目的:探究生物素对免疫检测的干扰及大剂量服用生物素对免疫指标的影响。方法:招募哈尔滨医科大学附属第一医院体检健康的志愿者34名，并将其分为5组：对照组(10例)、低剂量组(6例)、中剂量组(6例)、高剂量组(6例)和超高剂量组(6例)。同期选择本院10例慢性心衰稳定期随访者作为稳定心衰组，采用化学发光法自动化检测平台检测心肌肌钙蛋白I、肌钙蛋白T水平，酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA )方法检测生物素水平。结果:与对照组相比，稳定心衰组患者第1日至第5日生物素浓度明显降低，肌钙蛋白I、肌钙蛋白T水平明显升高，差异具有统计学意义( t1d＝11.40、13.33、63.60， t2d＝17.11、6.67、63.42， t3d＝14.10、13.33、64.71， t4d＝16.67、6.67、62.43， t5d＝15.80、13.33、66.05， P值均<0.001)。与用药前相比，服用5 mg生物素后低剂量组、服用10 mg生物素后中剂量组、服用20 mg生物素后高剂量组、服用50 mg生物素超高剂量组肌钙蛋白I、肌钙蛋白T及生物素浓度均明显升高，组间差异均具有统计学意义( F＝148.11、53.08、38.39、147.26、57.47、42.63、152.82、69.26、58.63、152.68、62.57、48.27， P值均<0.001)。 结论:生物素会干扰链霉亲和素捕获目标分析物的能力，从而导致检测结果的假性升高或者降低，影响临床判断。

目的:在国内建立胰岛素自身抗体（IAA）的电化学发光检测法，并初步评价其应用价值。方法:胰岛素原采用磺基吡啶钌衍生物（Sulfo-tag）和生物素标记后，与血清IAA孵育结合。Meso Scale Discovery（MSD）链霉亲和素电化学发光平板捕获标记的抗原抗体复合物后，采用MSD电化学发光仪进行检测，以IAA指数≥0.005作为阳性阈值。通过优化检测条件后，采用微量平板放射免疫法比较两种方法的相关性和一致性。选取2016至2018年于中南大学湘雅二医院代谢内分泌科门诊或住院的新诊断1型糖尿病（T1DM）患者（55例）及其一级亲属（216名），以及健康志愿者（健康对照组，413名）为研究对象，检测其血清样本，初步评价电化学发光法检测IAA的临床应用价值。结果:优化条件包括：（1）生物素标记的胰岛素原和磺基吡啶钌衍生物标记的胰岛素原的最适浓度均为800 ng/ml；（2）酸化血清的方式为水浴30℃静置孵育45 min；（3）在反应体系中先加入35 μl稀释后的抗原，再加入15 μl Tris-HCl缓冲液，然后与酸化血清混匀孵育过夜能获得更高的信噪比（S/N）。电化学发光法间隔3个月重复检测22例样本，IAA指数差异无统计学意义（ P=0.095），阴/阳性判定完全一致；与微量平板放射免疫法检测IAA的一致率为93.7%（119/127）（Kappa值为0.858），指数呈正相关（相关系数 r=0.749， P<0.001）。电化学发光法受试者工作特征（ROC）曲线下面积（AUC）为0.764（95 %CI：0.669~0.858）。电化学发光法检测T1DM患者IAA的阳性率为52.73%（29/55），明显高于健康对照组的0.76%（2/263）（ P<0.001）；检测T1DM一级亲属组的阳性率为0.93%（2/216），与健康对照组相比差异无统计学意义（ P=0.854）。 结论:电化学发光法检测IAA有较高的灵敏度和特异度，操作简便无放射污染，具有很好的临床应用价值。

