目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)肺腺癌转录子1(MALAT1)以及下游调控蛋白高迁移率族蛋白B1(High-mobility group protein box-1,HMGB1)在缺血后处理降低大鼠心肌缺血-再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury,IRI)中的作用.方法 将24只大鼠饲养7天后,随机分成3组:假手术(Sham)组、缺血再灌注(ischemia/reperfusion,IR)组、缺血后处理(ischemic post-conditioning,IPO)组.模型构建完毕 24 h 进行检测大鼠血清中心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)和白介素6(IL-6)表达水平,取材检测大鼠心肌梗死面积,检测大鼠心肌组织中MALAT1转录表达水平的差异,HMGB1、Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)蛋白含量差异.结果 与Sham组比较,IR、IPO组血清中cTnⅠ、IL-6水平明显升高,心肌梗死面积明显增加,心肌组织中MALAT1表达水平显著上调,HMGB1、TLR4水平明显升高(P＜0.05).与IR组比较,IPO组cTnⅠ浓度显著降低,心肌梗死面积显著减小,心肌组织中lncRNA-MALAT1相对表达量降低,HMGB1、TLR4蛋白含量降低(P＜0.05).结论 及时的缺血后处理可有效减缓大鼠心肌缺血-再灌注的损伤程度,其相关机制可能与抑制MALAT1调节控制HMGB1、TLR4表达水平之间有一定的关联.

目的:研究乳铁蛋白对放射性肺损伤的防护作用。方法:将15只C57BL/6 J小鼠按随机数表法分为健康对照组、15 Gy照射组(单纯照射组)和乳铁蛋白联合15 Gy照射组(联合组)，每组5只。联合组全程饮用10 mg/ml乳铁蛋白水溶液，3 d后单纯照射组和联合组给予单次15 Gy X射线全胸照射。于照后14 d处死，苏木素-伊红(HE)染色观察肺病理组织学改变、酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清炎症因子高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)及IL-6的水平，免疫组织化学染色和Western blot法检测肺组织中HMGB1、Toll样受体4(TLR4)、MyD88及核转录因子κB(NF-κB)炎症因子蛋白表达。结果:与健康对照组比较，单纯照射组小鼠肺重明显增加( t＝3.20， P<0.05)、肺充血水肿并伴有炎性细胞浸润，血清促炎因子TNF-α健康对照组为(291.80±5.49)pg/ml，单纯照射组为(332.25±22.18)pg/ml，两组比较差异有统计学意义( t＝3.07， P<0.05)；免疫组织化学染色显示HMGB1和NF-κB阳性明显增多。肺组织中HMGB1、TLR4、MyD88及NF-κB蛋白的表达明显增加，差异有统计学意义( t＝4.04、4.78、3.77、6.14， P<0.05)；与单纯照射组相比，乳铁蛋白干预能显著降低受照小鼠肺重( t＝2.18， P<0.05)、HMGB1、TNF-α和IL-1β水平( t＝4.67、2.97、3.49， P<0.05)。联合组肺组织中HMGB1和NF-κB表达阳性细胞数减少，并下调HMGB1、TLR4、MyD88及NF-κB蛋白表达水平，差异有统计学意义( t＝8.06、9.80、3.07、5.56， P<0.05)。 结论:乳铁蛋白能够减轻放射性肺损伤，其机制可能与下调炎症相关的HMGB1/TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。

目的 基于Toll样受体4/髓样分化因子88/核转录因子κB(TLR4/MyD88/NF-κB)信号通路探究白藜芦醇(Res)对炎症相关性结直肠癌(CAC)的影响.方法 小鼠随机分为对照组(Control)、模型组(Vehicle)、低浓度Res组(Res low)、高浓度Res组(Res high).利用氧化偶氮甲烷/葡聚糖硫酸钠(AOM/DSS)构建小鼠CAC模型,并分别给予Res和蒸馏水灌胃治疗.比较各组小鼠结直肠肿瘤数目和结直肠状态;ELISA检测血清白介素(IL)-1β、IL-6、IL-10和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;免疫组化染色检测结直肠组织环氧化酶2(COX-2)、Ki-67、E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白水平;qRT-PCR和Western blotting法检测结直肠组织TLR4、MyD88、NF-κB水平.结果 与Control组比较,Vehicle组小鼠结直肠肿瘤增多、结肠组织损伤严重,血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平明显升高(P<0.05),结直肠组织COX-2、Ki-67、TLR4、MyD88、NF-κB表达水平升高(P<0.05),IL-10、E-cadherin表达水平降低(P<0.05).与Vehicle组比较,Res low组、Res high组上述指标均有所缓解,具有明显的Res剂量依赖性(P<0.05).结论 Res可通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路,降低结直肠炎症反应,抑制结直肠癌的恶性增殖和转移,从而减轻CAC小鼠肠道损伤.

