硅酮支架已应用于临床30余年，具有可现场加工、容易取出、肉芽增生较轻等优点，目前主要用于治疗气道狭窄、气道瘘。通过对硅酮支架的现场加工，可对其临床应用进行创新及探索以扩大适应证、减少并发症。本文介绍了现场套接支架或支架环技术及自制封堵支架或封堵器，前者通过外套接和内套接增加或缩小支架外径，以适应气道结构；后者通过对硅酮支架进行剪裁、缝合制成硅酮封堵支架或硅酮封堵器，主要用于封堵中心支气管管腔，治疗支气管胸膜瘘及顽固性大咯血等。随着呼吸介入学者的不断探索，将进一步优化硅酮支架的临床应用。

目的:分析非动脉炎性前部缺血性视神经病变（NAION）模型大鼠视网膜蛋白质表达变化。方法:Sprague-Dawley大鼠20只，随机分为NAION动物（rNAION）模型组、单纯激光照射组、单纯光敏剂孟加拉玫瑰红（RB）组（单纯光敏剂RB组）、正常对照组，每组各为5只，均以右眼为实验眼。采用光动力疗法建立rNAION模型。建模后3 d分离各组大鼠视网膜。采用酶切法进行样本制备；非数据依赖方式采集质谱数据；SWATH定量质谱技术对数据进行定量分析，筛选差异蛋白并进行功能及相关通路分析。结果:rNAION模型组共筛选出差异蛋白184个（表达倍数大于1.5且 P<0.05 ）。其中，上调蛋白99个，下调蛋白85个。胶质纤维酸性蛋白、鸟嘌呤核苷酸结合蛋白4、层粘连蛋白1、14-3-3γ蛋白YWHAG等蛋白表达增加；富含亮氨酸胶质瘤失活蛋白1、分泌载体膜蛋白5及网格蛋白外套蛋白AP180表达降低。差异蛋白主要参与神经生长、能量代谢、囊泡介导的转运、突触可塑性调节、凋亡及炎症反应等生物学进程。通路富集分析结果显示，差异蛋白主要参与磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B （PI3K/Akt）信号通路及补体和凝血酶联反应等信号通路。 结论:NAION的发生可能通过改变能量代谢、神经生长、突触囊泡的运输及PI3K/Akt信号通路等蛋白表达，共同调控神经细胞再生及凋亡。

为了解尿素对厚壳贻贝在海洋酸化条件下,其贝壳损伤-修复过程的影响,通过构建酸化条件下厚壳贻贝的壳损伤模型,结合外套膜转录组学技术,分析了厚壳贻贝外套膜在尿素添加前后的转录组学响应;进一步对两种条件下的厚壳贻贝外套膜开展了显微观察、游离氨基酸组成变化及细胞内钙离子水平分析.结果表明,尿素的添加有助于贻贝外套膜在酸化背景下其细胞稳态维持、能量代谢水平提升、免疫平衡调节及钙离子募集等功能.上述研究有助于了解厚壳贻贝在海洋酸化背景下其贝壳的生物矿化过程及壳损伤-修复分子策略,从中判断尿素添加对贻贝在海洋酸化条件下的贝壳生物矿化过程的可能促进机制,也为在当前海洋酸化大背景下,海洋贝类养殖业的健康发展提供了新的思路.

为探究热激蛋白70(Heat shock protein 70,HSP70)对池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)在应对不利环境胁迫时的作用,研究结合转录组测序和RACE-PCR获得池蝶蚌HSP70家族一个成员(暂命名:HSP70 B2-like)cDNA全长序列(2 209 bp),同源分析显示,该基因编码的蛋白含有HSP70家族的签名序列,C末端存在细胞质特异性调控信号EE-MD.与其他物种的HSP70具有很高的相似性.进化树分析表明,获得序列与褶纹冠蚌HSP70亲缘关系最近,并和其他软体动物HSP70 B2亚家族聚为同一进化支.实时荧光定量PCR结果表明,池蝶蚌HSP70 B2-like在检测的多个组织中均有表达,且闭壳肌中表达量最高.经热刺激(37℃)后,池蝶蚌闭壳肌、肝胰腺、外套膜和肾中的HSP70 B2-like mRNA表达快速上调,6 h达到峰值(P＜0.01),随后逐渐下降.池蝶蚌鳃和血细胞中的HSP70 B2-like mRNA表达量则是先降后升再回落.但血细胞、外套膜和肾中的HSP70 B2-like在48 h再次出现表达上调.注射嗜水气单胞菌后,HSP70 B2-like在肝胰腺、血细胞和闭壳肌的表达量均显著上升,6 h开始上调(P＜0.05),持续到24 h,到48 h回落.而鳃中的HSP70 B2-like基因的表达则是先降后升再回落.研究结果表明,池蝶蚌HSP70 B2-like是一个应激蛋白基因,可能在机体耐受高温胁迫和抗病原菌浸染时发挥重要作用.

