目的:研究抗氧化剂叔丁基对苯二酚(tBHQ)对早期糖尿病大鼠视网膜结构和功能的保护作用及其机制。方法:选取8周龄健康清洁级雄性SD大鼠45只，采用随机数字表法将其分为正常对照组、糖尿病模型组和tBHQ干预组，每组15只；糖尿病模型组和tBHQ干预组采用一次性腹腔内注射链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型，正常对照组大鼠腹腔内注射等容量枸橼酸钠缓冲液；tBHQ干预组在STZ注射前2周喂食质量分数为1% tBHQ添加饲料，其余2个组大鼠喂食普通饲料；分别于造模后72 h、2周和4周尾静脉采血用于血糖检测。取造模成功的大鼠于造模后4周行视网膜电图(ERG)检测；采用苏木精－伊红染色法观察大鼠视网膜组织形态结构变化；采用TUNEL法观察视网膜组织各层细胞凋亡情况；Western blot法检测视网膜组织中蛋白激酶B(Akt)、p-Akt、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和p-eNOS的表达情况。另取体外培养的Müller细胞系rMC-1进行分组。正常对照组、甘露醇对照组、高糖组细胞分别在正常培养基、含5.5 mmol/L葡萄糖+24.5 mmol/L甘露醇的培养基、高糖培养基中培养72 h。tBHQ干预组细胞先于含5 μmol/L tBHQ的正常糖培养基中预处理24 h，然后于含5 μmol/L tBHQ的高糖培养基中继续培养72 h；磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂组细胞先于含5 μmol/L LY294002的正常糖培养基中预处理6 h，然后于含5 μmol/L LY294002及5 μmol/L tBHQ的正常糖培养基中继续培养24 h，最后于含5 μmol/L LY294002及5 μmol/L tBHQ的高糖培养基中继续培养72 h，收集各组细胞提取蛋白，Western blot法检测Akt、p-Akt、eNOS和p-eNOS的表达情况。结果:造模后72 h、2周和4周，糖尿病模型组大鼠血糖较正常对照组和tBHQ干预组高，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。造模后4周糖尿病模型组大鼠暗适应ERG的a波、b波振幅较正常对照组和tBHQ干预组下降，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。组织病理学染色结果显示，与正常对照组相比，糖尿病模型组视网膜神经节细胞数目减少，内丛状层水肿增厚，内核层及外核层变薄，结构疏松且排列紊乱，而tBHQ干预组各结构较糖尿病模型组有所改善。TUNEL染色结果显示，糖尿病模型组大鼠视网膜细胞凋亡指数较正常对照组和tBHQ干预组高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)，且凋亡细胞主要存在于外核层。Western blot法检测结果显示，正常对照组、糖尿病模型组和tBHQ干预组大鼠视网膜组织p-Akt/Akt的相对表达量分别为0.76±0.11、0.52±0.10和1.14±0.31，p-eNOS/eNOS的相对表达量分别为0.83±0.06、0.52±0.08和1.03±0.13，糖尿病模型组大鼠视网膜组织p-Akt/Akt、p-eNOS/eNOS的相对表达量均较正常对照组和tBHQ干预组降低，差异均有统计学意义(均 P<0.01)；正常对照组、甘露醇对照组、高糖组、tBHQ干预组和PI3K抑制剂组细胞p-Akt/Akt的相对表达量分别为0.95±0.38、0.94±0.27、0.33±0.25、1.32±0.37和0.24±0.09，p-eNOS/eNOS的相对表达量分别为0.86±0.11、0.74±0.29、0.45±0.29、1.28±0.22和0.73±0.29，高糖组细胞p-Akt/Akt、p-eNOS/eNOS的相对表达量较正常对照组和tBHQ干预组显著降低，差异均有统计学意义(均 P<0.05)，PI3K抑制剂组p-Akt/Akt、p-eNOS/eNOS的相对表达量较tBHQ干预组明显降低，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。 结论:tBHQ对早期糖尿病大鼠视网膜结构和功能均具有保护作用，其保护作用机制可能与Akt/eNOS信号通路的活化有关。

