目的:探讨去泛素化酶（CYLD）在小鼠心肌细胞衰老中的作用及机制。方法:选取野生型FVB（WT）小鼠和CYLD过表达（CYLD +/+）小鼠构建自然衰老模型。2月龄雄性WT小鼠（WT-2M， n=10）和CYLD +/+小鼠（CYLD-2M， n=10）作为年轻组，普通饲养17.5月（WT-17.5M，CYLD-17.5M， n=10）作为年老组。小动物超声检测心功能[左室短轴缩短率（LVFS）、左室射血分数（LVEF）]，蛋白免疫印迹检测心肌组织衰老相关蛋白p53、p21、p16表达水平，实时荧光定量PCR（qPCR）检测心肌组织衰老相关分泌表型（SASP） [细胞因子白介素-1β（IL-1β）、基质金属蛋白酶3（MMP3）、趋化因子CXCL1（CXCL1）]转录水平。转录组测序检测CYLD调控心肌细胞衰老的信号通路，对肿瘤坏死因子α（TNF-α）通路行qPCR验证。 结果:与WT-17.5M小鼠比较，CYLD-17.5M小鼠心功能LVEF和LVFS值增高（均 P<0.05）；p53、p21、p16蛋白表达水平减低（均 P<0.05），IL1B、MMP3、CXCL1转录水平也下降（均 P<0.05）。与WT-2M小鼠比较，WT-17.5M小鼠p53、p21、p16蛋白表达明显升高（均 P<0.01），IL1B、MMP3及CXCL1转录水平上调（均 P<0.01）。转录组测序发现WT-17.5M小鼠较WT-2M小鼠表达上调的信号通路64个，CYLD-17.5M小鼠较WT-17.5M小鼠表达下调的信号通路37个，二者共有的差异信号通路29个。选取TNF-α通路行qPCR验证，WT-17.5M较WT-2M小鼠TNF-α转录水平明显上调（ P<0.05），且高于CYLD-17.5M小鼠（ P<0.05）。 结论:CYLD对心肌自然衰老起保护作用，TNF-α通路介导可能是CYLD保护心肌衰老的作用机制之一。

目的:探讨圆柱瘤基因(CYLD)在非小细胞肺癌中的表达及其对增殖和转移特性的影响。方法:选取2021年6月到2023年12月阜外华中心血管病医院、河南省人民医院和郑州大学人民医院收治的93例非小细胞肺癌组织和癌旁组织作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析组织中CYLD mRNA表达水平；采用对照慢病毒和CYLD过表达慢病毒感染人非小细胞肺癌H1299细胞系，建立对照组和CYLD组，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、EdU和体外移植瘤分析CYLD对细胞增殖的影响；采用划痕实验、Transwell实验和体外移植瘤分析CYLD对非小细胞肺癌的转移的影响。采用蛋白质印迹法(Western blot)分析CYLD对细胞细胞核增殖抗原(Ki-67)、c-MYC、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和活化因子蛋白1(AP1)蛋白表达水平的影响。组间计量数据比较采用 t检验。 结果:癌旁组织CLYD蛋白表达水平(1.02±0.17)明显高于非小细胞肺癌组织(0.49±0.29)，差异有统计学意义( t＝15.300， P<0.05)。癌旁组织CLYD mRNA表达水平(1.52±0.23)明显高于非小细胞肺癌组织(0.68±0.12)，差异有统计学意义( t＝30.860， P<0.05)。对照组细胞活力[(86.84±6.05)%]明显高于GLYD组细胞[(57.95±3.79)%]，差异有统计学意义( t＝9.909， P<0.05)。对照组细胞EdU阳性率[(82.97±5.65)%]明显高于GLYD组细胞[(49.95±9.43)%]，差异有统计学意义( t＝7.352， P<0.05)。对照组细胞成瘤体积[(919.09±61.86) mm 3]明显高于GLYD组细胞[(639.93±51.24) mm 3]，差异有统计学意义( t＝8.512， P<0.05)。对照组细胞划痕愈合率[(83.49±4.20)%]明显高于GLYD组细胞[(46.71±5.15)%]，差异有统计学意义( t＝13.560， P<0.05)。对照组细胞划痕愈合数[(141.83±11.48)个]明显高于GLYD组细胞[(87.17±7.70)个]，差异有统计学意义( t＝9.686， P<0.05)。对照组细胞体内转移灶[(11.17±2.79)个]明显高于GLYD组细胞[(5.67±2.07)个]，差异有统计学意义( t＝3.884， P<0.05)。对照组细胞细胞Ki-67、c-MYC、Cyclin D1、JNK和AP1蛋白表达水平(0.95±0.10、1.20±0.06、0.93±0.06、1.48±0.09、1.31±0.08)明显高于GLYD组细胞(0.63±0.07、0.81±0.10、0.67±0.12、1.04±0.13、0.63±0.07)，差异有统计学意义( t＝6.612、9.613、4.657、6.724、15.770， P<0.05)。 结论:CYLD在非小细胞癌组织中呈低表达，过表达CYLD可抑制非小细胞肺癌的增殖和转移能力，主要与JNK1信号通路相关。