以背角无齿蚌(Anodonta woodiana)血细胞(含颗粒细胞和透明细胞)、消化腺细胞(含上皮样细胞和圆形小细胞)、外套膜细胞(含上皮样细胞、透明细胞、圆形大细胞和圆形小细胞)、斧足细胞(含上皮样细胞、透明细胞、圆形大细胞和圆形透亮细胞)为材料,比较了上述各类细胞的原代培养特征以及不同条件下的细胞存活率,优化了细胞制备及细胞活性鉴定的方法.结果显示,上述各类组织细胞存活率受不同培养温度、培养时间和培养基种类的影响,其中,血细胞96h在20℃下、培养基2中的存活率最高,为94.67％±0.47％;消化腺细胞48 h在20 ℃下、培养基3中的存活率最高,为93.67％±1.70％;外套膜细胞48 h在15 ℃下、培养基1中的存活率最高,为93.67％±1.7％;斧足细胞48 h在15 ℃下、培养基1的存活率最高,为94.33％±0.94％.相较于25℃,在20℃和15 ℃下,4种组织细胞96 h的存活率更为理想.本研究旨在为背角无齿蚌组织细胞系的建立及贝类细胞水平毒理学的研究提供基础数据.

采用RACE技术克隆获得马氏珠母贝STA RDL3基因cDNA全长序列(Pm-STA RDL3);利用荧光定量技术检测Pm-STA RDL3基因在各个组织中的表达量.结果表明,Pm-STA RDL3基因cDNA序列全长3 655 bp,开放阅读框(ORF)长1 491 bp,编码496个氨基酸,5'非翻译区(5'UTR)长110 bp,3'UTR长2 054 bp.Pm-STARDL3氨基酸序列同源比对分析显示与华贵类栉孔扇贝(Mimachlamys nobilis) STARDL3的序列的相似度最高.SMART软件分析得出,Pm-STARDL3有STARD类蛋白特有的结构域.荧光定量PCR检测结果表明Pm-STARDL3在肝胰腺中表达量最高,其后依次是外套膜、鳃与闭壳肌,各组织的表达量差异具统计学意义(p＜0.05).

为探讨Smad1/5基因在贝类生长发育中的调控作用,利用RACE技术克隆获得文蛤Smad1/5(Mm-Smad1/5)基因的cDNA全长序列,对其生物信息学、不同组织和不同发育时期时空表达特征进行分析,并利用直接测序法分析了外显子区域SNP位点与生长性状的相关性.结果表明:Mm-Smad1/5的cDNA全长序列为1832 bp,开放阅读框1380 bp,编码459个氨基酸;氨基酸多序列比对显示,Mm-Smad1/5蛋白与太平洋牡蛎Smad5、大西洋舟螺Smad1的一致性分别为83.7%和80.2%,与人、鸡、非洲爪蟾等脊椎动物Smad 1、Smad 5氨基酸序列的一致性达到70.5%以上,说明该基因具有较高的保守性;结构域预测发现,Mm-Smad1/5含有Smads蛋白家族特有MH1、MH2两个高度保守结构域.荧光定量PCR(qRT-PCR)结果表明,Mm-Smad1/5基因在成体6个组织均有表达,尤其在斧足、外套膜中表达量显著高于其他组织(P<0.05);Mm-Smad 1/5基因在各发育时期广泛表达, 从原肠胚期开始大量表达, 一直持续到壳顶幼虫期, 而从眼点幼虫大量下降, 稚贝时期又有所上升.Mm-Smad1/5基因外显子区域SNP位点相关分析表明,共发现了9个SNP位点,其中936 G>T位点与文蛤的生长性状显著相关(P<0.05).Mm-Smad1/5基因在文蛤生长发育中发挥重要调控作用, 可作为高产良种选育的候选基因, 而生长关联SNP位点分析将为文蛤分子标记辅助育种研究奠定重要基础.

