目的:探讨鞘氨醇-1-磷酸转运体2(SPNS2)和富含亮氨酸重复单位的G蛋白偶联受体5(Lgr5)在喉鳞状细胞癌中的表达及其与临床病理特征和预后的关系。方法:收集2012年3月至2016年3月江苏省泰兴市人民医院82例喉鳞状细胞癌患者术后石蜡标本，采用免疫组织化学法检测82例癌组织及50例癌旁正常组织中SPNS2、Lgr5的表达状态，分析SPNS2、Lgr5的表达与患者临床病理特征及预后的关系。结果:喉鳞状细胞癌组织SPNS2高表达率为40.24%(33/82)，高于癌旁正常组织的8.00%(4/50)，癌组织Lgr5高表达率为46.34%(38/82)，高于癌旁正常组织的12.00%(6/50)，差异均有统计学意义( χ2＝16.008， P<0.001； χ2＝16.484， P<0.001)。SPNS2表达状态与肿瘤大小( χ2＝5.713， P＝0.017)、肿瘤分期( χ2＝7.071， P＝0.008)、肿瘤分化程度( χ2＝5.722， P＝0.017)及淋巴结转移( χ2＝6.595， P＝0.010)有关。Lgr5表达状态与肿瘤分期( χ2＝8.200， P＝0.004)、肿瘤分化程度( χ2＝9.435， P＝0.002)以及淋巴结转移( χ2＝16.188， P<0.001)有关。SPNS2低表达组患者的3年总生存率为90.91%，显著高于SPNS2高表达组的71.43%( χ2＝4.975， P＝0.026)。SPNS2低表达组患者的3年无进展生存率为78.79%，显著高于SPNS2高表达组的55.10%( χ2＝6.113， P＝0.013)。Lgr5低表达组患者的3年总生存率为86.84%，显著高于Lgr5高表达组的65.91%( χ2＝5.801， P＝0.016)；Lgr5低表达组患者的3年无进展生存率为78.95%，显著高于Lgr5高表达组的56.82%( χ2＝6.316， P＝0.012)。多因素Cox回归分析显示，分化程度( RR＝0.199，95% CI为0.057～0.691， P＝0.011)、肿瘤分期( RR＝0.167，95% CI为0.053～0.531， P＝0.002)、SPNS2( RR＝0.208，95% CI为0.072～0.604， P＝0.004)、Lgr5( RR＝0.198，95% CI为0.060～0.655， P＝0.008)是影响喉鳞状细胞癌患者预后的危险因素。列联相关分析显示，SPNS2和Lgr5在喉鳞状细胞癌组织中的表达呈正相关( C＝0.591， P<0.001)。 结论:SPNS2和Lgr5在喉鳞状细胞癌组织中显著高表达，与临床病理特征密切相关，且二者均是影响喉鳞状细胞癌患者预后的危险因素。

富亮氨酸ɑ-2糖蛋白-1(leucine-rich ɑ2-glycoprotein-1, LRG1)作为富含亮氨酸重复序列蛋白家族成员之一，通过转化生长因子-β(transforming growth factor-β，TGF-β)信号通路影响多种疾病，与脑缺血后的血管生成、内皮细胞凋亡和自噬、炎症反应以及血脑屏障破坏关系密切，有望成为缺血性卒中的新型标志物及治疗靶点。然而，目前探讨LRG1与缺血性卒中关系的研究较少，对于其分子机制认识尚不完善，致使对LRG1在缺血性卒中中的作用存在争议。因此，文章就LRG1-TGF-β信号通路与缺血性卒中的研究进展进行综述，期望为缺血性卒中的早期诊断和防治提供新思路。

