目的:探究血清吡咯蛋白加合物(PPA)对吡咯生物碱相关肝窦阻塞综合征(PA-HSOS)的严重度评估和对抗凝疗效的预测价值。方法:收集南京大学医学院附属鼓楼医院2018年4月至2019年12月收治的48例PA-HSOS确诊患者资料，包括PPA浓度、门静脉流速、腹水分级、PA-HSOS严重度分级(参考欧洲血液和骨髓移植协作组成人可疑肝窦阻塞综合征新严重度分级标准并进行调整)和抗凝结局。以急性起病(食用含吡咯生物碱植物1个月内出现症状)患者为研究对象，经logistic回归分别拟合PPA联合门静脉流速、腹水分级的PA-HSOS严重度评估模型，计算2种联合模型的logit值，公式分别为logit 1＝0.034×PPA(nmol/L)+0.055×门静脉流速(cm/s)-3.287，logit 2＝0.039×PPA(nmol/L)-2.712×2级腹水(有＝1，无＝0)-0.388×3级腹水(有＝1，无＝0)-0.899。以在南京大学医学院附属鼓楼医院行初次抗凝治疗的患者为研究对象，经logistic回归拟合PPA联合血清肌酐和肝静脉压力梯度(HVPG)的抗凝疗效预测模型，计算logit值，公式为logit 3＝0.013×PPA(nmol/L)+0.064×血清肌酐(mol/L)+0.542×HVPG(mmHg，1 mmHg＝0.133 kPa)-16.005。评价PPA对PA-HSOS严重度评估效能和对抗凝疗效的预测价值。统计学方法采用受试者操作特征曲线分析。 结果:48例患者的血清PPA水平为10.81 nmol/L(3.91 nmol/L，32.04 nmol/L)，其中PA-HSOS轻度患者33例(68.8%)，中度患者3例(6.2%)，重度患者0例，极重度患者12例(25.0%)。23例在南京大学医学院附属鼓楼医院行初次抗凝治疗且有完整数据的患者中，8例应答且存活，15例无应答(5例死亡，1例继续行抗凝治疗后缓解，9例转行抗凝-经颈静脉肝内门体静脉分流术治疗后均存活)；1例最初未行抗凝治疗的患者，最终因病情进展行抗凝-经颈静脉肝内门体静脉分流术治疗后存活。PPA评估急性起病患者PA-HSOS严重度的曲线下面积(AUC)为0.75，95%置信区间( CI) 0.52~0.98( P＝0.047)；当PPA≥45.519 nmol/L，评估重度以上PA-HSOS的特异度为100.0%，灵敏度为57.1%。PPA与门静脉流速联合评估PA-HSOS严重度的AUC为0.77，95% CI 0.55~1.00( P＝0.032)；当联合模型的logit值≥0.180时，评估重度及以上PA-HSOS的特异度为71.4%，灵敏度为81.8%。PPA联合腹水分级(1或2级与3级)评估PA-HSOS严重度的AUC为0.85，95% CI 0.63~1.00( P＝0.005)；当联合模型的logit值≥0.347时，评估重度及以上PA-HSOS的特异度为85.7%，灵敏度为92.0%。PPA与血清肌酐和HVPG联合模型预测抗凝疗效的AUC为0.85，95% CI 0.69~1.00( P＝0.009)；当logit值≥0.393时，预测抗凝效果的特异度为62.5%，灵敏度为91.7%。 结论:PPA可用于评估急性起病的PA-HSOS患者的严重度，结合腹水分级可显著提高其效能；PPA结合血清肌酐、HVPG能较好地预测抗凝疗效。

