目的:探讨特丁基对苯二酚（tert-butylhydroquinone，tBHQ）对亲代3-氯-1，2-丙二醇（3-chloro-1，2-propanediol，3-MCPD）喂养后的子代雄性大鼠生殖系统发育的影响。方法:孕大鼠15只按数字随机法分为对照组、3-MCPD组和tBHQ组（3-MCPD+tBHQ）。除对照组外，其他二组大鼠自孕中期（孕7 d）开始每日灌胃3-MCPD（5.0 mg/kg），同时在tBHQ组的饲料中加入质量分数1%的tBHQ喂养。孕大鼠产下子代后，取子代雄性大鼠继续喂养，测量肛门生殖器之间距离，记录睾丸下降时间。在仔鼠性成熟时，检测血睾酮浓度、睾丸及附睾质量。病理切片观察附睾中精子活力、生精上皮、曲细精管情况。蛋白质印迹法检测BAX、BCL-2蛋白。结果:3-MCPD组与对照组比较，子代雄性鼠肛门生殖器距离缩短[（4.1±0.5）mm比（5.3±0.4）mm， P<0.001]；睾丸下降时间延迟[（25.5±0.7）d比（17.5±1.7）d， P<0.001]；睾丸脏器指数（睾丸质量/大鼠质量）和附睾脏器指数（附睾质量/大鼠质量）降低（ P<0.001）。病理结果显示3-MCPD组睾丸生精上皮及曲细精管损伤，蛋白质印迹法检测结果显示BAX升高、BCL-2降低，而对于tBHQ组各检测指标均得到改善。 结论:tBHQ对亲代3-MCPD染毒后的子代雄性大鼠生殖系统发育有保护作用，可以拮抗3-MCPD对子代雄性大鼠生殖系统发育的负面影响。

目的:观察叔丁基对苯二酚对脑缺血再灌注后大鼠线粒体通路第2个天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物（Smac）和凋亡抑制蛋白（XIAP）表达的影响。方法:2019年3-12月选取45只健康雄性SD大鼠，对大鼠进行随机编号并采用随机数表法分为假手术组、模型组与叔丁基对苯二酚组。通过结扎大鼠左颈动脉法建立脑缺血再灌注模型，并检测各组大鼠神经功能评分，剔除造模失败大鼠，每组各保留10只大鼠。分别于大鼠脑缺血再灌注后0.5 h、12 h对各组大鼠进行药物灌胃治疗，叔丁基对苯二酚组采用12.5 mg/kg叔丁基对苯二酚灌胃，假手术组与模型组采用等体积0.9%氯化钠注射液灌胃。再灌注24 h后，检测各组大鼠神经功能评分，之后处死大鼠，断头取脑。通过TUNEL法检测各组大鼠神经细胞凋亡情况；采用酶联免疫吸附法检测各组大鼠脑组织超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）表达水平；通过免疫组化法与蛋白质印迹法（Western blot）分别检测大鼠XIAP、Smac阳性细胞计数与蛋白表达水平。结果:叔丁基对苯二酚组大鼠神经功能评分为（1.36±0.49）分，明显低于模型组的（3.73±0.97）分（ t=6.896， P<0.001），缺血侧皮质区仍可见大量神经细胞凋亡，但数量少于模型组。模型组大鼠脑组织SOD水平明显低于假手术组，MDA、TNF-α、IL-1β水平明显高于假手术组［SOD：（51.94±3.46）U/mg<（70.68±2.67）U/mg， t=13.560， P<0.001；MDA：（5.69±0.78）nmol/mg>（1.20±0.96）nmol/mg， t=11.479， P<0.001；TNF-α：（89.36±9.84）pg/mg>（40.53±4.35）pg/mg， t=14.353， P<0.001；IL-1β：（41.35±6.79）pg/mg>（17.22±2.31）pg/mg， t=10.639， P<0.001］。叔丁基对苯二酚组大鼠脑组织SOD水平相对模型组明显上调，MDA、TNF-α、IL-1β水平明显下降［SOD：（51.94±3.46）U/mg<（68.84±5.03）U/mg， t=8.754， P<0.001；MDA：（5.69±0.78）nmol/mg>（2.46±0.48）nmol/mg， t=11.153， P<0.001；TNF-α：（89.36±9.84）pg/mg>（57.64±6.22）pg/mg， t=8.617， P<0.001；IL-1β：（41.35±6.79）pg/mg>（23.84±5.48）pg/mg， t=6.346， P<0.001］；模型组大鼠XIAP、Smac阳性细胞计数及表达水平均明显高于假手术组［阳性细胞计数：XIAP：（22.63±4.37）>（12.39±3.18）， t=5.992， P<0.001；Smac：（47.58±6.94）>（5.64±1.35）， t=18.759， P<0.001，蛋白表达量：XIAP：（0.53±0.08）>（0.24±0.05）， t=9.721， P<0.001；Smac：（0.92±0.15）>（0.36±0.05）， t=11.200， P<0.001］，叔丁基对苯二酚组大鼠XIAP阳性细胞计数及表达水平均明显高于模型组，Smac阳性细胞计数及表达水平均明显低于模型组［阳性细胞计数：XIAP：（36.78±5.26）>（22.63±4.37）， t=6.543， P<0.001；Smac：（31.74±4.26）<（47.58±6.94）， t=6.151， P<0.001，蛋白表达量：XIAP：（0.79±0.10）>（0.53±0.08）， t=6.420， P<0.001；Smac：（0.70±0.09）<（0.92±0.15）， t=3.977， P<0.001］。 结论:叔丁基对苯二酚能够有效减少脑缺血再灌注后神经细胞凋亡，降低脑组织氧化应激及炎性反应，其作用可能与调节XIAP、Smac信号通路有关。