目的:探讨微小RNA(miRNA，miR)-499-5p靶向CYLD对肿瘤细胞增殖和侵袭的影响。方法:选取2020年5月至2022年5月我院收治的宫颈癌组织和癌旁组织作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析miR-499-5p表达水平。采用对照miRNA和miR-499-5p抑制剂转染宫颈癌细胞Hela，命名为对照miRNA组和miR-499-5p KD组，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、克隆形成实验和5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(5-Ethynyl-2′-deoxyuridine，EdU)染色法分析肿瘤细胞增殖能力；采用划痕和Transwell分析两组细胞的迁移能力。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-499-5p靶基因。采用蛋白质免疫印迹(Western blot)分析两组细胞增殖、侵袭和靶蛋白表达水平。组间比较采用 t检验。 结果:宫颈癌组织中miR-499-5p表达水平(1.78±0.21)明显高于癌旁组织(1.07±0.14)，差异有统计学意义( t＝22.920， P<0.05)。对照组细胞吸光度( A)值水平(2.23±0.15)明显高于miR-499-5p KD组(1.45±0.08)，差异有统计学意义( t＝11.150， P<0.05)。对照组细胞克隆形成率[(80.97±3.36)%]明显高于miR-499-5p KD组[(57.99±9.87)%]，差异有统计学意义( t＝5.396， P<0.05)。对照组细胞克隆形成率[(87.24±3.87)%]明显高于miR-499-5p KD组[(67.38±2.51)%]，差异有统计学意义( t＝22.920， P<0.05)。对照组细胞细胞核增殖抗原(Ki-67)表达水平(1.36±0.10)明显高于miR-499-5p KD组(0.92±0.06)，差异有统计学意义( t＝9.218， P<0.05)。对照组细胞划痕愈合率[(73.37±4.01)%]明显高于miR-499-5p KD组[(57.21±2.29)%]，差异有统计学意义( t＝7.637， P<0.05)。对照组细胞克隆形成率[(106.83±8.95)个]明显高于miR-499-5p KD组[(81.17±7.49)个]，差异有统计学意义( t＝5.384， P<0.05)。对照组细胞黏着斑激酶(FAK)蛋白表达水平(1.16±0.11)明显高于miR-499-5p KD组(0.67±0.06)，差异有统计学意义( t＝9.409， P<0.05)。CYLD是miR-499-5p靶基因。对照组细胞CYLD蛋白表达水平(0.98±0.08)明显低于miR-499-5p KD组(1.59±0.06)，差异有统计学意义( t＝15.500， P<0.05)。癌旁组织CYLD蛋白表达水平(1.36±0.11)明显高于miR-499-5p KD组(0.74±0.10)，差异有统计学意义( t＝19.310， P<0.05)。 结论:miR-499-5p在宫颈癌组织中高表达，主要靶向调控CYLD表达参与宫颈癌细胞的增殖和侵袭过程。