目的:分析胰腺癌组织富含亮氨酸重复序列蛋白55(LRRC55)基因mRNA表达和启动子区甲基化状态并探讨其临床意义。方法:收集2019年5月至2021年5月间海军军医大学第一附属医院普外科37例行手术切除并经病理学证实的胰腺导管腺癌组织及其癌旁正常组织。另收集2例正常胰腺组织标本、2例健康成人外周血标本作为对照。记录患者的年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤大小、分化程度、临床分期、是否淋巴结转移及血CEA、CA19-9水平。采用亚硫酸氢盐测序法(BSP)检测2例胰腺癌组织及癌旁组织、2例正常胰腺组织、2株胰腺癌细胞株(PaTu8988、ASPC1)LRRC55基因启动子区CpG岛甲基化状态。应用实时定量PCR法检测35例胰腺癌及癌旁组织LRRC55基因mRNA的表达水平，并分析其与胰腺癌临床特征之间的关系。结果:胰腺癌组织和胰腺癌细胞株LRRC55基因启动子区CpG岛呈高甲基化状态，平均甲基化率分别为53%、71%，而癌旁组织和正常胰腺组织LRRC55基因为低甲基化状态，平均甲基化率分别为8%、11%；胰腺癌组织和对应癌旁胰腺组织LRRC55基因mRNA的相对表达量分别为0.21(0.02，1.00)、0.98(0.33，3.66)，胰腺癌组织LRRC55基因mRNA表达量显著低于癌旁组织，差异有统计学意义( P＝0.003)。相关性分析结果显示，胰腺癌组织LRRC55基因mRNA表达与肿瘤分化、CEA显著相关，而与患者年龄、性别、肿瘤部位及大小、CA19-9水平、有无淋巴结转移及临床分期均无相关性。 结论:胰腺癌组织及腺癌细胞株均存在LRRC55基因异常甲基化；LRRC55基因高甲基化与其基因表达降低有关，与胰腺癌组织的分化程度和CEA水平相关。该基因可能是胰腺癌的潜在抑癌基因。

LINGO-1是富含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白结构域的Nogo受体作用蛋白-1，在神经系统疾病中特异性表达。近年来，越来越多证据表明LINGO-1在神经胶质瘢痕形成、细胞死亡及炎症反应中发挥重要作用。LINGO-1会抑制少突胶质细胞活化，阻止轴突和髓鞘的形成和功能恢复，因此被认为是神经元存活、神经突延伸及轴突髓鞘化的负调节剂。LINGO-1水平的变化与多种神经系统疾病的发生和发展存在一定联系。该文对LINGO-1的生理功能进行阐述，并对LINGO-1在多发性硬化症、脊髓损伤、新生儿脑损伤及癫痫等神经系统疾病中的最新研究进展进行综述，旨在探寻神经系统疾病治疗的新策略。

目的:构建猪带绦虫重组质粒pET30a-富含亮氨酸重复序列（LRR）结构域15（LRRC15），原核表达纯化的LRRC15重组蛋白，制备兔多克隆抗体。方法:采用全基因合成方法，获得猪带绦虫LRRC15蛋白编码基因；将其克隆至pET30a载体，构建重组质粒pET30a-LRRC15，并进行双酶切PCR鉴定；将重组质粒转化至大肠埃希菌BL21（DE3）感受态细胞，用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达LRRC15重组蛋白，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析鉴定表达产物；用Ni-IDA亲和层析柱纯化LRRC15重组蛋白，SDS-PAGE进行分析鉴定；蛋白质印迹法（Western blot，WB）鉴定纯化重组蛋白特异性；用纯化的LRRC15重组蛋白免疫新西兰兔，制备LRRC15多克隆抗体，用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）测定纯化多克隆抗体的效价。结果:经PCR鉴定，扩增出长度为1 506 bp的条带，与LRRC15基因相符；经SDS-PAGE和WB鉴定，获得相对分子质量（ Mr）约为55.36 × 10 3的LRRC15目的蛋白；用LRRC15重组蛋白免疫新西兰兔，获得LRRC15多克隆抗体，其效价为1∶1 587 200。 结论:成功构建重组质粒pET30a-LRRC15，制备出猪带绦虫LRRC15重组蛋白，并获得了高纯度、高效价的LRRC15重组蛋白兔抗多克隆抗体。

