目的:观察胶质瘤微环境中发生恶性转化的肿瘤相关巨噬细胞（TAM）脂代谢特征，分析抑制其脂代谢重塑后生物学表型变化及调控机制。方法:实验采用12只6~8周雄性Balb/c小鼠。巨噬细胞（Mφ）来源于小鼠骨髓，恶性转化巨噬细胞（tMφ 1和tMφ 2）为胶质瘤干细胞与巨噬细胞体内外互相作用模型所克隆。检测Mφ、tMφ 1和tMφ 2内脂滴形成和胆固醇含量，qRT-PCR检测脂代谢关键酶固醇调节元件结合蛋白（SREBP）、脂肪酸合成酶（FASN）和3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（HMG-CoA）的表达水平，并与正常Mφ比较。分析脂代谢抑制药物辛伐他汀（SIM）对相关细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及胞内胆固醇含量的变化。构建SIM处理前后恶性转化TAM中miRNA的差异表达谱，生物信息学分析筛选并验证与脂代谢重塑相关的miR449a及其靶基因分拣微管连接蛋白17（SNX17）。qRT-PCR和Western 印迹分析上调miR-449a对SNX17表达水平影响，检测上调miR449a对恶性转化TAM生物学表型及胆固醇含量的影响，并检测敲减SNX17后低密度脂蛋白受体（LDLR）表达变化及其对恶性转化TAM胆固醇含量的影响。 结果:tMφ 1和tMφ 2内脂滴数量明显多于Mφ，胆固醇相对含量分别为3.89±0.68、3.56±0.53，显著高于Mφ（1.01±0.21）（ P<0.001），脂代谢酶SREBP（4.78±0.60、2.84±0.41）、FASN（4.65±0.70、3.01±0.45）和HMG-CoA（5.74±0.55、2.97±0.34）相对表达量高于Mφ（1.01±0.19、1.02±0.21和0.99±0.18）（均 P<0.001）。SIM作用后tMφ 1和tMφ 2细胞增殖率分别由（47.06±5.88）%、（45.29±5.64）%下降至（23.53±4.70）%、（18.74±5.76）%（均 P<0.05）；迁移细胞数分别由（1 025±138）个、（350±47）个下降至（205±63）个、（99±25）个（均 P<0.001），侵袭细胞数分别由（919±45）个、（527±34）个下降至（220±23）个、（114±21）个（均 P<0.001），胞内胆固醇相对含量分别由1.01±0.14、1.02±0.09下降至0.52±0.08、0.58±0.07（均 P<0.05）。SIM作用tMφ 1后筛选出miR-449a，生信分析并验证其靶基因为SNX17。过表达miR-449a后SNX17表达下调，细胞增殖率、迁移和侵袭数明显减少，胞内胆固醇含量降低；敲减SNX17后LDLR表达下调，胞内胆固醇水平亦相应下降（均 P<0.05）。 结论:胶质瘤干细胞重构的高度免疫抑制性微环境中恶性转化TAM脂代谢水平显著增高。miR-449a通过靶向SNX17调控LDLR从而重塑恶性转化TAM的脂代谢，进而抑制其增殖、迁移和侵袭能力，精准干预miR-449a/SNX17/LDLR轴可为通过代谢干预逆转胶质瘤干细胞重构的以TAM为主的高度利瘤性免疫微环境治疗提供实验依据。

