目的:探讨环状RNA hsa_circ_0008898对口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma，OSCC）细胞增殖、迁移、侵袭和肿瘤形成的影响和分子机制。方法:实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）和蛋白质印迹法检测OSCC组织、癌旁组织、OSCC细胞和人正常口腔角质细胞（normal oral keratinocytes，NOK）中环状RNAhsa_circ_0008898、Ras同源物基因家族成员A（ras homolog gene family member A，RHOA）及微RNA miR-197-5p的表达水平。在CAL27和SCC-25细胞中分别转染si-hsa_circ_0008898#1（敲低1组）、si-hsa_circ_0008898#2（敲低2组）、hsa_circ_0008898（circ过表达组）及空白质粒（circ空白组）；在敲低1组细胞中，再分别转染miR-197-5p抑制物（抑制组）和空白质粒（抑制对照组）。在CAL27和SCC-25细胞中分别转染miR-197-5p模拟物（miR过表达组）及空白质粒（miR空白组）；在miR过表达组细胞中，再分别转染hsa_circ_0008898载体（共转染1组）、RHOA载体（共转染2组）和空白质粒（共转染对照组）。细胞计数、克隆形成、流式细胞术、Transwell及划痕实验分别检测细胞增殖活力、克隆能力、细胞周期分布、细胞侵袭及迁移能力。将10只裸鼠平均分为2组，每组5只，经腋下皮下分别注射转染空白质粒（对照组）和转染sh-hsa_circ_0008898的SCC-25细胞（敲除组），检测肿瘤体积和质量。结果:OSCC组织中hsa_circ_0008898和RHOA的表达量（分别为2.89±0.72和2.62±0.21）均显著高于癌旁组织（分别为1.00±0.48 和1.00±0.11），miR-197-5p表达量（0.46±0.24）显著低于癌旁组织（1.00±0.42）（ P<0.05）。与NOK相比，CAL27和SCC-25细胞中hsa_circ_0008898、RHOA表达均显著升高，miR-197-5p表达均显著降低（ P<0.05）。敲低1组和敲低2组CAL27和SCC-25的细胞活力、克隆形成数、划痕愈合率和侵袭细胞数均显著低于circ空白组，G1期细胞比例均显著增加（ P<0.05）。与抑制对照组相比，抑制组CAL27和SCC-25的细胞活力、克隆形成数、迁移面积和侵袭细胞数均显著升高，G1期细胞比例显著降低（ P<0.05）。与miR空白组相比，miR过表达组CAL27和SCC-25的细胞活力、克隆形成数、划痕愈合率和侵袭细胞数均显著降低，G1期细胞比例显著增加（ P<0.05）。与共转染对照组相比，共转染2组CAL27和SCC-25的细胞活力、克隆形成数、划痕愈合率和侵袭细胞数均显著增加，G1期细胞比例显著降低（ P<0.05）。敲除组裸鼠移植瘤体积［（660.4±67.8） mm 3］和质量［（0.60±0.06） g］均显著低于对照组［分别为（1 210.4±198.9） mm 3和（1.00±0.12） g］（ P<0.05）。 结论:敲减hsa_circ_0008898表达通过调控miR-197-5p/RHOA轴抑制OSCC细胞增殖、克隆、迁移及侵袭能力，诱导细胞G1期阻滞，抑制裸鼠成瘤。

目的:研究左归丸对去卵巢致骨质疏松症大鼠破骨细胞中miR-133b-3p、RAS同源基因家族成员A（RhoA）表达的影响，探讨其作用机制。方法:将SD雌性大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、假手术组、左归丸组，每组6只。模型组、左归丸组采用卵巢切除术构建大鼠骨质疏松症模型。左归丸组灌胃左归丸水煎液10 g/kg，连续灌胃12周。采用比色法测定大鼠血清钙、磷水平，ELISA法检测ALP水平；骨密度仪检测各组大鼠股骨骨密度。培养各组破骨细胞，采用Western blot法检测RANKL、RUNX2蛋白表达。