目的:探究环状核糖核酸转化/转录域关联蛋白(circular RNA transformation/transcription domain associated protein,circTRRAP)和微小 RNA-761(microRNA-761,miR-761)在冠心病患者血清中的表达及与心肌损伤的相关性.方法:从2019年12月到2022年12月,在湖南中医药大学第一附属医院接受治疗的80例冠状动脉疾病患者被纳入研究组,同时,80名健康人为对照组.实时荧光定量PCR法用来检测血清中circTRRAP、miR-761表达水平;检测两组心肌损伤相关指标cTnI、cTnT、CK-MB和BNP的水平;采用Person相关性系数分析circTRRAP、miR-761表达与心肌损伤指标的相关性;以ROC曲线探究血清circTRRAP和miR-761水平对冠心病的诊断价值.结果:观察组的circTRRAP水平显著高于对照组,而miR-761水平则远低于对照组(P＜0.05).在心肌损伤指标cTnI、cTnT、CK-MB以及BNP方面,观察组的表达较对照组明显升高(P＜0.05).Pearson法结果显示,冠心病患者血清circTRRAP水平与miR-761呈负相关(r=-0.422,P＜0.05).此外,冠心病患者血清circTRRAP表达水平与cTnI、cTnT、CK-MB和BNP呈显著性的正相关(P＜0.05);miR-761 表达水平与cTnI、cTnT、CK-MB和BNP呈显著性的负相关(P＜0.05).circTRRAP水平诊断冠心病的曲线下面积(AUC)为0.917,敏感度为78.3％,特异性为95.0％;miR-761水平诊断冠心病的AUC为0.907,敏感度为97.8％,特异性为72.5％;circTRRAP和miR-761联合诊断的AUC为0.991,敏感度为93.5％,特异性为97.5％.结论:冠心病患者血清中circTRRAP的表达水平较高,miR-761的表达水平较低,且血清circTRRAP和miR-761表达水平对冠心病患者早期诊断均有重要作用.

目的:探讨下调长链非编码RNA（lncRNA）HOX转录反义RNA（HOTAIR）靶向微小RNA761（miR-761）对肝癌细胞HCCLM3放射敏感性的影响。方法:实时荧光定量PCR测定HOTAIR在肝癌细胞HuH-7、SNU-449、HCCLM3和正常肝细胞L-02中的表达差异。HCCLM3细胞分成空白对照、Sh-NC（转染shRNA阴性对照）、Sh-HOTAIR（转染HOTAIR shRNA）、RAD+Sh-NC（转染shRNA阴性对照并经8Gy剂量照射）、RAD+Sh-HOTAIR（转染HOTAIR shRNA并经8Gy剂量照射），流式细胞术检测细胞凋亡，Western印迹检测Bcl-2相关X蛋白（Bax）、C-Caspase-3蛋白表达。Sh-NC、Sh-HOTAIR细胞经过0、2、4、6、8 Gy照射处理，平板克隆实验测定放射敏感性。生物信息学软件预测miR-761可能为HOTAIR的靶基因，荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。将miR-761抑制物、HOTAIR shRNA以及抑制物阴性对照、HOTAIR shRNA分别共转染到HCCLM3细胞中，同样使用上述方法测定细胞凋亡和Bax、C-含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3蛋白表达和细胞存活分数。结果:肝癌细胞HuH-7、SNU-449、HCCLM3中HOTAIR表达水平均高于正常肝细胞L-02（1.85±0.12、2.27±0.23、2.68±0.15比1.00±0.09，均 P<0.05）。与Sh-NC比较，Sh-HOTAIR、RAD+Sh-NC细胞凋亡率和Bax、C-Caspase-3蛋白水平较高[凋亡率：（13.47±1.32）%、（12.84±1.19）%比（2.98±0.27）%；Bax蛋白：0.74±0.08、0.72±0.06比0.42±0.06；C-Caspase-3蛋白：0.56±0.06、0.54±0.08比0.25±0.04；均 P<0.05]。与Sh-HOTAIR、RAD+Sh-NC比较，RAD+Sh-HOTAIR细胞凋亡率和Bax、C-Caspase-3蛋白水平较高[凋亡率：（22.57±2.36）%比（13.47±1.32）%、（12.84±1.19）%；Bax蛋白：0.99±0.11比0.74±0.08、0.72±0.06；C-Caspase-3蛋白：1.03±0.12比0.56±0.06、0.54±0.08；均 P<0.05]。与Sh-NC比较，Sh-HOTAIR细胞存活分数较低，细胞放射敏感性较高（ P<0.05）。HOTAIR靶向负调控miR-761表达。与共转染抑制物阴性对照、HOTAIR shRNA的细胞比较，共转染miR-761抑制物、HOTAIR shRNA的细胞经过放射处理后，细胞凋亡率较低[（10.24±1.32）%比（21.84±2.01）%]，细胞中Bax（0.50±0.06比1.01±0.10）、C-Caspase-3蛋白（0.56±0.07比1.05±0.14）表达较低，细胞存活分数较高（均 P<0.05）。 结论:下调lncRNA HOTAIR靶向miR-761增加肝癌细胞HCCLM3放射敏感性。