目的:基于Toll样受体4/核因子κB(TLR4/NF-κB)和核因子E2相关因子2/泛素结合蛋白p62(Nrf2/p62)通路研究三臣散(SCP)对脂多糖(LPS)诱导的幼鼠肺部炎症的抗炎及抗氧化作用机制.方法:将76只雄性Wistar幼鼠随机分为空白组(n=12)和造模组(n=64).造模组幼鼠通过LPS经口气管滴注诱导肺部炎症,将造模后幼鼠随机分为三臣散高剂量组(HSCP组)、三臣散低剂量组(LSCP组)、地塞米松组(DEX组)和模型组(Model组),每组16只.HSCP组大鼠给予0.10 g/mL SCP灌胃,LSCP组给予0.05 g/mL SCP灌胃,DEX组给予0.025 g/mL地塞米松灌胃,Model组和空白组给予1 mL/100g羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液灌胃,2次/d.分别于第2、4天末次给药后24 h取材(n=8).取材后先行肺部病理切片检测造模是否成功,各组取12只(第2、4天各6只)造模成功幼鼠进行后续指标检测.观察幼鼠的一般情况、体质量,检测凝血四项、血常规,HE染色观察肺组织病理情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测下丘脑发热中枢介质和支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症因子的含量,检测肺组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,免疫印迹法检测肺组织中TLR4、IKBα、p65和Nrf2、p62蛋白表达水平.结果:与空白组比较,模型组幼鼠肺部在第2天出现大量炎症细胞浸润,肺泡结构破坏,肺泡壁出现透明膜,肺泡壁增厚、融合,支气管有片状渗出物;第4天肺泡壁增厚加重,肺泡数量减少,肺间质纤维化.与模型组比较,HSCP组、LSCP组、DEX组幼鼠肺部整体损伤程度更低,其中HSCP组最低.第2天,模型组幼鼠中性粒细胞数、前列腺素E(PGE)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、TLR4表达量、MDA含量均高于空白组(P＜0.05),环磷酸腺苷(cAMP)、转化生长因子-β(TGF-β)均低于空白组(P＜0.05);第4天,模型组幼鼠中性粒细胞数、PGE、IL-6、白介素-4(IL-4)、白介素-10(IL-10)、TNF-α、MDA含量均高于空白组(P＜0.05),cAMP、TGF-β、IκBα、SOD水平均低于空白组(P＜0.05).第2天,HSCP组幼鼠cAMP、TGF-β高于模型组、LSCP组和DEX组(P＜0.01或P＜0.05),PGE、IL-6、TNF-α、IL-4、MDA 含量低于模型组、LSCP 组和 DEX 组(P＜0.01 或 P＜0.05);HSCP 组幼鼠 IL-10 高于模型组(P＜0.01),TLR4表达量高于LSCP组、DEX组(P＜0.05);DEX组幼鼠TLR4表达量低于模型组(P＜0.05).第4天,HSCP组、LSCP组和DEX组幼鼠cAMP、IL-10、TGF-β高于模型组(P＜0.05或P＜0.05),中性粒细胞、PGE、IL-6、TNF-α、IL-4、MDA含量低于模型组(P＜0.05或P＜0.01).各组幼鼠第4天TLR4、IκBα蛋白相对表达量比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:SCP可以减轻LPS诱导的幼鼠轻型肺部炎症,其作用机制可能是通过调控TLR4/NF-κB通路下游的炎症因子来抑制炎症反应,以及激活Nrf2/p62通路调控与氧化应激相关的因子来抑制氧化应激反应.