目的:建立一种基于稳定元素标记和电感耦合等离子体质谱仪器的定量免疫分析方法，将其应用于血清淀粉样蛋白A（SAA）检测，并进行性能评价。方法:以磁珠作为固相载体，以元素钬（Ho）作为标记元素，构建基于双抗体夹心法的免疫检测体系。对磁珠抗体结合比例、元素抗体用量、反应时间等因素进行优化，确定检测体系最佳反应条件。根据美国临床实验室标准化协会（CLSI）系列文件对检测体系进行方法学确认和性能验证，具体包括空白检出限（LOB）、线性范围、准确度、特异性、不精密度、干扰实验等。最后收集免疫比浊法检测后SAA血浆样本82份，采用新建检测体系进行检测，并对二者的检测结果进行Pearson相关性分析。结果:亲水性链霉亲和素和生物素化抗体最佳结合比例为1∶0.15，元素标记抗体用量为3 μl，两反应步骤孵育时间分别为40、30 min。新建检测体系LOB为0.6 μg/L，在0~1 200 μg/L范围内线性相关性良好（ R2=0.998 9， P<0.001），高值样本与低值样本批内精密度分别为9.42%、7.95%，批间精密度分别为14.56%、13.56%，回收率为96.01%~104.76%，与降钙素原（PCT）、C反应蛋白（CRP）交叉反应率分别为0.45%，0.015%，均<0.5%。当甘油三酯浓度≤35.5 mg/L、胆红素浓度≤0.52 mg/L、血红蛋白浓度≤2.4 g/L时，检测的干扰偏倚均<10%。新建检测体系与免疫比浊法检测82份SAA血浆样本的结果分别为12.65（4.45，59.03）、18.23（9.33，68.72）mg/L，相关性良好（ R2=0.983， P<0.001）。 结论:本研究建立的以Ho为标记物的SAA定量免疫检测方法精密度高、准确度好、特异性高、线性范围宽，可满足临床检测需求。

预靶向放射免疫诊断(PRID)和预靶向放射免疫治疗(PRIT)旨在利用药用放射性核素有效标记抗肿瘤靶向抗体而分别应用于提高肿瘤显像的对比度和肿瘤治疗指数(TI)。与传统的放射性免疫偶联物不同，预靶向策略将肿瘤靶向步骤与有效载荷步骤分开，在减少正常组织暴露的同时提高了肿瘤的摄取量。预靶向策略的关键参数除了对比度和TI外，还包括抗体的免疫原性和特异性、放射性核素的适用性以及在临床中使用的便利性。预靶向的每个步骤都可以单独优化，且作为模块化系统，预靶向策略可广泛地应用于不同的肿瘤靶点、肿瘤类型或放射性核素。然而，尽管预靶向的多功能性为肿瘤的诊疗提供了巨大的应用潜能，但其过程复杂，在临床转化及如何在患者体内达到最佳使用效果方面面临着较大的挑战。该文旨在简要回顾预靶向策略的起源和发展过程，重点阐述目前已被广泛研究的2种蛋白质递送系统(生物素-链霉亲和素及半抗原-双特异性单克隆抗体)、放射性半抗原和放射性核素。此外，该文还将重点阐述预靶向研究领域的创新成果，包括使用生物正交化学和新型蛋白质载体(如自组装-解组装蛋白质和亲和体分子)进行的预靶向。该文并不是对过去30年PRID和PRIT全面的回顾，而是突出阐述了预靶向发展过程中的里程碑成果，并从TI和毒性方面评价其在临床前模型和临床试验中的应用。相信预靶向策略能够帮助人们认识肿瘤临床诊疗一体化实施的障碍，重新激发人们对放射免疫疗法的兴趣，并指导预靶向研究的进一步发展。

