目的:探讨转录因子En1在食管鳞状细胞癌（ESCC）细胞中的功能及机制。方法:利用癌症基因组图谱数据库（TCGA）中9 397例泛癌患者的En1表达和总生存资料、4 349例泛癌患者的En1表达和无进展生存资料，分析泛癌中En1表达水平与患者预后的关系。利用基因表达综合数据库（GEO）的53对和国家基因组科学数据中心-组学原始数据归档库（NGDC-GSA）的155对ESCC组织和配对癌旁组织的基因表达资料分析ESCC组织中En1的表达水平。以慢病毒系统介导ESCC细胞KYSE180和KYSE450中En1基因敲降，采用细胞计数试剂盒8法和克隆形成实验检测细胞的增殖能力，Transwell实验检测细胞的迁移能力，采用裸鼠皮下移植瘤实验检测En1对ESCC细胞体内肿瘤生长的影响。采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测细胞中En1及Hedgehog通路主要调控因子胶质瘤相关癌基因家族锌指1（GLI1）、GLI2和平滑蛋白（SMO）的表达。结果:来自TCGA数据库的泛癌样本资料显示，En1低表达患者的总生存时间和无进展生存时间均比En1高表达患者更长（均 P＜0.001）。来自GEO和NGDC-GSA数据库的资料显示，ESCC组织中En1的表达水平高于配对癌旁组织（均 P＜0.001）。功能研究显示，与shNC组相比，敲降En1能显著抑制KYSE180和KYSE450细胞的增殖（均 P＜0.001）、抑制克隆形成［KYSE180细胞：shEn1#1组和shEn1#2组的克隆形成数分别为（138.33±23.07）个和（127.00±19.70）个，均低于shNC组的（340.67±12.06）个（均 P＜0.001）；KYSE450细胞：shEn1#1组和shEn1#2组的克隆形成数分别为（65.33±2.52）个和（9.00±3.00）个，均低于shNC组的（139.00±13.00）个（均 P＜0.001）］、抑制迁移［KYSE180细胞：shEn1#1组和shEn1#2组的迁移细胞数分别为（66.67±12.66）和（71.33±11.02）个，均低于shNC组的（334.67±16.56）个（均 P＜0.001）；KYSE450细胞：shEn1#1组和shEn1#2组的迁移细胞数分别为（112.33±14.57）和（54.33±5.51）个，均低于shNC组的（253.33±21.03）个（均 P＜0.001）］。裸鼠皮下移植瘤实验显示，敲降En1肿瘤的生长速度减慢，shEn1#1组和shEn1#2组小鼠的移植瘤重量分别为（0.046±0.026）g和（0.047±0.025）g，均低于shNC组［（0.130±0.038）g，均 P＜0.001］。RT-qPCR检测结果显示，shEn1#1组和shEn1#2组KYSE180细胞中GLI1 mRNA表达量分别为0.326±0.162和0.322±0.133，shEn1#1组和shEn1#2组KYSE450细胞中GLI1 mRNA表达量分别为0.131±0.006和0.352±0.050，均低于shNC组（均 P＜0.01）。在敲降En1的KYSE450细胞中过表达GLI1，能减弱敲降En1对细胞增殖（ P＜0.001）、克隆形成［shEn1#1-GLI1组的克隆形成数为（151.00±9.54）个，高于shEn1#1-vector组的（102.33±10.02）个（ P=0.004）］和迁移［shEn1#1-GLI1组的迁移细胞数为（193.67±10.07）个，高于shEn1#1-vector组的（109.33±11.50）个（ P＜0.001）］的抑制作用。ESCC组织中GLI1、GLI2、GLI3、音猬因子、SMO和补缀同源物1的表达水平均高于配对癌旁组织，Hedgehog通路被激活。 结论:En1在ESCC组织中高表达，其通过调节Hedgehog信号通路在促进ESCC细胞增殖和迁移中发挥重要作用。

