目的:探讨微生态制剂联合门冬氨酸鸟氨酸对肝硬化并发肝性脑病患者的安全性及治疗效果。方法:选取2017年1月至2021年12月华北理工大学附属医院住院的肝性脑病患者72例，按照组间性别、年龄可比的原则，采用随机数字表法分为观察组（36例）和对照组（36例）。对照组给予门冬氨酸鸟氨酸治疗，观察组给予微生态制剂联合门冬氨酸鸟氨酸治疗。观察两组患者疗效及其对血清炎症因子、肠道菌群和肠黏膜屏障功能的影响。结果:观察组患者治疗的总有效率高于对照组［97.22%（35/36）比83.33%（30/36）］，组间差异无统计学意义（χ 2=2.53， P=0.112）。治疗后与治疗前差值治疗组患者较对照组患者丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase，ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase，AST）、总胆红素（total bilirubin，TBIL）、血氨、白细胞介素（interleukin，IL）6、IL-8、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor，TNF-α）、C反应蛋白（C reactive protein，CRP）、肠杆菌、肠球菌含量、内毒素、D-乳酸、二胺氧化酶、数字连接实验（digital connection experiment，NCT）时间均明显降低［（-130.89±31.67）U/L比（-98.64±43.41）U/L，（-137.81±31.92）U/L比（-79.58±45.42）U/L，（-57.13±21.07）μmol/L比（-45.92±18.11）μmol/L，（-164.06±19.30）μmol/L 比（-148.98±12.97）μmol/L，（-5.35±2.30）ng/L比（-2.18±2.77）ng/L，（-5.51±2.07）μmol/L 比（-3.72±1.50）ng/L，（-12.60±3.65）ng/L比（-7.97±5.86）ng/L，（-45.95±20.34）mg/L比（-21.14±19.09）mg/L，（-2.70±1.53）比（-1.31±2.47），（-2.50±1.26）比（-1.39±1.97），（-0.32±0.09）EU/ml比（-0.19±0.09）EU/ml，（-47.58±18.52）nmol/L比（-32.31±22.21）nmol/L，（-3.44±1.06）U/ml比（-1.86±1.30）U/ml，（-31.75±10.09）s比（-14.58±10.10）s］；而双歧杆菌、乳杆菌、数字符号试验（digit symbol test，DST）评分明显升高［（2.77±1.76）分比（1.13±2.06）分，（3.23±1.61）分比（1.06±2.31）分，（32.58±5.72）分比（16.33±6.16）分］，差异均有统计学意义（ t值分别为3.60、6.29、2.42、3.89、5.28、4.21、4.03、5.34、2.87、2.86、6.11、3.17、5.63、7.21、3.61、4.64、11.59， P值分别为0.001、<0.001、0.018、<0.001、<0.001、<0.001、<0.001、<0.001、0.005、0.006、<0.001、0.002、<0.001、<0.001、0.001、<0.001、<0.001）。 结论:微生态制剂联合门冬氨酸鸟氨酸治疗肝性脑病患者疗效显著，可以明显改善患者肝功能和认知功能，降低血氨水平，抑制炎症反应，改善肠道菌群和肠黏膜屏障功能，安全性较好，值得临床推广。