目的 探究特丁基对苯二酚(TBHQ)是否能通过调控核因子E2相关因子(Nrf2)信号通路对阿霉素诱导的慢性心脏毒性发挥保护作用.方法 将32只大鼠随机分为4组(n=8):对照组(Con组)、阿霉素组(DOX组)、特丁基对苯二酚组(TBHQ组)、阿霉素+TBHQ组(DOX+TBHQ组).DOX组和DOX+TBHQ组采用每周1次腹腔注射阿霉素(2.5 mg/kg)的方法构建慢性心脏毒性大鼠模型,连续6周;Con组和TBHQ组每周1次腹腔注射等体积0.9％NaCl溶液,连续6周.TBHQ组及DOX+TBHQ组在第1天给予阿霉素后即刻予以25 mg/kg的TBHQ溶液灌胃,每日1次,连续6周,Con组及DOX组予以等体积的ddH2O灌胃,每日1次,连续6周.给药干预后通过心脏超声观察大鼠心脏结构和功能变化;采用HE染色和Masson染色观察心脏组织形态及纤维化情况;相关试剂盒测定血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醇(MDA)水平;ELISA法检测血清白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Western blot检测心脏Nrf2及血红素加氧酶1(HO-1)蛋白的表达.结果 心脏彩超结果提示,与Con组相比,DOX组大鼠心脏室壁运动协调性减弱,运动幅度降低,左室射血分数(LVEF)及左室短轴缩短率(LVFS)减小(P＜0.05),而左室舒张末期内径(LVEDD)和左室收缩末期内径(LVESD)增大(P＜0.05);与DOX组比较,DOX+TBHQ组大鼠的LVEDD、LVESD、LVEF和LVFS均有改善(P＜0.05).HE及Masson染色结果显示,与DOX组相比,DOX+TBHQ组大鼠心肌损伤情况及心肌纤维化程度改善,胶原容积分数降低(P＜0.05).与Con组相比,DOX组大鼠血清SOD活力降低(P＜0.05),MDA、TNF-α和IL-6水平均升高(P＜0.05);与DOX组相比,DOX+TBHQ组大鼠血清SOD活力升高(P＜0.05),TNF-α、IL-6、MDA水平降低(P＜0.05).与Con组相比,DOX组大鼠心脏组织Nrf2、HO-1蛋白的表达降低(P＜0.05);DOX+TBHQ组较DOX组大鼠心脏组织Nrf2、HO-1蛋白表达升高(P＜0.05).结论 TBHQ可能通过上调Nrf2/HO-1信号通路对阿霉素诱导的大鼠慢性心脏毒性发挥保护作用.

甲基丁香酚(methyleugenol,ME)是中药细辛Asari Radix et Rhizoma挥发油中主要活性成分之一,具有镇痛、麻醉、抗炎等功效,其在植物体内的生物合成是初始前体物苯丙氨酸在众多酶的催化下经过一系列中间产物而完成的过程.丁香酚-O-甲基转移酶(eugenol O-methyltransferase,EOMT)是其中的关键酶之一,可使丁香酚苯环 4 位上的羟基甲基化,从而将丁香酚转化为甲基丁香酚.该研究首次从华细辛Asarum sieboldii中克隆 1 条(异)丁香酚-O-甲基转移酶[(iso)eugenol O-methyltrans-ferase,IEMT]基因,其开放阅读框包含 1 113 bp,编码 1 个由 370 个氨基酸残基组成的蛋白质;该蛋白具有甲基转移酶特征性结构域,以及二聚化结构域;构建原核表达重组质粒pET28a(+)-AsIEMT,诱导目标蛋白表达并分离纯化蛋白,以及对目标蛋白进行体外酶学分析,结果表明,AsIEMT具有双重催化活性,既能催化丁香酚生成甲基丁香酚,也能催化异丁香酚生成甲基异丁香酚,但后者效率更高;以异丁香酚为底物时,酶反应动力学常数Km为(0.90±0.06)mmol·L-1,Vmax 为(1.32±0.04)nmol·s-1·mg-1.该研究拓展了对苯丙素类次生代谢关键酶基因的了解,为中药细辛品质形成机制的阐明提供了重要的研究基础.