目的 探讨地奥心血康(以下简称心血康)联合辛伐他汀对动脉粥样硬化(AS)小鼠的影响及机制.方法 将 8 只C57BL/6J小鼠作为对照组,将 32 只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、心血康组(160 mg·kg-1)、辛伐他汀组(1.3 mg·kg-1)及联合治疗组(心血康 160 mg·kg-1+辛伐他汀 1.3 mg·kg-1),每组 8 只.对照组给予常规饲料喂养,其余 4 组均给予高脂饲料喂养.同时,各给药组均按照上述剂量灌胃给药,灌胃体积为 10 mL·kg-1,每天 1 次,持续 18 周.给药结束后,检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;采用油红O染色法观察小鼠主动脉斑块形成及肝脏脂质聚集情况;ELISA法检测血清前蛋白转化酶枯草溶菌素 9(PCSK9)水平;qRT-PCR及Western Blot法检测肝脏组织LDLR、HNF1α、SREBP2 mRNA及蛋白表达水平.结果 (1)与对照组比较,模型组小鼠的血清TC、TG、LDL-C水平显著升高(P＜0.01),HDL-C水平显著降低(P＜0.01);主动脉根斑块面积百分比、主动脉全体斑块面积百分比、肝脏脂滴面积百分比均显著升高(P＜0.01);肝脏组织中LDLR mRNA及蛋白表达水平显著降低(P＜0.01),血清PCSK9 水平显著升高(P＜0.01);肝脏组织中HNF1α、SREBP2 mRNA及蛋白表达水平均明显升高(P＜0.05,P＜0.01).(2)与模型组比较,心血康组及联合治疗组小鼠的血清TC、TG、LDL-C水平明显降低(P＜0.05,P＜0.01),HDL-C水平明显升高(P＜0.05);辛伐他汀组小鼠血清LDL-C水平显著降低(P＜0.01);心血康组及联合治疗组小鼠的主动脉根斑块面积百分比、主动脉全体斑块面积百分比明显降低(P＜0.05,P＜0.01),各给药组小鼠的肝脏脂滴面积百分比均显著降低(P＜0.01);心血康组及联合治疗组小鼠肝脏组织中LDLR蛋白表达水平明显升高(P＜0.05),血清PCSK9 水平明显降低(P＜0.05,P＜0.01),肝脏组织中HNF1α、SREBP2 mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P＜0.05,P＜0.01).(3)与辛伐他汀组比较,联合治疗组小鼠血清HDL-C水平明显升高(P＜0.05);主动脉根斑块面积百分比、肝脏脂滴面积百分比均明显降低(P＜0.05,P＜0.01);肝脏组织中 LDLR 蛋白表达水平显著升高(P＜0.01),血清 PCSK9 水平显著降低(P＜0.01);肝脏组织中HNF1α蛋白及SREBP2 mRNA表达水平均明显降低(P＜0.05,P＜0.01).结论 心血康可能通过抑制SREBP2及HNF1α表达,调节PCSK9/LDLR信号途径,从而发挥对辛伐他汀降脂及抗AS作用的协同增效作用.

目的 研究茱萸丸对动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的影响及其相关机制.方法 采用高脂饲料喂养雄性低密度脂蛋白受体敲除(low density lipoprotein receptor knockout,LDLR-/-)小鼠诱导AS模型,造模周期为12周.造模成功的50只LDLR-/-小鼠随机分成模型组及茱萸丸低、中、高剂量(130.54、261.08、552.16mg/kg)组和阿托伐他汀(10.40mg/kg)组,每组10只,C57BL/6J小鼠10只作为对照组.给药12周后,采用生化法检测小鼠血清三酰甘油(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)水平;苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)、Masson、油红 O 染色观察小鼠主动脉的病理学改变;ELISA检测血清中白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)、IL-1β、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;超高液相色谱串联质谱法(ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UHPLC-MS/MS)检测小鼠血浆中三甲胺(trimethylamine,TMA)、氧化三甲胺(trimethylamine oxide,TMAO)含量;16SrRNA技术检测小鼠粪便中肠道菌群物种组成差异;荧光探针法检测主动脉ROS的荧光强度;免疫荧光及Western blotting检测小鼠主动脉硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxin interacting protein,TXNIP)和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白(NOD like receptor family pyrin domain containing 3,NLRP3)蛋白表达;qRT-PCR检测主动脉硫氧还蛋白(thioredoxin,TRX)、TXNIP、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein,ASC)、NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cystein-asparate protease-3,Caspase-3)mRNA表达.结果 与对照组比较,模型组小鼠血清TC、TG、LDL-C水平升高(P＜0.01),HDL-C水平显著下降(P＜0.01),主动脉内膜大面积增厚,形成明显的泡沫细胞,脉壁胶原蛋白沉积增多,血清中IL-18、IL-1β、ROS、TMA、TMAO水平显著升高(P＜0.01),SOD活性显著降低(P＜0.01),Chao1、Ace以及observed species指数降低(P＜0.01),拟杆菌门、粪杆菌属、布劳特氏属、乳杆菌属菌群丰度显著下降(P＜0.01),主动脉中ROS含量增加(P＜0.01),TXNIP、NLRP3蛋白与mRNA表达水平升高(P＜0.01),TRX、ASC、Caspase-1mRNA表达水平升高(P＜0.01).与模型组比较,茱萸丸组血清TG、TC、LDL-C水平显著降低(P＜0.05、0.01),HDL-C水平显著升高(P＜0.01),主动脉斑块、血管壁泡沫细胞及胶原蛋白沉积均呈现不同程度的改善,血清中IL-18、IL-1β、ROS、TMA、TMAO 水平显著降低(P＜0.05、0.01),SOD 活性显著升高(P＜0.01),Chao1、Ace 以及 observed species指数均明显升高(P＜0.01),拟杆菌门、粪杆菌属、布劳特氏属、乳杆菌属菌群丰度升高(P＜0.05、0.01),厚壁菌门菌群丰度降低(P＜0.05),主动脉中ROS含量减少(P＜0.05、0.01),TXNIP、NLRP3蛋白与mRNA表达水平显著降低(P＜0.01),TRX、ASC、Caspase-1 mRNA表达水平显著降低(P＜0.01).结论 茱萸丸能够显著抑制LDLR-/-AS小鼠主动脉病理改变、调节肠道菌群中有益菌和有害菌的相对丰度,减少TMAO生成,抑制ROS/TXNIP/NLRP3信号通路,改善炎症反应,减轻内皮细胞损伤,从而发挥抗AS的作用.