目的 基于TLR4/NF-κB/MLCK通路研究百合地黄汤对对氯苯丙氨酸(PCPA)及多因素刺激所致失眠伴肠道菌群失调小鼠的治疗作用及机制,为临床用药提供理论依据.方法 将 84 只KM小鼠随机分为正常组、模型组、阳性药物组(地西泮,1.38 mg·kg-1)、百合组(2.25 g·kg-1)、地黄组(2.25 g·kg-1)、百合地黄汤组(4.5 g·kg-1).采用夹尾 2 min、昼夜颠倒 24 h、垫料潮湿 24 h、45°鼠笼倾斜 24 h、交替鼠笼 24 h、禁食不禁水 24 h、冷水浴 3 min等多因素刺激 4 周结合PCPA腹腔注射 2 d共同制备失眠小鼠模型.模型复制成功后,给予相应的药物治疗.采用高架十字迷宫系统观察小鼠的焦虑样行为;通过翻正反射实验观察睡眠潜伏期和睡眠持续时间;16sRNA测序法分析小鼠肠道菌群组成结构;液相色谱-质谱联用(LC-MS)检测脑和结肠γ-氨基丁酸(GABA)、谷氨酸(Glu)、色氨酸(Trp)、5-羟色氨酸(5-HTP)、5-羟色胺(5-HT)的浓度变化;免疫组织化学法检测结肠中闭锁小带蛋白 1(ZO-1)、闭合蛋白(Occludin)的表达情况;实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测结肠组织中基因白细胞介素 1β(IL-1β)、白细胞介素 6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、ZO-1、Occludin、Toll样受体 4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的表达情况;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测结肠上皮组织中蛋白TLR4、NF-κB、磷酸化-核因子κB(p-NF-κB)、MLCK、肌球蛋白轻链(MLC)和磷酸化-肌球蛋白轻链(p-MLC)表达情况.结果 与正常组小鼠比较,模型组小鼠在高架十字迷宫中进入开臂区域的距离、在开臂区域停留的时间明显缩短(P＜0.05);睡眠潜伏期明显延长、睡眠持续时间明显缩短(P＜0.05);肠道菌群的丰富度、均匀度降低(P＜0.01);脑内神经递质GABA、Trp、5-HTP、5-HT浓度明显降低(P＜0.01),Glu浓度明显升高(P＜0.01);结肠中GABA、Glu浓度明显降低(P＜0.01),Trp、5-HTP、5-HT浓度明显升高(P＜0.01);结肠组织炎性因子 IL-1β、IL-6 以及 TNF-α基因表达水平明显升高(P＜0.01),ZO-1、Occludin基因和蛋白表达水平明显降低(P＜0.01),通路中TLR4、NF-κB、MLCK基因表达水平明显升高(P＜0.01),TLR4、p-NF-κB、MLCK、p-MLC蛋白表达水平明显升高(P＜0.01).与模型组小鼠比较,百合地黄汤能够明显延长失眠小鼠在高架十字迷宫中进入开臂区域距离、在开臂区域停留的时间(P＜0.05);明显缩短睡眠潜伏期、增加睡眠持续时间(P＜0.05);肠道菌群的丰富度、均匀度升高(P＜0.01);升高脑内神经递质GABA、Trp、5-HTP、5-HT浓度(P＜0.05,P＜0.01),降低Glu浓度(P＜0.01);升高结肠中GABA、Glu浓度(P＜0.01),降低Trp、5-HTP、5-HT浓度(P＜0.05,P＜0.01);下调IL-1β、IL-6、TNF-α基因表达水平(P＜0.01),上调ZO-1、Occludin基因和蛋白表达水平(P＜0.01),下调通路中TLR4、NF-κB、MLCK基因表达水平和TLR4、p-NF-κB、MLCK、p-MLC蛋白表达水平(P＜0.01).结论 百合地黄汤能够有效治疗失眠伴肠道菌群失调症状,其作用机制可能与调节脑和肠内神经递质紊乱、下调TLR4/NF-κB/MLCK信号通路表达、上调紧密连接蛋白表达、降低炎症反应,进而修复肠黏膜机械屏障有关.

目的 探讨丹皮酚基于Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白 1(Kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)/核因子 E2 相关因子 2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)/抗氧化反应元件(antioxidant response element,ARE)信号通路改善乙醇刺激所致小鼠肝、脑炎症和氧化应激损伤的作用机制.方法 将 C57BL/6 小鼠随机分为空白组,模型组,水飞蓟宾组(36.8 mg/kg),丹皮酚高、中、低(480、240、120 mg/kg)剂量组,每组 15 只;适应期各组小鼠自由饮用 Liber-DeCarli对照液体饲料,模型复制期空白组小鼠自由饮用 Lieber-DeCarli对照液体饲料,其他组小鼠自由饮用 Lieber-DeCarli乙醇液体饲料并连续灌胃相对应的药液 10d;测定小鼠血脂[三酰甘油(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)]、肝功能[丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)]、炎症因子[白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-1α、IL-1β、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α)]以及氧化应激指标[过氧化氢酶(catalase,CAT)、还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、超氧化物歧化酶(super oxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)]水平;采用苏木精—伊红染色法、油红 O染色观察各组小鼠肝、脑组织形态变化;采用 Western blot法、免疫荧光法以及 qRT-PCR法检测小鼠肝、脑组织Keap1/Nrf2/ARE信号通路相关蛋白及 mRNA表达水平.结果 与模型组比较,丹皮酚高剂量组小鼠体质量显著增加(P＜0.05),血脂(TG、TC)、肝功能(ALT、AST)、炎症因子(IL-6、IL-1α、IL-1β、TNF-α)、氧化应激指标(CAT、GSH、SOD)水平显著升高(P＜0.05),MDA含量显著降低(P＜0.05);小鼠肝、脑组织 Nrf2、血红素氧合酶-1、醌 NADH脱氢酶 1、谷氨酸—半胱氨酸连接酶催化亚基蛋白及 mRNA表达水平显著升高(P＜0.05),Keap1 蛋白及 mRNA表达水平显著降低(P＜0.05);丹皮酚高剂量组小鼠肝、脑组织病理状态明显改善.结论 丹皮酚能显著减轻乙醇诱导的小鼠肝、脑炎症和氧化应激损伤,其机制可能是通过调控 Keap1/Nrf2/ARE信号通路实现的.

