目的:了解青海省自然疫源性病区小型兽类空间分布，并以线粒体细胞色素C氧化酶亚基I（COI）基因作为分子标记，对捕获的小型兽类进行分子水平的物种鉴定。方法:2009 - 2016年，在青海省6个州的16个市（县），采集小型兽类标本为研究对象，分析小型兽类地区分布、不同海拔分布、生态环境类型分布；采用PCR扩增小型兽类的COI基因部分片段序列（长度约650 bp），并进行同源性比较、遗传距离和系统发育分析。结果:共捕获小型兽类1 631只，分别隶属于3目7科21属30种；其中啮齿动物926只，分别隶属于5科19属25种，占56.78%。格尔木市采集的小型兽类数量最多（313只），2 800 ~ < 3 000 m的海拔段为小型兽类分布最高峰（532只），沙地草原捕获数量最多（612只）。共成功扩增292只小型兽类COI基因，同源性比对与目标序列一致。种内遗传距离为0.01% ~ 2.90%，种间遗传距离为4.00% ~ 12.00%，种间遗传距离大于种内遗传距离；属间遗传距离为13.00% ~ 21.00%，科间遗传距离为22.00% ~ 25.00%。邻接法（NJ）系统发育树显示，同种个体聚为有很高支持度的单一分支共形成20个，置信度为98% ~ 100%。结论:青海省小型兽类空间分布受地区、海拔、生态环境等自然地理因素的综合影响，且分子鉴定法可弥补形态学鉴定中的不足。

目的:研究职业性慢性苯中毒患者线粒体细胞色素c氧化酶亚单位I（mitochondrial cytochrome c oxidase subunit I，MT-COI）基因甲基化水平，探讨职业性慢性苯中毒患者有效的分子生物标志物。方法:于2020年3月，选择2018年1月至2019年12月在深圳市职业病防治院就诊的轻度苯中毒患者38人作为病例组，并选择46名同期进行健康体检者作为对照组。采用焦磷酸测序法检测甲基化位点，采用流式细胞法检测外周血细胞计数水平，采用非参数检验统计分析。结果:与对照组比较，病例组MT-COI位点平均甲基化水平[（2.26±0.75）%]、MT-COI位点1甲基化水平[（2.21±0.81）%]、MT-COI位点2甲基化水平[（2.31±0.96）%]较低，差异有统计学意义（ P<0.05）。白细胞计数和血小板计数随MT-COI甲基化程度的增高有增高的趋势，呈明显正相关（ r=0.254、0.280， P<0.05）。 结论:职业性慢性苯中毒患者MT-COI基因甲基化水平可能与职业性慢性苯中毒的存在相关性，其可作为潜在的职业性慢性苯中毒的效应生物标志物。

隐种A和隐种B是桉树枝瘿姬小蜂Leptocybe invasa两种重要的全球入侵隐种,对多国林业生产造成了严重危害.由于桉树枝瘿姬小蜂体型微小,且无法从形态上区分隐种类型,给该害虫的防治造成困难.本研究基于线粒体DNA细胞色素C氧化酶亚基1(mtDNA COI)基因序列的种特异性(species-specific COI,SS-COI)PCR方法,研究桉树枝瘿姬小蜂隐种快速分子检测技术.基于隐种A、B的COI序列分别设计特异性SS-COI引物各1对(AF/AR和BF/BR).使用这两对引物扩增同一桉树枝瘿姬小蜂样品DNA,即可有效进行隐种鉴定,同时两对引物也能互相验证鉴定结果.引物鉴定灵敏性检测结果显示,AF/AR与BF/BR均具有较高的鉴定灵敏性,其对DNA的有效鉴定浓度阈值分别为11.42 pg/μL和28.32 pg/μL.本研究开发的桉树枝瘿姬小蜂隐种A、B的快速鉴定方法解决了桉树枝瘿姬小蜂入侵地区隐种鉴别的难题,极大缩短鉴定时间、降低鉴定费用,为进一步探究桉树枝瘿姬小蜂隐种A、B的生物学差异以及它们对不同抗性品种桉树的适应能力提供技术参考.