对各组大鼠骨组织进行miRNA测序及差异表达分析。采用miR-133b-3p类似物及其对照处理破骨细胞，采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）方法检测破骨细胞增殖活力，采用抗酒石酸酸性磷酸酶染色检测破骨细胞活性，双荧光素酶报告基因实验检测miR-133b-3p与RhoA的靶向关系，采用miR-133b-3p类似物及RhoA共表达的“挽救”实验研究左归丸影响破骨细胞活性的分子调控机制。结果:与模型组比较，左归丸组骨密度增加（ P<0.05或 P<0.01），血清钙、磷水平增加（ P<0.05），ALP水平下降（ P<0.05），RANKL蛋白表达下降（ P<0.01），RUNX2蛋白表达增加（ P<0.05）。测序结果显示，左归丸组骨质疏松大鼠破骨细胞中rno-miR-133b-3p表达下调幅度最大（ P<0.01）。左归丸组破骨细胞miR-133b-3p表达低于模型组。miR-133b-3p过表达可促进破骨细胞增殖和分化，RhoA过表达可逆转由miR-133b-3p过表达所引起的破骨细胞过度增殖和分化。 结论:RhoA是miR-133b-3p调控的靶基因，左归丸通过调控miR-133b-3p/RhoA抑制破骨细胞活性，从而缓解骨质疏松症状。

目的:探讨成纤维细胞生长因子10(FGF10)对神经元损伤的保护作用及其潜在的分子机制。方法:剥离新生SD乳鼠的脑组织并提取其中的皮层神经元，将其种植于含L-多聚赖氨酸的孔板上进行培养，并分为正常组、髓鞘碎片组和髓鞘碎片+FGF10组，其中髓鞘碎片组神经元在培养4 h后添加一定含量的髓鞘碎片溶液(终浓度为10 μg/mL)，而髓鞘碎片+FGF10组神经元同时在培养基内添加髓鞘碎片和FGF10溶液(终浓度为4.3 nmol/L)。培养1周后，应用TUNEL染色、流式细胞术检测各组神经元的凋亡情况，应用活/死细胞染色、CCK-8法检测各组神经元的生存情况，应用Western blotting、免疫荧光双标染色检测各组神经元内凋亡相关蛋白、微管相关蛋白和RAS同源基因家族成员A(Rho A)/Rho A相关蛋白激酶(ROCK)信号通路相关蛋白的表达。结果:与正常组相比，髓鞘碎片组中TUNEL染色所示神经元凋亡率明显升高，流式细胞术所示早期神经元凋亡率明显升高，活化半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达明显升高，Bcl-2/Bax值明显降低，活/死细胞染色所示神经元死亡率明显升高，CCK-8法所示神经元生存率明显降低，乙酰化微管蛋白/酪氨酸微管蛋白(Ace/Tyr-tubulin)值明显降低，Tau蛋白表达明显降低，Ace/Tyr-tubulin荧光强度比值明显降低，Rho A、ROCK蛋白表达明显升高，Rho A荧光强度值明显升高，差异均有统计学意义( P<0.05)。与髓鞘碎片组相比，髓鞘碎片+FGF10组中TUNEL染色所示神经元凋亡率明显降低，流式细胞术所示早期神经元凋亡率明显降低，活化caspase-3蛋白表达明显降低，Bcl-2/Bax值明显升高，活/死细胞染色所示神经元死亡率明显降低，CCK-8法所示神经元生存率明显升高，Ace/Tyr-tubulin值明显升高，Tau蛋白表达明显升高，Ace/Tyr-tubulin荧光强度比值明显升高，Rho A、ROCK蛋白表达明显降低，Rho A荧光强度值明显降低，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:FGF10可能通过抑制Rho A/ROCK信号通路进而促进神经元内微管稳定，从而对抗神经元在髓鞘碎片环境下发生的凋亡并提高其生存率。