目的:鉴定富含亮氨酸重复蛋白15(leucine-rich repeat-containing protein-15，LRRC15)来源的优势细胞毒性T淋巴细胞(cytosolic T lymphocyte，CTL)表位肽，并验证其诱导CTL特异性抗乳腺癌免疫效应。方法:收集中国医科大学附属第一医院乳腺癌外科自2010年1月至2010年7月经手术病理证实的乳腺癌组织及正常组织各30例。利用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas，TCGA)数据库和免疫组化方法评估LRRC15在乳腺癌中表达情况。利用免疫表位数据库(Immune Epitope Database and Analysis Resource，IEDB)联合SYFPEITHI数据库预测LRRC15蛋白序列中HLA-A2.1限定性CTL表位肽。利用分子对接软件MOE、T2亲和力实验和荧光共聚焦技术确认候选CTL表位肽与HLA-A2.1分子亲和性。利用酶联免疫斑点实验(enzyme-linked immunospot assay，ELISPOT)以及流式细胞术检测CTL表位肽免疫活性。利用钙黄素和Dil标记乳腺癌细胞评价CTL表位肽诱导的杀伤效应。建立乳腺癌移植瘤模型进行免疫回输，在体内评估CTL表位肽诱导的抗肿瘤效应。结果:相比于正常组织，LRRC15 mRNA在乳腺癌组织中表达水平明显增高，组间差异有统计学意义[(4.00±1.57)比(1.31±0.72)， Z＝14.85， P <0.05]；LRRC15 mRNA表达与CD8 ＋T细胞浸润呈显著正相关性( r＝0.20， P<0.001)。LRRC15蛋白在乳腺癌组织中呈现高表达，可作为乳腺癌潜在靶点。在筛选得到的3条候选CTL表位肽中，L2与HLA-A2.1分子具有最高亲和力(FI＝2.490)。与阴性肽组相比，L2能够明显提升CD8 ＋T细胞亚群比例(27.70%比45.50%)，L2负载的树突状细胞(dendritic cells，DCs)能够明显提升CD8 ＋T细胞分泌干扰素(interferon，IFN) -γ的水平(50.20%比74.90%)。在最高效靶比时，L2诱导的效应细胞对乳腺癌细胞系MDA-MB-231的杀伤效应明显高于阴性肽对照组，组间差异有统计学意义[(19.30±2.20)%比(8.60±1.40)%， t ＝1.45， P <0.05]，但对乳腺上皮细胞MCF-10A无杀伤效应( P >0.05)。L2负载DCs诱导的CTL细胞对2例乳腺癌组织来源的原代肿瘤细胞表现出明显的杀伤效应，且杀伤效应随着效靶比增高而增加。与阴性肽相比，L2诱导的CTL效应细胞使小鼠移植瘤体积明显降低[(450±110)mm 3比(725±130 )mm 3， t ＝0.36， P <0.05]，生存时间明显延长[(35±4.5)d比(29.16±1.94)d，LogRank P ＝ 0.000 ]。 结论:LRRC15来源HLA-A2.1限定性CTL表位肽L2能够在体外有效的诱导CTL免疫应答反应，并发挥抗乳腺癌效应。

目的 探讨甘草酸通对脑缺血再灌注(I/R)损伤的神经保护作用及其分子机制.方法 采用胎鼠大脑皮质神经元氧糖剥夺(OGD)模型和大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,分别在体外和体内模拟脑I/R损伤.结果 本研究证实甘草酸对神经元增殖有促进作用,对神经元焦亡有抑制作用.此外,发现甘草酸可以改善脑梗死.Western blot结果显示,甘草酸下调OGD和MCAO模型中核苷酸结合寡聚结构域、富含亮氨酸重复序列和含1个Pyrin结构域(NLRP1)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1(caspase-1)、gasdermin D(GSDMD)、IL-1 β、IL-6、TNF-α和iNOS蛋白的表达.结论 甘草酸可通过抑制NLRP1依赖性神经元焦亡,对脑I/R损伤具有神经保护作用.