目的:观察Waardenburg综合征（WS）患儿眼部临床特征和基因突变位点。方法:病例系列研究。2019年至2021年于四川大学华西医院眼科经临床及基因检查确诊的WS患儿3例纳入研究。其中，男性2例，女性1例；年龄分别为3、4、12个月。患儿均行外眼、眼前节、眼底和荧光素眼底血管造影检查，观察其眼部临床特征。抽取3例患儿外周静脉血，提取全基因组DNA行全外显子测序，分析其基因突变位点。结果:3例患儿均有不同程度虹膜色素减少和眼底色素异常，并伴有感音神经性听力障碍；例1患儿同时存在内眦间距宽，例2患儿同时存在黄斑中心凹发育不良。基因测序结果显示，例1患儿配对盒基因3 （ PAX3）基因第2~8号外显子存在大片段杂合缺失，最终诊断为WS Ⅰ型；例2患儿小眼畸形相关转录因子（ MITF）基因第9号外显子c.1066 C> T杂合突变、 HPS6基因第1号外显子c.1417 G> T杂合突变，最终诊断为WS Ⅱ型；例3患儿 SOX10基因第3号外显子c.497_500 delAAGA杂合缺失，最终诊断为WS Ⅳ型。 PAX3和 SOX10基因突变均为新发现突变。 结论:WS眼部临床特点包括虹膜色素减少和眼底色素异常、内眦异位； PAX 3基因第2~8号外显子大片段杂合缺失、 MITF基因第9号外显子c.1066 C> T杂合突变、 SOX10基因第3号外显子c.497_500 delAAGA杂合缺失分别是3例患儿的致病基因突变。

目的:探讨配对盒基因6 (paired box 6，PAX6)在先天性巨结肠(Hirschsprungs disease，HSCR)患儿结肠组织内低表达的分子机制。方法:选取24例HSCR患儿巨结肠根治术后痉挛段结肠组织为HSCR组，同期18例新生儿坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis，NEC)手术切除坏死肠段两端正常结肠组织为NEC组作为对照。采用实时定量聚合酶链反应及蛋白免疫印迹法检测两组结肠组织内PAX6的表达水平，染色质免疫共沉淀-实时定量聚合酶链反应法检测两组结肠组织中PAX6启动子区组蛋白H3K9乙酰化水平及E1A结合蛋白p300 (EP300)结合水平。结果:HSCR组PAX6 mRNA和蛋白表达水平明显低于NEC组(0.13±0.05比1.08±0.45，0.41±0.12比0.82±0.12)，PAX6启动子区组蛋白H3K9乙酰化水平和EP300结合水平也明显低于NEC组(0.45±0.17比1.38±0.59，0.32±0.15比1.45±0.49 )，差异均有统计学意义( P<0.01)。HSCR组PAX6表达水平与其启动子区组蛋白H3K9乙酰化水平成正相关( r＝0.664， P<0.05)，H3K9乙酰化水平与EP300结合水平成正相关( r＝0.624， P<0.05) 。 结论:HSCR患儿结肠组织中PAX6低表达可能与其启动子区EP300结合减少导致H3K9乙酰化水平下调有关。

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)C3orf77-2对头颈鳞癌细胞增殖和迁移的影响。方法:收集2021年9月至2023年9月郑州大学第一附属医院收治并接受手术治疗的30例下咽鳞癌患者的临床样本作为研究对象。选取下咽鳞癌组织和癌旁组织标本，运用lncRNA芯片技术检测下咽鳞癌组织和配对的癌旁组织标本中lncRNA的表达，分析差异表达的非编码RNA；实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)验证基因芯片差异基因；收集临床数据，分析lncRNA C3orf77-2表达与各种临床病理的相关性；下咽鳞癌FaDu细胞随机分为对照组、siNC组、lncRNA C3orf77-2 si-lnc1组、lncRNA C3orf77-2 silnc2组；沉默lncRNA C3orf77-2后，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和克隆形成实验检测细胞增殖能力，细胞划痕实验检测细胞迁移能力；组间比较采用最小显著差异法LSD- t检验进行统计分析。 