目的:探讨白细胞介素-33（IL-33）对脂多糖（LPS）诱导的大鼠心脏微血管内皮细胞（RCMECs）通透性的影响。方法:体外培养RCMECs，分为空白对照组、LPS组、IL-33组和LPS+IL-33组。用细胞计数试剂（CCK8）检测IL-33对RCMECs增殖的影响。异硫氰酸荧光素（FITC）-葡聚糖法检测4组单层RCMECs通透性。Western Blot检测4组RCMECs中血管内皮钙黏蛋白、Ras同源基因家族（Rho）成员A（RhoA）、磷酸化Rho相关含卷曲螺旋蛋白激酶（p-ROCK2）蛋白表达。高通量测序比较LPS组和LPS+IL-33组的差异基因表达，并对差异基因进行基因本体（GO）富集分析。结果:10~50 ng/ml的IL-33对RCMECs增殖无显著影响（ P>0.05）。与空白对照组比，LPS组RCMECs通透性增加（相对灰度值1.404±0.029 比 1.000±0.200， P<0.05），血管内皮钙黏蛋白表达显著下调（相对灰度值0.429 5±0.012 9 比 0.594 9±0.014 2， P<0.05）；而与LPS组比，LPS+IL-33组可降低RCMECs通透性（相对灰度值0.948±0.013， P<0.01），上调血管内皮钙黏蛋白表达（相对灰度值0.549 1±0.012 0， P<0.005）。与空白对照组比，LPS组RhoA（相对灰度值0.211 4±0.009 9 比 0.135 0±0.007 6， P<0.000 1）、p-ROCK（相对灰度值0.656 3±0.013 2 比 0.503 6±0.036 2， P<0.000 1，）蛋白表达上调；与LPS组比，LPS+IL-33组RhoA（相对灰度值 0.157 7±0.010 7， P=0.000 2）、p-ROCK（相对灰度值0.427 7±0.003 8， P<0.000 1）蛋白表达降低。高通量测序发现，LPS组、LPS+IL-33组下调的差异基因与细胞骨架及Rho信号通路相关。 结论:IL-33可能通过抑制Rho/Rho相关含卷曲螺旋蛋白激酶信号通路RhoA、p-ROCK蛋白表达，改善LPS诱导的心脏微血管内皮细胞的高通透性。

目的:探究呼吸康复训练联合百令胶囊通过人RAS同源基因家族成员A（RhoA）/Rho-kinase信号通路对慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者的疗效及肺功能的影响。方法:选择2016年2月至2017年9月陆军第八十一集团军医院100例COPD患者，按照随机数字表法分为对照组和联用组，每组50例，同期挑选50例健康人群作为空白组。对照组患者给予百令胶囊进行治疗，百令胶囊+呼吸康复训练联用组采用呼吸康复训练联合百令胶囊进行治疗。分别分析各组患者肺功能[最大深吸气后第1秒用力呼出气体容积（FEV 1）、用力肺活量（FVC）、FEV 1/FVC]情况和临床疗效，通过免疫印迹、实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测RhoA、RockⅠ/Ⅱ蛋白和mRNA的表达。 结果:经治疗，联用组的肺功能各项指标FEV 1、FVC、FEV 1/FVC显著高于对照组[（2.34 ± 0.91）L比（1.91 ± 0.83）L、（2.98 ± 0.83）L比（2.34 ± 0.86）L、（79.63 ± 9.95）%比（76.13 ± 6.97）%]（ P<0.05）；与空白组相比，其余各组RhoA mRNA、RockⅠ/Ⅱ mRNA显著增高（ P<0.05），与对照组相比，联用组RhoA mRNA、RockⅠ/Ⅱ mRNA显著降低（2.46 ± 0.18比4.38 ± 0.21、1.72 ± 0.11比2.36 ± 0.24、1.79 ± 0.24比3.34 ± 0.21）（ P<0.05）；经治疗后，联用组6 min步行实验（6MWD）和临床总有效率[92.00%（46/50）比78.00%（39/50）]显著优于对照组（ P<0.05）。 结论:呼吸康复训练与百令胶囊联用能够显著改善COPD患者肺功能，提高临床疗效，并且可以通过RhoA/Rho-kinase信号通路下调RhoA、RockⅠ/Ⅱ蛋白和mRNA的表达。