目的 基于吖啶酯化学发光免疫定量分析技术,建立一种血清白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)的检测方法.方法 采用双抗体夹心法,分别用吖啶酯标记完整抗体和生物素标记酶切片段抗体,并与待测物IL-6形成夹心复合物,其中生物素再与链霉亲和素包被的磁性固相微粒特异反应发光,通过测量发光信号值进行定量分析;并对其标记抗体稀释缓冲液、标记抗体浓度、样本加样量等进行条件优化;对空白限(LOB)、检出限(LOD)、中间精密度、可报告范围、干扰实验、钩状(HOOK)效应等性能指标进行评价;选择145例血清样本,采用线性回归分析与罗氏电化学发光法进行方法学比对.结果 成功建立一种基于吖啶酯化学发光免疫定量分析技术检测血清IL-6的方法.该方法选择MES-BSA作为标记抗体稀释缓冲液,标记抗体浓度选择0.2 μg/ml,样本加样量选择50μl.该方法的LOB为0.2 pg/ml,LOD为0.5 pg/ml,可报告范围为0.5～30 000 pg/ml,中间精密度＜5.3％.在IL-6达到200 000 pg/ml浓度水平时,未出现HOOK效应现象.在三酰甘油(TG)30 000 μg/ml,血红蛋白(HGB)9 000 μg/ml,胆红素(TBIL)330 μg/ml,类风湿因子(RF)1 500 IU/ml浓度范围内,干扰物质对检测结果无影响.与电化学发光法测定IL-6比对,线性回归方程为Y=0.980 2X-3.487 9,r=0.997 7,两种方法试剂测定结果呈高度相关(P＜0.05).结论 建立了基于吖啶酯化学发光检测血清IL-6的方法,各项指标均符合临床应用要求,适宜在临床实验室推广应用.

目的 比较谷氨酸脱氢酶1(GLUD1)在正常皮肤、光线性角化病(AK)、皮肤鳞状细胞癌(cSCC)、基底细胞癌(BCC)、皮内痣及恶性黑色素瘤(MM)组织中的表达情况.方法 通过免疫组化链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物技术(SABC法)检测30例AK、30例BCC、30例cSCC与30例正常皮肤组织中GLUD1的表达情况;采用相同方法比较30例皮内痣与30例MM组织标本中GLUD1的表达差异.结果 GLUD1在cSCC组、BCC组和AK组中阳性细胞率分别为(40.73±3.50)％、(33.11±2.90)％和(29.68±4.08)％,均显著高于正常皮肤组(16.37±2.14)％,其中cSCC组中阳性细胞率显著高于AK组及BCC组.GLUD1在MM组中阳性细胞率显著高于皮内痣组[(48.43±4.66)％比(19.64±2.45)％].GLUD1在正常皮肤、AK、BCC和cSCC组织中染色强阳性率分别为0.00％(0/30)、13.33％(4/30)、3.33％(1/30)和26.67％(8/30),cSCC组显著高于正常皮肤组,差异有统计学意义(P＜0.05)o GLUD1在皮内痣组和MM组的染色强阳性率分别为0.00％(0/30)和50.00％(15/30),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 GLUD1的高表达可能与AK、BCC、cSCC和MM的发病相关.

目的 以革兰阴性菌外膜蛋白折叠辅助因子关键蛋白BamA为靶蛋白,基于生物膜干涉(Biolayer interferometry,BLI)技术建立化合物与BamA蛋白β折叠结构域(BamAβ-barrel)结合活性的评价方法,为建立靶向BamA蛋白的抗革兰阴性菌先导物奠定基础.方法 应用BLI方法检测BamAβ-barrel与已知的阳性化合物darobactin的结合活性.原核表达并纯化带有His标签的大肠埃希菌BamAβ-barrel蛋白,使用表面活性剂LDAO对其进行复性和折叠;使用生物素标记折叠和未折叠蛋白,并结合到超级链霉*亲和素(super streptavidin,SSA)生物传感器,然后检测蛋白与不同浓度的darobactin结合信号的变化,同时做无蛋白或darobactin稀释液对照;空白对照采用未结合生物素化的BamAβ-barrel蛋白的传感器,检测上述系列稀释样品.相应信号采用Steady state analysis方式拟合分析,计算平衡常数(KD)值.结果 成功获得高纯度的折叠状态BamAβ-barrel蛋白,通过BLI技术检测到折叠状态的BamAβ-barrel与阳性化合物darobactin具有良好结合活性且呈现浓度依赖性,R2为0.9998,KD值为(2.2E-06±8.0E-08)M.结论 基于BLI技术成功建立了折叠状态的BamAβ-barrel-化合物结合活性的评价方法,为后续BamA蛋白靶向性抗革兰阴性菌抗生素的发现建立基础.