目的:探讨CD38对巨噬细胞溶酶体再生及胆固醇外流的影响.方法:以低密度脂蛋白(LDL)受体敲除(LDLr-/-)小鼠的骨髓源性巨噬细胞为细胞模型.采用活细胞成像系统观察烟酸腺嘌呤二核苷酸磷酸(NAADP)对巨噬细胞溶酶体数量的影响;利用ELISA检测巨噬细胞内NAADP的水平;细胞经NA处理后,利用RT-qPCR检测CD38 mRNA表达,利用Western blot检测CD38蛋白表达和转录因子EB(TFEB)磷酸化水平;利用激光共聚焦技术观察CD38/NAADP信号通路对溶酶体数量和胆固醇外流的影响.结果:NAADP可显著增加巨噬细胞中溶酶体的数量(P<0.05),这种效应可被NAADP拮抗剂NED-19、Ca2+螯合剂BAPTA及钙调磷酸酶抑制剂CsA明显抑制(P<0.05);CD38可明显促进巨噬细胞中NAADP的合成(P<0.05);NAADP合成底物NA可明显促进CD38 mRNA和蛋白表达(P<0.05);NA还可显著降低TFEB的磷酸化水平,且这一效应也可被NED-19、BAPTA和CsA明显抑制(P<0.05);阻断CD38/NAADP信号通路可明显抑制NA诱导的溶酶体数量增加和溶酶体游离胆固醇及胞质胆固醇酯的外流(P<0.05);在LDLr/CD38双基因敲除巨噬细胞中,NA诱导的溶酶体数量增加和溶酶体游离胆固醇及胞质胆固醇酯的外流效应消失,CD38基因回补后,这一效应即可恢复(P<0.05).结论:CD38可经TFEB介导,触发巨噬细胞溶酶体再生,进而促进巨噬细胞溶酶体游离胆固醇和胞质中胆固醇酯的外流.

[目的]基于脂质代谢组学方法考察羟基红花黄色素A(HSYA)对高脂饲料诱导的LDLR-/-小鼠高脂血症脂质代谢的影响及其机制.[方法]将28只雄性LDLR-/-小鼠分为对照组与高脂组.对照组喂养普通饲料,高脂组喂养高脂饲料,6 周后,高脂组按照血清中低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量平均分为 4 组:模型组、辛伐他汀组、HSYA(3.8 mg/kg)低剂量组、HSYA(7.6 mg/kg)高剂量组.给药11周,给药期间同时给予高脂饲料饲养.全自动生化仪检测小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、LDL-C含量,苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织病理形态,油红O染色观察小鼠肝脏组织脂肪蓄积情况,采用靶向脂质组学技术对LDLR-/-小鼠血清中脂质进行测定.[结果]与对照组比较,模型组小鼠血清中LDL-C、TC、TG、AST、ALT含量升高(P<0.05),肝组织出现大小不等的脂滴浸润,肝细胞排列紊乱,大量脂质蓄积.与模型组比较,HSYA两组小鼠血清中LDL-C、TC、TG、AST、ALT含量降低(P<0.05),肝脏的脂肪变性、脂质蓄积等病理情况得到改善.脂质组学检测结果显示,模型组和对照组之间具有差异的脂质分子共有 14 种(VIP>1,P<0.05).HSYA两组与模型组比较,17 种脂质分子呈现相反的趋势并具有差异,分别为PE(18∶0/18∶1)、PE(18∶0/18∶2)、PE(18∶0/20∶3)、PE(18∶0/20∶4)、PE(O-18∶0/18∶1)、PE(O-18∶0/20∶4)、LPE(18∶1)、LPE(20∶4)、FFA(22∶4)、PI(18∶0/18∶2)、PI(16∶0/18∶1)、PI(18∶1/18∶1)、LPI(18∶0)、PG(18∶1/16∶1)、PG(18∶1/18∶1)、PG(18∶1/18∶2)、PA(18∶1/18∶1)(VIP>1,P<0.05).[结论]研究利用脂质组学技术,发现HSYA可以通过调节高脂血症LDLR-/-小鼠血清中脂质代谢水平,发挥治疗高脂血症的作用,为临床应用HSYA提供了新的参考依据.