目的:观察黄芪甲苷对溶血磷脂酸（LPA）诱导的小鼠神经母细胞瘤细胞（N1E-115）神经突起回缩的影响，探讨其作用机制。方法:将N1E-115细胞按随机数字表法分为空白组、模型组及0、40、80 μg/ml黄芪甲苷组。0、40、80 μg/ml黄芪甲苷组分别以20、40、80 μg/ml黄芪甲苷干预24 h，空白组及模型组不做药物干预，每组以无血清培养12 h，模型组及黄芪甲苷各浓度组以40 μmol/L的LPA干预10 min。于倒置显微镜观察并拍照，采用Image J软件计数N1E-115细胞神经突起数量；采用免疫荧光染色法检测细胞RAS同源基因家族成员A（RhoA）、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶2（ROCK2）、p-ROCK2、磷酸化肌球蛋白轻链2（p-MLC2）蛋白表达；荧光实时定量PCR法检测RhoA、ROCK2 mRNA水平；Western blot法检测RhoA、ROCK2、p-MLC2、肌球蛋白轻链2（MLC2）蛋白表达。结果:与20 μg/ml黄芪甲苷组比较，40、80 μg/ml黄芪甲苷组神经突起回缩抑制率升高（ P<0.05）；与模型组比较，20、40、80 μg/ml黄芪甲苷组RhoA、p-ROCK2、p-MLC2蛋白平均荧光强度及40 μg/ml黄芪甲苷组ROCK2蛋白平均荧光强度降低（ P<0.05或 P<0.01）；20、40、80 μg/ml黄芪甲苷组RhoA mRNA［（0.89±0.09）、（0.41±0.01）、（0.09±0.03）比（1.50±0.01）］、ROCK2 mRNA［（0.89±0.09），（0.14±0.01），（0.20±0.01）比（1.62±0.17）］水平降低（ P<0.05或 P<0.01）；20、40、80 μg/ml黄芪甲苷组ROCK2蛋白［（0.75±0.06，0.57±0.02，0.66±0.01）比（1.08±0.02）］、p-MLC2蛋白［（1.72±0.03）、（1.40±0.04）、（1.29±0.03）比（2.19±0.11）］、MLC2蛋白［（1.13±0.02）、（0.68±0.03）、（0.75±0.03）比（1.60±0.03）］及40、80 μg/ml黄芪甲苷组RhoA蛋白［（0.35±0.01）、（0.40±0.03）比（0.57±0.08）］表达降低（ P<0.05或 P<0.01）。 结论:黄芪甲苷可阻止LPA诱导的神经突起回缩，促进受损神经再生，其机制可能与下调RhoA-ROCK2通路RhoA、ROCK2、p-ROCK2、p-MLC2、MLC2蛋白表达，抑制神经生长锥崩溃有关。

目的 探讨贝母素乙调节Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关的卷曲螺旋激酶(ROCK)信号通路对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)大鼠软骨损伤的影响.方法 以碘乙酸钠(MIA)法制备KOA大鼠模型,随机分为模型组、贝母素乙(3.5 mg/kg)组、贝母素乙(3.5 mg/kg)+LPA(RhoA激活剂,1 mg/kg)组,每组 10 只,另选 10 只大鼠为对照组.机械刺激法和热辐射法检测大鼠膝关节疼痛症状;检测大鼠关节肿胀度、膝关节宽度并以步态评分评测其关节功能;透射电镜检测大鼠膝关节软骨细胞超微结构;TUNEL染色检测大鼠关节软骨细胞凋亡比;酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血清和关节液促炎因子白细胞介素(IL)-18、单核细胞趋化蛋白 1(MCP-1)水平;免疫印迹检测各组大鼠关节软骨组织凋亡(Cleaved caspase-3、Bax)和RhoA/ROCK通路相关蛋白表达.结果 贝母素乙可降低KOA大鼠关节肿胀度、膝关节宽度、步态评分、软骨细胞凋亡比、血清及关节液IL-18、MCP-1水平、软骨组织Cleaved caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK1 蛋白表达,升高机械痛阈值、热痛阈值(P<0.05);LPA可减弱贝母素乙对KOA大鼠关节软骨损伤的改善作用.结论 贝母素乙可通过抑制RhoA/ROCK信号激活而抑制KOA大鼠关节炎症反应和关节软骨细胞凋亡,减轻软骨损伤.

