目的:制备缓释万古霉素的多聚乳酸-聚乙二醇-多聚乳酸(PLGA-PEG-PLGA)温敏水凝胶，探讨其理化性能、生物学性能和抗菌性能。方法:PLGA(1 500~2 000)-PEG (1 000~1 500)-PLGA(1 500~2 000)多聚物溶液在4 ℃下孵育7 d，充分溶解后在37 ℃水浴中放置10 min成胶并负载万古霉素。冻干脱水48 h后利用扫描电镜观察其微观结构。在37 ℃、60 r/min条件下利用紫外-可见光谱分析绘制其体外降解曲线及药物释放曲线。以二甲基亚砜(DMSO)作为阳性对照，利用噻唑蓝(MTT)法检测本材料细胞相容性。在37 ℃、120 r/min条件下检测其抗菌效果。两组间比较采用独立样本 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:抗菌水凝胶扫描电镜结果显示，PLGA-PEG-PLGA抗菌温敏水凝胶具有疏松多孔的微观结构，载药前[(53.77±31.20) μm、后孔隙尺寸[(50.42±27.60) μm]差异无统计学意义( t＝0.255， P>0.05)；体外降解时长30 d；空载水凝胶组[(96.41±2.41)%]、载药水凝胶组细胞活性[(96.98±2.26)%]，与DMSO组[(37.64±2.69)%]差异有统计学意义( F＝1 727.784， P<0.05)；药物释放实验证实万古霉素可以持续释放30 d；抗菌实验结果表明，载药水凝胶可以对金葡菌提供长达72 h的抗菌效果。 结论:PLGA-PEG-PLGA温敏型水凝胶是一种较理想的抗生素载体，无细胞毒性，能够长效缓释负载的抗生素，具有潜在的临床应用价值。

目的:探讨肺炎克雷伯菌 wza基因缺失对细菌荚膜形成能力及对噬菌体敏感性的影响。 方法:以野生型肺炎克雷伯菌株W14为背景，利用温敏型质粒介导的同源重组技术构建Δ wza基因缺失菌株。在溶菌肉汤（LB）培养基固体平板观察菌落形态并在液体LB培养基中测定细菌的生长曲线。通过透射电镜，糖醛酸含量测定的方法检测 wza基因缺失对肺炎克雷伯菌株荚膜形成的影响。并通过观察噬菌斑明确 wza基因缺失是否影响菌株W14对噬菌体phiW14的敏感性。使用 t检验比较菌株W14与Δ wza 缺失菌株荚膜多糖的糖醛酸含量差异情况。 结果:通过PCR技术明确Δ wza基因缺失菌株构建成功。LB固体平板上观察到Δ wza基因缺失菌株的菌落较小，而生长曲线未观察到 wza基因缺失对菌株生长速度的影响。透射电镜结果显示， wza基因缺失后菌株荚膜多糖缺失。糖醛酸含量检测表明Δ wza基因缺失菌株的糖醛酸含量为（45.963±2.795）μg/ml，远低于野生型菌株W14的（138.800±5.201）μg/ml， t=27.233， P<0.001。通过观察噬菌斑发现 wza基因缺失后，菌株失去了对噬菌体phiW14的敏感性。 结论:基因 wza的缺失损害了细菌的荚膜形成能力并使得菌株失去了对噬菌体phiW14的敏感性。