目的 探究鸢尾黄素对哮喘幼鼠气道炎症、气道重塑及高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1 protein,HMGB1)/Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)通路的影响.方法 将60只雄性BALB/c幼鼠随机分为空白组、模型组、地塞米松组,以及鸢尾黄素低、中、高剂量组,每组10只.采用腹腔注射致敏剂[卵清蛋白(ovalbumin,OVA)20 μg+氢氧化铝凝胶2 mg]+4%OVA雾化吸入激发建立幼鼠哮喘模型.肺功能检测仪检测幼鼠肺容积(lung volume,LV)、每分钟静息通气量(resting ventilation per minute,VE)及气道反应性(Penh值);苏木精-伊红染色观察并分析气道重塑情况;ELISA法检测肺泡灌洗液中白介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)含量;实时定量逆转录聚合酶链反应及Western blot法检测肺组织中HMGB1/TLR4/NF-κB通路相关mRNA及蛋白表达.结果 与模型组比较,地塞米松组及鸢尾黄素低、中、高剂量组LV、VE均显著升高(P<0.05),其中鸢尾黄素各剂量组随剂量增加LV、VE升高(P<0.05);地塞米松组及鸢尾黄素低、中、高剂量组Penh值、IL-1β、IL-6、TNF-α、气道重塑指标,以及HMGB1、TLR4、NF-κB p65 mRNA和HMGB1、TLR4、p-NF-κB p65 蛋白表达水平均降低(P<0.05),其中鸢尾黄素各剂量组随剂量增加上述指标降低(P<0.05).与地塞米松组比较,鸢尾黄素低、中剂量组LV、VE均降低(P<0.05),Penh值、IL-1β、IL-6、TNF-α、气道重塑指标,以及HMGB1、TLR4、NF-κB p65 mRNA和HMGB1、TLR4、p-NF-κB p65蛋白表达水平均升高(P<0.05);鸢尾黄素高剂量组上述指标与地塞米松组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 鸢尾黄素能有效减轻哮喘幼鼠气道炎症,抑制气道重塑,可能与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB通路有关.

目的 探讨联合检测外周血TOLL/白介素-1 受体相关蛋白(TIRAP)、叉头蛋白转录因子 3a(FOXO3a)、肝素结合蛋白(HBP)对脓毒症患者近期预后的预测价值.方法 回顾性收集 2020 年 1 月—2022 年 12 月本院205 例脓毒症患者的临床资料,根据 28d生存情况分为生存组 157 例、死亡组 48 例.统计两组外周血TIRAP、FOXO3a、HBP及急性生理功能和慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)、序贯器官衰竭评估(SOFA)评分.分析 TIRAP、FOXO3a、HBP 与 APACHEⅡ、SOFA 评分的相关性.采用 Logistic 回归方程分析 TIRAP、FOXO3a、HBP交互作用对脓毒症近期预后的影响.评价TIRAP、FOXO3a、HBP联合预测脓毒症近期预后的价值.结果 死亡组入院第 1、3、7 天外周血 TIRAP、HBP 水平及 APACHEⅡ、SOFA 评分高于生存组,FOXO3a水平低于生存组(P＜0.05);入院第 1 天,脓毒症死亡患者TIRAP、HBP水平与APACHEⅡ、SOFA评分呈正相关,FOXO3a与APACHEⅡ、SOFA评分呈负相关(P＜0.05);TIRAP×FOXO3a×HBP在脓毒症近期预后中存在交互作用(P＜0.05);入院第 1 天外周血 TIRAP+FOXO3a+HBP 联合预测预后的曲线下面积(AUC)大于TIRAP+FOXO3a、TIRAP+HBP、FOXO3a+HBP,预测效能更佳(P＜0.05).结论 脓毒症预后不良患者外周血TIRAP、HBP水平升高,FOXO3a水平降低,其水平变化与病情严重程度、近期预后有关,联合检测其水平可提高近期预后的预测效能.