目的 观察加减薯蓣丸对血管性痴呆(vascular dementia,VD)伴抑郁小鼠的疗效并探究其作用机制.方法 采用双侧颈总动脉狭窄法结合慢性不可预测温和刺激复制VD伴抑郁小鼠模型,将小鼠分为假手术组、模型组、加减薯蓣丸组以及氟西汀组.采用行为学实验检测小鼠抑郁行为,免疫荧光法检测小鼠胼胝体血小板衍生生长因子受体α(platelet-derived growth factor receptor alpha,PDGFRα)、髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)表达水平,Western blot法检测MBP、少突胶质细胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG)、髓鞘相关糖蛋白(myelin associated glycoprotein,MAG)、酪氨酸蛋白激酶EPH受体A4(Ephrin receptor A4,EphA4)、Ras同源基因家族成员-A(Ras homolog gene family,member A,RhoA)、轴突生长抑制因子-A(neurite outgrowth inhibitor-A,Nogo-A)、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(Rho associated coiled-coil forming protein kinase,Rock)、Nogo受体(Nogo receptor,NgR)的蛋白表达水平,劳克坚牢蓝(Luxol fast bue,LFB)染色法观察胼胝体髓鞘结构,超微透射电子显微镜观察髓鞘超微结构.结果 行为学检测结果显示,加减薯蓣丸组及氟西汀组小鼠在旷场实验中活动总路程显著增加(P<0.05),糖水偏好率显著升高(P<0.05),强迫游泳实验中不动时间明显增加(P<0.05);免疫荧光染色结果显示,加减薯蓣丸、氟西汀均可增加PDGFRα、MBP荧光强度;LFB染色结果显示,与假手术组比较,模型组小鼠LFB髓鞘染色缺失,存在脱髓鞘改变,加减薯蓣丸能改善VD抑郁小鼠髓鞘着色程度;Western blot法检测结果显示,与假手术组比较,模型组小鼠胼胝体中MBP、MOG、MAG表达水平显著下降(P<0.05),加减薯蓣丸组小鼠MBP、MOG、MAG表达水平显著升高(P<0.05);加减薯蓣丸组小鼠胼胝体中EphA4、RhoA、Rock、No-go-A、NgR蛋白表达水平显著降低(P<0.05).结论 加减薯蓣丸可能通过抑制EphA4/RhoA/Rock通路促进髓鞘再生,改善VD小鼠的抑郁状态.