目的 探讨富含亮氨酸重复序列15(LRRC15)、SUN结构域蛋白2(SUN2)在上皮性卵巢癌(EOC)组织中的表达变化及其与患者预后的关系.方法 选取102例EOC患者手术切除癌组织(观察组),以60例因卵巢良性囊肿行手术治疗的正常卵巢组织为对照组.采用免疫组化法检测癌及正常卵巢组织中LRRC15、SUN2表达.通过Spearman秩相关分析评估LRRC15与SUN2表达的相关性,采用Kaplan-Meier生存曲线和Cox回归分析LRRC15、SUN2表达与EOC患者预后的关系.结果 观察组LRRC15阳性率高于对照组,SUN2阳性率低于对照组,差异有统计学意义(P均＜0.05).观察组中LRRC15与SUN2表达呈负相关(r=-0.634,P＜0.05).LRRC15在EOC患者FIGO分期Ⅲ期、淋巴结转移中的阳性率高于FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移癌组织,SUN2在EOC患者FIGO分期Ⅲ期、淋巴结转移中的阳性率低于FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移癌组织,差异有统计学意义(P均＜0.05).LRRC15阳性组EOC患者3年总生存率低于LRRC15阴性组,SUN2阴性组EOC患者3年总生存率低于SUN2阳性组,差异均有统计学意义(P均＜0.05).FIGO分期Ⅲ期、病理分级Ⅲ级、淋巴结转移、LRRC15阳性是影响EOC患者预后的危险因素,SUN2阳性是保护因素(P均＜0.05).结论 EOC患者癌组织中LRRC15表达升高、SUN2表达降低,LRRC15、SUN2表达与EOC肿瘤进展有关,检测二者水平有助于评估EOC患者预后.

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)癌症易感性基因 15(Cancer susceptibility candidate 15,CASC15)在肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)中的分子调控机制.方法 通过生物信息学方法预测目的基因表达,并分析目的基因表达与患者生存时间的关系;收集临床HCC患者肝癌组织和癌旁组织;CCK-8、Transwell和流式细胞术实验检测HCC细胞SMMC7721 和Huh-7 的增殖、侵袭、迁移以及凋亡;双荧光素酶实验检测miR-144-3p与CASC15 和富含亮氨酸的重复序列蛋白 1(Leucine rich repeat containing protein 1,LRRC1)的靶向关系;qRT-PCR和Western blot检测mRNA和蛋白表达情况;免疫荧光实验用于蛋白定位研究;回复实验验证CASC15/miR-144-3p/LRRC1 对HCC进展的影响.体内实验验证CASC15 对HCC进展的影响.结果 TCGA数据库与qRT-PCR检测显示HCC组织和细胞中CASC15 高表达、miR-144-3p低表达、LR-RC1 高表达(P<0.05).增殖、侵袭、迁移的细胞功能实验结果表明在肿瘤发展中CASC15 和LRRC1 起到促进作用,miR-144-3p则是抑制作用,与凋亡实验结果一致(P<0.05).细胞功能实验表明CASC15 抑制miR-144-3p功能,miR-144-3p抑制LRRC1,CASC15 与miR-144-3p结合,并导致LRRC1 上调.回复实验结果表明CASC15 通过抑制miR-144-3p促进LRRC1的表达从而促进HCC细胞增殖、侵袭和迁移并抑制细胞凋亡.结论 CASC15 可能通过调节miR-144-3p/LRRC1 轴,从而促进HCC进展.

[目的]筛选玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)转录因子的互作蛋白,解析黑色素调控转录因子StMR1 调控玉米大斑病菌致病性的分子机制.为解析玉米大斑病菌侵染过程中转录因子的调控网络,阐明病菌的致病机理提供参考.[方法]收集玉米大斑病菌菌丝和孢子不同萌发阶段作为试验材料,采用Gateway方法构建玉米大斑病菌cDNA文库,使用同源重组的方法构建转录因子StMR1 的诱饵载体,采用酵母双杂交技术筛选其互作蛋白并进行一对一验证.[结果]构建的玉米大斑病菌文库插入的平均片段长度大于 1 000 bp,初级文库及次级文库的库容量为 1.2×107 和 1.04×107 CFU,重组率为 100%,可以用于酵母双杂交筛选.成功构建可以用于筛库的诱饵载体pGBKT7-StMR1,经初筛与复筛得到 3 个互作蛋白,一对一验证短链脱氢酶、糖基转移酶、富含亮氨酸重复序列蛋白均与转录因子StMR1 存在互作.[结论]成功构建了丰富度高且质量好的玉米大斑病菌cDNA文库并筛选到了与转录因子StMR1 互作的蛋白.