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人脐带间充质干细胞通过GDF-15/FOXO3a治疗小鼠卵巢功能不全的研究
编辑人员丨5天前
目的:探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)改善卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency,POI)小鼠的卵巢损伤及机制.方法:采用足底注射透明带3多肽(zona pellucida 3 peptide,pZP3)方法构建POI小鼠模型,将小鼠分为对照组、佐剂对照组、pZP3组和hUC-MSCs组,每组10只.以阴道涂片监测动情周期、以酶联免疫吸附测定检测血清卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)和雌二醇(estradiol,E2)水平,以HE染色观察卵巢组织学,以蛋白质印迹(Western blotting)检测叉头框转录因子O3a(forkhead box O3a,FOXO3a)、p-FOXO3a、p53、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、Bax表达水平,以实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测 POI 的标志物骨形态发生蛋白 15(bone morp hogenetic protein 15,BMP15)、抗米勒管激素(anti-Müllerian hormone,AMH)、WNT、卵泡刺激素受体(follicle-stimulating hormone receptor,FSHR)以及促炎因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和IL-1β的表达水平,以RNA-seq检测生长分化因子-15(growth differentiation factor-15,GDF-15)的表达水平.通过环磷酰胺(cyclophosphamide,Cy)构建体外模型.结果:①造模6周后,与对照组相比,pZP3组和hUC-MSCs组动情周期出现紊乱,且血清FSH水平升高,血清E2水平降低,表明模型构建成功.②相较于对照组,pZP3组闭锁卵泡增加,原始卵泡数目降低,hUC-MSCs干预后小鼠原始卵泡比例和数目均高于pZP3组(P<0.05).③与对照组相比,pZP3组卵巢中凋亡蛋白p53、Bax表达水平上调,hUC-MSCs干预后小鼠凋亡蛋白p53、Bax表达较pZP3组下调(均P<0.05);pZP3组体内Caspase-3变化与对照组差异无统计学意义(P>0.05).pZP3组炎症因子IL-1β、TNF-α表达上调,hUC-MSCs干预小鼠的IL-1β、TNF-α表达较pZP3组显著下调(均P<0.05).@pZP3组体内Treg细胞数量降低(P<0.01),hUC-MSCs干预后小鼠Treg细胞数量较pZP3组升高(P<0.000 1).pZP3组卵巢组织中BMP15、AMH、WNT以及FSHR的mRNA表达水平较对照组降低,hUC-MSCs干预后小鼠的表达水平较pZP3组升高(均P<0.05).⑤pZP3组FOXO3a磷酸化水平高于对照组(P<0.000 1),hUC-MSCs干预后,FOXO3a磷酸化水平较pZP3组下降(P<0.000 1).测序结果提示,pZP3组GDF-15表达上调,hUC-MSCs组中GDF-15表达较pZP3组下调.结论:POI小鼠体内GDF-15和p-FOXO3a表达上调,hUC-MSCs通过下调GDF-15的表达和降低FOXO3a的磷酸化水平,改善POI小鼠的卵巢组织形态,实现对POI小鼠的治疗作用.