目的 以线粒体细胞色素C氧化酶亚基(COI)基因为目的基因,利用DNA条形码技术对未知鼠样本进行鉴定.方法 采用夹夜法对九江市武宁县宋溪镇某村的鼠密度进行调查,经形态学初步鉴定后,以捕获的 1 只无法明确鉴定的大型鼠样本为对象,提取基因组DNA并采用COI基因通用引物BatL5310 和R6036R进行PCR扩增及测序,将测序结果在NCBI网站进行BLAST比对,采用MEGA7 软件选择最大似然法构建系统发育树.结果 共捕获小型兽类7 只,密度为3.38%,经形态学鉴定有褐家鼠2 只,黑线姬鼠2 只,臭鼩鼱2只,形态学初步鉴定为青毛巨鼠或小泡巨鼠的未知鼠1 只,提取的未知鼠样本DNA通过PCR成功扩增出COI基因目的条带,与NCBI基因库中小泡巨鼠(KP995219)序列同源性高达 100%,系统发育树显示该鼠样本与小泡巨鼠(KP995219、KP995203)处于同一分支,遗传距离分别为 0、0.0016,而青毛巨鼠(NC_036730)单独处于另一分支,遗传距离较远.结论 赣北地区首次报道小泡巨鼠,采用COI基因的DNA条形码技术可快速、准确的进行鼠种鉴定,有助于弥补非常见鼠形态学鉴定困难的不足.

目的:筛选两种药用蜘蛛北国壁钱Uroctea lesserti Schenkel,1936 和华南壁钱Uroctea compactilis L.Koch,1878 有鉴别意义的特征,完善传统动物药的鉴定方法.方法:采用形态分类学方法观察和比较两个物种的形态特征,同时考察线粒体DNA细胞色素C氧化酶亚基I(mtDNA-COI)基因序列特征和遗传距离.结果:华南壁钱和北国壁钱原动物形态、药材及其网巢彩色特征图及比较表显示二者存在明显差异.两种壁钱的 COI序列长度为 630～681 bp,在 NJ 树中可各自聚成一支,并与外群完全分开.所得到的COI基因片段序列上传至GenBank 数据库,分别获得北国壁钱的登录号OP358932 和华南壁钱的登录号OP363143.结论:该研究为两种壁钱药材的真伪鉴定提供了重要的实验依据.

目的 对云南大理毛腿鼠耳蝠体表寄生虫的感染状况进行分析,并描述两种蛛蝇的形态特征,探究其系统进化关系.方法 2022年7月,在云南大理州剑川县捕捉毛腿鼠耳蝠,采集其体表寄生虫并进行鉴定.计算各体表寄生虫的构成比、感染率、平均多度和平均感染强度;使用优势度指数(Y)确定各体表寄生虫类群中的优势种;运用扩散指数(C)、I指数、聚块指数(m*/m)和K指数判断优势种的空间分布类型;利用协调系数(V)分析优势种之间的相互关系.描述两种寄生蛛蝇的主要形态学特征.提取蛛蝇基因组DNA,PCR扩增线粒体细胞色素C氧化酶1亚基(cox1)、细胞色素B(cytb)和16S核糖体RNA(16S rRNA)序列,测序并串联后,用MEGA 11以最大似然法构建基于这3个基因的系统进化树.结果 共捕获毛腿鼠耳蝠72只(雄性24只,雌性48只),体表寄生虫感染率为97.3％(70/72).共采集体表寄生虫1 745只,其中革螨1 463只,分属于2科5属7种,分别为织金巨刺螨、鼠耳蝠螨、围睫肪刺螨、柯氏蝠螨、盾板浆刺螨、宽埃螨和朝鲜巨刺螨;蛛蝇282只,分属于2属2种,分别为台湾蛛虱蝇和叉笔虱蝇;未检获其他体表寄生虫.毛腿鼠耳蝠的革螨感染率、平均多度和平均感染强度分别为94.4％(68/72)、20.32、21.53,均高于蛛蝇[91.7％(66/72)、3.92、4.27](Fisher 精确检验,P＜0.05;U=700、424,均P＜0.01).织金巨刺螨、鼠耳蝠螨和围睫肪刺螨为优势种(Y=0.30、0.23、0.22).优势种鼠耳蝠螨(C=1.98、I=0.98、m*/m=1.18、K=5.55)、织金巨刺螨(C=9.43、I=8.43、m*/m=2.15、K=0.87)和围睫肪刺螨(C=6.50、I=5.50、m*/m=2.02、K=0.98)在不同毛腿鼠耳蝠个体间均呈现聚集分布.鼠耳蝠螨与围睫肪刺螨(V=0.33,P＜0.05)、鼠耳蝠螨与织金巨刺螨(V=0.34,P＜0.05)、围睫肪刺螨与织金巨刺螨(V=0.72,P＜0.01)之间均存在正协调关系.台湾蛛虱蝇体长约3 mm,背板Ⅰ呈宽圆形,末端有约25根长刚毛,背板Ⅱ和背板Ⅵ之间有较多长毛,背板Ⅵ上有6根长刚毛和10根长刺.叉笔虱蝇体长为3.5～4.0 mm,背板Ⅰ呈长宽状,边缘有一排短刚毛,背板Ⅱ长约为宽的3倍,背板Ⅱ后方有两个突起,突起表面呈凹状,后缘尖锐带有色素沉着.台湾蛛虱蝇cox1、cytb和16S rRNA序列分别为875、338和455 bp,提交至GenBank获得的登录号分别为OQ127648、OQ134944和OQ127330;叉笔虱蝇cox1、cytb和16S rRNA序列分别为832、332和451 bp,提交至GenBank获得的登录号分别为OQ119629、OQ129602和OQ119632.系统进化树分析结果显示,台湾蛛虱蝇与短铗蛛虱蝇聚在同一个分支上,再与叉笔虱蝇聚在一支.结论 云南大理毛腿鼠耳蝠体表寄生虫感染率高,主要为革螨和蛛蝇,其中台湾蛛虱蝇与同属的短铗蛛虱蝇的亲缘关系最近,叉笔虱蝇与台湾蛛虱蝇和铗蛛虱蝇的亲缘关系较近.