目的:对比温敏型羟丁基壳聚糖(HBC)护创敷料和明胶海绵在鼻内镜下泪囊鼻腔吻合术(EES-DCR)中的应用效果。方法:前瞻性随机对照研究。纳入山东省眼科医院2021年1月至2022年5月慢性泪囊炎患者共51例(53只眼)。所有患者均行EES-DCR，按随机数字表法分为试验组(24例)和对照组(27例)。试验组术中应用温敏型HBC护创敷料填塞泪囊鼻腔吻合口；对照组术中应用明胶海绵填塞泪囊鼻腔吻合口。随访期间，试验组失访3例，对照组失访5例，最后试验组有效样本21例(23只眼)，对照组有效样本22例(22只眼)。记录术中应用吻合口填充材料的耗时，术后随访6～12个月比较两组患者的手术治愈率、手术有效率、上皮化率以及术后并发症。结果:术中吻合口填充敷料耗时试验组为90.00(74.25，121.00)s，对照组为200.00(178.75，206.50)s，差异有统计学意义( Z＝－4.98， P<0.05)。手术治愈率为试验组78.26%(18/23)，对照组72.72%(16/22)，两组差异无统计学意义( χ2＝0.00， P＝1.000)；试验组手术有效率为95.65%(22/23)，对照组为90.91%(20/22)，两组差异无统计学意义( χ2＝0.32， P＝0.569)。术后4周两组患者吻合口上皮化90%以上的患者试验组为16只眼(69.57%)，对照组为15只眼(68.18%)，差异均无统计学意义( χ2＝0.01， P＝0.920)。术后鼻腔渗血患者试验组15例(65.22%)，对照组7例(31.82%)，差异无统计学意义( χ2＝0.58， P＝0.445)；术后鼻腔异味患者试验组0例，对照组8例(36.36%)，差异有统计学意义( χ2＝10.17， P＝0.001)；术后鼻塞患者试验组0例，对照组5例(22.73%)，差异有统计学意义( χ2＝5.88， P＝0.015)；术后鼻腔异物感患者试验组4例(17.39%)，对照组7例(31.82%)，差异无统计学意义( χ2＝1.27， P＝0.206)；术后吻合口变狭窄患者试验组1例(4.35%)，对照组2例(9.09%)，差异无统计学意义( χ2＝0.41， P＝0.524)。术后吻合口狭窄者给予扩张吻合口，其余未特殊处理。 结论:在EES-DCR术中应用温敏型HBC护创敷料和明胶海绵治疗慢性泪囊炎均有效，相较于明胶海绵，温敏型HBC护创敷料更易于操作，且术后并发症较少、术后不适症状较轻。

目的 构建一种由PLGA-PEG-PLGA/甘油组成的温敏凝胶系统,用以负载盐酸布比卡因和多聚脱氧核糖核苷酸复方药物.方法 以胶凝温度作为关键响应参数,单因素法初步筛选凝胶基质浓度、药物装载量以及甘油添加量.随后,采用正交实验设计,并引入渗透压作为优化参数,以深化配方的优化过程.最后,对优选的配方进行质量评估.结果 优选配方包含16％PLGA-PEG-PLGA、5％甘油、2％盐酸布比卡因,0.4％多聚脱氧核糖核苷酸.常温下配方呈均一透明溶液态,胶凝温度33.83 ℃,胶凝时间100s,pH值3.11,渗透压836 mOsm,可注射性及黏附性良好.药物体外释放符合Ritger-peppas方程.开放型伤口模型证实了该样品能够有效促进伤口的愈合,达到镇痛的效果.结论 优选配方制备工艺简单,各项质量指标均符合要求,有望在临床中得到应用.

目的 利用气泡微针技术及温敏型材料设计制备温敏型贮库式微针,探讨解决微针在中药外用制剂存在"载药量低"问题的可行性.方法 首先,以盐酸青藤碱为模型药物,将药物与温敏型材料N-异丙基丙烯酰胺浇筑入由壳聚糖形成的气泡微针空腔中,通过定位固化等工艺,制备具有针体、定位层、基底层和药物贮库4个部分功能结构的温敏型贮库式微针;其次,对所制备的微针载药量、尺寸、力学、皮肤穿刺等载药能力和机械性能进行表征;最后,分别采用Franz扩散仪和经皮微渗析技术,评估该贮库式微针的体外和在体释药行为特征.结果 所制备的温敏型贮库式微针载药量可达5.76 mg/cm2,暴露针尖呈圆锥型,高度约为650 μm,且具良好机械强度和皮肤穿刺能力;体外释放试验显示,该微针在皮肤模拟温度条件下,可较大程度地释放针体内药物,并呈扩散和骨架溶蚀的释药特征;在体经皮渗透试验显示,相较于常规外用制剂,该贮库式微针可快速且明显促进药物的经皮吸收.结论 该研究初步表明利用温敏型材料和气泡微针技术所制备的贮库式微针能明显提高微针载药量,并仍保持微针"微创"的作用优势.