目的:探究特丁基对苯二酚(tBHQ)对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及机制.方法:24只大鼠随机分为4组,即假手术组(SD组)、缺血再灌注组(ID组)、tBHQ假手术组(ST组)和tBHQ缺血再灌注组(IT组).tBHQ溶液分3次每次间隔12h手术前尾静脉注射于大鼠体内.通过蛋白质印迹法(Western Blot)和聚合酶链式反应(PCR)检测核因子NF-E2相关因子(Nrf2)和抗氧化反应原件(ARE)的表达程度.应用苏木素-伊红(HE)染色检测各组肝脏损伤程度,采用比色法检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)浓度,ELISA法测定肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平.结果:应用tBHQ后,大鼠肝脏Nrf2及ARE表达明显上升.相比于ID组,IT组血清AST、ALT,肝组织MDA水平降低,SOD水平上升,结果均有统计学意义(P＜0.05).组织染色结果显示,ID组有大量炎性细胞侵润和肝细胞坏死,IT组组织损伤程度明显减轻.结论:tBHQ通过促进Nrf2及其下游ARE的表达,起到减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤的作用.

目的 研究叔丁基对苯二酚(tBHQ)在大鼠急性矽尘暴露中的保护效果及可能机制.方法 将无特定病原体(SPF)级雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组和干预组,每组32只.模型组与干预组采用一次性非暴露气管染尘法建立大鼠矽尘模型,干预组以质量分数为1％的tBHQ溶液进行干预,对照组以1％的生理盐水进行干预,1次/d.各组分别于3、14、28、60 d处死8只大鼠,用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定大鼠肺组织中白细胞介素(IL)-1、肿瘤坏死因子(TNF)-α、羟脯氨酸(HYP)、转化生长因子(TGF)-β含量,用比色法测定大鼠肺组织和血清中丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力.结果 与对照组相比,各个时间点模型组和干预组大鼠肺组织中IL-1含量均随时间延长而升高,模型组大鼠肺组织中IL-1含量在60d时达到最高,干预组大鼠肺组织中IL-1含量在28 d时达到最高,除3d外差异均有统计学意义(P＜0.05);与对照组相比,除3d外,各个时间点模型组和干预组大鼠肺组织中TNF-α含量均增加,差异均有统计学意义(P＜0.05);与对照组相比,各个时间点模型组和干预组大鼠肺组织中HYP、TGF-β含量均随时间延长而升高,在60 d时达到最高,差异有统计学意义(P＜0.05);与模型组相比,28、60d干预组大鼠肺组织中IL-1、HYP、TGF-β含量均明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05);与对照组相比,各个时间点模型组和干预组大鼠肺组织和血清中MDA的含量均随着时间延长而升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与模型组相比,各个时间点干预组大鼠肺组织中MDA的含量均降低,差异有统计学意义(P＜0.05);与对照组相比,各个时间点模型组和干预组大鼠肺组织和血清中GSH-PX活力均随着时间延长而降低,除3d外差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 tBHQ的干预可以在一定程度上减轻大鼠接触矽尘的氧化应激损伤,提高机体的抗氧化损伤能力,降低肺组织IL-1、TNF-α、TGF-β、HYP的含量,对于急性矽尘接触导致的肺组织炎症和纤维化具有一定的阻碍和抑制作用.

目的:建立以分泌型荧光素酶Gaussia Luciferase(Gluc)为报告基因的Nrf2信号通路的报告系统.方法:以mini-ML和mini-CV为基础转录序列,通过分子克隆方法在其上游分别串联1个、2个、4个和8个抗氧化反应元件(Anti-oxidant response element,ARE),检测不同转录元件下Gluc的活性;同时以CMV启动子驱动的碱性磷酸酶(Alkinane Phosphtase,AP)为内参基因,构建报告质粒.将上述质粒转染到HaCaT细胞,在莱菔硫烷(SF)和特丁基对苯二酚(BHQ)作用的情况下,测定Gluc和AP的活性.结果:转录序列串联的ARE元件越多,Gluc活性越高;以mini-ML为基础转录序列的质粒较mini-CV为基础转录序列的质粒对抗氧化活性的干扰小;以mini-ML为基础转录序列串联8个ARE元件的HaCaT细胞中在SF和BHQ处理6 h、UV辐射后4 h时,Gluc活性最大.结论:本研究成功构建了以Gluc为报告基因的Nrf2报告系统,该系统为UV疾病细胞模型的建立奠定了基础.