[目的]观察TSB2抑制热休克蛋白90(HSP90)与内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的结合对动脉粥样硬化形成的影响.[方法]用TSB2处理人脐静脉内皮细胞,用免疫共沉淀法检测HSP90与eNOS的结合情况.利用C57BL/6小鼠和低密度脂蛋白受体敲除(LDLR-/-)小鼠,普通饮食(ND)或高脂饮食(HFD)喂养12周,同时腹腔注射 PBS 或 TSB2,分为 4 组:C57BL/6+ND+PBS 组、LDLR-/-+ND+PBS 组、LDLR-/-+HFD+PBS 组、LDLR-/-+HFD+TSB2组.提取主动脉检测HSP90与eNOS的结合情况,检测主动脉和主动脉窦的粥样硬化斑块情况、一氧化氮(NO)和氧自由基(O2·-)生成情况,同时使用左旋精氨酸的竞争性底物L-单甲基-精氨酸(L-NMMA)明确NO的生成和一氧化氮合酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)明确O2·-的生成.[结果]与对照组相比,加入TSB2处理的人脐静脉内皮细胞后,HSP90与eNOS的结合水平减少41.06％(P＜0.05).与LDLR-/-+HFD+PBS组相比,LDLR-/-+HFD+TSB2组小鼠主动脉中HSP90与eNOS的结合水平减少40.95％(P＜0.05),主动脉内皮细胞O2·-生成水平减少63.73％(P＜0.05)(L-NAME明显抑制LDLR-/-+HFD+PBS组O2·-的生成),但NO生成量未见明显变化(L-NMMA抑制所有组NO的生成),同时主动脉及主动脉窦的斑块形成水平分别减少59.39％和68.86％(P＜0.05).[结论]TSB2通过抑制主动脉血管内皮细胞HSP90与eNOS的结合,减少血管内皮细胞脱偶联eNOS的O2·-生成,最终抑制动脉粥样硬化形成.

目的 探究丹参酮Ⅱ A对动脉粥样硬化模型小鼠及巨噬细胞RAW264.7胆固醇逆向转运的影响及其作用机制.方法 雄性LDLR-/-小鼠32只随机分为4组,给予普通饲料或高脂饲料喂养12周.对照组、模型组给予生理盐水,丹参酮Ⅱ A组、阿托伐他汀组给予丹参酮Ⅱ A溶液、阿托伐他汀溶液干预12周.RAW264.7细胞用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)100 mg·L-1诱导24 h,并同时给予含有丹参酮ⅡA低、中、高剂量(10、20、40 μmol·L-1)的培养基.检测小鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C值.油红0染色观察小鼠主动脉根部、RAW264.7细胞内脂质积聚.Western blot测定小鼠主动脉组织、肝组织、RAW264.7细胞ABCA1、ABCG1蛋白表达.结果 与模型组比较,丹参酮ⅡA、阿托伐他汀降低小鼠血清TC、TG、LDL-C水平,升高HDL-C水平(P＜0.05),减小小鼠主动脉根部斑块相对管腔面积比值,上调小鼠主动脉组织、肝组织ABCA1、ABCG1蛋白水平(P＜0.05);丹参酮Ⅱ A减少RAW264.7细胞内的脂滴累积,AB-CA1、ABCG1蛋白表达增加(P＜0.05).结论 丹参酮Ⅱ A通过促进胆固醇逆向转运,抑制泡沫细胞形成,改善脂代谢,发挥抗动脉粥样硬化的作用.