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编辑人员丨5天前
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慢性间歇性低氧条件下靶向封闭大麻素受体1对小鼠脾脏免疫功能及炎症反应的调节作用
编辑人员丨5天前
目的:观察靶向封闭大麻素受体1(CB1R)对慢性间歇性低氧(CIH)小鼠脾脏免疫功能及炎症反应的影响,探讨其调节作用。方法:2021年5—8月,于山西医科大学第二医院实验动物中心选取40只4~5周龄SPF级雄性C57BL/6小鼠,随机数字表法随机分为常氧对照组(NC组)、CIH 6周组(6w CIH组)、CIH 10周组(10w CIH组)、CIH+CB1R靶向封闭6周组(6w CIH+AM251组)、CIH+CB1R靶向封闭10周组(10w CIH+AM251组),使用高级可编程间歇低氧仓建立CIH小鼠模型。苏木精-伊红(HE)染色观察CIH小鼠脾脏组织的形态结构;免疫荧光检测小鼠脾脏M1、M2型巨噬细胞表面标志物CD86、CD206的表达,qRT-PCR技术检测脾脏组织中CB1R、CD86、CD206等基因的mRNA表达水平,以及辅助性T细胞(Th)17和调节性T细胞(Treg)特征性转录调节因子维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)和叉头框蛋白p3(Foxp3)的相对表达量。ELISA法测定炎症因子 IL-6、IL-10 的表达。采用SPSS 26.0和Graphpad prism 8.3软件分析数据。结果:(1)与NC组相比,CIH组小鼠脾脏组织结构紊乱,纤维组织增生,小动脉周围淋巴鞘中淋巴细胞增生、排列紊乱;CIH组CB1R表达较NC组高( P<0.05),且10w CIH组较6w CIH组表达高( P<0.05),CIH+AM251组CB1R表达均低于对应的CIH组(均 P<0.05);(2)与NC组比较,CIH组巨噬细胞CD86表达水平高于NC组;6w及10w CIH组RORγt相对表达量分别为0.76±0.03、0.91±0.04,均高于NC组的0.65±0.06(均 P<0.05),炎症因子IL-6的相对表达量分别为10.80±1.73、14.86±0.01,均高于NC组的6.69±0.23(均 P<0.05);6w及10w CIH+AM251组巨噬细胞CD206表达水平均高于对应的CIH组( P<0.05),6w及10w CIH+AM251组Foxp3相对表达量分别为0.62±0.05、0.32±0.21,均高于6w CIH组的0.28±0.02及10w CIH组的0.02±0.01(均 P<0.05),抑炎因子IL-10相对表达量分别为668.45±15.71、379.15±56.84,表达水平均高于对应的CIH组(均 P<0.05)。 结论:靶向封闭CB1R可通过调节小鼠脾脏巨噬细胞极化和炎性相关因子的表达,减轻CIH诱导的炎症反应,对机体有一定的保护作用。
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编辑人员丨5天前
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多烯磷脂酰胆碱通过调控AKT/FoxO1信号通路保护棕榈酸诱导肝细胞脂毒性的研究
编辑人员丨1个月前
目的 探索多烯磷脂酰胆碱对棕榈酸诱导肝细胞脂毒性的保护作用,及其作用机制.方法 用0.4 mmol.L-1棕榈酸滤液持续刺激对数生长期HepG2细胞24 h,同时加入0、0.5、1.0、2.0 mg·mL-1多烯磷脂酰胆碱溶液,分别设为模型组和低、中、高剂量实验组.另取不做任何处理的细胞为对照组.用噻唑蓝法检测细胞存活率,用酶联免疫吸附试验法检测细胞中三酰甘油(TG)含量,用探针法检测细胞线粒体功能,用蛋白质印迹法检测细胞蛋白激酶B(AKT)和叉头框转录因子O亚族1(FoxO1)蛋白的表达水平.结果 中、高剂量实验组和模型组、对照组的细胞存活率分别为(74.31±8.69)%、(78.13±9.34)%、(63.67±7.40)%和(82.47±12.30)%,细胞中 TG 含量分别为(11.45±3.06)、(8.34±2.05)、(17.63±5.12)和(5.12±1.32)mg·g-1 protein,线粒体活性氧生成量分别为(0.47±0.06)、(0.39±0.05)、(0.62±0.09)和(0.31±0.05)U·mg-1 protein,FoxO1 蛋白相对表达水平分别为 0.27±0.05、0.22±0.03、0.41±0.08 和 0.07±0.02,磷酸化 AKT/AKT 比值分别 为 0.23±0.07、0.34±0.06、0.09±0.01和0.38±0.05.中、高剂量实验组的上述指标与模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 多烯磷脂酰胆碱可减轻棕榈酸诱导的肝细胞脂毒性,提高肝细胞存活率及线粒体功能,其作用机制可能与调控AKT/FoxO1信号通路活性有关.