目的:探讨内毒素致急性肺损伤（ALI）时核因子E2相关因子2（Nrf2）对细胞紧密连接蛋白Claudin-18的影响。方法:将18只健康雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为对照组、内毒素致ALI模型组（ALI组）及Nrf2激活剂叔丁基对苯二酚（tBHQ）预处理组（tBHQ+ALI组），每组6只。通过腹腔注射脂多糖（LPS）15 mg/kg制备小鼠内毒素致ALI模型；对照组注射等量磷酸盐缓冲液（PBS）。tBHQ+ALI组于制模前3 h分3次腹腔注射tBHQ，每次间隔1 h（合计50 mg/kg），最后一次注射tBHQ的同时给予LPS 15 mg/kg；对照组和模型组给予等量PBS，最后一次给药时分别注射PBS或LPS。注射LPS后12 h处死小鼠取肺组织，苏木素?-?伊红（HE）染色后，光镜下观察肺组织病理学改变，并计算肺损伤评分；测定肺湿/干质量比值（W/D）；采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测肺组织Nrf2蛋白表达；采用免疫组化法检测肺组织Claudin-18阳性表达。结果:对照组肺组织结构完整，无明显病理学改变。与对照组相比，ALI组肺泡间隔增宽，伴有炎症细胞浸润、毛细血管充血及组织水肿，肺损伤评分及肺W/D比值均明显升高〔肺损伤评分（分）：6.50±1.05比1.83±0.75，肺W/D比值：3.79±0.22比3.20±0.14，均 P<0.01〕，且肺组织Nrf2蛋白表达及Claudin-18阳性表达均明显降低〔Nrf2蛋白（Nrf2/β-actin）：0.41±0.33比1.22±0.33，Claudin-18（ A值）：0.28±0.07比0.44±0.10，均 P<0.05〕。tBHQ预处理后，肺组织病理损伤程度较ALI组明显减轻，肺泡间隔轻度异常，炎症细胞浸润及组织水肿减轻，肺损伤评分及肺W/D比值均明显降低〔肺损伤评分（分）：3.00±0.89比6.50±1.05，肺W/D比值：3.28±0.19比3.79±0.22，均 P<0.01〕，且肺组织Nrf2蛋白表达及Claudin-18阳性表达均明显升高〔Nrf2蛋白（Nrf2/β-actin）：1.26±0.09比0.41±0.33，Claudin-18（ A值）：0.45±0.04比0.28±0.07，均 P<0.05〕。 结论:Nrf2能通过上调Claudin-18表达减轻肺水肿，从而改善内毒素致ALI。

目的:探讨柯萨奇病毒和腺病毒受体(coxsackievirus-adenovirus receptor，CAR)在胸腺癌中的表达和溶瘤腺病毒H101抗肿瘤活性之间的关系及其机制研究。方法:实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot检测胸腺癌组织和细胞中CAR的基因和蛋白质表达量。H101病毒感染Bcap-37、MP59和T1889细胞后，RT-qPCR和半数组织培养感染量(TCID 50)法检测细胞中H101的表达及上清中病毒滴度。不同感染复数(MOI)H101感染T1889细胞后，CCK-8法检测各组细胞的增殖活性，流式细胞术检测细胞凋亡率。不同浓度组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(Trichostatin A，TSA)处理T1889细胞后检测细胞中CAR的表达量；TSA处理细胞后，感染H101，检测细胞中H101的表达量及病毒滴度，CCK-8法检测细胞活性；TSA处理或TSA＋ERK激活剂TBHQ处理细胞后检测T1889细胞中MARK、ERK1/2的磷酸化水平和CAR的蛋白质表达量。 结果:与癌旁正常组织相比，胸腺癌组织中CAR的基因和蛋白质表达量均显著降低( P<0.01)；胸腺癌MP59细胞和T1889细胞中CAR表达量明显低于胸腺上皮细胞(TEC)和Bcap-37细胞( P<0.01)，H101表达量及上清中H101滴度明显低于Bcap-37细胞( P<0.01)；H101感染细胞48 h后，MP59和T1889细胞活性与Bcap-37细胞相比明显升高，细胞凋亡率明显下降( P<0.01)。不同浓度TSA处理后，T1889细胞中CAR基因和蛋白质水平呈剂量依赖性升高。0.25 μmol/L TSA处理T1889细胞后，H101基因表达量和病毒滴度明显升高( P<0.05)，MAPK和ERK1/2蛋白的磷酸化水平不断下降，CAR表达不断升高；和TSA处理组相比，TSA＋TBHQ处理组细胞内CAR蛋白质表达量明显下降( P<0.01)，p-ERK1/2/ERK1/2比值明显升高( P<0.01)。 结论:TSA通过抑制MARK/ERK1/2通路上调CAR在胸腺癌中的表达，从而增强H101的抗肿瘤活性。