目的:分析外泌体(Exo)微小RNA-761(miR-761)通过调控肿瘤相关巨噬细胞(TAM)极化对骨肉瘤(OS)细胞上皮-间质转化(EMT)进程的影响,阐明其相关的作用机制.方法:miR-761质粒和阴性对照(miR-NC)质粒分别转染至HEK239细胞中,同时设不转染的细胞为对照组,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测转染效果.分离含miR-761的Exo,采用透射电镜观察Exo形态,采用纳米颗粒分析仪检测Exo样品浓度和粒径分布,Western blotting法检测Exo表面标志蛋白表达情况.采用佛波酯(PMA)刺激人单核细胞白血病THP-1细胞成为M0巨噬细胞,采用含miR-761的Exo处理M0巨噬细胞并与O S MG63细胞建立共培养体系,实验分组为M0组、TAM组、miR-761 NC组和miR-761 Exo组,收集各组M0巨噬细胞,流式细胞术检测各组细胞中M1巨噬细胞标志物CD86和M2巨噬细胞标志物CD206阳性率,Western blotting法检测各组细胞中M1巨噬细胞分泌因子白细胞介素1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)和M2巨噬细胞分泌因子白细胞介素10(IL-10)及转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达水平;采用含miR-761的Exo处理M0巨噬细胞并与MG63细胞建立共培养体系,实验分为对照组、TAM组、miR-NC Exo+TAM组和miR-761 Exo+TAM组,收集各组MG63细胞,免疫荧光染色法观察各组MG63细胞中E-钙黏附蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)荧光强度,Western blotting法检测各组细胞中E-cadherin、Vim entin及EMT调控相关转录因子Twist1、Snail和Slug蛋白表达水平,Transwell小室实验检测各组MG63细胞中侵袭和迁移细胞数.结果:通过转染实验成功获得含miR-761的HEK239细胞,并分离得到Exo.与M0组比较,TAM组巨噬细胞中CD86阳性率降低(P＜0.05),CD206阳性率升高(P＜0.05),IL-1β和TNF-α蛋白表达水平降低(P＜0.05),IL-10和TGF-β1蛋白表达水平升高(P＜0.05);与TAM组比较,miR-761 Exo组巨噬细胞中CD86阳性率升高(P＜0.05),CD206阳性率降低(P＜0.05),IL-1β和TNF-α蛋白表达水平升高(P＜0.05),IL-10和TGF-β1蛋白表达水平降低(P＜0.05).与对照组比较,TAM组MG63细胞中E-cadherin荧光表达强度减弱而Vimentin荧光表达强度增强,E-cadherin蛋白表达水平降低(P＜0.05),Vimentin、Twist1、Snail和Slug蛋白表达水平升高(P＜0.05),迁移细胞数和侵袭细胞数增加(P＜0.05);与TAM组比较,miR-761 Exo+TAM组MG63细胞中E-cadherin荧光表达强度增强而Vimentin荧光表达强度减弱,E-cadherin蛋白表达水平升高(P＜0.05),Vimentin、Twist1、Snail和Slug蛋白表达水平降低(P＜0.05),迁移细胞数和侵袭细胞数减少(P＜0.05).结论:Exo传递miR-761能够抑制OS细胞EMT进程,进而抑制细胞的迁移和侵袭,其作用机制可能与调控TAM极化作用有关.