目的 探讨土三七相关肝窦阻塞综合征(HSOS)的临床特征,以充分认识该病的严重性. 方法 收集2011年1月至2018年5月苏州大学附属第一医院收治的土三七相关HSOS患者的病历资料进行回顾性分析. 结果 共19例患者纳入研究,包括男性12例(63.2% ),女性7例(36.8% );年龄44～82岁,中位年龄65岁.所有患者均误将土三七作为三七自行泡水(13例)、煎煮(4例)或泡酒(2例)服用.用药原因为外伤者11例,高血压病4例,腰椎间盘突出2例,腰椎骨折和前列腺炎出血各1例.用药时间为5～212 d,中位时间23 d.服用土三七至发生HSOS时间中位数为20(5～212)d.RUCAM评分为4、5、6、7、8分者分别为1、7、5、4、2例.肝脏储备功能Child-Pugh分级为A级者2例,B级8例,C级9例;肝损伤类型为胆汁淤积型5例,肝细胞损伤型6例,混合型8例.HSOS严重程度分级为超重度5例,重度4例,中度7例,轻度3例.临床表现以腹胀、纳差、黄疸、肝肿大、腹水和双下肢水肿等为主.实验室检查表现为ALT、AST、TBil、INR升高、凝血酶原时间延长和PLT、血清白蛋白降低.影像学表现主要为腹腔积液、肝肿大、肝实质密度减低、回声呈地图样不均匀强化、肝静脉显示不清.治疗措施采取保肝、利尿、抗凝、激素抗炎、改善微循环和血浆置换等.19例患者的结局:好转15例,死亡4例,病死率为21.1% . 结论 土三七相关的HSOS为一严重不良反应,以失代偿期肝病为主要表现,预后较差,病死率高.因此,应加强公众安全用药的教育,避免误用土三七.

目的:探讨正己烷职业接触人群尿液与血液多项生物监测指标的差异,分析其内在相关性,为该人群的健康监护提供依据.方法:用溶剂解吸气相色谱法测定工作场所空气中正己烷浓度;采用酶标仪比色法测定受检者尿液中吡咯加合物的水平;全自动生化分析仪进行血清主要生化指标检测;全自动血细胞分析仪进行全血细胞计数分析;采用SPSS 20.0软件进行均数t检验、秩和检验、双变量Pearson相关分析.结果:正已烷职业接触组和对照组车间空气中正己烷时间加权平均浓度(TWA)分别为32.6 ± 6.9mg/m3和＜ 0.15mg/m3,两组工人尿液中吡咯加合物水平为1.91±0.29 nmol/mL和1.17 ±0.18 nmol/mL,两个指标在两组中差异均有统计学意义(P＜0.05).职业接触组血清总胆红素(TBIL)、间接胆红素(IBIL)、碱性磷酸酶(ALP)、钾离子(K+)分别是15.76±5.29μmol/L、11.87 ±4.14μmol/L、64.1±14.9U/L、4.34±0.33 mmol/L,对照组上述4项指标分别为11.89±4.1 μmol/L、8.36±3.92μmol/L、43.34±9.68U/L、4.49±0.41 mmol/L,两组比较(t检验),各指标差异均有统计学意义(P＜0.05).接触组平均红细胞血红蛋白水平(MCHC)、大血小板比例(P-LCR)、单核细胞绝对值(MONO)、嗜酸性细胞绝对值(EOS)指标分别为337.3±9.37 g/L、(28.93±1.17)％、(0.35±0.09)×109/L、(0.163±0.079)×109/L,与对照组指标341.7±13.58 g/L、(27.45±0.99)％、(0.39±0.11)×109/L、(0.129 ±0.083)×109/L比较,差异均有统计学意义(t检验,P＜0.05);尿液中吡咯加合物水平与TBIL、IBIL、ALP呈正相关,相关系数r分别为0.577、0.566、0.431;与MCHC呈负相关,相关系数r为-0.433;与EOS呈正相关,相关系数r为0.517.结论:正己烷职业接触人群尿中吡咯加合物水平,血清TBIL、IBIL、ALP、K+水平与非接触人群相比有显著性差异,建议作为正己烷职业接触者健康监护的监测指标;其中尿液吡咯加合物水平与血液多项功能指标存在相关关系.