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编辑人员丨1个月前
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缺血性疾病患者血清lncRNA PVT1和FOXM1表达水平及联合心脏磁共振延迟强化成像与预后的关系
编辑人员丨2024/4/27
目的 探讨缺血性疾病患者血清长链非编码RNA浆细胞瘤转化迁移基因1(lncRNA PVT1)和叉头框转录因子M1(FOXM1)表达水平及联合心脏钆对比剂延迟增强磁共振成像(LGE-MRI)与预后的关系.方法 选取2021年2月-2022年2月我院收治的缺血性心脏病患者118例即为研究组,随访一年根据随访过程中是否发生主要心脏不良事件(MACE),分为MACE组32例,无MACE组86例.同期选择在我院体检健康的志愿者118例为对照组.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清lncRNA PVT1的相对表达量.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测FOXM1水平.受试者工作特征(ROC)曲线分析LGE-MRI、血清lncRNA PVT1和FOXM1对缺血性心脏病患者预后发生MACE的预测价值.结果 研究组患者DBP、SBP、TG、TC、LDL-C、GLU水平与对照组相比显著升高,HDL-C水平显著降低(P<0.05).与对照组相比,研究组的血清中lncRNA PVT1和FOXM1水平显著升高(P<0.05).与无MACE组相比,MACE组患者DBP、SBP、TC、LDL-C水平显著升高,HDL-C水平显著降低(P<0.05).与无MACE组相比,MACE组患者血清中lncRNA PVT1和FOXM1水平显著升高(P<0.05).MACE组的LGE-MRI阳性数量显著高于无MACE组(P<0.05).与LGE-MRI、血清lncRNA PVT1和FOXM1单独预测相比,三者联合预测MACE发生的AUC更高(Z=7.221,P<0.001;Z=7.737,P<0.001;Z=7.091,P<0.001).结论 缺血性心脏病预后发生MACE的患者血清lncRNA PVT1和FOXM1水平呈高表达,二者联合LGE-MRI对MACE的发生有一定的预测价值.
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编辑人员丨2024/4/27
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汉黄芩素促进自身免疫性肝炎模型大鼠Th17/Treg细胞平衡
编辑人员丨2024/2/3
目的 探讨汉黄芩素(WG)对自身免疫性肝炎(AIH)大鼠Th17/Treg细胞平衡的影响.方法 随机选出 10 只大鼠作为对照组,其余大鼠通过尾静脉注射伴刀豆球蛋白A(ConA,12.5 mg/kg)溶液构建AIH模型大鼠.将造模成功大鼠随机平分为AIH组、L-WG组(10 mg/kg)、M-WG组(20 mg/kg)、H-WG组(30 mg/kg)、H-WG+VPA组[30 mg/kg WG+300 mg/kg Notch信号通路激活剂丙戊酸(VPA)],每组10只,每天给药1次,持续10 d.ELISA检测血清中炎性因子及肝功能指标;HE染色观察肝脏组织病理形态;流式细胞测量术检测脾脏Th17/Treg细胞水平;Western blot检测脾脏类视黄酸相关孤儿受体γt(RORγt)、叉头框蛋白P3(Foxp3)以及肝组织Notch信号通路蛋白质的表达.结果 对照组大鼠肝组织结构正常,染色清晰;AIH组大鼠肝组织细胞出现水肿,细胞体积增大导致肝窦受压变窄,出现大量炎性细胞浸润以及少量坏死现象.AIH组较对照组丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性、白介素(IL)-17和IL-23含量、Th17细胞水平、Th17/Treg、RORγt、Notch、hes家族bHLH转录因子 1(HES1)、含YRPW基序的bHLH转录因子hes相关家族1(HEY1)蛋白表达均显著上升(P<0.05),IL-10和TNF-β含量、Treg细胞水平、Foxp3蛋白水平均显著下降(P<0.05);与AIH组相比,L-WG组、M-WG组、H-WG组肝损伤情况得到改善,ALT、AST活性、IL-17和IL-23含量、Th17细胞水平、Th17/Treg、RORγt、Notch、HES1、HEY1 蛋白表达均显著降低(P<0.05),IL-10和TNF-β含量、Treg细胞水平、Foxp3 蛋白水平均显著升高(P<0.05);VPA逆转了H-WG对AIH大鼠的改善效果.结论 WG可能通过下调Notch信号通路促进AIH大鼠Th17/Treg细胞平衡.
