寡肽转运蛋白1(PEPT1 )是一种具有转运小分子肽功能的载体蛋白。PEPT1在多种肿瘤中表达，并能靶向转运小肽类物质进入肿瘤细胞。以PEPT1为载体可特异性地将抗肿瘤药物递送至肿瘤细胞，减少药物对正常组织的毒副作用，最大程度地发挥药效。此外PEPT1还可介导小肽类肿瘤放射性示踪剂和肿瘤光动力治疗分子的转运，为肿瘤诊断和光动力治疗提供了新思路。从PEPT1在肿瘤中的表达，PEPT1介导抗肿瘤药物、肿瘤放射性示踪剂和肿瘤光动力治疗分子的靶向递送等几个方面综述了近年来PEPT1在肿瘤靶向治疗研究中的应用进展，并对其应用前景进行展望。

目的:探讨胆碱能抗炎通路在脑肠肽Ghrelin调控脓毒症大鼠小肠上皮靶向寡肽转运体1（PepT1）表达中的作用。方法:将100只成年雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、脓毒症组、脓毒症+迷走神经离断组、脓毒症+Ghrelin组、脓毒症+迷走神经离断+Ghrelin组，每组20只。假手术组大鼠开腹后仅分离盲肠，不结扎和穿孔；脓毒症组大鼠行盲肠结扎穿孔术（CLP）制备脓毒症动物模型；脓毒症+迷走神经离断组大鼠CLP的同时行迷走神经离断术；脓毒症+Ghrelin组大鼠行CLP制模后立即静脉注射Ghrelin 100 μmol/L；脓毒症+迷走神经离断+Ghrelin组大鼠行CLP和迷走神经离断术后立即静脉注射Ghrelin，给予剂量及方法同脓毒症+Ghrelin组。各组取10只大鼠观察术后7 d生存情况。各组其余10只大鼠于术后20 h处死取静脉血和小肠组织，观察腹腔肠道情况，透射电镜下观察小肠上皮细胞损伤情况，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定血清及小肠组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）含量；制备小肠黏膜刷状缘囊泡（BBMV），采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）及蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测小肠上皮PepT1的mRNA和蛋白表达。结果:假手术组术后7 d大鼠全部生存；脓毒症组大鼠7 d累积生存率明显低于假手术组（20%比100%， P<0.05）；Ghrelin干预后可改善大鼠累积生存率（与脓毒症比较：40%比20%， P<0.05），但迷走神经离断后则减弱了Ghrelin的保护作用（与脓毒症+Ghrelin组比较：10%比40%， P<0.05）。与假手术组比较，脓毒症组大鼠小肠和盲肠呈暗红色，肠管肿胀积气，透射电镜下可见小肠上皮细胞损伤严重，血清及小肠组织TNF-α、IL-1β含量明显升高，小肠上皮PepT1的mRNA和蛋白表达水平均明显下降，说明脓毒症大鼠模型制备成功。脓毒症大鼠迷走神经离断后肠管肿胀积气情况加重，导致大鼠全部死亡。与脓毒症组比较，脓毒症+Ghrelin组大鼠腹腔情况明显好转，透射电镜下可见小肠上皮细胞损伤明显减轻，血清及小肠组织TNF-α、IL-1β含量明显下降〔血清TNF-α（ng/L）：253.27±23.32比287.90±19.48，小肠组织TNF-α（ng/L）：95.27±11.47比153.89±18.15，血清IL-1β（ng/L）：39.16±4.47比54.26±7.27，小肠组织IL-1β（ng/L）：28.47±4.13比42.26±2.59，均 P<0.05〕，小肠上皮PepT1 mRNA和蛋白表达水平明显上调〔PepT1 mRNA（2 -ΔΔCt）：0.66±0.05比0.53±0.06，PepT1蛋白（PepT1/GAPDH）：0.80±0.04比0.60±0.05，均 P<0.05〕；与脓毒症+Ghrelin组比较，脓毒症+迷走神经离断+Ghrelin组实施迷走神经阻断后，Ghrelin减轻脓毒症大鼠炎症因子释放的作用明显减弱〔血清TNF-α（ng/L）：276.58±19.88比253.27±23.32，小肠组织TNF-α（ng/L）：144.28±12.99比95.27±11.47，血清IL-1β（ng/L）：48.15±3.21比39.16±4.47，小肠组织IL-1β（ng/L）：38.75±4.49比28.47±4.13，均 P<0.05〕，失去了对小肠上皮PepT1表达的上调作用〔PepT1 mRNA（2 -ΔΔCt）：0.58±0.03比0.66±0.05，PepT1蛋白（PepT1/GAPDH）：0.70±0.02比0.80±0.04，均 P<0.05〕，且小肠上皮细胞损伤加重。 结论:Ghrelin可通过促进胆碱能神经元抑制炎症因子的释放，促进PepT1的转录与翻译，从而在脓毒症中发挥保护作用。

寡肽转运体(PEPTs)属于溶质转运体(SLC)大家族,以H+梯度为驱动力,包括PEPT1和PEPT2.PEPT1是低亲和力、高容量转运蛋白,主要表达于小肠;而PEPT2是高亲和力、低容量的转运蛋白,主要在肾脏、脑和肺中表达,在生物体中分布较广.PEPTs除重吸收二肽和三肽以及维持脑中神经肽的稳态作用外,还能够吸收和处置许多重要的化合物,如一些氨基头孢菌素、血管紧张素转化酶抑制剂、抗病毒前药等,而且PEPTs也与一些肠道疾病和癌症相关.因此综述了PEPTs在生理、药物转运中的重要作用及临床相关性.