近年来,我国由于误服含吡咯里西啶生物碱(pyrrolizidine alkaloids,PAs)的中草药而导致药源性肝损伤的报道逐年增多.丹酚酸B(salvianolic acid B,Sal B)是丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.)中的主要水溶性有效成分,具有抗凝血和抗氧化等作用.本研究旨在研究丹酚酸B对千里光碱(senecionine,SEN)肝毒性的保护作用及其可能的作用机制.实验方案经上海中医药大学动物实验伦理委员会批准,所有程序均严格按照动物使用和护理的伦理原则进行.实验采用SEN(50 mg·kg1)单次灌胃造成小鼠急性肝损伤模型,使用Sal B(10 mg·kg1)进行干预.结果表明,Sal B能显著改善SEN致小鼠肝损伤,降低血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶活力,并明显改善肝窦内出血、肝细胞坏死等病理状况,血清PAs毒性标志物吡咯蛋白加合物的含量也明显减少.进一步检测凝血、氧化应激和纤维化等相关通路关键因子,发现Sal B可降低纤溶酶原激活物抑制因子1的表达以抑制凝血系统,可调节谷胱甘肽及超氧化物歧化酶水平等改善机体的抗氧化应激能力,还可以通过影响基质金属蛋白酶9、转化生长因子-β1、信号传导蛋白和转录激活物3、趋化因子1等肝纤维化相关因子改善细胞外基质的过度沉积及延缓肝纤维化进程.本研究表明,丹酚酸B对千里光碱肝毒性的保护作用与调控凝血系统、改善氧化应激以及调控肝纤维化相关因子等有关,为临床上应用丹酚酸B治疗PAs肝损伤提供了理论依据.

目的:探究吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)对脓毒症合并急性肾损伤(AKI)大鼠线粒体功能与Klotho表达的影响.方法:将60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、PDTC组,每组20只,模型组和PDTC组大鼠通过盲肠结扎穿刺(CLP)制备脓毒症AKI模型,造模后1h,PDTC组大鼠腹腔注射50 mg/kg PDTC,模型组与对照组注射同等剂量生理盐水,每日1次,持续1周.ELISA法检测大鼠血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)和24 h尿蛋白(24 h UP)水平,硫代巴比妥酸法检测肾组织丙二醛(MDA)水平,微板法检测肾组织超氧化物歧化酶(SOD)水平,光谱光度测量工具检测肾组织总抗氧化能力(T-AOC)水平,苏木精—伊红(HE)染色和Masson染色观察肾组织病理形态学改变与胶原沉积现象,TUNEL染色检测肾组织细胞凋亡,免疫组织化学染色和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测肾组织Klotho蛋白和mRAN表达水平,免疫荧光染色检测肾组织细胞色素C氧化酶Ⅳ(COXⅣ)和自噬标记轻链3(LC3)的共定位与表达以来评估线粒体水平,western blotting法检测肾皮质匀浆细胞色素-C(Cyto-C)、抗增殖蛋白(Prohibitin)蛋白表达.结果:相较于模型组,PDTC组血清SCr、BUN含量及24 UP水平均显著下降(均P＜0.05),肾组织SOD、T-AOC含量显著增加,MDA含量显著减少(P＜0.05),肾组织病理改变得到明显改善,胶原沉积减少,TUNEL阳性细胞率显著降低(P＜0.05),Klotho蛋白与mRNA表达水平均显著上调(P＜0.05),同时,LC3水平下降,肾皮质线粒体Cyto-C、Prohibitin蛋白表达显著升高(P＜0.05),肾皮质胞浆Cyto-C、Prohibitin蛋白表达显著降低(P＜0.05).结论:PDTC可通过调节线粒体功能和Klotho表达来改善大鼠脓毒症合并AKI,并有效减轻肾组织的氧化损伤.