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编辑人员丨2024/2/3
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PTEN对FoxM1可变剪接的调控及该过程在肿瘤细胞迁移中的作用
编辑人员丨2024/2/3
目的·探讨10号染色体磷酸酶和张力同源蛋白(phosphatase and tensin homolog,PTEN)对叉头框转录因子M1(forkhead box M1,FoxM1)可变剪接的调控,以及该调控作用对肿瘤细胞迁移的影响.方法·在人胚肾293T细胞,人前列腺癌DU145细胞,人结肠腺癌RKO细胞,人结肠癌SW480、SW620细胞中用短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)敲低PTEN的mRNA水平.设计针对FoxM1及其亚型FoxM1B和FoxM1C的特异性引物,用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测FoxM1B和FoxM1C的mRNA表达水平在PTEN敲低前后的差异.在DU145细胞中分别过表达FoxM1B和FoxM1C,利用Transwell细胞迁移实验和划痕实验检测两者对肿瘤细胞迁移的影响.通过免疫荧光和双荧光素酶报告基因检测实验,探索FoxM1B和FoxM1C对肿瘤细胞迁移调控差异的潜在机制.结果·①将293T、DU145、RKO、SW480和SW620细胞内的PTEN敲低后,qRT-PCR检测发现,与对照细胞相比,在PTEN敲低的细胞中FoxM1B的mRNA均显著增多,而FoxM1C的mRNA表现为减少或不变.PTEN敲低不影响FoxM1的转录水平,而影响FoxM1的可变剪接,促进了 FoxM1B亚型的生成.②Transwell细胞迁移实验结果显示,与对照细胞相比,FoxM1B过表达组DU145细胞迁移数量增多(P=0.024),FoxM1C过表达组DU 145细胞迁移数量减少(P=0.000).细胞划痕实验结果显示,过表达FoxM1B的DU145细胞愈合能力显著增强(P=0.001),过表达FoxM1C的DU145细胞愈合能力减弱(P=0.021).FoxM1B和FoxM1C对肿瘤细胞迁移具有相反的调节作用:FoxM1B促进肿瘤细胞迁移,而FoxM1C则抑制肿瘤细胞迁移.③FoxM1B和FoxM1C过表达,均未引起β连环蛋白入核.双荧光素酶报告基因检测实验发现FoxM1B和FoxM1C的转录活性没有差别,FoxM1B和FoxM1C在调控肿瘤转移方面的差异不是由β连环蛋白转位介导的.结论·PTEN敲低影响肿瘤细胞内FoxM1的可变剪接,导致促迁移的FoxM1B表达增加,从而促进肿瘤细胞迁移.
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编辑人员丨2024/2/3
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慢性鼻-鼻窦炎患者HIF-1α、FoxM1的表达及其与黏蛋白MUC5AC、MUC5B的相关性
编辑人员丨2023/12/9
目的 探讨慢性鼻-鼻窦炎(CRS)患者缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、叉头框转录因子 M1(FoxM1)的表达及其与黏蛋白 5 AC(MUC5 AC)、黏蛋白 5 B(MUC5 B)的关系.方法 选取 2016 年 3 月—2018 年 5 月南充市中心医院行鼻内镜手术伴鼻息肉的CRS患者(CRS wNP组)和不伴鼻息肉的 CRS患者(CRS sNP 组)鼻窦黏膜各 40 例,另选取30 例正常鼻腔黏膜作为对照组,采用免疫组织化学和逆转录定量PCR(qRT-PCR)检测各组HIF-1α、FoxM1、MUC5 AC、MUC5 B的表达,并分析它们之间的关系.结果 免疫组织化学结果显示,MUC5 AC、MUC5 B、HIF-1α、FoxM1 在各组黏膜上皮中阳性面积均差异明显(P<0.001).CRS wNP 组和 CRS sNP 组各指标阳性表达率明显高于对照组(P<0.05).qRT-PCR结果显示,各组 MUC5 AC、MUC5 B、HIF-1α、FoxM1 mRNA 的相对表达量均有明显差异(P<0.001),CRS wNP组和CRS sNP组各指标相对表达量明显高于对照组(P<0.05).Person分析结果显示,在伴或不伴鼻息肉的CRS组织中,HIF-1α、FoxM1 与 MUC5 AC及 MUC5 B mRNA 的表达均存在正相关(P<0.001).结论 发现在伴或不伴鼻息肉的 CRS 中,HIF-1α、FoxM1、MUC5 AC、MUC5 B 的表达均上调,且 HIF-1α、FoxM1 均与黏蛋白MUC5 AC、MUC5 B正相关,HIF-1α和 FoxM1 可能在CRS中黏液生成增多中起着重要的作用.