TLR13 (Toll like receptor 13)是一种TLR模式识别受体,属于TLR11家族,在机体抵抗细菌、真菌、病毒和寄生虫的感染过程起重要的作用.为研究马氏珠母贝TLR13 (PmTLR13)在马氏珠母贝免疫反应中的作用,本研究采用RACE扩增技术获得了PmTLR13基因cDNA全长序列,并且运用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术检测PmTLR13基因在马氏珠母贝7个组织中的表达模式.结果显示,PmTLR13基因序列全长2 750 bp,其中5'UTR长为25 bp,3'UTR长为34 bp,开放阅读框(ORF)为2 106 bp,编码701个氨基酸,预测其分子量约为81.22 kD,等电点为8.77.SMART分析结果显示PmTLR13具有富含亮氨酸的重复序列(LRRs)、TIR域、跨膜域和信号肽,符合典型的TLR家族特征;多序列比对结果表明物种间TLR13具有较高的保守性;RT-PCR数据分析表明,PmTLR13基因在马氏珠母贝肝胰腺、性腺、闭壳肌、鳃、血细胞、中央膜区、边缘膜区中均有表达,其中鳃中表达量最高,其次是外套膜边缘区和肝胰腺.研究结果表明,PmTLR13可能在马氏珠母贝免疫防御反应中担任着重要的角色.

清道夫受体(scavenger receptors,SRs)作为一类先天性免疫受体,在宿主固有免疫防御中起着重要的作用.本研究采用RACE技术首次从马氏珠母贝cDNA文库中克隆出一个新型的马氏珠母贝SR基因全长序列pmSR),并且运用qRT-PCR技术检测了pmSR基因在马氏珠母贝不同组织中的表达情况和哈维氏弧菌刺激后在血淋巴中的时序表达模式.结果显示,PmSR基因序列全长为954 bp,5'UTR长为107 bp,3'UTR长为169bp,开放阅读框为678 bp,其编码225个氨基酸;PmSR氨基酸序列含有α卷曲螺旋结构和具有6个保守的半胱氨酸的SRCR域(scavenger receptor cystein rich domain),具有A型SRCR结构域的典型特征.SRCR结构域氨基酸序列多序列比对显示PmSR的SRCR结构域与老鼠和斑马鱼MARCO (macrop Hagereceptor with collagenous structure,MARCO) SRCR相似度最高,分别为44％和43％;且蛋白质聚类分析表明PmSR与SR-AI (class A scavenger receptor I,SR-AI)同源性最高.qRT-PCR结果显示,PmSR基因在马氏珠母贝闭壳肌、肝胰腺、血细胞、外套膜、性腺、鳃中均有表达,在肝胰腺表达量最高;哈维式弧菌(Vibrio harveyi)刺激后,血淋巴中PmSR基因表达量在0～8 h逐渐上升,并于8h达到最大表达量,约为对照组(0 h)的4.2倍,表达量随后下降,直至16h后,其表达量再次出现显著性上升,结果具有显著性差异(p＜0.05).本研究为贝类免疫防御系统的研究提供了重要资料.

为探究三角帆蚌基质蛋白基因HcCA3的功能,本研究根据HcCA3基因的cDNA全长序列,设计并合成特定的干扰链(siRNA),将干扰链注射到三角帆蚌闭壳肌内,实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测HcCA3基因在外套膜不同部位即前端缘膜(amp)、后端缘膜(pmp)和中央膜(mc)的表达变化.在RNA干扰预实验中,筛选了三条目的基因干扰链,其中siRNA-HcCA3-1干扰链干扰效果最好;同时筛选了4条阴性对照链,发现HcCA3基因在注射不同的阴性对照链的各个组织中的表达均呈现不同程度的显著性下降,并没有筛选到合适的阴性对照链.在RNA干扰正式实验中,随着累计注射干扰链siRNA-HcCA3-1,HcCA3基因在前端缘膜和后端缘膜内出现了相似的表达特征,12d出现了敲降作用(分别为对照组的28％和30％),HcCA3基因在中央膜中表达从12d开始显著下降(为对照组的84％),18d为对照组的76％.本实验通过累积注射siRNA-HcCA3-1,成功的抑制了HcCA3基因在外套膜不同部位的表达,推测该基因参与了贝壳和珍珠的矿化,为进一步研究HcCA3基因的功能提供了基础.