目的:探讨Toll样受体9（TLR9）信号通路激活对肾小管细胞转录组的影响。方法:提取并培养小鼠原代肾小管上皮细胞，在细胞融合度达80%时分为两组，分别加入10 μL磷酸盐缓冲液（PBS，PBS对照组）和终浓度为5 μmol/L的TLR9激活剂胞嘧啶-鸟嘌呤寡脱氧核苷酸（CpG-ODN，CpG-ODN处理组）。提取细胞RNA后在Illumina平台进行测序，使用差异基因分析软件DEGseq分析两组细胞中基因的差异表达情况，通过Goatools和KOBAS在线软件分析差异基因所参与的信号通路，应用Homer软件预测转录因子。结果:与PBS对照组相比，CpG-ODN处理后有584个显著的差异表达基因，其中102个基因表达上调，482个表达下调。差异表达基因富集最显著的基因本体（GO）为β-干扰素响应、病毒响应或防御等炎症反应相关条目；京都基因与基因组百科全书数据库（KEGG）信号通路富集结果显示，富集系数最显著的信号通路包括2'-5'-寡腺苷酸合成酶活性、核糖核酸酶活性的调节、病毒生命周期的负调控、β-干扰素响应和对原生动物的防御反应等。转录因子预测结果显示，干扰素调节因子3（IRF3）是差异基因启动子序列上富集最显著的转录因子；IRF3是TLR9下游表达差异最显著的转录因子，转录因子21（TCF21）、锌指蛋白135（ZNF135）和阳性调节域4（PRDM4）等转录因子可能是TLR9信号通路的新候选靶标。结论:CpG-ODN激活TLR9信号通路，原代肾小管上皮细胞能直接响应CpG-ODN的刺激并发生转录组学变化，为进一步探究TLR9信号通路在脓毒症相关性急性肾损伤中的分子机制研究提供了基础。

目的:分析慢加急性肝衰竭（ACLF）患者非生物型人工肝（简称人工肝）治疗的疗效及其治疗前后细胞因子水平变化，探讨细胞因子水平在ACLF患者短期（28 d）预后中的诊断效能并为人工肝治疗时机的选择提供依据。方法:选择诊断为ACLF患者90例，分为接受人工肝治疗组（45例）与未接受人工肝治疗组（45例），收集2组患者的年龄、性别、入院后第1次血常规、肝肾功能、降钙素原（PCT），追踪2组患者28 d生存情况，进行生存分析；接受人工肝治疗的45例患者根据出院前临床表现及最后一次实验室检查结果作为疗效判断指标，进一步分为好转组（24例）与恶化组（21例），收集患者第1次人工肝治疗前后血常规、凝血功能、肝肾功能、PCT、甲胎蛋白（AFP）、人β防御素-1（HBD-1）、12项细胞因子等指标，进行分析和比较；确定影响ACLF患者预后的独立危险因素，采用受试者操作特征曲线（ROC曲线）分析其对患者短期（28 d）预后的诊断效能。据资料不同用Kaplan-Meier法、log-rant检验、 t检验、Wilcoxon秩和检验、Mann-Whitney U秩和检验、 χ2检验、Spearman秩相关分析、logistic回归分析进行统计学分析。 结果:接受人工肝治疗的ACLF患者28 d生存率明显高于未接受人工肝治疗组（82.2%对比61.0%， P<0.05）。经人工肝治疗后，ACLF患者的血清HBD-1、α干扰素（IFN-α）和白细胞介素-5（IL-5）水平较治疗前明显下降（ P<0.05），肝功能及凝血功能较治疗前明显改善（ P<0.05）；其余血清学指标治疗前后差异无统计学意义（ P>0.05）。人工肝治疗前，ACLF好转组患者血清HBD-1和INF-α水平明显低于恶化组（ P<0.05），与患者预后（恶化）呈正相关（ r值分别为0.591、0.427， P值分别为<0.001、0.008）；ACLF好转组AFP水平明显高于恶化组（ P<0.05），与患者预后（恶化）呈负相关（ r=-0.557， P<0.001）。