目的:初步探讨大鼠急性一氧化碳中毒迟发性脑病(DEACMP)模型中干预剂叔丁基对苯二酚(tBHQ)前后脑组织海马区核因子E2相关因子2(Nrf2)及其下游靶基因血红素加氧酶1(HO-1)的变化,从而进一步研究DEACMP的发病机制,同时为其靶向治疗的研究提供一定的实验基础.方法:将240只大鼠按随机数字表法分为一氧化碳中毒组(CO组)、空气对照组(AC组)、一氧化碳+3%乙醇组(EC组)、一氧化碳+tBHQ组(TC组),再将各组大鼠按染毒后1、3、7、14、21、28 d随机分为6个亚组,随后用Morris水迷宫试验观察大鼠行为学表现,免疫组织化学及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠干预剂tBHQ前后Nrf2及HO-1的表达变化,TUNEL染色检测细胞凋亡情况.结果:CO组、EC组、TC组大鼠海马区Nrf2及HO-1表达均表现为染毒后第1天升高,3 d达高峰,随后逐渐下降的趋势,各时间点与AC组比较差异均有统计学意义,TC组与CO组比较Nrf2及HO-1表达增高,各亚组比较差异均有统计学意义.CO组、EC组、TC组大鼠与AC组比较凋亡细胞随时间明显增多,且均表现为增高-高峰(7~14 d)-降低的趋势,TC组与CO组比较凋亡细胞(7~14 d)减少,差异有统计学意义.结论:DEACMP的发生发展中Nrf2/ARE/HO-1通路起着重要作用,tBHQ特异性激活Nrf2通路达到早期保护作用,有望减少或减轻DEACMP.

目的 预测款冬花止咳化痰主要活性成分的作用靶点,探讨其多成分-多靶点-多通路的作用机制.方法 采用网络药理学方法针对己报道的款冬花中酚酸类、苯丙素类及倍半萜类主要成分(绿原酸、3,5-二咖啡酰基奎尼酸、3,4-二咖啡酰基奎尼酸、4,5-二咖啡酰基奎尼酸、芦丁、咖啡酸、槲皮素、金丝桃苷、山柰酚、β-谷甾醇、款冬酮、款冬素酯),依据反向药效团匹配方法预测款冬花活性成分靶点.通过CooLGeN数据库中己批准的止咳化痰药物靶基因的比对筛选,借助MAS 3.0生物分子功能软件进行靶点信息注释,通过Systems Dock Web Site软件将款冬花成分与靶点进行分子对接,采用Cytoscape软件构建款冬花成分-靶点-通路网络.结果 网络分析表明款冬花活性成分涉及白细胞介素-2(IL-2)、环氧合酶-2(COX-2)、入核糖核酸酶A3 (RNASE3)等18个靶点及信号转导-炎症-能量代谢等相关生物过程和代谢通路.结论 款冬花止咳化痰作用体现了中药多成分、多靶点、多途径的作用特点,该研究为深入阐释款冬花止咳化痰作用机制提供科学依据.

采用水蒸气蒸馏法提取豆腐柴叶的挥发油,通过气相色谱-质谱联用(GC-MS)对挥发油进行化学成分分析,并以还原能力、对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基清除能力及抑制微生物生长为评价指标,研究其体外抗氧化和抑菌作用.结果表明,从豆腐柴叶挥发油中共分离鉴定出化合物有26种,占挥发油总量的98.10％,主要成分有丙酸乙酯(33.70％)、2,2'-亚甲基双-(4-甲基-6-叔丁基苯酚)(9.38％)、叶绿醇(7.91％)、α-桉叶醇(3.75％)、角鲨烯(3.39％)和棕榈酸(3.34％)等.豆腐柴叶挥发油具有较强的抗氧化活性,其还原能力和对DPPH、ABTS自由基清除能力随其浓度的增加而增强;对DPPH、ABTS自由基清除作用的半数抑制浓度(IC50)分别为3.396 mg/mL和0.761 mg/mL.豆腐柴叶挥发油对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和绿脓杆菌均有显著抑制作用,挥发油的质量浓度与对4种受试菌的抑制作用呈量效关系,其最低抑制浓度(MIC)均为1.125 mg/mL.故豆腐柴叶挥发油具有较好的抗氧化和抑菌特性,为其在食品和药品方面的研究与应用提供了理论基础.