背景:既往研究显示人β-防御素3具有显著的抗真菌、抗细菌和抗病毒活性,并且在连接先天和获得性免疫应答中起到重要的桥梁作用.目的:观察人β-防御素3水凝胶治疗大鼠牙周炎的效果.方法:以泊洛沙姆188与407为基质,采用冷溶法构建空白水凝胶,将人β-防御素3与该水凝胶混合制备人β-防御素3水凝胶.将25只SD大鼠随机分为5组,每组5只:健康组不做任何处理,牙周炎组、空白水凝胶组、盐酸米诺环素组、载药水凝胶组采用正畸结扎钢丝法构建牙周炎模型,造模8周后于颊侧与腭侧牙周袋内分别注射空白水凝胶、盐酸米诺环素、人β-防御素3水凝胶,1次/周,连续给药4周后进行相关检测.结果与结论:①与健康组比较,牙周炎组大鼠牙周菌斑指数、牙龈出血指数及牙周探诊深度均增加(P<0.01);与牙周炎组比较,盐酸米诺环素组与载药水凝胶组大鼠牙周菌斑指数、牙龈出血指数及牙周探诊深度均减少(P<0.05);②大鼠脏器苏木精-伊红染色显示载药水凝胶无毒性作用;③体视显微镜与Micro CT扫描显示,与健康组比较,牙周炎组大鼠牙根暴露及釉牙骨质界-牙槽嵴顶距离均增加(P<0.05);与牙周炎组比较,盐酸米诺环素组与载药水凝胶组大鼠牙根暴露、釉牙骨质界-牙槽嵴顶距离均减少(P<0.05);④苏木精-伊红、Masson及抗酒石酸酸性磷酸酶染色显示,牙周炎组、空白水凝胶组大鼠牙周炎症明显、纤维结构混乱、破骨细胞活跃,盐酸米诺环素组、载药水凝胶组大鼠牙周炎症水平降低、纤维排列较规则、破骨细胞减少;⑤qRT-PCR检测显示,与健康组比较,牙周炎组大鼠牙龈组织中白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、诱导型一氧化氮合酶的mRNA表达升高(P<0.05);与牙周炎组比较,盐酸米诺环素组、载药水凝胶组大鼠牙龈组织中白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、诱导型一氧化氮合酶的mRNA表达降低(P<0.05);⑥结果表明,人β-防御素3水凝胶可通过降低炎症因子的相对表达及抑制破骨来减轻大鼠牙周组织炎症.

目的 探讨脐疗中药温敏型纳米凝胶制剂治疗勃起功能障碍(阳痿)的临床效果.方法 将90例阳痿患者按照随机数字表法分为对照组与观察组,每组45例.对照组采用西地那非治疗,观察组采用脐疗中药温敏型纳米凝胶制剂治疗,两组均连续治疗2个月.比较两组的疗效、勃起功能国际问卷(IIEF)评分、状态-特质焦虑问卷(STAI)评分、血清睾酮及雌二醇水平、阴茎勃起角度,观察两组治疗期间不良反应的发生情况.结果 观察组治疗总有效率高于对照组(P＜0.05).治疗后,两组患者的IIEF评分、血清睾酮水平较治疗前升高,STAI评分、血清雌二醇水平较治疗前降低,阴茎勃起角度较治疗前增大,且观察组上述指标优于对照组(P＜0.05).治疗期间两组均未发生不良反应.结论 脐疗中药温敏型纳米凝胶制剂治疗阳痿的效果明显,能显著改善患者的勃起功能、焦虑状态及性激素水平,安全性好.

目的 构建Ⅱ型猪链球菌05ZYH33菌株双组分系统Ihk/Irr的双基因缺失突变株.方法 首先对双组分系统 Ihk/Irr基因进行序列分析;选取Ihk/Irr基因的相关片段克隆至pET30a表达载体,进行可溶表达并注射家兔制备抗体;分别将ihk基因上游irr基因下游各1 kb的片段扩增,将两个片段连接起来;克隆至温敏型pJRS233的穿梭质粒中;利用两步同源重组法获得突变体;分别提取突变株的基因组DNA,RNA及菌体总蛋白,利用PCR, RT-PCR,Western-blot方法验证突变体.结果 成功制备了双组分系统Ihk/Irr可溶性表达的蛋白,成功构建了重组的温敏型ikr-pJRS233重组质粒,成功将重组质粒转入猪链球菌05ZYH33中并获得突变株,基因组PCR,RT-PCR及Western-blot分别证实了双组分系统Ihk/Irr双基因被成功敲除.结论 成功构建重组温敏型的穿梭质粒,导入到猪链球菌05ZYH33菌株中经两步同源重组获得突变株,在基因组DNA,RNA及蛋白水平上验证了双组分系统Ihk/Irr双基因缺失株的成功构建.