寡肽转运蛋白1 (oligopeptide transporter 1,PepT1;solute carrier family 15 member 1,SLC15A1)是一种主要存在于小肠上皮细胞的质子依赖型转运蛋白质,转运底物主要为蛋白质水解产物中的二肽、三肽以及与二肽、三肽结构类似的一些化合物PepT1的研究有助于促进药物生物利用度的提高,对于肿瘤的治疗也具有十分重要的意义.现主要从PepT1的晶体结构、靶向前药、转运底物、相互作用的蛋白质及PepT1的疾病应答机制等几方面展开综述.

目的 研究帕拉米韦及其拟肽类衍生物的大鼠小肠吸收机制,筛选出膜渗透性最大的衍生物.方法 采用大鼠在体单向灌流法研究帕拉米韦拟肽类衍生物的小肠吸收,采用高效液相色谱法测定药物和酚红的浓度.建立lgD预测值和lgP之间的关系.结果 帕拉米韦拟肽类衍生物的膜渗透系数都比帕拉米韦高,其中帕拉米韦L-异亮氨酸衍生物具有最高的膜渗透性;寡肽转运蛋白(PEPT1)典型底物甘氨酰肌氨酸能显著降低帕拉米韦拟肽类衍生物的小肠吸收,而L-缬氨酸不具有这种能力.结论 帕拉米韦拟肽类衍生物是PEPT1的底物,它们在大鼠小肠内的吸收是PEPT1介导的主动转运过程.

目的:探讨罗格列酮对脓毒症大鼠凝血功能、炎性介质及对肠道黏膜组织中PepT1蛋白表达的干预.方法:将45只SD大鼠随机均分为3组:假手术组、模型组和实验组,模型组和实验组采用盲肠结扎穿孔法建立脓毒症大鼠模型,假手术组仅进行盲肠探查.实验组术前给予20 mg·kg-罗格列酮灌胃,其余各组大鼠均灌胃等量生理盐水.分别于术后0,24,48 h采用全自动血凝分析仪检测大鼠凝血功能指标水平、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清炎性介质水平;蛋白免疫印迹(WB)法检测大鼠空肠黏膜组织中寡肽转运蛋白1(PepT1)蛋白表达.结果:术后24 h、48 h模型组和实验组大鼠PAI-1水平高于假手术组,PT、APTT较假手术组延长(P＜0.05),其中实验组大鼠PT、APTT较模型组缩短、PAI-1水平均低于模型组(P＜0.05).术后24 h、48 h模型组和实验组大鼠血清IL-10水平低于假手术组,TNF-α水平高于假手术组(P＜0.05),且实验组大鼠血清IL-10水平高于模型组,TNF-α水平低于模型组(P＜0.05).假手术组、模型组和实验组大鼠空肠黏膜组织中PepT1蛋白相对表达量分别为0.86±0.29、0.52±0.13、0.79±0.22.与假手术组比,模型组和实验组大鼠空肠黏膜组织中PepT1蛋白相对表达量降低(P＜0.05);与模型组比,实验组大鼠空肠黏膜组织中PepT1蛋白相对表达量升高(P＜0.05).结论:罗格列酮可调控脓毒症大鼠炎性介质水平,改善凝血功能,其干预机制与增加肠道黏膜组织中PepT1蛋白表达、改善肠道功能有关.

目的:比较金钗石斛细粉和超微粉中生物碱类成分在大鼠体内的血药浓度,考察不同粒径金钗石斛对肠道转运体基因表达的影响.方法:将36只大鼠随机分为空白组、金钗石斛细粉组(0.25 g·kg-1)和金钗石斛超微粉组(0.25 g·kg-1),每6h灌胃1次,连续灌胃5d,收集大鼠血浆和小肠样本.血浆样本分析采用UPLC-MS,Hypersil Gold C18色谱柱(2.1 mm×150 mm,1.9μm),以0.1％甲酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱;电喷雾离子源(ESI)正离子模式检测.采用实时荧光定量聚合酶链式反应分析肠道转运体多药耐药蛋白1(MDR1),寡肽转运蛋白1(PEPT1),有机阳离子转运蛋白2(OCT2),乳腺癌耐药蛋白1(BCRP1),单羧酸转运蛋白1(MCT1)和多药耐药相关蛋白2(MRP2)的基因表达情况.结果:灌胃给予金钗石斛细粉和超微粉后,在大鼠血浆中能检测出石斛碱、石斛氨碱和mubironine B.金钗石斛超微粉组血浆中石斛碱和石斛氨碱的质量浓度比金钗石斛细粉组显著增加(P＜0.05).与空白组比较,金钗石斛细粉和超微粉均能显著抑制BCRP1的基因表达(P＜0.05),且金钗石斛超微粉组较细粉组表达更低(P＜0.05);金钗石斛细粉还能显著上调MDR1的基因表达(P＜0.05),而金钗石斛超微粉则对MDR1基因表达的影响不显著.结论:与金钗石斛细粉相比,金钗石斛超微粉灌胃后在大鼠体内石斛碱和石斛氨碱的血药浓度升高,这可能与肠道转运体MDR1和BCRP1有关,为金钗石斛药材粒径的选择提供了实验依据.