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编辑人员丨2023/12/9
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醋酸铅暴露对PC12细胞凋亡与自噬的影响及可能机制
编辑人员丨2023/11/25
目的 探讨醋酸铅[Pb(Ac)2]暴露对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞凋亡与自噬的影响及相关分子机制.方法 体外培养的PC12细胞用Pb(Ac)20(细胞对照),100,200和400 μmol·L-1处理24h后,采用MTT法检测细胞存活率,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞培养液中LDH含量,吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色观察细胞凋亡,流式细胞术检测细胞凋亡率,单丹磺酰尸胺(MDC)试剂盒检测细胞自噬,免疫荧光法观察Bcl-2相互作用蛋白1(Beclin1)在细胞内的表达,Western印迹法检测细胞内自噬相关蛋白沉默信息调节因子1(Sirt1)、叉头框蛋白转录因子3a(FoxO3a)、叉头蛋白M1(FoxM1),Beclin1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)以及P62蛋白表达.结果 与细胞对照组相比,Pb(Ac)2100,200和400 μmol·L-1处理24h后,PC12细胞存活率显著降低(P<0.05,P<0.01),细胞外液LDH含量升高(P<0.05,P<0.01).AO/EB染色结果显示,随着Pb(Ac)2浓度的提高,PC12细胞颜色逐渐加深为橙红色,出现明显的凋亡现象;与细胞对照组相比,PC12细胞凋亡率随Pb(Ac)2浓度的提高而显著增加(P<0.01),PC12细胞内自噬体数量增加(P<0.01).免疫荧光结果显示,Pb(Ac)2暴露后,PC12细胞胞质内Beclin1呈现大量点状聚集且荧光强度加强,表明细胞发生了自噬.Western印迹法结果显示,与细胞对照组相比,Pb(Ac)2各浓度组Sirt1,FoxO3a和Beclin1蛋白表达水平及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著增加(P<0.05,P<0.01),FoxM1和P62蛋白表达水平显著下降(P<0.05,P<0.01).结论 Pb(Ac)2暴露可诱导PC12细胞发生凋亡与自噬,其机制可能与Sirt1/FoxO3a信号通路激活有关.
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编辑人员丨2023/11/25
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基于微RNA-mRNA调控网络对草酸钙肾结石形成关键分子的筛选和分析
编辑人员丨2023/10/28
目的 应用生物信息学技术构建草酸钙肾结石大鼠miRNA-mRNA调控网络并筛选出调控草酸钙肾结石形成的关键分子.方法 从基因表达汇编(GEO)数据库中筛选出乙二醇喂养14 d诱导的草酸钙肾结石大鼠肾组织的miRNA和mRNA数据集,利用GEO2R在线工具分析得到差异表达miRNA(DEM)和差异表达基因(DEG),并用热图进行展示.利用在线靶基因预测工具miRWalker预测DEM的靶基因,根据miRNA负向调控mRNA原理应用R语言"venn.diagram"包与DEG取交集,得到参与调控草酸钙肾结石形成的基因,然后应用"clusterprofile"包对调控基因进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,利用String数据库进行蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络分析,利用Cytoscape软件实现对PPI和miRNA-mRNA调控网络可视化和关键基因的筛选.结果 共分析得到 38 个DEM和 364 个DEG.将预测得到的DEM靶基因与DEG取交集后得到 116 个调控基因,这些基因富集在 24 个GO条目和 22 个KEGG信号通路中.成功构建了miRNA-mRNA调控网络,处于核心调控位置的miRNA为miRNA-6215、miRNA-758-5p和miRNA-214-3p.PPI网络分析筛选出 5 个关键基因,分别为叉头框转录因子M1(Foxm1)、核分裂周期蛋白80(Ndc80)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子2B(Cdkn2b)、Cdc10 依赖性转录因子 1(Cdt1)和B细胞编码κ轻链多肽抑制基因(Ikbkg).结论 通过构建miRNA-mRNA调控网络,筛选出在草酸钙肾结石形成过程中起关键调控作用的miRNA和基因,为草酸钙结石的防治提供了新的研究思路.
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编辑人员丨2023/10/28
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叉头框蛋白M1在脑胶质瘤中作用的研究进展
编辑人员丨2023/10/28
胶质瘤是成人中枢神经系统中最常见的原发性肿瘤.叉头框蛋白M1(FOXM1)是叉头框转录因子家族的成员之一,其可通过调控Wnt/β-catenin、Akt/FOXM1、p53 通路及其自身的翻译后修饰过程促进神经胶质瘤的恶性增殖、迁移和侵袭等过程.本文总结叉头框蛋白M1 在脑胶质瘤中的作用,以期为临床脑胶质瘤的治疗提供新的理论依据和治疗靶标.
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编辑人员丨2023/10/28