目的 考察长链非编码RNA(lncRNA)LOXL1反义RNA 1(LOXL1-AS1)对氧糖剥夺(OGD)诱导的人脑微血管内皮细胞(HBMEC)凋亡和炎性因子表达的影响与机制.方法 将HBMEC分为对照组(正常培养)、OGD组(OGD损伤)、OGD+si-NC组(转染si-NC+OGD损伤)、OGD+si-LOXL1-AS1组(转染si-LOXL1-AS1+OGD损伤)、OGD+miR-NC组(转染miR-NC+OGD损伤)、OGD+miR-761组(转染miR-761 mimic+OGD损伤)、OGD+si-LOXL1-AS1+阴性对照组(转染si-LOXL1-AS1与anti-miR-NC+OGD损伤)、OGD+si-LOXL1-AS1+miR-761抑制剂组(转染si-LOXL1-AS1与miR-761 inhibitor+OGD损伤).RT-qPCR检测LOXL1-AS1和miR-761表达,CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测炎性因子白细胞介素-6 IL-6、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平.双荧光素酶报告实验检测LOXL1-AS1和miR-761的互补结合.结果 与对照组相比,OGD组HBMEC的LOXL1-AS1表达量、凋亡率、Bax表达量、IL-6、IL-1β和TNF-α水平均升高,存活率、Bcl-2表达量减少(均P＜0.05).抑制LOXL1-AS1后,与OGD组或OGD+si-NC组相比,OGD+si-LOXL1-AS1组HBMEC的LOXL1-AS1表达量、凋亡率、Bax表达量、IL-6、IL-1β和TNF-α水平降低,存活率、Bcl-2表达量增加(均P＜0.05).LOXL1-AS1靶向调控miR-761.过表达miR-761后,OGD+miR-761组HBMEC的存活率、Bcl-2表达量比OGD+miR-NC组增加,凋亡率、Bax表达量、IL-6、IL-1β和TNF-α水平均比OGD+miR-NC组降低(均P＜0.05).OGD+si-LOXL1-AS1+miR-761抑制剂组HBMEC的存活率、Bcl-2表达量低于OGD+si-LOXL1-AS1+阴性对照组,凋亡率、Bax表达量、IL-6、IL-1β和TNF-α水平高于OGD+si-LOXL1-AS1+阴性对照组(均P＜0.05).结论 抑制LOXL1-AS1表达可通过靶向上调miR-761促进OGD诱导的HBMEC细胞存活并抑制凋亡和炎性因子表达.

目的 探讨miR-761对钙化性主动脉瓣膜疾病(calcified aortic valve disease,CAVD)的影响及其潜在机制.方法 于2022年1月至2023年1月从重庆医科大学附属第一医院心胸外科收集正常(6例)和钙化(8例)的瓣膜组织,采用Western blot、免疫组织化学染色和RT-qPCR检测钙化瓣膜组织中自噬基因、成骨基因、γ-氨基丁酸受体相关蛋白(Gamma-aminobutyric acid receptor-associated protein,GAB ARAP)或miR-761表达的变化;双荧光素酶实验验证miR-761与GABARAP 3'-UTR区的结合;通过细胞免疫荧光实验对分离的猪主动脉瓣膜间质细胞(porcine aortic valve interstitial cells,pVICs)进行表型鉴定;在pVICs中转染miR-761 mimic、inhibitor以及相应的对照构建过表达或敲低miR-761的pVICs细胞系,加入GFP-LC3腺病毒后观察自噬小体数量的变化.成骨培养基(osteogenic medium,0M)处理pVICs前后分别采用Western blot、碱性磷酸酶染色和茜素红S染色检测pVICs的成骨分化能力.结果 与正常组织比较,钙化瓣膜组织中α-SMA、RUNX2、Beclin 1、ULK1和GABARAP蛋白表达上调,p62蛋白、miR-761表达下调(P＜0.05);双荧光素酶实验验证了 miR-761与GABARAP 3'-UTR区的结合(P＜0.05);分离出的pVICs表达间质细胞标记物α-SMA、Vimentin,不表达内皮细胞标记物CD31;共聚焦显微镜结果显示,敲低miR-761使pVICs的自噬小体生成增多;此外,蛋白、碱性磷酸酶染色、茜素红S染色结果均显示,敲低miR-761显著增加pVICs中的GABARAP的表达,显著降低OPN、α-SMA、RUNX2、Collagen Ⅰ的表达(P＜0.05),抑制OM诱导的细胞钙盐沉积.结论 miR-761可能通过抑制GABARAP的表达抑制自噬,促进心脏瓣膜钙化.

目的:观察青、老年大鼠脑组织miRNA表达谱差异,及补肾方(左归丸)和益气方(益气聪明汤)的调整作用.方法:以自然衰老大鼠(24月龄)为衰老模型,随机分为老年对照组、左归丸组、益气聪明汤组;另设青年对照组(5月龄).用芯片技术检测各组大鼠脑组织miRNA差异表达变化,并进行实时定量PCR验证,以及利用生物信息软件进行靶基因预测分析.结果:共检测出761种miRNA,与青年对照组比较,老年对照组差异表达的miRNA有126种.左归丸和益气聪明汤干预老年大鼠差异表达的miRNA分别有miR-152-3p、miR-450a-5p等8种和miR-19a-3p、miR-203a-3p等21种.PCR验证结果与芯片数据一致.生物信息软件分析显示左归丸和益气聪明汤干预衰老大鼠差异表达miRNA的靶基因,涉及调控脑功能活动的多条信号通路.结论:青、老年大鼠脑组织miRNA表达有显著差异,补肾益气方药对老年大鼠差异表达的部分miRNA具有改善作用,推测这可能是补肾益气方药延缓脑功能退化的部分作用机制.