目的 探讨盐酸小檗碱对肝纤维化大鼠肠黏膜机械屏障的影响及其机制.方法 将雄性SD大鼠60只随机分为正常对照组、模型组和盐酸小檗碱组,每组20只.模型组和盐酸小檗碱组采用40％CC14橄榄油溶液皮下注射建立大鼠肝纤维化模型,盐酸小檗碱组于模型建立第4周予盐酸小檗碱150 mg/(kg·d)灌胃干预动物.各组大鼠肝组织HE及Masson三色染色观察肝组织炎症活动度及纤维化程度;各组大鼠小肠组织HE染色观察黏膜上皮绒毛结构及排列情况;全自动生物化学检测仪测定各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST),总胆红素(TBIL)及白蛋白(ALB)含量;分光光度法测定各组大鼠血二胺氧化酶(DAO)活性;酶联免疫法测定各组大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α);免疫组织化学法及实时荧光定量PCR检测各组大鼠小肠黏膜紧密连接蛋白Occludin蛋白及mRNA的表达.结果 与正常对照组比较,模型组和盐酸小檗碱组肝组织G评分及S评分均显著升高(P＜0.05);盐酸小檗碱组显著低于模型组(P＜0.05).与正常对照组比较,模型组和盐酸小檗碱组小肠黏膜结构不完整,肠绒毛排列不整齐;盐酸小檗碱组较模型组小肠黏膜结构完整,肠绒毛排列整齐.与正常对照组比较,模型组及盐酸小檗碱组血清ALT、AST、TBIL、DAO、TNF-α均升高(P＜0.05);盐酸小檗碱组血清ALT、TBIL、DAO、TNF-α均低于模型组(P＜0.05).与正常对照组比较,模型组和盐酸小檗碱组血清ALB、小肠Occludin蛋白及mRNA的表达降低(P＜0.05),盐酸小檗碱组高于模型组(P＜0.05).结论 肝纤维化时肠黏膜机械屏障受损,盐酸小檗碱能减轻肝纤维化时肠黏膜机械屏障的损伤,其机制可能与降低TNF-α水平有关.

目的 探讨酪酸梭菌对肝内胆汁淤积大鼠的肠黏膜通透性和紧密连接蛋白的影响.方法 将40只SD大鼠随机分为正常(Con)组、模型(Mod)组、酪梭菌低(CBL)、高(CBH)剂量组,每组10只.除正常组外,其余各组大鼠均灌胃α-荼基异硫氰酸盐复制肝内胆汁淤积模型,各组大鼠于造模当日开始灌胃相应药物,每天1次,连续5 d.末次给药后测定大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、二胺氧化酶(DAO)的活性和总胆红素(T-BIL)的含量,观察肝组织病理学变化,Werstern blotting分析小肠组织中紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的蛋白表达.结果 与Con组比较,Mod组血清中ALT、AST、DAO及T-BIL水平显著升高,小肠组织中Occludin和ZO-1蛋白表达明显降低(P<0.05);与Mod组相比,CBL组、CBH组大鼠血清中ALT、AST、DAO及T-BIL含量明显降低,肝组织病理学明显改善,小肠组织中Occludin和ZO-1的蛋白表达增加(P<0.05).结论 酪酸梭菌对胆汁淤积大鼠肝损伤具有一定的保护作用,能改善其肠黏膜通透性,其机制可能与增加小肠组织中紧密连接蛋白的表达有关.