单因素logistic回归分析提示：HBD-1、IFN-α和AFP为ACLF患者预后的独立危险因素（ P值分别为0.001、0.043、0.036），HBD-1、IFN-α水平越高，AFP水平越低，预后越差。ROC曲线评估HBD-1、IFN-α及AFP对ACLF患者短期（28 d）预后诊断效能的曲线下面积（AUC）分别为0.883、0.763、0.843，灵敏度分别为0.75、0.75、0.72，特异度分别为0.84、0.80、0.83；HBD-1与AFP联合时对ACLF患者短期预后的诊断效能进一步提高（AUC为0.960，灵敏度为0.909，特异度为0.880）；HBD-1+IFN-α+AFP三者联合的诊断效能最大，AUC为0.989，灵敏度为0.900，特异度为0.947。 结论:人工肝治疗可有效改善ACLF患者临床症状、肝功能及凝血功能，清除肝衰竭患者体内HBD-1、IFN-α和IL-5等细胞因子，延缓/逆转疾病进展，提高患者生存率；HBD-1、IFN-α和AFP为影响ACLF患者预后的独立危险因素，可作为ACLF患者判断短期预后的生物学指标，HBD-1和/或IFN-α水平越高，疾病恶化风险越高，在排除感染后应尽早启动人工肝治疗；HBD-1诊断ACLF预后的灵敏度、特异度优于IFN-α和AFP，当HBD-1与IFN-α及AFP 3个指标联合应用时，诊断效能最高。

目的:评估血清人β防御素-1（HBD-1）水平对慢加急性肝衰竭（ACLF）患者短期（28 d）预后的诊断价值。方法:选择诊断为ACLF的患者50例，同时纳入同期住院的失代偿期肝硬化、代偿期肝硬化患者各20例，收集3组患者的年龄、性别、血清HBD-1水平、C反应蛋白（CRP）、降钙素原（PCT）、中性粒细胞计数/淋巴细胞计数（NLR）与血常规、凝血功能、肝功能、肾功能等指标，筛选与ACLF患者短期（28 d）预后相关的指标。依据患者28 d疾病转归情况分为好转组与恶化组，比较2组患者的血清HBD-1水平及上述其他指标。采用受试者操作特征（ROC）曲线分析血清HBD-1水平对ACLF患者短期预后的诊断效能，并与PCT、NLR、凝血酶原活动度（PTA）的诊断效能进行比较；将HBD-1分别与NLR、PCT、PTA联合，评估其对ACLF患者短期预后的诊断效能，并与单个指标应用时的诊断效能进行比较。计量资料组间均数比较采用 t检验或方差分析，计数资料比较采用χ 2检验；相关分析采用Spearman秩相关分析。 结果:ACLF组、失代偿期肝硬化组、代偿期肝硬化组3组患者的年龄、性别之间的差异无统计学意义（ P值均> 0.05）。血清HBD-1水平在ACLF组、失代偿期肝硬化组、代偿期肝硬化组3组患者中的表达水平分别为（319.1±44.4）ng/ml、（264.5±46.5）ng/ml、（240.1±35.4）ng/ml，其在ACLF组患者中的表达水平明显增高，差异有统计学意义（ P < 0.01）。ACLF恶化组患者的血清HBD-1水平为（346.2±43.6）ng/ml，明显高于好转组的（308.5±40.6）ng/ml，差异有统计学意义（ P < 0.05）。相关性分析提示HBD-1、NLR、PCT、凝血酶原时间（PT）、国际标准化比值（INR）与患者28 d疾病转归（好转）呈负相关（ P值均< 0.05）；PTA与患者28 d疾病转归（好转）呈正相关（ P < 0.05）。ROC曲线评估HBD-1对ACLF患者短期预后的诊断效能的曲线下面积（AUC）为0.774、灵敏度为0.750、特异度为0.786、截断值为337.96 ng/ml，诊断效能高于PCT、NLR、PTA；HBD-1联合PTA的诊断效能最高，AUC为0.802、灵敏度为0.778、特异度为0.786，优于HBD-1+PCT、HBD-1+NLR及HBD-1、PCT、NLR、PTA单独应用的诊断效能。 