目的 探讨Toll样受体4(TLR-4)抑制剂对脂多糖(LPS)诱导脓毒性心肌病(SIC)小鼠心肌损伤的改善作用及其可能机制.方法 2023 年3-6 月在武汉科技大学动物实验中心进行实验.采用随机数字表法将SPF级雄性C57BL/6 小鼠 9 只随机分为对照组、SIC组和TLR4 抑制剂干预组(干预组),每组 3 只.SIC组腹腔注射LPS(15 mg/kg)构建SIC小鼠模型.干预组于构建SIC小鼠模型前1h经尾静脉以0.3 mg·kg-1·h-1速度泵入TLR4 抑制剂预处理.对照组腹腔注射生理盐水(15 mg/kg).于制模24h后处死小鼠留取心脏,采用苏木精—伊红(HE)染色法观察小鼠心肌组织病理形态变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定各组小鼠血清肌钙蛋白(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、血浆脑利钠肽(BNP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素 6(IL-6)、IL-1β的含量,蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)法检测TLR4、NF-κB蛋白表达情况.结果 对照组心肌细胞结构正常;SIC组心肌纤维排列紊乱,部分心肌细胞水肿,间质内可见明显炎性细胞浸润;干预组组织形态结构相对完整,心肌纤维排列规则,间质内可见零散炎性细胞浸润.小鼠心肌损伤标志物cTnI、CK-MB、BNP:SIC组>干预组>对照组(F =437.637、631.009、378.443,P均<0.001);炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6 表达:SIC组>干预组>对照组(F =546.621、329.266、665.091,P均<0.001);TLR4 蛋白表达水平:SIC组>对照组>干预组(F =388.491,P<0.001),NF-κB蛋白表达水平:SIC组>干预组>对照组(F =77.421,P<0.001).且通过进一步行相关性分析示炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6 水平与TLR4、NF-κB蛋白表达呈正相关(r =0.990、0.988、0.994,0.976、0.981、0.971,P均<0.001).结论 TLR4 抑制剂可通过下调TLR4/NF-κB信号通路降低脓毒性心肌病小鼠炎性反应,对SIC小鼠的心肌损伤起改善作用.

目的:基于中医古方挖掘探究中医药治疗黄疸的用药规律,并通过网络药理学研究其潜在作用机制.方法:通过中医资源网检索治疗黄疸的方剂,统计所涉及药物的性味归经、分类及频次,采用关联规则分析及聚类分析获得治疗黄疸的核心药物组合.通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、中医药百科全书数据库(ETCM)及文献,检索和筛选核心药物组合所涉及药物的化学成分,运用SwissTargetPrediction数据库进行靶点预测.通过 OMIM(Online Mendelian Inheritance in Man)、GeneCards、TTD(Therapeutic Target Database)等数据库收集黄疸相关靶点.将成分靶点与疾病靶点相映射,获得交集靶点,采用STRING平台进行蛋白相互作用分析,构建"中药-成分-靶点-疾病"网络,获得治疗黄疸的关键靶点和潜在活性成分.基于Metascape平台对关键靶点进行京都基因和基因组百科全书(KEGG)和基因本体(GO)富集分析,构建"靶点-通路"网络,获得核心靶点.结果:共纳入处方273首,涉及中药329味.纳入中药的药性以寒、温为主,药味以苦、辛、甘为主,主要归胃、肝、肺、脾经,功效以利水渗湿、清热、补虚、解表为主.高使用频次中药共计80味,通过关联规则分析共获得核心药物组合18条,核心药物组合共涉及10味中药,聚类分析获得3首核心基础方.网络药理学结果显示,核心药物组合治疗黄疸的作用机制与物质基础聚焦得到16个潜在活性成分、8个核心靶点,富集得到25条相关通路.结论:中医古方中治疗黄疸的核心药物主要有茵陈、栀子、大黄等10味中药,功效以利水、清热、燥湿、补虚为主,其作用机制可能是通过木蝴蝶素、西红花酸、槲皮素、β-谷甾醇等活性成分,作用于肿瘤坏死因子(TNF)、肿瘤抑制蛋白p53(TP53)、信号转导因子和转录激活因子3(STAT3)、白介素-8(IL-8)等核心靶点,进而影响磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路、缺氧诱导因子-1(HIF-1)信号通路、Toll样受体(TLR)信号通路、核因子-κB(NF-κB)信号通路、细胞凋亡信号通路等,发挥治疗黄疸的作用.