结果:下咽鳞癌组织中lncRNA C3orf77-2表达量(0.78±0.14)显著高于癌旁组织(0.13±0.10)，差异有统计学意义( t＝14.96， P<0.01)。下咽鳞癌组织中lncRNA C3orf77-2的表达与患者肿瘤分化程度( F＝4.3， P<0.05)、TNM分期( F＝13.4， P<0.05)、淋巴结转移( t＝4.07， P<0.05)明显相关；CCK-8结果显示，各组细胞在24、48、72 h的吸光度值分别为空白对照组(0.360±0.018、0.546±0.047、0.882±0.028)，siNC组(0.401±0.018、0.561±0.037、0.825±0.056)，lncRNA C3orf77-2 si-lnc1(0.230±0.031、0.416±0.009、0.555±0.048)和lncRNA C3orf77-2 si-lnc2(0.244±0.008、0.367±0.041、0.531±0.022)，差异有统计学意义( F24 h＝15.6、 F48 h＝360.7、 F72 h＝105.7， P<0.01)。克隆形成实验结果显示，siNC组(89.00±0.58)，lncRNA C3orf77-2 si-lnc1(31.67±1.76)，lncRNA C3orf77-2 si-lnc2(22.67±1.76)，空白对照组(94.00±2.52)，差异有统计学意义( F＝433.6， P<0.01)。细胞划痕实验显示：si-NC组(36.67±4.33)，lncRNA C3orf77-2 si-lnc1(10.83±1.17)，lncRNA C3orf77-2 si-lnc2(12.00±1.67)，差异有统计学意义( F＝78.8， P<0.01)。 结论:lncRNA C3orf77-2在下咽鳞癌组织中表达显著上调，且与患者的临床病理特征相关。沉默lncRNA C3orf77-2可显著抑制FaDu细胞的增殖、迁移。

目的:探讨儿童进行性限制性斜视的临床特征、影像学表现、组织病理学特点及手术效果。方法:回顾性病例系列研究。收集2017年6月至2022年10月在天津市眼科医院就诊的进行性限制性斜视9例（9只眼）患儿的资料，比较患儿双眼眼球突出度及受累眼在第一眼位及水平内外转时睑裂高度的改变，总结患儿的临床特征并对行斜视矫正手术患儿术中情况、手术效果及术后组织病理学结果进行分析。采用Wilcoxon符号秩检验和Friedman双向秩方差分析进行统计学处理。结果:9例患儿均为单眼发病，其中男性4例，女性5例；右眼3例，左眼6例；发病年龄为2~40个月。患儿双眼眼球突出度右眼为13.00（12.00，13.00）mm，左眼为12.00（12.00，13.50）mm，差异无统计学意义（ Z=-1.00， P=0.317）；受累眼睑裂高度内转为8.00（7.25，8.00）mm，第一眼位为7.50（7.00，8.00）mm，外转为8.00（7.75，8.00）mm，差异无统计学意义（ χ2=1.00， P=0.607）。所有患儿头颅CT或MRI检查均未见明显异常，血清学及免疫学检查亦未见明显异常，而眼眶CT或MRI检查均提示不同眼外肌肌腹增粗。9例患儿中6例行斜视矫正手术，手术患儿术前均行被动牵拉试验，受累眼向各个方向运动均受到不同程度限制。术后第一眼位正位，但眼球运动仍受限。对3例患儿术中眼外肌取材行组织病理学检查，1例提示主要为增生的胶原纤维；1例在弥漫型增生的胶原纤维之间散在束状排列的平滑肌纤维，1例表现为异常增生的横纹肌纤维，部分横纹肌纤维直径大小不一，配对盒（PAX）基因阳性的卫星细胞增多，以表达慢肌球蛋白的肌纤维为主。 结论:儿童进行性限制性斜视呈限制性改变，受累眼眼球突出度及睑裂高度无明显改变，影像学检查显示受累眼外肌肌腹增粗；被动牵拉试验发现受累眼向各个方向运动均受到不同程度限制，虽然斜视矫正手术可以改善眼位，但术后眼球运动仍存在受限因素；部分患儿组织病理学表现为骨骼肌纤维或胶原纤维异常增生。