目的 探讨miR-181b通过下调CYLD蛋白影响甲状腺乳头状癌细胞的增殖和凋亡行为及其机制.方法 qPCR检测miR-181b在甲状腺乳头状癌组织和正常甲状腺组织中的表达情况及差异;Western blotting实验检测miR-181b与CYLD蛋白之间的调控作用;克隆形成实验检测抑制miR-181b后甲状腺癌细胞增殖能力的变化情况;流式细胞术实验检测抑制miR-181b后甲状腺癌细胞凋亡行为的变化情况.结果 与正常甲状腺组织相比,甲状腺乳头状癌组织中miR-181b的表达水平相对上调,差异具有统计学意义(P<0.05);在FTC-133细胞株中miR-181b的表达水平相对较高;Western blotting实验证实miR-181b能直接调控CYLD蛋白的表达水平;抑制miR-181b的表达后可以抑制甲状腺癌细胞的增殖行为,并在一定程度上促进其凋亡.结论 miR-181b可以调控CLYD的表达影响甲状腺癌细胞的增殖和凋亡行为.

目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-362-5p对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、凋亡的影响及其调控机制.方法 通过实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测人胃癌细胞株和正常胃黏膜细胞中miR-362-5p的表达;采用脂质体瞬时转染技术转染miR-362-5p抑制物;噻唑蓝(MTT)法检测miR-362-5p对胃癌细胞株SGC-7901增殖能力的影响;流式细胞术检测miR-362-5p对胃癌细胞周期和凋亡的影响;利用Targetscan信息学预测软件预测miR-362-5p靶向调控Cylindrom-atosis (CYLD)基因,构建携带CYLD野生型及突变型3'非翻译区(3'UTR)野生型和突变型荧光素酶报告载体,并利用双荧光素酶活性分析检测;Western blot检测miR-362-5p对CYLD蛋白表达的调控作用.结果 miR-362-5p在胃癌细胞株SGC-7901、AGS、MKN28的表达水平分别为6.27±0.70、4.63±0.35、5.53±0.45,明显高于胃黏膜细胞(P =0.006、0.003、0.003).转染miR-362-5p抑制物后,胃癌细胞SGC-7901中miR-362-5p表达水平下降[miR-362-5p-IN组(0.41 ±0.07),miR-362-5pNC组(0.84±0.07),P=0.022].下调miR-362-5p后显著抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖[48 h(吸光度值):miR-362-5p-IN组:0.28±0.02,miR-362-5p NC组:0.45±0.04,P=0.028;72 h(吸光度值):miR-362-5p-IN组:0.33±0.02,miR-362-5p NC组:0.61±0.04,P=0.003];下调miR-362-5p后流式细胞术结果显示胃癌细胞G1/Go期比例增加[miR-362-5p-IN组:(78.04±3.74)％,miR-362-5pNC组:(67.86±3.35)％,P=0.017],凋亡增加[miR-362-5p-IN组:(33.29±4.86)％,miR-362-5pNC组:(18.20±0.80)％,P=0.040].双荧光素酶报告基因实验验证CYLD是miR-362-5p的潜在靶基因.Western blot法检测结果显示CYLD蛋白水平与miR-362-5p表达呈负相关.结论 miR-362-5p可通过靶向负调控CYLD蛋白,促进胃癌细胞的增殖,抑制细胞凋亡,进而促进胃癌的发生发展.