目的 综合比较 95℃水浴法、碱裂解法及离心柱法提取多房棘球绦虫虫体基因组DNA的质量差异,筛选出适用于PCR鉴定多房棘球绦虫线粒体DNA分型的DNA提取方法.方法 无菌条件下取适量多房棘球绦虫原头节(Protoscoleces,PSCs)、囊壁组织样本为实验材料,分别采用 95℃水浴法、碱裂解法及离心柱法提取虫体样本中的基因组 DNA,检测其浓度与A260/A280 比值,并以提取的DNA为模板,通过PCR扩增多房棘球绦虫核基因延伸蛋白样蛋白(Ezrin/radixin/moesin-like protein,elp)和线粒体基因细胞色素 b(Cytochrome b,cob)、NADH脱氢酶亚基 2(NADH dehydrogenase subunit 2,nad2)和细胞色素 c 氧化酶亚基 I(Cytochrome c oxidase subunit 1,cox1)的片段,综合比较 3 种方法提取的基因组DNA扩增效果.结果 3 种方法均可从PSCs中提取出基因组DNA,琼脂糖凝胶电泳和核酸定量结果显示离心柱法提取的基因组DNA A260/A280 比值最高,差异具有统计学意义(P＜0.01),且在加样模板总量一致的情况下,以离心柱法提取的PSCs DNA为模板扩增的cob、nad2 和cox1 基因产物电泳条带清晰、明亮,片段长度准确;而使用 95℃水浴法和碱裂解法提取的PSCs 基因组DNA 仅有效扩增出cob 基因条带.通过离心柱法提取的囊壁组织 DNA 为模板仅扩增出elp 基因片段,小鼠组织基因组DNA未扩增出任何虫体的目的基因片段.结论 使用离心柱法从多房棘球绦虫 PSCs 中提取的基因组DNA质量最佳,能够有效扩增出虫体线粒体基因片段,且无宿主来源细胞的污染,可满足后续实验室对多房棘球绦虫不同虫株的基因型鉴定研究.