目的:探讨督脉电针和高压氧对脊髓损伤大鼠脊髓神经元的作用机制.方法:选择Wistar大鼠共60只,按随机数字表法分为5组,即正常对照组、模型组、督脉电针组、高压氧组、高压氧联合督脉电针组,每组12只.正常对照组只行椎板切除,不造成脊髓损伤;其余组用脊髓横断的方法损伤大鼠胸髓背侧部位,以构建实验模型.高压氧组于造模清醒4 h后,置于高压氧舱内氧疗,持续75 min/次,治疗4次/d.督脉电针组分别于造模清醒4 h后给予干预,频率2 Hz;干预时长为20 min,频率为1次/d.高压氧联合督脉电针组使用上述两种方法相结合,对大鼠进行干预.正常对照组和模型组不予治疗.造模后的第1、3、7天分别对各组进行Basso Beattie Bresnahan(BBB)运动功能评估,记录各组大鼠行为学改变.造模后第7天处死各组大鼠,取大鼠脊髓组织,应用TUNEL法检测凋亡细胞并计算凋亡指数;免疫荧光检测Ras同源基因家族成员A(RhoA)、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)通路变化;同时采用经典的RT-PCR和Western印迹测定大鼠脊髓损伤区轴突生长抑制因子A(Nogo-A)、Nogo-66受体(NgR)mRNA和蛋白的含量.结果:造模后第1、3和7天,督脉电针组、高压氧组和高压氧联合督脉电针组BBB评分均高于模型组(均P＜0.05),且高压氧联合督脉电针组评分高于督脉电针组与高压氧组(P＜0.05).TUNEL染色下模型组脊髓灰质区神经元染色明显阳性,提示细胞凋亡较多,高压氧联合督脉电针组损伤部位细胞凋亡显著减少(P＜0.05);督脉电针组、高压氧组和联合治疗组RhoA、ROCK蛋白含量、Nogo-A mRNA和蛋白表达量、NgR mRNA和蛋白表达量均低于模型组(F=34.597、39.230、14.783、12.370、21.435、50.435,均P＜0.05),且联合组的Nogo-A mRNA和蛋白表达量、NgR mRNA和蛋白表达量均低于督脉电针组和高压氧组(F=13.58、11.253、24.843、41.221,均P＜0.05).结论:督脉电针和高压氧对脊髓损伤大鼠脊髓神经元具有保护作用,其机制可能与RhoA/ROCK通路有关.

目的 基于Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路探讨茯苓酸(PA)对慢性肾衰竭(CRF)大鼠肾功能、纤维化的影响及潜在机制.方法 以雄性SD大鼠为对象,以5/6肾切除术建立CRF大鼠模型,将造模成功的大鼠分为模型组,PA低、中、高剂量组(5、10、20 mg/kg PA)和PA高剂量+ROCK通路激活剂溶血磷脂酸(LPA)组(20 mg/kg PA+1 mg/kg LPA),每组15只;另取15只大鼠仅切口暴露肾脏但不切除,作为假手术组.各药物组大鼠灌胃和/或尾静脉注射相应药液,每天1次,连续12周.实验期间,观察各组大鼠一般情况;末次给药后,检测各组大鼠的血清肾功能指标(血尿素氮、血清肌酐、尿酸)水平,观察其肾组织病理学改变,并进行肾小管损伤评分和肾纤维化区域面积量化,检测其肾组织中氧化应激指标[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)]、炎症因子(肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6)水平,结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅰ型胶原(collagen Ⅰ)阳性表达率,以及通路相关蛋白(RhoA、ROCK1)、纤维化相关蛋白(转化生长因子β1、裸角质层同源物2、α-平滑肌肌动蛋白)表达水平.结果 与假手术组比较,模型组大鼠饮食减少,体型瘦小,精神萎靡且反应迟钝,肾小球减少、萎缩,肾小管扩张且结构杂乱,间质可见大量炎症细胞浸润;其血清肾功能指标水平,肾小管损伤评分、肾纤维化面积占比、肾组织MDA和炎症因子水平、CTGF和collagen Ⅰ阳性表达率、通路相关蛋白和纤维化相关蛋白的表达水平均显著升高,SOD水平显著降低(P＜0.05).与模型组比较,PA各剂量组大鼠的一般情况和肾组织病理损伤均有不同程度好转,上述各定量指标均显著改善,且呈剂量依赖性(P＜0.05).LPA可显著逆转PA对上述指标的改善作用(P＜0.05).结论 PA能改善CRF大鼠肾功能并减轻肾组织纤维化,上述作用可能与抑制RhoA/ROCK信号通路的激活有关.