目的:研究CYLD蛋白在毛发上皮瘤、毛母细胞瘤和汗管瘤等皮肤附属器肿瘤中的分布、表达特征,探索皮肤附属器肿瘤的发病机理.方法:收集毛发上皮瘤、毛母细胞瘤和汗管瘤患者皮损,进行CYLD蛋白免疫组织化学染色,并通过IPP软件测定平均光密度值进行半定量分析.结果:毛发上皮瘤组、毛母细胞瘤组的平均光密度值均低于正常人毛囊对照组(P＜0.001),但毛发上皮瘤组和毛母细胞瘤组CYLD蛋白平均光密度值比较,差异无统计学意义(P＞0.05).汗管瘤组的平均光密度值低于正常人汗腺对照组(P＜0.001).结论:CYLD蛋白表达于正常角质形成细胞(基底层和颗粒层为主)、毛囊、汗腺和皮脂腺的细胞质和细胞核周围区域;毛发上皮瘤、毛母细胞瘤、汗管瘤的肿瘤组织中CYLD蛋白表达水平均显著下降,提示这三种皮肤附属器肿瘤的致病机理可能与CYLD蛋白表达下调有关.

目的 研究miR-320a和头帕肿瘤综合征蛋白( CYLD)在胃癌患者中的表达及其与临床病理特征及预后的关系.方法 选取2013年3月—2014年11月在我院行肿瘤切除术的460例胃癌患者作为研究对象,分别收集患者肿瘤组织及癌旁非肿瘤胃粘膜组织,采用荧光定量PCR检测miR-320a和CYLD mRNA表达水平,采用免疫组织化学染色法检测CYLD蛋白表达,分析miR-320a和CYLD表达水平及其与临床病理特征及预后的关系.结果 miR-320a和CYLD mRNA在肿瘤组织中的相对表达量为(0. 37 ± 0. 09)、(0. 91 ± 0. 23),在癌旁非肿瘤组织中的相对表达量为(0. 86 ± 0. 15),(1. 56 ± 0.42),miR -320a 和 CYLD mRNA 在肿瘤组织中的相对表达量与非肿瘤组织比较,差异具有统计学意义(t =60. 078, 29. 113,P<0. 001);CYLD蛋白在肿瘤组织中的阳性表达率43. 48%与癌旁非肿瘤组织73. 91%比较,差异具有统计学意义(χ2=86. 624,P=0. 003);miR-320a表达水平与患者肿瘤直径和淋巴结转移有关(χ2=25. 859,13. 742,P<0. 05);YLD表达水平与患者TNM分期和肿瘤分化程度有关(χ2=37. 725,59. 323,P<0. 05). miR-320a低表达患者中位生存期(20. 36 ± 0. 56)(95% CI:19. 252~21. 462)与miR-320a高表达患者中位生存期(28. 29个月95% CI:27. 158~29. 412个月)比较,差异具有统计学意义(χ2=87. 967,P<0. 001);CYLD阴性表达患者中位生存期(17. 70个月95% CI:16. 599~18. 796个月)与CYLD阳性表达患者中位生存期(26. 74个月95% CI:25. 474~27. 997个月)比较,差异具有统计学意义( χ2=109. 887,P<0. 001);miR-320a和CYLD共表达患者中位生存期(29. 01个月95% CI:26. 831~28. 946个月)与非共表达患者中位生存期(17. 13个月95% CI:17. 214~19. 568个月)比较,差异具有统计学意义(χ2=117. 680,P<0. 001).肿瘤组织miR-320a与CYLD mRNA表达水平呈正相关(r=0. 607,P<0. 001);miR-320a低表达、CYLD阴性表达、TNM分期、淋巴结转移及肿瘤分化程度是影响胃癌患者预后的独立危险因素( HR=1. 939、2. 180、1. 561、1. 719、1. 608,95% CI:1. 141~3. 295,1. 252~3. 796,1. 014~2. 403,1. 115~2. 650,1. 097~2. 357,P<0. 05).结论 miR-320a和CYLD在胃癌患者肿瘤组织中表达量明显降低,与疾病发生发展及不良预后有关,是潜在的胃癌诊断及治疗新靶点.