前期研究发现在Fe2+和Cu2+胁迫下,OPT基因转录表达水平会有较大的变化.为进一步探究这两种金属对OPT基因的影响,分析了不同浓度Fe2+和Cu2+胁迫下灵芝寡肽转运蛋白基因家族的转录表达水平.以灵芝荣保1号为实验材料,设置不同浓度梯度(0、50、100、200和400 mg/L)Fe2+和Cu2+进行液体静置培养,分别于15 d和30 d收集样品,测定生物量和多糖含量,利用实时荧光定量PCR技术分析OPT基因的转录表达水平.结果表明,Fe2+对灵芝的生长有一定的促进作用,Cu2+则对其有抑制作用.两种金属在实验用的浓度范围内对于灵芝多糖含量在培养前期表现出抑制作用,后期则有一定的促进作用.除未检测到转录本的3个OPT基因(OPT7、OPT8和OPT9),其余OPT基因的转录表达均有差异性.培养前期(15 d),Cu2+胁迫下OPTs基因表达水平较低且差异不明显,Fe2+胁迫下OPTs基因表达水平差异较大;培养后期(30 d),Cu2+胁迫下OPTs基因表达水平较15 d的样品明显增加,且存在差异,Fe2+胁迫下绝大多数OPTs基因均在浓度为200 mg/L下转录表达水平最高.实验证明,不同浓度Fe2+和Cu2+对灵芝的生物量与多糖含量存在不同程度的影响,同时OPT基因在转录水平上也做出了不同的响应,表明其在灵芝适应与吸附外界金属离子的过程起到了重要的作用.

[目的]在乳酸乳球菌NZ9000中异源表达德氏乳杆菌保加利亚亚种中由双组分系统TCS1(JN675228/JN675229)调控的与酸适应相关基因,进而探究德氏乳杆菌保加利亚亚种应对酸胁迫的机制.[方法]通过逆转录聚合酶链式反应和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳验证由德氏乳杆菌保加利亚亚种TCS1调控的与酸适应相关基因中腺嘌呤磷酸核糖转移酶(aprt)、D-丙氨酸-D-丙氨酸连接酶(ddl)、寡肽ABC转运蛋白(oppDII)和延伸因子Ts(tsf)在乳酸乳球菌NZ9000中的表达情况.酸处理实验验证基因表达对宿主菌酸胁迫耐受能力的影响.并采用酵母双杂交验证双组分系统TCS1与表达的酸适应相关基因之间的互作关系及具体的互作部位.[结果]结果表明,乳酸乳球菌NZ9000中成功表达了aprt、ddl、oppDII和tsf aprt、ddl基因使重组菌对酸胁迫的抗性分别提高了75倍和114倍.oppDII和tsf基因的表达对重组菌株的耐酸能力没有明显影响.酵母双杂交实验表明TCS1中的组氨酸蛋白激酶HPK1与Dd1之间存在相互作用,且HPK1-C结构域是二者相互作用的关键区域.[结论]aprt和ddl过表达菌株酸刺激的适应能力显著高于对照菌株,该研究结果可为德氏乳杆菌保加利亚亚种及类似菌株耐酸性特性的获得策略提供参考.

目的 观察具有神经毒性的寡聚肽Aβ42对体外血脑屏障通透性及转运Aβ的影响以及清开灵的干预作用.方法 通过体外培养Balb/c小鼠脑微血管内皮细胞形成血脑屏障,随机分为正常对照组(加入DMEM)、模型组(加入Aβ42)和清开灵组(加入Aβ42+清开灵),测定各组TEER值、HPR 2小时通透率,用ELISA法检测各孔Aβ40浓度值,用Western blot法检测RAGE、LRP-1、Claudin-5、Occludin、PKC和ERK的表达水平.结果 与正常组比较,模型组TEER值、claudin-5的表达显著降低(P＜0.05,0.01),HRP、Aβ40的透过量、RAGE、PKC蛋白的表达量明显增加(P＜0.01);与模型组比较,清开灵能够增加TEER值(P＜0.05)、claudin-5的表达(P＜0.01),抑制HPR和Aβ40的透过量(P＜0.05,0.01),明显减少RAGE、PKC蛋白表达(P＜0.01).结论 清开灵注射液对血脑屏障的结构和功能均有保护作用,通过明显减少RAGE表达,增加Claudine-5表达,分别从细胞内转运途径和细胞旁转运途径抑制Aβ的透过,阻断AD发病过程中的恶性循环,这主要与抑制PKC信号通路有关.