目的:探讨配对盒基因9(Pax9)、CXC趋化因子配体14(CXCL14)和转化生长因子β 1(TGF-β 1)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清中的表达及其与其预后的关系。 方法:本研究为病例对照研究。采用非随机抽样的方法选取2018年3月至2020年3月大冶市人民医院收治的72例NSCLC患者为试验组，另选取60名同期体检健康者为对照组。采用酶联免疫吸附法检测并比较2组受试者血清中Pax9、CXCL14和TGF-β 1水平，分析上述血清指标与行根治性放化疗NSCLC患者预后的关系。绘制受试者工作特性曲线评价上述血清指标预测NSCLC患者生存预后的效能，采用多因素logistic回归分析NSCLC患者生存预后的独立危险因素。 结果:试验组血清Pax9、CXCL14和TGF-β 1水平均高于对照组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。72例NSCLC患者随访期间有37例(51.39%)死亡(死亡组)，35例(48.61%)患者生存(生存组)。生存组TNM分期为Ⅳ期占比及血清Pax9、CXCL14和TGF-β 1水平低于死亡组，分化程度为高分化、靶向治疗占比高于死亡组，差异有统计学意义(均 P<0.05)；2组年龄、性别、吸烟史、ECOG、肿瘤大小和肿瘤类型比较差异均无统计学意义(均 P>0.05)。血清Pax9、CXCL14和TGF-β 1对NSCLC患者生存预后均有一定预测效能，曲线下面积分别为0.778、0.833和0.735；上述3项血清指标联合预测NSCLC患者生存预后的曲线下面积为0.945。TNM分期和Pax9、CXCL14和TGF-β 1是NSCLC患者生存预后的独立危险因素(均 P<0.05)，分化程度和靶向治疗是NSCLC患者生存预后的独立保护因素(均 P<0.05)。 结论:Pax9、CXCL14和TGF-β 1在NSCLC患者血清中表达升高，并与NSCLC患者生存预后较差相关，可作为预测NSCLC患者生存预后潜在的生物标志物。

目的:分析总结卵巢浆液性癌(SOC)腹腔积液中肿瘤细胞的病理形态学及免疫细胞化学特点。方法:采集2015年1月至2021年7月南京医科大学附属无锡人民医院收治的61例肿瘤患者的浆膜腔积液标本，包括32例SOC、10例胃肠道腺癌、5例胰腺导管腺癌、6例肺腺癌、4例良性间皮增生和1例恶性间皮瘤患者的腹腔积液，2例恶性间皮瘤患者的胸腔积液，1例恶性间皮瘤患者的心包积液，离心后制成常规涂片，将剩余积液离心后制成细胞蜡块并行常规HE染色和免疫细胞化学染色，分析其细胞形态学和免疫细胞化学特点。抽取患者空腹肘静脉血5 ml，检测血清肿瘤标志物糖类抗原125(CA125)、癌胚抗原(CEA)和糖类抗原19－9(CA19－9)的水平。结果:32例SOC患者中，5例为低级别浆液性癌(LGSOC)，27例为高级别浆液性癌(HGSOC)。29例(90.6%)SOC患者血清CA125增高，但与纳入研究的非卵巢原发病变患者间差异均无统计学意义(均 P>0.05)；9例胃肠道腺癌和5例肺腺癌患者血清CEA阳性，阳性率高于SOC患者(均 P<0.001)；5例胃肠道腺癌和5例胰腺导管腺癌患者血清CA19－9阳性，阳性率高于SOC患者(均 P<0.05)。4例良性间皮增生患者的血清CA125、CEA和CA19－9均在正常范围内。LGSOC肿瘤细胞异型性小，聚集成小簇状或微乳头状，部分患者可见砂砾体；背景细胞较少，以淋巴细胞为主；制成细胞蜡块后，乳头结构更为明显。HGSOC肿瘤细胞异型性大，细胞核增大明显，且大小不等，可相差3倍以上，有时可见到核仁及核分裂象；肿瘤细胞多聚集成巢团状、乳头状及梅花状；背景细胞较多，以组织细胞为主。