目的:探讨红景天苷(SALD)对对乙酰氨基酚(APAP)诱导肝脏损伤模型小鼠的保护作用及机制.方法:将60只小鼠随机分为正常组(生理盐水)、模型组(生理盐水)、阳性组(乙酰半胱氨酸,150 mg/kg)和SALD低、中、高剂量组(100、200、300 mg/kg),每组10只.除正常组外,其余各组小鼠均灌胃500 mg/kg的APAP复制肝损伤模型.造模前1 h,各组小鼠灌胃相应药物,连续5 d.给药结束后,测定小鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)含量,苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织病理学改变,Western blot法检测肝组织中Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)(细胞核内)、核转录因子NF-E2相关因子(Nrf2)(细胞核内)、血红素氧合酶1(HO-1)(细胞质中)、还原型辅酶/醌氧化还原酶(NQO1)(细胞质中)以及谷氨酸半胱氨酸连接酶(GCLC)(细胞质中)蛋白表达.结果:与正常组比较,模型组小鼠血清中ALT、AST、ALP和LDH含量显著增加(P<0.01),肝组织发生肝小叶结构紊乱辨别不清、肝细胞嗜酸性坏死等病变,肝组织中Nrf2、Keap1、HO-1、GCLC蛋白表达水平显著降低(P<0.05).与模型组比较,除SALD低剂量组小鼠血清中LDH含量减少和阳性组小鼠肝组织中Nrf2、Keap1表达水平升高不显著外,其余各组小鼠上述指标均显著改善(P<0.05或P<0.01),且各给药组小鼠肝组织中NQO1蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01);各给药组小鼠肝组织病理变化均得到不同程度好转.结论:SALD对APAP诱导的肝损伤具有保护作用;其机制可能与促进Keap1、Nrf2入核,增强肝组织中NO-1、NQO1和GCLC蛋白表达有关.

目的:观察高脂饮食诱导的脂肪肝小鼠骨组织微结构的改变及可能机制.方法:20只4周龄C57雄性小鼠随机分成2组,标准饮食组(control,n=9)喂食标准饮食,高脂饮食组(HFD,n=11)喂食高脂食物诱导小鼠脂肪肝模型.12周实验结束后采集小鼠的血液、肝脏、股骨、胫骨样本.检测血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)浓度;肝脏组织经HE和油红O染色,测定肝脏的甘油三酯(TG)及总胆固醇(TC)含量;采用micro-CT高分辨率扫描模式对两组骨样本数据进行比较,数据包括:骨总体积(TV)、骨量(BV)、骨体积分数(BV/TV)、连接密度(Conn.D)、结构模型指数(SMI)、骨小梁数目(Tb. N)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁间距(Tb.Sp)、表观密度(Ap.Dens)、实质密度(Mat.Dens)及各向异性程度(DA),部分股骨HE染色测量骨髓脂肪含量.结果:高脂饮食组小鼠均成功建立脂肪肝模型;与标准饮食组比较,高脂饮食组小鼠的股骨具有低TV [(2.128 ± 0.591)mm3 vs.(3.570 ± 0.330)mm3,P<0.001]、Tb.N[(1.769 ± 0.218)/mm vs.(2.284 ± 0.726)/mm,P=0.030]、SMI(2.950± 0.242 vs. 3.820 ± 0.729,P=0.004)以及较高的Tb.Sp[(0.595 ± 0.083)mm vs.(0.472 ± 0.116)mm,P=0.013];高脂饮食组胫骨TV [(1.127 ± 0.338)mm3 vs.(1.741 ± 0.683)mm3,P=0.017]和SMI(2.431 ± 0.501 vs. 3.188 ± 0.465,P=0.003)也低于标准饮食组.骨髓组织形态分析后发现高脂饮食组小鼠骨髓中每mm2脂肪滴的数目(AD)显著高于标准饮食组(5.5 ± 2.2 vs. 2.6 ± 0.5,P=0.042),AD的多少与TV显著相关(股骨:r=-0.756,P=0.030;胫骨:r=-0.771,P=0.025).结论:脂肪肝对小鼠的骨微结构有着不良影响,而骨髓的脂化可能是导致这一病理现象的潜在原因.