目的:探讨特丁基对苯二酚（tert-butylhydroquinone，tBHQ）对亲代3-氯-1，2-丙二醇（3-chloro-1，2-propanediol，3-MCPD）喂养后的子代雄性大鼠生殖系统发育的影响。方法:孕大鼠15只按数字随机法分为对照组、3-MCPD组和tBHQ组（3-MCPD+tBHQ）。除对照组外，其他二组大鼠自孕中期（孕7 d）开始每日灌胃3-MCPD（5.0 mg/kg），同时在tBHQ组的饲料中加入质量分数1%的tBHQ喂养。孕大鼠产下子代后，取子代雄性大鼠继续喂养，测量肛门生殖器之间距离，记录睾丸下降时间。在仔鼠性成熟时，检测血睾酮浓度、睾丸及附睾质量。病理切片观察附睾中精子活力、生精上皮、曲细精管情况。蛋白质印迹法检测BAX、BCL-2蛋白。结果:3-MCPD组与对照组比较，子代雄性鼠肛门生殖器距离缩短[（4.1±0.5）mm比（5.3±0.4）mm， P<0.001]；睾丸下降时间延迟[（25.5±0.7）d比（17.5±1.7）d， P<0.001]；睾丸脏器指数（睾丸质量/大鼠质量）和附睾脏器指数（附睾质量/大鼠质量）降低（ P<0.001）。病理结果显示3-MCPD组睾丸生精上皮及曲细精管损伤，蛋白质印迹法检测结果显示BAX升高、BCL-2降低，而对于tBHQ组各检测指标均得到改善。 结论:tBHQ对亲代3-MCPD染毒后的子代雄性大鼠生殖系统发育有保护作用，可以拮抗3-MCPD对子代雄性大鼠生殖系统发育的负面影响。

目的 探究特丁基对苯二酚(TBHQ)是否能通过调控核因子E2相关因子(Nrf2)信号通路对阿霉素诱导的慢性心脏毒性发挥保护作用.方法 将32只大鼠随机分为4组(n=8):对照组(Con组)、阿霉素组(DOX组)、特丁基对苯二酚组(TBHQ组)、阿霉素+TBHQ组(DOX+TBHQ组).DOX组和DOX+TBHQ组采用每周1次腹腔注射阿霉素(2.5 mg/kg)的方法构建慢性心脏毒性大鼠模型,连续6周;Con组和TBHQ组每周1次腹腔注射等体积0.9％NaCl溶液,连续6周.TBHQ组及DOX+TBHQ组在第1天给予阿霉素后即刻予以25 mg/kg的TBHQ溶液灌胃,每日1次,连续6周,Con组及DOX组予以等体积的ddH2O灌胃,每日1次,连续6周.给药干预后通过心脏超声观察大鼠心脏结构和功能变化;采用HE染色和Masson染色观察心脏组织形态及纤维化情况;相关试剂盒测定血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醇(MDA)水平;ELISA法检测血清白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Western blot检测心脏Nrf2及血红素加氧酶1(HO-1)蛋白的表达.结果 心脏彩超结果提示,与Con组相比,DOX组大鼠心脏室壁运动协调性减弱,运动幅度降低,左室射血分数(LVEF)及左室短轴缩短率(LVFS)减小(P＜0.05),而左室舒张末期内径(LVEDD)和左室收缩末期内径(LVESD)增大(P＜0.05);与DOX组比较,DOX+TBHQ组大鼠的LVEDD、LVESD、LVEF和LVFS均有改善(P＜0.05).HE及Masson染色结果显示,与DOX组相比,DOX+TBHQ组大鼠心肌损伤情况及心肌纤维化程度改善,胶原容积分数降低(P＜0.05).与Con组相比,DOX组大鼠血清SOD活力降低(P＜0.05),MDA、TNF-α和IL-6水平均升高(P＜0.05);与DOX组相比,DOX+TBHQ组大鼠血清SOD活力升高(P＜0.05),TNF-α、IL-6、MDA水平降低(P＜0.05).与Con组相比,DOX组大鼠心脏组织Nrf2、HO-1蛋白的表达降低(P＜0.05);DOX+TBHQ组较DOX组大鼠心脏组织Nrf2、HO-1蛋白表达升高(P＜0.05).结论 TBHQ可能通过上调Nrf2/HO-1信号通路对阿霉素诱导的大鼠慢性心脏毒性发挥保护作用.

