。 结果:亲本细胞株TE-8细胞miR-203表达水平(1.31±0.15)明显高于DDP耐药食管癌细胞株TE-8/DDP中miR-203表达水平(0.53±0.18)，差异有统计学意义( t＝4.801， P<0.05)。对照组细胞经50 μg/ml和100 μg/ml DDP处理36 h后细胞吸光度值(1.98±0.13、1.43±0.12)明显高于miR-203组细胞吸光度值(1.58±0.11、1.11±0.12)，差异有统计学意义( t＝3.781、3.017， P<0.05)。对照组细胞经50 μg/ml和100 μg/ml DDP处理36 h后细胞凋亡率[(30.54±5.81)%、(51.45±6.29)%]明显低于miR-203组细胞吸光度值[(49.29±5.00)%、(78.27±8.81)%]，差异有统计学意义( t＝3.781、3.017， P<0.05)。100 mg/kg DDP治疗20 d后，对照组细胞形成肿瘤体积[(498.35±43.10) mm 3]明显大于miR-203组细胞体内肿瘤体积[(309.44±27.87) mm 3]，差异有统计学意义( t＝5.091， P<0.05)。对照组细胞形成肿瘤质量[(8.91±1.29) g]明显高于miR-203组细胞体内肿瘤质量[(4.73±1.01) g]，差异有统计学意义( t＝3.182， P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶结果显示三磷酸腺苷结合盒转运子E1(ABCE1)是miR-203的靶基因。对照组细胞ABCE1表达水平(0.89±0.09)明显高于miR-203组细胞ABCE1表达水平(0.25±0.07)，差异有统计学意义( t＝4.761， P<0.05)。对照组细胞半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3表达水平(0.38±0.09)明显高于miR-203组细胞Caspase-3表达水平(1.21±0.13)，差异有统计学意义( t＝6.281， P<0.05)。 结论:miR-203通过靶向ABCE1蛋白调控食管癌对顺铂的耐药性。

基于膜解剖的胃肠肿瘤根治术已经大幅降低了术后复发率，提高了手术疗效。但膜解剖在食管癌根治术中并未得到普遍采用。我们的研究发现，作为前肠器官，食管同样具有系膜结构，食管癌系膜内同样存在第五转移，系膜完整性破坏导致的癌泄露和转移，可能是术后高复发率的根本原因。应用纳米碳及吲哚菁绿荧光示踪显示，食管上段的淋巴引流到胃左动脉系膜淋巴结。为此，我们在食管癌根治术中，采用膜解剖理论，将食管癌、食管系膜、胃左动脉及其系膜和系膜内的所有结构一同完整切除，彻底清除癌肿、阻止癌细胞通过血管、淋巴系统和系膜内转移进行的播散、提高了疗效和预后。本文通过阐述食管膜解剖结构的理论基础、胚胎发育、影像学、尸体解剖以及腔镜观察到的结构以及食管膜解剖理论在食管癌根治术中的应用效果，阐明了食管膜解剖结构以及食管癌的淋巴引流特点，揭示食管癌淋巴结转移规律、优化淋巴结清扫策略，从而提高食管癌根治术的疗效。