结论:血清HBD-1水平随肝脏功能受损程度的加重而逐渐增加，与ACLF患者的短期预后呈负相关；血清HBD-1水平预测ACLF患者短期预后的灵敏度与特异度高，其诊断效能优于PCT、NLR、PTA，HBD-1与PTA联用，诊断效能更高；当血清HBD-1水平高于337.96 ng/ml时，提示患者预后不佳。

肝衰竭是一组严重的临床症候群，进展迅速，预后凶险。近年来，国内外评估肝衰竭患者预后的生物学标志物不断涌现，如中性粒细胞/淋巴细胞比值、甲胎蛋白、半乳糖凝集素-3、骨桥蛋白、高尔基体蛋白73、人β-防御素-1等，这些生物学标志物对早期识别肝衰竭患者，准确评估其预后，制定有效的治疗方案具有重要意义。

目的:研究人β-防御素-3(human beta-defensin-3，hBD3)对肠上皮细胞自噬的调节作用及其介导的自噬调控对肠上皮细胞迁移的影响。方法:应用雷帕霉素(Rapamycin)诱导肠上皮细胞IEC-6构建细胞自噬模型。根据实验设计分为对照(Control)组、雷帕霉素(Rapamycin)组和人β-防御素-3(hBD3)+雷帕霉素组。蛋白质印迹法检测各组肠上皮细胞自噬相关蛋白表达水平，mRFP-GFP-LC3自噬双标腺病毒感染肠上皮细胞动态监测自噬流。应用CXCR4抑制剂和siRNA进一步验证hBD3调控自噬的潜在机制。划痕实验检测肠上皮细胞迁移能力，通过ATG7 siRNA转染的肠上皮细胞进一步佐证hBD3是通过调控自噬从而影响肠上皮细胞迁移。采用随机数字表法，将新生大鼠随机分为对照组+生理盐水(Control+NS，n＝11)，坏死性小肠结肠炎造模组+生理盐水(NEC+NS，n＝12)和坏死性小肠结肠炎造模组+hBD3(NEC+hBD3，n＝8)。通过配方奶喂养+缺氧冷刺激诱导构建坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis，NEC)模型鼠，收集肠管组织检测自噬相关基因表达。结果:蛋白免疫印迹法检测自噬相关蛋白结果显示，雷帕霉素组中应用200 nmol/L雷帕霉素处理IEC-6细胞24 h后，自噬相关蛋白p62、Beclin1和LC3 Ⅱ/Ⅰ相较于对照组的表达量分别为0.44±0.05、1.17±0.05和1.32±0.05，均较对照组差异有统计学意义( P<0.001， P＝0.026和0.001 4)，成功构建了肠上皮细胞自噬模型。hBD3+雷帕霉素组IEC-6细胞中p62、Beclin1和LC3 Ⅱ/Ⅰ相较于对照组的表达量分别为0.86±0.04、0.75±0.04和0.95±0.03，与雷帕霉素组比较，差异亦有统计学意义( P＝0.009、0.002 7和0.003)，提示hBD3预处理可以显著抑制肠上皮细胞自噬水平。雷帕霉素组mRFP +GFP +斑点和mRFP +GFP -斑点计数分别为(38.33±2.02)个和(72.33±2.61)个，较对照组(3.67±0.88)个和(4.67±1.20)个明显增加，组间比较，差异有统计学意义( P均<0.000 1)；hBD3+雷帕霉素组mRFP +GFP +斑点和mRFP +GFP -斑点数分别为(14.67±1.76)个和(16.00±2.41)个，均较雷帕霉素组明显减少，组间差异有统计学意义( P均<0.000 1)，提示hBD3对IEC-6细胞自噬流有抑制作用。