免疫细胞化学染色显示，AE1/AE3、细胞角蛋白7(CK7)、配对盒基因8(PAX－8)、CA125、肾母细胞瘤基因(WT1)在32例SOC中均为弥漫阳性表达。抑癌基因p53在5例LGSOC中均呈局灶阳性，在23例HGSOC中呈弥漫阳性表达，在另外4例HGSOC中呈阴性表达。胃肠道腺癌和肺腺癌多有手术史，胰腺导管腺癌的肿瘤细胞往往形成较小的细胞巢。间皮源性病变多有特征性"开窗"现象，免疫细胞化学可协助鉴别诊断。 结论:结合患者的临床表现、腹腔积液涂片及细胞块中的细胞形态学特点，可为SOC的诊断提供重要的线索，辅以免疫细胞化学检测可进一步提高诊断的准确性。

目的:探讨Ras相关结合蛋白23（RAB23）在食管鳞状细胞癌（简称食管鳞癌）细胞侵袭和迁移中的作用和机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应检测16例配对食管鳞癌及癌旁正常组织中RAB23 mRNA的表达。比较基因表达综合（GEO）数据库的GSE20347数据集中食管鳞癌和配对癌旁正常组织RAB23 mRNA的表达水平。免疫组织化学检测106例配对食管鳞癌和癌旁正常组织、33例淋巴结阳性与10例淋巴结阴性患者原发灶与淋巴结组织中RAB23蛋白含量。在食管鳞癌KYSE30和KYSE150细胞中瞬时敲降RAB23表达（转染si-RAB23-1和si-RAB23-9）或者稳定敲降RAB23表达（转染sh-RAB23），采用Western blot法验证RAB23敲降效率，采用细胞计数试剂盒8法和裸鼠皮下成瘤实验检测食管鳞癌细胞的增殖能力，采用Transwell实验和裸鼠尾静脉-肺转移实验检测食管鳞癌细胞的侵袭和迁移能力，采用细胞黏附实验检测食管鳞癌细胞的黏附能力，采用转录组测序技术分析RAB23敲降后对细胞转录谱的影响，并通过Western blot检测验证相关信号通路。结果:16例食管鳞癌组织中RAB23 mRNA表达水平为0.009 7±0.008 9，高于癌旁正常组织［0.003 2±0.003 7， P=0.006］。对GEO数据库GSE20347数据集中食管鳞癌和配对癌旁正常组织表达谱的生信分析显示，食管鳞癌组织中RAB23 mRNA表达水平为4.30±0.25，高于癌旁正常组织（4.10±0.17， P=0.037）。106例食管鳞癌组织中，51例RAB23低表达，55例RAB23高表达；而配对癌旁正常组织中，82例RAB23低表达，24例RAB23高表达，食管鳞癌组织中RAB23表达水平高于配对癌旁正常组织（ P＜0.001）。33例淋巴结阳性食管鳞癌组织中，1例RAB23低表达，32例RAB23高表达；10例淋巴结阴性的食管鳞癌组织中，3例RAB23低表达，7例RAB23高表达。淋巴结阳性食管鳞癌组织中RAB23表达水平高于淋巴结阴性食管鳞癌组织（ P=0.024）。33例阳性淋巴结组织中，1例RAB23低表达，32例RAB23高表达，而10例阴性淋巴结组织中均为RAB23低表达。阳性淋巴结组织中RAB23表达水平高于阴性淋巴结组织（ P＜0.001）。瞬时或稳定敲降RAB23后，KYSE30细胞体外和体内的增殖能力无明显变化，KYSE30细胞的细胞侵袭和迁移能力下降，而KYSE150细胞仅侵袭能力下降，迁移能力无明显变化。sh-RAB23组KYSE30细胞黏附细胞的数量为（313.75±89.34）个，少于sh-NC组［（1 030.75±134.29）个， P＜0.001］。sh-RAB23组KYSE150细胞的黏附细胞数为（710.5±31.74）个，也少于sh-NC组［（1 005.75±61.09）个， P＜0.001］。转录组测序分析显示，敲降RAB23后，si-RAB23-1组和si-RAB23-9组KYSE30细胞中黏着斑相关信号通路均被削弱，sh-RAB23组KYSE30和KYSE150细胞中p-FAK和p-paxillin表达水平降低。 结论:RAB23在食管鳞癌组织中高表达，与淋巴结转移有关。敲低RAB23表达后能够削弱黏着斑相关信号通路，进而抑制食管鳞癌细胞的侵袭、迁移和黏附。