目的 探讨麝香保心丸联合双联抗血小板药物治疗进展性脑梗死的临床疗效.方法 选取医院2019年1月至2020年1月收治的进展性脑梗死患者146例,按随机数字表法分为观察组和对照组,各73例.两组均予阿司匹林联合氯吡格雷治疗,观察组加用麝香保心丸,均治疗21 d.结果 与治疗前比较,两组患者治疗后血液流变学指标(血浆黏度、低切全血黏度、高切全血黏度、红细胞比容、纤维蛋白原)、血清炎性因子(白细胞介素1、白细胞介素6、肿瘤坏死因子-α、超敏反应蛋白、基质金属蛋白酶9)、一氧化水平均显著下降,且观察组均显著低于对照组(P<0.05);与治疗前比较,两组患者治疗后的内皮素-1、血管内皮生长因子水平均显著升高,且观察组均显著高于对照组(P<0.05);治疗后12 h至治疗后21 d,两组患者神经功能缺损量表(NIHSS)评分均呈先上升后下降趋势,且观察组均显著低于对照组(P<0.05).观察组临床总有效率为90.41％,显著高于对照组的71.23％(P<0.05);观察组血尿、上消化道出血、梗死后出血、咯血、皮肤黏膜淤斑、血红蛋白进行性下降发生率与对照组相比均无显著差异(P>0.05).结论 麝香保心丸联合双联抗血小板药物治疗进展性脑梗死疗效较好,可改善患者血液流变学指标、炎性因子水平和血管内皮状态,且短期安全性高.

目的 观察左归降糖通脉方对晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)诱导大鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs)损伤的干预作用,并基于AGEs/RAGE/NF-κB通路探讨左归降糖通脉方的作用机制.方法 将30只SD大鼠随机均分为空白组(同体积蒸馏水)、中药组[左归降糖通脉方36 g/(kg·d)]和西药组[尼莫地平18.35 mg/(kg·d)+格列齐特27.5 mg/(kg·d)],每日灌胃1次,连续5 d,用于制备含药血清.将BMECs随机分为空白组、模型组、左归降糖通脉方组、尼莫地平+格列齐特组、晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)抑制剂(FPS-ZM1)组及吡咯烷二硫代氨基甲酸铵(pyrrolidinedithiocarbamate ammonium,PDTC)组,BMECs加入200 mg/L的AGEs作用24 h后,分别予空白血清、空白血清、左归降糖通脉方含药血清、尼莫地平+格列齐特含药血清、FPS-ZM1、PDTC干预.通过形态学观察及CCK-8法检测细胞存活率,采用Western blot、RT-PCR法检测RAGE、核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)的蛋白和mRNA表达情况.结果 与空白组比较,模型组细胞存活率明显下降(P<0.01);与模型组比较,左归降糖通脉方组及尼莫地平+格列齐特组细胞存活率上升(P<0.05);相较于空白组,模型组RAGE、NF-κB的蛋白和mRNA表达水平明显上调(P<0.01);相较于模型组,左归降糖通脉方组、尼莫地平+格列齐特组、FPS-ZM1组及PDTC组RAGE、NF-κB的蛋白和mRNA表达水平明显下调(P<0.05);左归降糖通脉方组与FPS-ZM1组RAGE、NF-κB的蛋白和mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 左归降糖通脉方可能通过抑制AGEs与RAGE的结合,抑制AGEs/RAGE/NF-κB通路的激活,下调下游炎症因子的释放,对BMECs起到保护作用.