AMD3100+hBD3+雷帕霉素组IEC-6细胞中p62、Beclin1和LC3 Ⅱ/Ⅰ相较于对照组的表达量分别为0.22±0.04、0.91±0.02和1.16±0.02，与hBD3+雷帕霉素组比较，差异有统计学意义( P＝0.000 4、0.022 3和0.005)，而CXCR4 siRNA+hBD3+雷帕霉素组IEC-6细胞中p62、Beclin1和LC3 Ⅱ/Ⅰ相较于对照组的表达量分别为0.39±0.03、1.02±0.04和1.13±0.02，与hBD3+雷帕霉素组相比，差异有统计学意义( P＝0.000 8、0.009 6和0.011)，提示阻断或沉默CXCR4可有效逆转hBD3对自噬的抑制作用。雷帕霉素组肠上皮细胞迁移速率为0.58±0.04，hBD3+雷帕霉素组肠上皮细胞迁移速率为0.86±0.03，两项比较，差异有统计学意义( P＝0.006 3)。转染ATG7 siRNA后，雷帕霉素组和hBD3+雷帕霉素组的肠上皮细胞迁移速率分别为0.95±0.04和0.99±0.02，组间比较，差异无统计学意义( P＝0.089)。NEC+NS组中自噬相关基因Beclin1和LC3的表达量分别为2.01±0.06和2.49±0.09，较Control+NS组(0.96±0.04和1.01±0.02)和NEC+hBD3组(0.78±0.07和1.06±0.08)显著增加，组间差异有(0.78±0.07、1.06±0.08， P均<0.001)。 结论:新生大鼠坏死性小肠结肠炎模型的肠管组织中自噬相关基因过度激活，hBD3通过与CXCR4结合能明显抑制肠上皮细胞自噬且hBD3介导的自噬抑制是其促进肠上皮细胞迁移的可能机制之一，从而对新生大鼠坏死性小肠结肠炎发挥保护作用。

目的:探讨医用蛆虫分泌排泄物（ES）对糖尿病足溃疡（DFU）患者中性粒细胞吞噬及杀菌作用的影响。方法:采用实验研究的方法。选择东部战区空军医院内分泌科，糖尿病足中心2020年6—12月收治的符合入选标准的30例DFU患者［男16例、女14例，年龄（64±7）岁］。Percoll非连续性密度梯度离心法分离中性粒细胞，将每例患者细胞分别纳入生理盐水组、蛆虫ES组（每组30孔），分别加入无菌生理盐水和终质量浓度357 μg/mL（下同）蛆虫ES。培养1、2 h，行瑞氏染色观察并计算细胞吞噬率和吞噬指数。选择10例患者，将每例患者细胞分别纳入铜绿假单胞菌+中性粒细胞组、铜绿假单胞菌+中性粒细胞+蛆虫ES组（每组10孔），分别进行相应处理；另设置单纯铜绿假单胞菌组、铜绿假单胞菌+蛆虫ES组（每组10孔），分别加入铜绿假单胞菌+RPMI 1640培养液+无菌生理盐水、铜绿假单胞菌+RPMI 1640培养液+蛆虫ES。培养2 h，平板菌落计数法计数活菌菌落。分别选择6、6、3例患者，同前将每例患者细胞分别纳入蛆虫ES组和生理盐水组（每组6、6、3孔）并行相应处理。培养6 h，采用实时荧光定量反转录PCR法检测细胞中白细胞介素1β（IL-1β）、IL-6、溶菌酶mRNA表达，采用酶联免疫吸附测定法检测细胞培养上清液中IL-1β、IL-6含量，采用免疫荧光法观察溶菌酶表达阳性细胞情况。对数据行单因素方差分析、配对样本 t检验、LSD检验及Wilcoxon符号秩和检验。 结果:培养1 h，蛆虫ES组细胞吞噬率、吞噬指数［53.5%（49.7%，58.0%）、3.18（2.96，3.32）］分别与生理盐水组［52.0%（47.5%，55.2%）、3.15（2.96，3.25）］相近（ Z=-1.701、-1.092， P>0.05）；培养2 h，蛆虫ES组患者细胞吞噬率、吞噬指数［70.0%（66.7%，72.0%）、4.47（4.22，4.96）］分别明显高于生理盐水组［58.0%（55.0%，60.0%）、4.11（3.52，4.24）， Z=-4.786、-4.279， P<0.01］。