胰岛素抵抗是肥胖和2型糖尿病发生的共同病理生理机制.骨骼肌是胰岛素介导的葡萄糖摄取、代谢、利用的主要靶器官之一,是胰岛素抵抗发生最早和最重要的部位.研究表明,骨骼肌葡萄糖摄取障碍、胰岛素信号通路受损、线粒体生物合成受阻与骨骼肌胰岛素抵抗密切相关.当骨骼肌发生胰岛素抵抗时,多种microRNAs (miRNAs)表达上调(miR-106b,miR-23a,miR-761,miR-135a,Let-7,miR-29a)或下调(miR-133a,miR-149,miR-1),它们参与对骨骼肌葡萄糖摄取、胰岛素信号通路及线粒体生物合成的调控,在骨骼肌胰岛素抵抗的发生与发展中发挥了重要作用.这些miRNAs可作为治疗骨骼肌胰岛素抵抗或糖尿病的潜在靶点.

目的 应用Meta分析的方法评价microRNA-21(miR-21)在乳腺癌患者诊断中的价值.方法 检索1990年至2018年在Pubmed、Embase、Medline等英文数据库及1990年至2018年在中国知网、万方及维普数据库收录的所有有关miR-21用于乳腺癌诊断的研究文献,根据纳入与排除标准筛选文献,提取原始有效数据后,利用Med-Disc 1.4进行统计分析.结果 共有11篇文献纳入相关临床研究,11个独立的病例对照研究,其中包含乳腺癌患者761例,健康对照组652例.miR-21用于诊断乳腺癌的合并灵敏度和特异性分别为0.66(95％ CI0.63 ～0.70)和0.82(95％CI0.79 ～0.82),阳性似然比和阴性似然比分别为4.12(95％ CI2.60 ～6.52)和0.33(95％ CI0.21 ～0.52);其DOR为13.31 (95％ CI 5.59～31.68);SROC-AUC为0.898.亚组分析显示miR-21对于血清标本和非亚洲人的诊断优势高于非血清标本和亚洲人.结论 评价结果提示miR-21在乳腺癌诊断中有一定的精确性,可作为重要的参考指标.

微小RNA(miRNA,miR)是高度进化保守的长度为18～ 25个核苷酸的非编码核糖核酸,能够在转录后水平调节基因的表达.近年来,大量研究表明miR-761参与细胞内线粒体的分裂、融合及合成,并在不同肿瘤中发挥着抑癌或促癌的作用.此外,还与心血管疾病、海马神经元的塑形和发育等密切相关.本文就miR-761的研究进展进行综述.

目的 探讨LncRNA FAL1通过靶向miR-761对骨肉瘤MG63细胞生物学行为(增殖、侵袭、迁移、凋亡)的影响.方法 常规培养MG63细胞,将其随机分为Vector组、FAL1组、si-FAL1组、si-Ctrl组并分别转染pcDNA3.1空载体、过表达载体pcDNA3.1-FAL1、干扰序列si-FAL1、阴性对照si-Ctrl,用实时荧光定量PCR法检测MG63细胞中miR-761表达,用双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA FAL1与miR-761的靶向关系.取部分MG63细胞随机分为si-Ctrl组(转染si-Ctrl)、si-FAL1组(转染si-FAL1)、si-FAL1+inhibitor-NC组(共转染si-FAL1和inhibitor-NC)、si-FAL1+miR-761 inhibitor组(共转染si-FAL1和miR-761 inhibitor),用CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭、迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 与Vector组比较,FAL1组LncRNA FAL1相对表达量高,而miR-761相对表达量低(P均<0.05);与si-Ctrl组比较,si-FAL1组LncRNA FAL1相对表达量低,而miR-761相对表达量高(P均<0.05).双荧光素酶报告基因实验证实,LncRNA FAL1可直接靶向miR-761.与si-Ctrl组比较,si-FAL1组细胞增殖活力低,侵袭、迁移数量低,凋亡率高(P均<0.05);与si-FAL1组比较,si-FAL1-miR-761 inhibitor组MG63细胞增殖活力高,侵袭、迁移数量多,凋亡率低(P均<0.05),但si-FAL1-inhibitor-NC组MG63细胞增殖活力、侵袭、迁移数量、凋亡率差异无统计学意义(P均>0.05).结论LncRNA FAL1可通过靶向调控miR-761的表达以抑制MG63细胞增殖、侵袭、迁移,并促进其凋亡.