目的 在基于生物素-链霉亲和素(biotin-avidin/streptavidin,BAS)的化学发光技术检测人绒毛膜促性腺激素β亚基(β-human chorionic gonadotropin,β-hCG)和孕酮(progesterone,Prog)时,建立一种简易、有效的抗生物素干扰方法.方法 采用两种浓度链霉亲和素磁珠(streptavidin coated magnetic micro particles,M)检测不同生物素浓度的高、中、低水平的β-hCG和Prog血清,通过回收试验评价两种浓度M的抗生物素干扰能力以及采用低浓度M的校准曲线时高浓度M检测的准确度.结果 ①β-hCG和Prog的抗生物素干扰能力在低浓度M(0.72 mg/ml)时分别为100 和 25 ng/ml,在高浓度M(1.44 mg/ml)时分别为 500 和 50 ng/ml.②使用和低浓度M相同的校准曲线时,高浓度M对于生物素浓度在 500 ng/ml以下的β-hCG三个水平的回收率均在90%～110%之间;对于生物素浓度在50 ng/ml以下的高、中水平的Prog,其回收率在90%～110%之间.结论 在基于BAS化学发光技术检测血清β-hCG和Prog时,采用高浓度M(1.44 mg/ml)是一种简易、有效且可靠的抗生物素干扰方法.

目的 在传统的时间分辨荧光免疫分析(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)技术基础上,结合生物素-亲和素放大技术和磁性微粒技术优势,建立一项新方法 进行血清中糖类抗原153(carbohydrate antigen 153,CA153)含量的测定.方法 利用磁性微粒表面的链霉亲和素分子与生物素-CA153包被抗体快速高效结合,从而在固相载体磁性微粒表面形成双抗体夹心复合物.并对新方法 的各项性能指标进行评价.结果 获得的CA153 TRFIA线性方程为y=54 638x+7 052.2,R2=0.9995;该方法 的灵敏度为0.48 U/mL,批内和批间的变异系数分别为2.09％～5.95％,1.54％～7.15％,平均回收率为94.48％,与其他肿瘤标志物无明显干扰,正常范围参考值为0～35U/mL.用该方法 检测乳腺癌与健康体检者血清的CA153结果 与化学发光法一致,相关系数为0.9782.结论 该方法 灵敏度优于传统技术,是TRFIA的一种新方法,反应时间短,操作简单,敏感度、特异性、准确度等均符合临床应用要求.

目的 探讨由核酸适配体介导的新型靶向铁磁纳米颗粒增强上皮细胞黏附分子(EpCAM)阳性肿瘤细胞热疗效应的作用.方法 利用生物素与链霉亲和素的亲合作用将EpCAM核酸适配体SYL3C与铁磁纳米颗粒连接构建核酸适配体-铁纳米粒复合物(AptNPs),应用动态光散射粒径仪评估其直径大小,普鲁士蓝染色观察AptNPs对EpCAM阳性肿瘤细胞的靶向结合特性,乳酸脱氢酶检测AptNPs在交变电磁场作用下对EpCAM阳性肿瘤细胞的热杀伤效应,吖啶橙/溴化乙锭双染观察其引起EpCAM阳性肿瘤细胞的凋亡情况.结果 生物素-链霉亲和素将SYL3C与铁磁纳米颗粒连接成功构建AptNPs,AptNPs直径为282 nm.流式细胞仪检测和普鲁士蓝染色显示,AptNPs对EpCAM阳性肿瘤细胞有较强的选择结合特异性,对EpCAM阴性肿瘤细胞结合较弱.在交变电磁场加热5h后,1.5×108个AptNPs使EpCAM阳性细胞HCT116存活率仅为28.9％,A549细胞为54.4％,与EpCAM阴性细胞HepG2细胞(76.7％)比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 AptNPs可以靶向性地提高对EpCAM阳性肿瘤细胞热疗的效应,在肿瘤靶向治疗新策略中具有潜在的应用价值.