目的:分析肺透明细胞瘤（CCTL）的临床病理学特征。方法:收集解放军总医院第一医学中心和解放军总医院海南医院病理科2008年8月至2019年8月病例共9例CCTL患者的临床资料、组织形态特点、免疫组织化学染色及特殊染色结果，分析其临床病理学特征。结果:本组病例男3例，女6例，年龄28~70岁（平均52.2岁）。肿瘤均位于肺的周边部，8例为单发，1例为多发（24个结节）。肿瘤最大径0.5~5.5 cm不等，呈圆形或椭圆形，与周围肺组织边界清楚，无完整的纤维性包膜。镜下见肿瘤细胞卵圆形、短梭形或多角形，核仁明显，无核分裂像；瘤细胞多围绕薄壁血管呈片状分布，血管周围间质可有透明变性，未见坏死。免疫组织化学染色：肿瘤细胞波形蛋白弥漫阳性，血管内皮细胞标记CD34、黑色素A、抗黑色素瘤特异性单抗（HMB45）及酸性钙结合蛋白（S-100）不同程度阳性，广谱细胞角蛋白（CK）、上皮膜抗原（EMA）、平滑肌肌动蛋白（SMA）、结蛋白、共同型急性淋巴细胞白血病抗原（CD10）、配对盒基因8（PAX-8）及肌调节蛋白（Myo-D1）均阴性，增殖细胞核抗原（Ki-67）阳性指数低。过碘酸雪夫染色（PAS染色）阳性，淀粉酶消化糖原后PAS染色（d-PAS染色）阴性。预后方面，9例均经手术切除，术后随访5~137个月，除1例失访，其余8例均存活，未出现本病的复发及转移。结论:CCTL是一种罕见的良性肿瘤，大多数为单发，极少数可以多发；病理组织学形态及免疫组织化学染色有助于诊断及鉴别诊断。手术完整切除后，预后良好。但当肿瘤出现恶性的组织学特点时，需密切随访。

目的:探讨间充质干细胞(MSC)在非小细胞肺癌(NSCLC)抵抗表皮生长因子受体抑制剂(EGFR-TKI)耐药过程中的作用及其机制。方法:HCC827及PC-9肺腺癌细胞与MSC共培养后给予吉非替尼处理，检测肺癌细胞凋亡变化；应用荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测共培养刺激后MSC细胞表达生长因子及细胞因子的情况；收集培养癌旁和远端正常肺组织来源MSC并行微小核糖核酸(miRNA)表达谱检测，并采用miRNA模拟物及抑制剂进行功能验证；此外，行聚合酶链反应微阵列分析(PCR Array)检测进一步探讨MSC调控NSCLC细胞抵抗吉非替尼的机制。两组数值间比较应用非配对 t检验。 结果:肺癌来源MSC的miR-26a表达组低于正常肺组织来源MSC的miR-26a表达组(53.3%， t＝4.626， P<0.01)，而肺癌来源MSC的miR-146a表达组高于正常肺组织来源MSC的miR-146a表达组(1.83倍， t＝4.895， P<0.01)。应用Transwell体系共培养肺癌细胞和MSC 48 h后发现，肺癌细胞(HCC827细胞)来源的miR-26a表达组明显低于MSC来源的miR-26a表达组(45.7%， t＝1.866， P<0.05)；且肺癌细胞(PC-9细胞)来源的miR-26a表达组也明显低于MSC来源的miR-26a表达组(62.0%， t＝1.728， P<0.05)，同时肺癌细胞(HCC827细胞)来源的肝细胞生长因子(HGF)表达组明显高于MSC来源的HGF表达组(3.88倍， t＝2.014， P<0.05);且肺癌细胞(PC-9细胞)来源的HGF表达组也明显高于MSC来源的HGF表达组(5.29倍， t＝2.197， P<0.05)。此外，MSC培养液可促进HCC827细胞可高表达转运蛋白和药物代谢基因三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2(ABCG2)(4.23倍)和细胞色素P450酶2C9(CYP2C9)(2.18倍)。 结论:肺癌来源的MSC通过异常表达miR-26a和miR-146a调控促肿瘤细胞因子增强NSCLC细胞对EGFR-TKI的抗药性。