目的 探讨PCSK9对小鼠肝脏脂肪变性的机制.方法 以腺相关病毒8.2(adeno-associated virus 8.2,AAV8.2)为载体构建绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)和人源PCSK9经尾静脉转染至小鼠肝脏表达.将36只C57BL/6J小鼠按照随机数字表法分为空白组、GFP组和PCSK9组,每组各12只,共饲养24周.通过苏木精-伊红(hematoxylin eosin,HE)染色观察肝脏组织形态,天狼星红染色(sirius red staining,SRS)观察肝脏纤维化程度,油红0(oil red O,ORO)染色观察肝脏脂质浸润程度.通过酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清PCSK9、白细胞介素(interleukin,IL)-1β,流式细胞术检测肝脏单核细胞胞内炎性细胞因子,包括IL-2、IL-4、γ-干扰素(interferon-γ,INF-γ)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、颗粒酶B(granulase B,GrB).免疫组化检测肝组织巨噬细胞标志物CD68阳性细胞百分比.Western blot法检测PCSK9干预小鼠单核-吞噬细胞白血病细胞(RAW264.7)细胞胆固醇流出蛋白、清道夫受体相关蛋白、NF-κB信号通路相关蛋白表达.结果 PCSK9组小鼠肝脏组织脂滴总量、脂肪变性、空泡化、纤维化程度明显增加或增强(P＜0.001).免疫组化检测结果显示,PCSK9组巨噬细胞标志物CD68阳性细胞百分比显著高于GFP组及空白组(P＜0.05).流式细胞术检测结果显示,PCSK9组IL-2、TNF-α在CD4+、CD8+细胞亚群百分比明显高于高脂GFP组(P＜0.05),而IL-4、INF-γ,GrB在组间各细胞群中比较,差异无统计学意义(P＞0.05).Western blot法检测结果显示,与空白组比较,PCSK9显著降低LDLR水平,升高 ATP 结合盒转运体 A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)、清道夫受体 B(scavenger receptor B,SRB 或 CD36)、Toll样受体 4(Toll-like receptor 4,TLR4)、磷酸化 IκBα 激酶(phosphorylated inhibit kappa B α kinase,p-IκBα)、磷酸化 p65 蛋白(phosphorylated p65,p-p65)蛋白水平(P＜0.05).结论 PCSK9介导NF-κB信号通路致小鼠肝脏脂肪代谢失衡及炎性细胞因子浸润加速了肝脏脂肪变性.

目的 探讨miR-125a对巨噬细胞脂质代谢及主动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)病变的影响及作用机制.方法 油红O及比色法检测巨噬细胞内脂滴情况及脂质含量;生物信息学预测miR-125a下游靶标;双荧光素酶报告基因验证miR-125a与sortilin mRNA靶向结合;qPCR、Western blot和免疫组化检测荷脂THP-1巨噬细胞和低密度脂蛋白受体敲除(LDLR-/-)小鼠中miR-125a及sortilin表达;全自动生化分析仪测定血脂改变;组织染色显示主动脉AS斑块面积及脂质沉积情况.结果 过表达miR-125a可减轻THP-1巨噬细胞内脂质蓄积;生信分析和荧光素酶报告基因显示sortilin mRNA是miR-125a的作用靶标;过表达miR-125a可下调巨噬细胞sortilin表达,减少胞内脂滴数量及脂质含量,改善LDLR-/-小鼠血脂谱,抑制主动脉脂质沉积及AS病变面积.结论 miR-125a可通过下调sortilin表达抑制巨噬细胞脂质蓄积及主动脉AS病变.

目的 初步探讨绝经后脂质代谢紊乱是否参与抑郁症状的形成.方法 24只LDLR-/-和16只WT C57BL/6J雌鼠,分为5组(n=8),分别为:WT+普通饮食组(WT)、WT+高脂饮食组(WT-H)、LDLR-/-去卵巢+普通饮食组(LDLR-/-)、LDLR-/-去卵巢+高脂饮食组(LDLR-/--H)、LDLR-/-去卵巢+高脂饮食+辛伐他汀组(XF),连续喂养3个月.LDLR-/-雌鼠双侧卵巢摘除联合高脂饮食建立绝经后脂质代谢紊乱模型.检测小鼠体重、脑总胆固醇(TC)及海马ERα、ERβ水平、抑郁行为、脑内5-HT水平;对脑TC水平和抑郁相关指标进行相关性分析.结果 (1)LDLR-/--H组可复制绝经后脂质代谢紊乱特征,表现为小鼠体重显著增加、脑TC水平显著升高、海马ERβ表达明显下降;(2)LDLR-/--H组小鼠水平和垂直运动均显著降低,TST静止时间显著增加,脑5-HT水平显著降低;(3)XF组小鼠脑TC水平显著下降、抑郁行为明显改善、5-HT水平明显提高;(4)小鼠脑TC水平与5-HT水平及抑郁样行为显著相关.结论 绝经后脂质代谢紊乱能诱导抑郁症状发生,通过调节脂质代谢可以显著改善抑郁症状.