目的:肾小球硬化是多种慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)进展至终末期肾病(end stage renal dis-ease,ESRD)的主要病理基础,研究发现转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)和结缔组织生长因子(connec-tive tissue growth factor,CTGF)等细胞因子表达失衡最终造成肾小球硬化.探讨核转录因子 κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)基因调控对肾组织TGF-β和CTGF的影响,采用NF-κB的特异性抑制剂,抑制TGF-β和CTGF的基因表达,为延缓肾小球硬化提供实验依据.方法:采用阿霉素肾病大鼠模型进行实验,分为三组:(1)对照组:静脉生理盐水替代阿霉素,每只约注射1 ml.(2)模型组:尾静脉注射阿霉素5 mg/kg,第7天重复尾静脉注射阿霉素3 mg/kg.(3)干预组:同模型组方法造模,第1次尾静脉注射阿霉素后,次日开始尾静脉注射给予吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)6 mg/kg体重,每日1次,至第6周实验结束.分别于第6周后每组各处死大鼠6只,用于实验.肾小球硬化组织切片HE染色,通过免疫组织化学法评估大鼠肾脏中TGF-β和CTGF的蛋白情况;逆转录-定量聚合酶链反应(RT-PCR)分析TGF-β和CTGF的mRNA的表达;Western-blot分析TGF-β和CTGF蛋白表达的情况.结果:(1)模型组1周时即出现大量蛋白尿,随着时间的进展,蛋白尿持续增加,在第2、4、6周各时间点24 h尿蛋白与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01),另外干预组在第1、2、4和6周与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.01).(2)药物治疗及干预6周后,模型组在血清学尿素氮、肌酐及胆固醇较对照组明显升高,血清白蛋白水平较对照组明显降低,差异均有统计学意义(P<0.01).干预治疗后,干预组在血清学尿素氮、肌酐及胆固醇水平较模型组明显下降,血清白蛋白较模型组升高,差异均有统计学意义(P<0.01).(3)肾小球硬化病理学观察,模型组:细胞外基质明显增加,毛细血管壁塌陷,出现局灶节段性肾小球硬化(FSGS),间质纤维化.干预组:大鼠系膜细胞轻度增生,细胞外基质明显减少,部分呈局灶节段性硬化.肾组织病理改变,干预组明显轻于模型组.(4)免疫组织化学显示:各组肾组织TGF-β和CTGF蛋白的分布,与对照组比较,模型组大鼠肾组织TGF-β和CTGF蛋白分布明显增加.干预组与模型组比较,TGF-β和CTGF蛋白分布明显下降,两组差异有统计学意义(P<0.05).(5)RT-PCR检测结果显示,TGF-β和CTGF的mRNA相对表达量,对照组TGF-β和CTGF的mRNA有微量表达,模型组与对照组比较,TGF-β和CTGF的mRNA相对表达量均明显上调(P<0.05);干预组与模型组比较,TGF-β和CTGF的mRNA相对表达量均明显下调(P<0.05).(6)Western-blot分析,模型组与干预组比较,模型组TGF-β和CTGF的蛋白表达均明显上调(P<0.01);干预组与模型组比较,干预组TGF-β和CTGF的蛋白表达均明显下调(P<0.01).结论:NF-κB参与TGF-β和CTGF的基因调控,NF-κB特异抑制剂可以有效抑制TGF-β和CTGF的mRNA与蛋白的表达,通过阻断肾脏纤维化中的NF-κB活化来抑制TGF-β和CTGF的表达,从而改善肾小球硬化,NF-κB抑制剂有望成为治疗肾小球疾病的新靶点.