目的 采用 Box-Behnken 效应面法优化丹皮酚纳米结构脂质载体(NLC)温度敏感型原位凝胶的处方,并对其体外释放性能进行考察,为经皮给药制剂的研究提供参考.方法 以泊洛沙姆407和泊洛沙姆188质量分数为考察因素,胶凝温度为考察指标,通过二项式模型及多元线性回归模型拟合并建立胶凝温度与2个考察因素之间的数学关系,采用Box-Behnken效应面法,对丹皮酚NLC温敏型原位凝胶的处方进行优化,并考察该制剂的体外释药特性.结果 胶凝温度与2个考察因素之间存在可信定量关系,且二项式模型较多元线性模型置信度高.丹皮酚NLC温敏型原位凝胶的最佳处方为22.90%泊洛沙姆407和3.34%泊洛沙姆188,胶凝温度为(33.4±0.1)℃,24 h内丹皮酚NLC原位凝胶的累积释放量为51.19%.结论 该方法适用于丹皮酚NLC温敏型原位凝胶的处方优化,建立的数学模型预测性良好,优选的处方可为丹皮酚经皮给药制剂的开发提供参考.

背景:温敏水凝胶具有仿细胞外基质、良好生物相容性、微创可注射和原位成型等特点,在组织工程中广泛使用.目的:制备脂质体介导的温敏型海藻酸/磷酸三钙/胶原Ⅰ(Alg/TCP/Col)水凝胶,并对其进行表征.方法:通过交错融合制备包载不同浓度钙离子的脂质体Ca-IFVs,综合考察脂质体包封率和载药率,筛选最佳钙离子浓度的脂质体,用于以下实验.将Alg/TCP/Col前体溶液(海藻酸或海藻酸/磷酸三钙前体溶液)与脂质体Ca-IFVs以不同的配比(5,10,15,20)在37℃下混合,制备温敏型水凝胶,观察水凝胶的结构、流变性、体积溶胀比及机械性能.将MC3T3-E1细胞分别接种于Alg/TCP/Col水凝胶、海藻酸水凝胶、海藻酸/磷酸三钙水凝胶表面,接种1,3,7 d后,采用共聚焦显微镜观察细胞形态.结果与结论:①冻干水凝胶中孔的尺寸在50-100μm范围,α-磷酸三钙的颗粒均匀地附着在海藻酸/α-磷酸三钙水凝胶的表面上;与海藻酸/α-磷酸三钙水凝胶相比,Alg/TCP/Col水凝胶是具有胶原纤维的致密聚集体;②Alg/TCP/Col水凝胶具有在35-39℃之间适当的相转变温度Tm;③随着复合材料凝胶中Ca-IFVs体积的增加,凝胶体积溶胀比增加,当将α-磷酸三钙复合物加入到海藻酸/α-磷酸三钙水凝胶中时,溶胀比略有降低;与海藻酸/α-磷酸三钙水凝胶相比,Alg/TCP/Col水凝胶的溶胀比增加;④在前体溶液与脂质体配比为10时,Alg/TCP/Col水凝胶、海藻酸/α-磷酸三钙水凝胶的压缩模量高于海藻酸水凝胶(P<0.05);⑤在前体溶液与脂质体配比为10时,海藻酸水凝胶表面的MC3T3-E1细胞呈圆形;海藻酸/α-磷酸三钙水凝胶中的细胞形态趋于扩展,散布在水凝胶孔表面上;在Alg/TCP/Col水凝胶表面的细胞具有应力延长形态,细胞形态趋势相似,并向凝胶内部延伸,同时数量显著增加;⑥结果表明脂质体介导的Alg/TCP/Col水凝胶,具有良好的机械性能及细胞相容性.