目的 探讨重组新城疫病毒(recombinant Newcastle disease virus,rL-RVG)是否通过Nrf2-GCLC-GPX4通路引发胃癌细胞铁死亡.方法 培养人胃癌HGC-27细胞,分别用rL-RVG、新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)、PBS 溶液(对照组)处理 HGC-27 细胞后,用 CCK-8、Transwell 侵袭、细胞划痕实验检测胃癌HGC-27细胞的增殖、侵袭、迁移能力.加入铁死亡促进剂(erastin)、核因子E2相关因子2(nuclear factor E2 related factor 2,Nrf2)促进剂(TBHQ)及抑制剂(ML385)作为干预组,脂质氧化试剂盒检测各组丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;DCFH-DA荧光探针及流式细胞仪检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量;Western blot、免疫荧光法检测 Nrf2-GCLC-GPX4 通路相关蛋白表达情况.结果 与对照组比较,rL-RVG和NDV处理后,细胞的存活率均下降,呈剂量、时间依赖性,且rL-RVG处理组较为显著(P＜0.05);NDV和rL-RVG处理组胃癌HGC-27细胞迁移、侵袭能力均受到抑制,后者较前者抑制更明显(P＜0.05);与对照组比较,病毒组Nrf2、GCLC、SLC7A11、GPX4蛋白表达下降(P＜0.05),MDA水平、ROS相对表达量上升(P＜0.05),rL-RVG组上升或下降的趋势较NDV组明显,且erastin组SLC7A11、GPX4蛋白表达下降(P＜0.05);与对照组比较,TBHQ组、ML385组Nrf2、GCLC、SLC7A11、GPX4蛋白表达分别上升、下降(P＜0.05),MDA水平、ROS相对表达量分别下降、上升(P＜0.05);与 rL-RVG 组比较,rL-RVG+TBHQ 组、rL-RVG+ML385 组 Nrf2、GCLC、SLC7A11、GPX4 蛋白表达分别上升、下降(P＜0.05),MDA水平、ROS相对表达量分别下降、上升(P＜0.05).结论 重组新城疫病毒(rL-RVG)可通过Nrf2-GCLC-GPX4通路诱导胃癌细胞铁死亡的发生,抑制肿瘤细胞的生长.

目的 探讨转录因子 NF-E2 相关因子 2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)对氯化镉所致大鼠睾丸和卵巢内质网应激的反馈调节作用.方法 将 48 只 SD大鼠随机分为对照组,氯化镉低、中、高剂量组,叔丁基对苯二酚(tert-bu-tylhydroquinone,tBHQ)组,tBHQ+氯化镉低、中、高剂量组,共 8 组,每组 6 只.对照组、tBHQ组分别给予腹腔注射 0.9%生理盐水、20 mg/kg体重 tBHQ溶液;氯化镉低、中、高剂量组分别腹腔注射 1.14、2.28、4.56 mg/kg 体重氯化镉溶液;tBHQ+氯化镉低、中、高剂量组于氯化镉染毒前 120 min先行腹腔注射 20 mg/kg体重 tBHQ溶液后,分别腹腔注射 1.14、2.28、4.56 mg/kg体重氯化镉溶液.染毒 48h后处死动物,取睾丸、卵巢组织,采用 RT-PCR 和 Western blot法测定 Bip、PERK、Nrf2 mRNA 和蛋白的表达水平.结果 与 tBHQ组比较,tBHQ+氯化镉中剂量组大鼠睾丸 Nrf2 mRNA和蛋白表达明显上调(F值分别为 144.47、302.88,P<0.05),tBHQ+氯化镉低、中、高剂量组大鼠卵巢 Nrf2 mRNA 和蛋白表达均明显上调(F 值分别为 55.97、80.08,P<0.05);与同剂量氯化镉组比较,tBHQ+氯化镉中剂量组大鼠睾丸 Nrf2 蛋白表达明显上调(F=74.66,P 值<0.05),此剂量组大鼠睾丸 Bip、PERK表达水平无显著变化;tBHQ+氯化镉高剂量组大鼠卵巢 Nrf2 蛋白表达明显上调(F= 30.58,P<0.05),大鼠卵巢 Bip mRNA 和蛋白、PERK mRNA 表达均出现不同程度的下调(F 值分别为 33.13、25.28、30.24,P<0.05),且大鼠卵巢Nrf2 蛋白表达与 Bip mRNA、PERK mRNA表达均呈负相关关系(r值分别为-0.783、-0.817,P<0.05),tBHQ+氯化镉高剂量组大鼠睾丸 PERK、Nrf2 mRNA和 Bip、PERK、Nrf2 蛋白的表达均明显低于氯化镉高剂量组(F 值分别为 19.73、53.63、25.28、99.98、74.66,P<0.05).结论 在不同氯化镉染毒剂量条件下,tBHQ的干预可不同程度地诱导大鼠睾丸和卵巢的 Nrf2 表达;大鼠卵巢 Nrf2 表达的上调,可通过 PERK/Nrf2 途径减轻 ERS水平,以改善镉对卵巢组织的损害.