培养2 h，铜绿假单胞菌+中性粒细胞组活菌菌落数明显低于单纯铜绿假单胞菌组（ P<0.01），铜绿假单胞菌+中性粒细胞+蛆虫ES组活菌菌落数明显低于铜绿假单胞菌+蛆虫ES组和铜绿假单胞菌+中性粒细胞组（ P<0.01）。培养6 h，蛆虫ES组细胞IL-1β、IL-6、溶菌酶mRNA表达均较生理盐水组明显上调（ t=-3.279、-4.273、-4.763， P<0.05或 P<0.01），蛆虫ES组细胞培养上清液中IL-1β、IL-6含量分别明显高于生理盐水组（ t=-9.526、-6.447， P<0.01），蛆虫ES组溶菌酶阳性细胞明显多于生理盐水组。 结论:蛆虫ES可通过促进DFU患者中性粒细胞免疫防御相关因子和溶菌酶的产生，从而增强中性粒细胞对铜绿假单胞菌的吞噬、杀菌作用。

目的 探究双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对糖尿病大鼠创面炎症反应和愈合的影响.方法 用卡波姆 980、吐温-80、甘油、超纯水、氢氧化钠配制基质软膏,加入双氢青蒿素、尼泊金乙酯搅拌均匀,即得双氢青蒿素软膏.50 只SPF级SD大鼠,采用链脲佐菌素腹腔注射法制作糖尿病大鼠模型,成功造模 44 只.用直径 2.0 cm圆形打孔器在大鼠背部制造全层皮肤缺损创面.用随机数表法将 36 个创面分为 4 组,每组9 个,分别外用 5%、10%、15%双氢青蒿素软膏及基质软膏(对照组),每天 1 次,连续 14 d.第 3、7 和14 天观察创面愈合情况,然后切取包含 0.2 cm创缘和创面组织,HE染色观察组织学变化,Masson染色观察胶原变化,ELISA法检测白细胞介素 6(interleukin 6,IL-6)、白细胞介素 10(interleukin 10,IL-10)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的含量.另外 8 只随机分为 10%双氢青蒿素组和对照组,切取第7 天时的创面组织,高通量测序技术进行转录组测序,筛选两组间的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),进行基因本体(gene ontology,GO)功能富集分析及京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析.采用SPSS 27.0 统计软件对数据进行单因素方差分析.结果 不同浓度双氢青蒿素组的创面愈合率均优于对照组,10%双氢青蒿素组最明显(P＜0.05).与对照组比较,各双氢青蒿素组在第 7、14 天时炎症细胞浸润减少,胶原纤维面积增加(P＜0.05).各双氢青蒿素组IL-6、TNF-α表达明显低于对照组(P＜0.05);而IL-10 表达明显高于对照组(P＜0.05).差异基因火山图显示,10%双氢青蒿素组明显上调缺氧诱导因子 1α(hypoxia inducible factor 1α,Hif-1α)、Smad同源物 12(Smad homolog 12,Smad12)、β-防御素 4(β-defensin 4,Defb4)等抗炎、抗菌基因.GO功能富集分析显示,10%双氢青蒿素组在炎症反应、免疫反应和对细菌的防御反应等方面显著富集.KEGG富集分析显示,10%双氢青蒿素组在趋化因子信号通路和NOD样受体信号通路等方面显著富集.结论 双氢青蒿素可能通过减少炎症细胞浸润、调节炎症因子、抗炎抗菌基因、趋化因子信号通路和NOD样受体信号通路等来抑制过度的炎症反应,从而加速创面愈合.