变异链球菌是口腔主要的龋病病原菌.丙氨酸消旋酶通过合成右旋丙氨酸(D-alanine,D-ala)参与细菌细胞壁肽聚糖的生物合成过程,与细菌性疾病密切相关,近年来成为抗菌药物的又一理想靶位.D-环丝氨酸(D-cycloserine,DCS)是丙氨酸消旋酶不可逆性抑制剂.本研究通过聚合酶链反应克隆变异链球菌UA159的smu.1834c基因,经过酶切、连接,构建重组表达质粒pET-smu.1834c,诱导表达重组,纯化蛋白.测定DCS对丙氨酸消旋酶活性的抑制作用.成功诱导表达纯化smu.1834c基因编码蛋白,具有体外催化L-丙氨酸生成D-丙氨酸的活性.发现DCS能够抑制该蛋白的活性.本研究证实变异链球菌smu.1834c基因编码丙氨酸消旋酶.DCS能够抑制其活性,并且呈现一定的剂量相关性.

目的 探讨双歧杆菌四联活菌片联合注射用门冬氨酸鸟氨酸治疗肝性脑病的临床疗效.方法 选取2014年4月—2016年2月恩施州中心医院收治的肝性脑病患者96例为研究对象,将患者随机分为对照组和治疗组,每组各48例.对照组静脉滴注注射用门冬氨酸鸟氨酸,10 g注射用门冬氨酸鸟氨酸加入到5％葡萄糖注射液或0.9％氯化钠注射液250 mL中溶解,1次/d.治疗组在对照组基础上口服双歧杆菌四联活菌片,3片/次,3次/d.两组患者均连续治疗10 d.观察两组临床疗效,比较治疗前后两组认知功能指标、肝功能、血氨指标、内毒素和炎症因子指标.结果 治疗后,对照组和治疗组的总有效率分别为79.17％、93.75％,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05).治疗后,两组患者数字连接实验(NCT)时间显著减少,数字符号试验(DST)评分显著增高,同组治疗前后比较差异具有统计学意义(P<0.05).治疗后,治疗组认知功能指标显著优于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05).治疗后,两组患者的血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBiL)和血氨水平均显著降低,同组治疗前后比较差异具有统计学意义(P<0.05).治疗后,治疗组肝功能和血氨指标水平显著低于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05).治疗后,两组患者的内毒素(LPS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-18(IL-18)水平均显著降低,同组治疗前后比较差异具有统计学意义(P<0.05).治疗后,治疗组内毒素和炎症因子指标水平显著低于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05).结论 双歧杆菌四联活菌片联合注射用门冬氨酸鸟氨酸治疗肝性脑病具有较好的临床疗效,能够明显改善患者的认知状态和肝功能,降低血氨、内毒素和炎症因子水平,且安全性较好,具有一定的临床推广价值.

目的 探讨蜡样芽孢杆菌(Bc)对肝内胆汁淤积大鼠的肝损伤和肠黏膜通透性的影响.方法 将40只大鼠分为对照组、模型组及Bc低、高剂量组,每组10只.除对照组外,其余大鼠均单次灌胃α-荼基异硫氰酸盐(ANIT)建立胆汁淤积模型.Bc低、高剂量组于造模次日开始灌胃Bc(1.0×108、2.0×108 CFU/kg),对照组和模型组灌胃等体积蒸馏水,每天1次,连续5d.检测各组大鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、二胺氧化酶(DAO)、总胆红素(T-BIL)和乳酸(LA)的水平;观察各组大鼠肝组织病理学变化,免疫组织化学分析各组大鼠小肠组织中紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的表达.结果 与对照组比较,模型组大鼠血清中ALT、AST、DAO、T-BIL及LA水平明显升高,小肠组织中Occludin和ZO-1表达明显减少(P＜0.05).与模型组比较,Bc低、高剂量组大鼠血清中AST、DAO和LA等水平明显降低(P＜0.05);肝组织病理学明显改善,小肠组织中Occludin和ZO-1的蛋白表达增加(P＜0.05).结论 Bc对胆汁淤积大鼠肝损伤有一定保护作用,可改善其肠黏膜通透性,其机制可能与上调小肠组织中紧密连接蛋白的表达有关.