目的:运用Meta分析、GEO基因芯片挖掘、生物信息学及分子对接技术,分析解毒化瘀颗粒治疗ACLF的疗效与机制.方法:检索PubMed、Web of Science、Cochrane、Embase、SinoMed、CNKI、VIP、WanFang数据库,根据纳入与排除标准筛选文献,运用R软件对观察指标进行Meta分析.通过GEO、TCMSP、SymMap、PharmMapper等数据库,取得解毒化瘀颗粒的化学成分,预测药物靶点,收集ACLF相关靶点,运用R软件、PyMOL、AutoDockTools1、AutoDock Vina等软件进行GO富集分析、KEGG富集分析、WGCNA共聚类分析和分子对接验证.结果:通过Meta分析发现,在总有效率、死亡率、MELD评分、血清总胆红素、血清白蛋白、血清丙氨酸氨基转移酶、凝血酶原活动度指标方面,治疗组均优于对照组(P<0.05).生物信息学分析发现,解毒化瘀颗粒干预ACLF的靶点有52个;主要化学成分有8-异戊烯基山奈酚、异鼠李素、异泽兰黄素等;核心靶点有CYP3A4、CYP1A2、CYP1A1、NQO1、ABCG2等;富集分析涉及类固醇代谢、激素代谢、细胞基质连接、黏着斑、铁离子结合、四吡咯结合、化学致癌作用-受体激活、亚油酸代谢、类固醇激素生物合成、细胞色素P450代谢通路、花生四烯酸代谢、胆汁分泌等;56组分子对接得分均<-5.0 kcal/mol.结论:在西医治疗的基础上加用解毒化瘀颗粒,能够改善ACLF的预后,且具有多途径、多成分的作用机制.

目的 探究硫酸镁通过Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)/核转录因子-κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)通路对慢性肾衰竭(chronic renal failure,CRF)大鼠血管钙化(vascular calcification,VC)的影响.方法 将SD大鼠按照随机数字法随机分为对照组、模型组、硫酸镁-L组(25％硫酸镁2 mL)、硫酸镁-H组(25％硫酸镁4 mL)、硫酸镁-H+吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)组(25％硫酸镁4 mL+100 mg/kg NF-κB抑制剂PDTC),10只/组;除对照组外,造模大鼠使用硫酸腺嘌呤混悬液灌胃3周,于4～12周,硫酸镁-L组、硫酸镁-H组、硫酸镁-H+PDTC组灌胃相应剂量药物,模型组使用等体积生理盐水灌胃(1次/d),全程用高磷饲料饲喂;对照组于1～3周进行1.5％甲基纤维素灌胃,4～12周使用等量生理盐水灌胃,整个试用期均使用基础饲料喂养;全自动生化分析仪检测大鼠血清生化指标;HE染色观察大鼠肾组织病理学情况;钙盐染色液染色观察腹主动脉钙化情况;邻甲酚酞络合酮比色法检测大鼠腹主动脉血管壁钙含量;蛋白质印迹法检测大鼠腹主动脉核心结合因子α1(core binding factorα1,Cbfα1)、骨形态发生蛋白2(bone morpho?genic protein2,BMP2)及TLR4/NF-κB通路蛋白表达情况.结果 与对照组相比,模型组大鼠血清中血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(serum creatinine,Scr)、血磷、钙水平、肾组织病理损伤程度、腹主动脉钙化程度、Cbfα1、BMP2、TLR4、p-NF-κB p56/NF-κB p56表达显著增加,血清中镁水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,硫酸镁-L组、硫酸镁-H组、硫酸镁-H+PDTC组BUN、Scr、血磷、钙水平、肾组织病理学程度、腹主动脉钙化程度、Cbfα1、BMP2、TLR4、p-NF-κB p56/NF-κB p56表达显著降低,镁水平显著增加(P<0.05);与硫酸镁-L组相比,硫酸镁-H组、硫酸镁-H+PDTC组BUN、Scr、血磷、钙水平、肾组织病理损伤程度、腹主动脉钙化程度、Cbfα1、BMP2、TLR4、p-NF-κB p56/NF-κB p56表达显著降低,镁水平显著增加(P<0.05);与硫酸镁-H组相比,硫酸镁-H+PDTC组BUN、Scr、血磷、钙水平、肾组织病理学程度、腹主动脉钙化程度、Cbfα1、BMP2、TLR4、p-NF-κB p56/NF-κB p56表达显著降低,镁水平显著增加(P<0.05).结论 硫酸镁可能通过抑制TLR4/NF-κB通路来改善CRF大鼠VC.