认知功能障碍是衰老和神经退行性疾病[如阿尔茨海默病(AD)]的关键症状.提高认知能力将影响相当大一部分老龄人口的生活质量.Klotho缺陷会使小鼠寿命缩短并导致过早衰老所伴随的多种并发症.Klotho可以预防年龄相关的认知能力下降和神经退行性病变.Klotho蛋白可以通过多种机制防止认知能力下降:如在肾小管上,它与FGF受体结合FGF23.FGF23是一种骨源性激素,调节肾脏排泄磷酸盐和维生素D代谢;通过激活N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体信号传导促进最佳突触功能;通过抑制IGF-1信号通路、降低p-FOXO3a和p-AKT的表达、上调SOD2的表达介导神经元抗氧化作用;刺激抗氧化防御系统;减少炎症;促进自噬和增强淀粉样蛋白-β的清除;抑制TXNIP/NLRP3炎性小体和细胞因子IL-1β、IL-18的表达;抑制铁死亡.外周给予Klotho也会改善认知功能;一些药物如川芎内酯、白藜芦醇、卡巴胆碱及阿曲汀也会增加Klotho的水平改善认知.运动与饮食也会调整Klotho水平,这需要进一步研究.本综述介绍了 Klotho分子以及其在发挥神经保护和提高认知能力所涉及的分子机制.

目的:探讨人β防御素(human beta-defensin,hBD)-2、3 与慢性牙周炎(chronic periodontitis,CP)和高血压之间的关系.方法:前瞻性收集十堰市人民医院口腔科就诊的慢性牙周炎合并高血压患者 20 例,慢性牙周炎患者 20 例,牙周健康受试者 20 例.弗罗里达探针进行牙周指标检测,包括探诊深度(probing depth,PD)、临床附着丧失(clinical attachment level,CAL)以及出血指数(bleeding index,BI).采用RT-qPCR检测牙龈组织中hBD-2、3 mRNA的表达,免疫组织化学染色检测牙龈组织中hBD-2、3 蛋白表达并进行半定量分析.结果:PD、CAL在慢性牙周炎合并高血压组中最高,健康组中最低,差异具有统计学意义(P<0.05).RT-qPCR测得健康组hBD-2、3 mRNA水平最高,慢性牙周炎组次之,慢性牙周炎合并高血压组最低(P<0.05),且hBD-2、3 mRNA与PD、CAL均呈负相关,hBD-2、3 mRNA与BI呈中等程度负相关.免疫组化结果显示慢性牙周炎组和慢性牙周炎合并高血压组hBD-2、3 评分之间差异均不具有统计学意义(P>0.05).结论:高血压可能是慢性牙周炎患者牙周组织破坏程度加重的危险因素,其原因可能与牙龈组织中hBD-2、3 表达降低有关.

目的 分析血清β-防御素-3(HBD-3)、诱骗受体3(DCR3)对复杂性肾结石患者经皮肾镜碎石术后尿路感染的预测价值.方法 选取2020年1月-2022年12月河北省沧州中西医结合医院收治的112例复杂性肾结石患者为研究对象进行回顾性研究,所有患者均行经皮肾镜碎石术(PCNL),根据术后感染情况将患者分为非尿路感染组52例、尿路感染组60例.比较两组一般资料及HBD-3、DCR3水平.受试者工作特征(ROC)曲线分析C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、HBD-3、DCR3水平对术后尿路感染的预测价值.结果 与非尿路感染组比较,尿路感染组的HBD-3[(0.77±0.08)ng/mL vs.(1.36±0.25)ng/mL,P=0.001]、DCR3[(4.68±0.53)ng/mL vs.(13.21±0.28)ng/mL,P=0.001]水平较高.多因素 logistics 回归分析显示,泌尿道手术史、术前尿路感染、手术时间、导尿管留置时间、结石负荷、抗菌药物种类、合并肾功能障碍、术中通道类型CRP、PCT、HBD-3、DCR3为患者术后尿路感染的影响因素(P＜0.05).ROC曲线显示,CRP、PCT、CRP联合PCT准确度分别为70.54％、72.32％、78.57％;HBD-3、DCR3、HBD-3联合DCR3准确度分别为69.64％、75.89％、86.61％.结论 复杂性肾结石患者术后尿路感染与多种因素相关,且术后尿路感染患者HBD-3、DCR3表达水平较高,联合检测对术后尿路感染具有较高的预测价值.