目的 探究复方丹参注射液对重症急性胰腺炎(SAP)肺损伤(ALI)大鼠肺组织的改善作用,并探究其可能的作用机制.方法 将SD大鼠分为假手术组、模型组、复方丹参注射液(SM)低、中、高剂量组、地塞米松组,每组12只大鼠,HE染色观察胰腺、肺组织损伤情况;测量腹水量、肺组织干、湿质量;测定肺泡灌洗液(BAL)中中性粒细胞(PMN)数量以及动脉血中血气指标;蛋白免疫印迹(WB)、免疫组化法分析CYLD/NF-κB通路蛋白表达;酶联免疫吸附法检测BAL中炎性细胞因子水平.结果 与假手术组比较,模型组大鼠胰腺、肺组织病理评分、腹水量、胰腺、肺组织W/D、PMN、PaCO2、p-p65、p-IκBα蛋白表达、TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA升高,PaO2、OI、CYLD蛋白表达、SOD水平降低(P＜0.05).与模型组相比,SM组、地塞米松组胰腺、肺组织病理评分、腹水量、胰腺、肺组织W/D 、PMN、PaCO2、p-p65、p-IκBα蛋白表达、TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA均降低,PaO2、OI、CYLD蛋白表达、SOD水平均升高(P＜0.05).结论 复方丹参注射液可缓解SAP-ALI大鼠炎症损伤,可能与激活肺组织CYLD、抑制/NF-κB信号通路激活有关.

目的:本研究主要是miR-802促进上皮-间质转化(EMT)的发展抑制CYLD激活NF-κB信号通路,促进膀胱尿路上皮癌发生与发展.方法:qRT-PCR检测miR-802在膀胱尿路上皮癌肿瘤组织和癌旁正常组织中的表达,膀胱尿路上皮癌细胞系(T24、5637、J82、BIU-87、SW870、UM-CM-3)与非肿瘤正常尿路上皮细胞系SV-HUC-1的表达及与临床特征因素的相关性;预测靶基因CYLD,用荧光素酶报告基因法及Western blot检测与miR-802的调控关系;Western blot检测3种EMT相关蛋白表达水平(E-cadherin、N-cadherin及Vimentin)与miR-802的相关性;qRT-PCR检测127例膀胱尿路上皮癌肿瘤组织和癌旁正常组织及膀胱尿路上皮癌细胞系T24、5637、J82、BIU-87、SW870、UM-CM-3与非肿瘤正常尿路上皮细胞系SV-HUC-1中的CYLD mRNA表达;Western blot检测膀胱尿路上皮癌肿瘤组织中CYLD蛋白表达水平;用CCK8法、流式细胞法、Tranwell迁移实验检测了膀胱尿路上皮癌细胞系T24的增殖、迁移及周期S期的聚集;采用Western blot检测CYLD及TNF-a对NF-κB信号通路及相关分子的调控作用.结果:miR-802在膀胱尿路上皮癌患者及膀胱尿路上皮癌各株细胞系中表达均呈现升高趋势,而同时与危险因素分级、TNM分期、淋巴结转移也呈现正相关;miR-802 mimics转染组较miR-NC对照组CYLD蛋白的表达量明显降低;miR-802过表达导致N-cadherin与Vimentin的蛋白表达显著升高,而E-cadherin的表达显著降低;CYLD可以作用于膀胱尿路上皮癌,对其有抑制效果;miR-802通过促进EMT的发展,而促进膀胱尿路上皮癌细胞的增殖、迁移及周期S期的聚集,但该效果被CYLD回补;CYLD抑制NF-κB信号通路活性.结论:miR-802促进EMT的发展抑制CYLD激活NF-κB信号通路,促进膀胱尿路上皮癌发生与发展,本研究miR-802有可能成为诊断和预测膀胱尿路上皮癌的潜在生物标志物.

圆柱瘤基因(CYLD)是一种肿瘤抑制基因,其突变或缺失将会导致圆柱瘤的发生.由其编码的去泛素化酶CYLD蛋白是去泛素化酶家族的成员.CYLD通过移除底物蛋白K63连接的泛素链来改变靶分子的功能,并参与核因子κB、JNK和Wnt等信号通路的调控.现就近年CYLD的研究进展,尤其在肝脏相关疾病进展中的负向调控作用进行综述.