目的 研究miR-27b通过核因子-E2 相关因子(Nrf)2/抗氧化反应元件(ARE)信号通路影响高血压性脑出血(HICH)大鼠模型神经细胞凋亡和炎症因子产生.方法 HICH 大鼠共分为空白(SM)组、对照(HICH)组、miR-27b 抑制(HICH+ART)组、miR-27b阴性对照(HICH+AR)组、miR-27b阳性对照(HICH+TBHQ)组,荧光素酶报告分析Nrf2 是否为miR-27b的靶基因,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组miR-27b和Nrf2 表达,Western印迹检测B细胞淋巴瘤(Bcl)-2 和Bcl-2 相关X蛋白(Bax)蛋白表达,酶联免疫吸附试验检测炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β及IL-6含量,噻唑蓝(MTT)法及流式细胞仪检测神经细胞活力及凋亡情况.结果 HICH组miR-27b和Nrf2 随着时间表达趋势相反,两者存在明显的负相关性(P<0.05).与SM组相比,HICH 组、HICH+AR组Bax蛋白表达、TNF-α、IL-1β、IL-6 水平含量显著升高,Bcl-2 蛋白量显著降低(P<0.05);HICH+ATR组、HICH+TBHQ组Bax蛋白表达、TNF-α、IL-1β、IL-6 水平含量显著降低,Bcl-2 蛋白量显著升高(P<0.05).HICH+ATR 组、HICH+TBHQ 组的细胞活力显著高于 HICH 组及 HICH+AR 组(P<0.05),且细胞凋亡数目显著小于HICH 组及HICH+AR组(P<0.05).结论 通过抑制miR-27b的表达,增加Nrf2 的表达,促使Bcl-2 蛋白过表达和Bax蛋白低表达,从而减少了HICH大鼠神经细胞的凋亡,缓解了大鼠炎症反应的发生.

目的 建立药用辅料聚乙二醇6000中4种抗氧剂的定量测定方法,为聚乙二醇6000的质量控制提供技术支撑.方法 采用气质联用(GC-MS/MS)法同时检测聚乙二醇6000 中 2,6-二叔丁基对甲基苯酚(BHT)、叔丁基对羟基茴香醚(BHA)、叔丁基对苯二酚(TBHQ)、2,6-二叔丁基-4羟基苯酚(Ionox-100)4种抗氧剂的含量.使用DB-5 MS毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm);多反应监测(MRM)模式.结果 4 种抗氧剂相关系数在 0.9996～1.000;平均回收率(n = 6)为 92.7%～101.3%,RSD为 2.2%～3.0%.结论 该方法灵敏度高、专属性强,适用于聚乙二醇6000中4种抗氧剂的检测.

目的 探讨丹参酮ⅡA对脓毒症诱发的肠屏障功能障碍的保护作用及机制.方法 用100 μg/mL LPS处理Caco2细胞后,在不同时间段检测细胞通透性,用0、0.1、1、10、50、100及200 μg/mL的LPS处理Caco2细胞3 h,用Western blot法检测紧密连接蛋白ZO-1、Occludin及Claudin-1表达水平,筛选LPS处理的最佳时间和剂量.细胞经100 μg/mL LPS造模后,采用不同浓度丹参酮ⅡA干预,Western blot法检测紧密连接蛋白表达水平,RT-PCR检测炎症因子IL-17A及IL-17C mRNA水平.细胞经ERK激动剂TBHQ或PAR2激动剂SLIGRL-NH2处理后,Western blot检测ERK、p-ERK、ZO-1、Occludin及Claudin-1表达水平.结果 应用100 μg/mL LPS处理Caco2细胞3 h构建脓毒症肠屏障功能障碍细胞模型,经0.14、0.68和3.4 μM的丹参酮ⅡA干预后,ZO-1、Occludin及Claudin-1的蛋白表达水平较LPS模型组上升,IL-17A及IL-17C mRNA的表达水平下降.丹参酮ⅡA可下调细胞模型中p-ERK水平,丹参酮ⅡA干预后再加入ERK激动剂TBHQ或PAR2激动剂SLIGRL-NH2,p-ERK水平较丹参酮ⅡA治疗组上升,ZO-1、Occludin及JAM表达水平较丹参酮ⅡA治疗组下降.结论 丹参酮ⅡA能有效缓解由LPS诱导的脓毒症肠屏障功能损伤,其初步机制可能为通过抑制ERK磷酸化.