[目的]明确危害我国青岛地区3种针叶树的害虫是松针鞘瘿蚊Thecodiplosis japonensis,研究其形态特征、危害特点及扩散方式,以期为该虫的发生监测及防治提供理论基础.[方法]对采自黑松Pinus thunbergii和赤松P.densiflora上瘿蚊的卵、幼虫、蛹及成虫进行观察、拍照和比对.制做玻片观察幼虫剑骨片的形态特征.用扫描电子显微镜观察幼虫头部表面超微结构.提取其基因组DNA,利用通用引物扩增线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)序列并测序,与NCBI数据库中已有序列比对.统计受害枝中单枝瘿瘤数量及每瘿瘤内幼虫数量,计算针叶被害率和每瘿瘤幼虫数目的相关性.观察交配、产卵行为并持续记录其生活史.[结果]老熟幼虫剑骨片和成虫翅脉的形态特征均符合Thecodiplosis japonensis的描述;基于COⅠ基因序列构建邻接法系统发育树(NJ树)显示,山东青岛瘿蚊样本与日本T.japonensis样本聚成一支,置信度为100％,明确了外来入侵种松针鞘瘿蚊已在我国山东黄岛地区定殖.目前该虫主要危害黑松Pinus thunbergii、赤松P.densiflora和油松P.tabulaeformis,幼虫在当年生松针基部为害形成虫瘿并在其中取食,使松针停止生长,而导致被害针叶较健康针叶显著缩短,逐渐枯黄脱落.[结论]本文首次明确在黄岛区危害3种松树树种的针叶造瘿类害虫为松针鞘瘿蚊,描述其生物学特性及危害特征.DNA比对结果对开发松针鞘瘿蚊分子快速鉴定技术提供依据,为疫情的早期监测提供理论基础和参考.

为明确浙江近海(鱚)属鱼类物种组成,对采自舟山和温州近海共计411尾(鱚)鱼样品进行形态学测定,并基于线粒体细胞色素氧化酶Ⅰ亚基(COⅠ)基因片段探讨其序列差异及系统发育关系.结果显示:浙江近海的(鱚)属鱼类为少鳞(鱚)和中国(鱚),两种(鱚)鱼形态特征鲜明,鱼鳔形态差异明显.所测得的少鳞(鱚)和中国(鱚)COⅠ 基因片段长度均为600 bp,平均GC含量分别为46.6％和49.9％.依据Kimura-2-parameter模型(K2P),少鳞(鱚)和中国(鱚)的种内平均遗传距离分别为0.002和0.000,两种间平均遗传距离为0.211.采用邻接法构建的系统发育树显示,中国(鱚)先和邵氏(鱚)聚为一支,然后与少鳞(鱚)聚为一支,再与其他(鱚)属鱼类聚类.研究结果明确了浙江沿海(鱚)属鱼类的物种组成,并为探讨少鳞(鱚)和中国(鱚)的系统发育关系及基于COⅠ基因的(鱚)属鱼类物种鉴定提供了参考.

[目的]明确海南烟粉虱Bemisia tabaci田间种群对2种新型杀虫剂溴氰虫酰胺和氟吡呋喃酮的敏感水平,为杀虫剂的合理施用与烟粉虱的田间抗性监测提供参考.[方法]以2017年1月采自海南省6个地点烟粉虱田间种群为材料,利用线粒体细胞色素氧化酶I基因(mtCOI)测序及mtCOI PCR-RFLP分子标记对采集种群隐种进行鉴定;采用浸叶法测定溴氰虫酰胺和氟吡呋喃酮2种药剂对各地区田间种群的致死中浓度(LC5o).[结果]在海南省6个烟粉虱田间种群中,三亚市吉阳区种群为MEAM1隐种,澄迈县永发镇种群和乐东黎族自治县冲坡镇种群以MED隐种为主的MEAMl(＜10％)与MED隐种(分别为94.6％和92.9％)混合种群,其他3个田间种群均为MED隐种.与溴氰虫酰胺敏感种群相比,除乐东黎族自治县十所种群已处于低水平抗性(RR:5～10倍),其他5个种群均处于敏感水平(RR ＜5倍);所有6个田间种群对氟吡呋喃酮均处于敏感水平(RR ＜3倍).[结论]溴氰虫酰胺和氟吡呋喃酮可作为烟粉虱防控的新药剂,并可作为其抗性治理的替代药剂,但同时应密切关注烟粉虱对溴氰虫酰胺抗性水平变化情况.