目的:基于分子对接,确定中药红藤75%乙醇提取物的水溶性部位(HTW)中的抗炎物质基础及相关的炎症因子.方法:采用液质联用(LC-MS)技术确定HTW中的主要化学成分.采用软件Autodock Vina对化合物与肿瘤坏死因子-α、白介素-1β转化酶、IL-6、IκB激酶β、诱导性一氧化氮合酶(iNOS)及Toll样受体2(TLR2)等6种靶点蛋白的结合能进行打分,虚拟筛选出抗炎活性成分以及关键靶点.结果:通过LC-MS分析,共确定14个含量较为丰富的小分子化合物,主要为苯丙酸、苯乙醇和木脂素类化合物,其中绿原酸类化合物含量最高.分子对接结果显示,TLR2与HTW中化合物的结合能平均值最高,其中与化合物2、3、7、11-13的结合能均超过-9.0 kcal/mol,远超过阈值-7.2 kcal/mol.TLR2与木通苯乙醇苷B(12)的结合能为-9.7 kcal/mol,与绿原酸(3)及其异构体(2)亦有较好的结合力.iNOS对HTW中化合物也较敏感,与苯乙醇苷类化合物10的结合能为-9.8 kcal/mol.结论:绿原酸、苯乙醇苷等化合物可能是红藤水溶性部位(HTW)最重要的抗炎活性物质;其抗炎关键靶点可能是TLR2和iNOS.

目的 探讨 miRNA-146 是否通过调控 Toll 样受体 4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路促进滋养层细胞HTR-8/SVneo增殖和迁移,以期为不明原因复发性流产(uRSA)的发病机制研究和防治提供参考.方法(1)细胞研究:将转染后的胎盘滋养层细胞 HTR-8/SVneo 分成 miRNA-146 抑制剂组、抑制剂对照组、miRNA-146 模拟物组、模拟物对照组,检测各组 HTR-8/SVneo细胞生长的活力、增殖、凋亡、迁移情况,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和 Western blot检测各组TLR4、NF-κB、肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素-6(IL-6)的mRNA和蛋白相对表达水平.(2)动物研究:建立 Dicer酶敲除的 uRSA小鼠模型,将正常妊娠小鼠作为对照组,通过 qRT-PCR检测胎盘组织的 miRNA-146 mRNA表达情况,采用免疫组织化学法检测胎盘组织的 TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-6 蛋白表达情况.结果(1)细胞研究:与模拟物对照组比较,miRNA-146 模拟物组 HTR-8/SVneo细胞克隆形成率、增殖能力及迁移能力显著增加(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05);与抑制剂对照组和miRNA-146 模拟物组比较,miRNA-146 抑制剂组 HTR-8/SVneo 细胞克隆形成率、增殖能力及迁移能力显著降低(P<0.05),而细胞凋亡率显著增加(P<0.05).与模拟物对照组比较,miRNA-146 模拟物组的 TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-6 蛋白和mRNA相对表达量显著降低(P<0.05);与抑制剂对照组和miRNA-146 模拟物组比较,miRNA-146抑制剂组的TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-6 蛋白和mRNA相对表达量显著增加(P<0.05).不同浓度(10～80 μmol/L)miRNA-146对 HTR-8/SVneo细胞生长活力的增长均有显著影响(P<0.05),并呈浓度依赖性.(2)动物研究:与对照组比较,uRSA组小鼠胎盘组织中miRNA-146 mRNA的相对表达量显著降低[(0.32±0.19)vs.(0.96±0.24),t=12.473,P<0.05],而TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-6 的蛋白表达有增高趋势.结论 上调 miRNA-146 的表达具有促进胎盘滋养层细胞的增殖和迁移作用,其机制可能与负性调控TLR4/NF-κB通路相关.miRNA-146 有望成为防治 uRSA的潜在靶标.