目的:胰升糖素样肽1(glucagon-like peptide-1, GLP-1)、胃泌素协同促进大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)转分化的胰岛素分泌细胞(insulin-producing cells, IPCs)分化。方法:(1)制备IPCs模型：胰十二指肠同源盒1(pancreatic duodenal homeobox 1, Pdx-1)、神经元素3(neurogenin 3, Ngn3)联合V型肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源基因A(V-type tendon fibrosarcoma oncogene homolog A, MafA)共转染BMSCs转分化为IPCs；(2)IPCs分为4组：A组，未诱导组；B组，GLP-1诱导组；C组，胃泌素诱导组；D组，GLP-1联合胃泌素诱导组，高糖培养基培养7 d，RT-PCR检测各组胰岛素2(insulin2)、葡萄糖激酶(GK)、巢蛋白(nestin)、胰升糖素(glucagon)及Pdx-1表达水平，ELISA检测各组胰岛素分泌情况。结果:在高糖条件下培养7 d，各组IPCs形态出现明显变化，逐渐聚集并形成散在细胞团块，联合诱导组形成大型细胞团块，双硫棕染色呈红棕色；各组在诱导第0、3、5、7、9天胰岛素分泌水平逐渐提高，且联合诱导组升高最为明显( P<0.05)；与A组相比，B、D组Insulin2和GK表达明显上调，D组glucagon表达下调，C组Pdx-1表达下调，glucagon表达上调，( P<0.05)；与B组相比，C组insulin2表达下调，glucagon表达水平明显上调，D组insulin2和GK表达水平明显上调，glucagon表达水平下调( P<0.05)；与C组相比，D组Pdx-1、insulin2和GK表达水平明显上调，glucagon表达水平下调( P<0.05)。 结论:GLP-1和胃泌素通过上调insulin2和GK，下调glucagon协同促进IPCs向胰岛β细胞分化。

目的:探讨Xp21邻近基因缺失综合征的临床特征和遗传学特点，提高临床医师对该病的认识。方法:对Xp21邻近基因缺失综合征一家三兄弟的临床表现、诊治过程、基因特点等进行分析。以"Xp21邻近/临近基因缺失综合征"、"复合型甘油激酶缺乏症"和"Xp21 contiguous gene deletion syndrome"、"complex glycerol kinase deficiency"为关键词，分别对中国知网、维普数据库、万方数据和生物医学文献数据库(PubMed)及Web of Science数据库自建库至2019年12月收录的文献进行检索，并复习相关资料。结果:先证者为男童，第4胎，第4产，在新生儿期因"皮肤色素沉着、促肾上腺皮质激素显著升高"诊断为"先天性肾上腺皮质增生症(失盐型)"，患儿血清三酰甘油、肌酸激酶水平显著升高，尿甘油酸水平显著升高，17羟孕酮水平正常，经微阵列单核苷酸多态性分析技术分析发现患儿X染色体p21.3p21.1区域5.16 Mbp缺失，确诊Xp21邻近基因缺失综合征，予氟氢可的松、氢化可的松替代治疗，患儿皮肤颜色转为正常，血清促肾上腺皮质激素降至正常。现患儿3岁8个月，智力运动发育落后，腓肠肌假性肥大，无电解质紊乱。患儿父母健康，患儿姐姐18岁，健康；患儿长兄及次兄均在出生不久后皮肤颜色变黝黑、智力运动落后，外院诊断为"脑性瘫痪、肌肉萎缩"，分别于1岁及1岁6个月死亡。患儿母亲及姐姐X染色p21.3p21.1区带杂合缺失。文献检索共收集到22例资料完整、基因诊断明确的国内外个案报道，其中13例于新生儿期起病，主要表现为肾上腺皮质功能不全、肌营养不良、高三酰甘油血症、发育迟缓等，少数有特殊面容；Xp21区域大片段缺失变异，主要缺失基因均包括 NR0B1、 GK和 DMD。 结论:Xp21邻近基因缺失综合征临床表型复杂，且易被误诊，在新生儿期即可发生肾上腺皮质功能不全，预后不良，需要通过血清生化及基因分析明确诊断。

为探究高糖饲料对草鱼葡萄糖耐受量的影响,研究选取饲喂高糖饲料140d,平均体重374 g的草鱼为高糖组,以及饲喂普通饲料,体重接近高糖组的草鱼为对照组进行葡萄糖腹腔注射试验.高糖组和对照组分别包含48尾草鱼,每组3个重复,注射前断食48h.葡萄糖注射量按每千克体重注射1.5 g计算,采用1 mL PBS缓冲液溶解后注入草鱼腹腔,同时选取体重接近一致的48尾草鱼作为阴性对照组(PBS组),腹腔注射1mL PBS缓冲液.在注射完成后0、1h、3h、6h和12h测定其血浆血糖和胰岛素含量,并采集草鱼肝脏组织,利用RT-qPCR技术检测肝脏糖代谢关键基因表达水平.血浆检测结果显示,初始时(0h)高糖组含量最低;1h时高糖组和对照组草鱼血糖含量达到峰值,且高糖组血糖峰值显著低于对照组;12h时两组草鱼血糖恢复至初始水平.高糖组和对照组草鱼腹腔注射葡萄糖后胰岛素水平都略有升高,但是差异不显著.RT-qPCR显示,初始时高糖组葡萄糖转运蛋白2基因(glut2)、葡萄糖-6-磷酸酶基因(g6pase)和糖原合成酶2基因(gys2)相对表达量比对照组高;1-3h时高糖组gk和gys2基因相对表达量显著高于对照组.综上,饲喂高糖饲料的草鱼能够快速清除过剩血糖,具有更高的葡萄糖耐受能力,增加糖原合成是高糖组草鱼快速清除血糖的主要方式.

目的 以糖尿病GK大鼠为研究对象,采用宏基因组学测序技术,观察肠道菌群及肠黏膜屏障的变化,探讨参芪复方对糖尿病血糖波动的影响及作用的机制.方法 建立自发性2型糖尿病血糖波动大鼠模型.实验分为空白组(NS,5 mL/kg)、模型组(NS,5 mL/kg)、参芪复方组(参芪复方浸膏,1.44 g/kg)、西格列汀组(西格列汀混悬液,16 mg/kg),除空白组外均予以高脂饲料喂养,干预8周.每周1日监测各组大鼠8:00、10:00、14:00、16:00、18:00尾静脉血糖,计算血糖波动指标(MBG、SDBG、LAGE);检测血清LPS及结肠SIgA、ZO-1含量;观察肠道病理切片并计算组织损伤指数(TDI)评分;通过宏基因组学技术检测肠道菌群.结果 与空白组比较,参芪复方能减少GK大鼠的血糖波动幅度,降低血清LPS水平,增加肠道SIgA、ZO-1的浓度,改善肠道炎症损伤,降低TDI评分,增加拟杆菌门/厚壁菌门(B/F)比值,升高了梭杆菌门及Marinifilaceae、拟杆菌属、普氏菌属菌群丰度.结论 参芪复方能减少糖尿病血糖波动幅度,其可能与降低肠道炎症,抑制肠黏膜屏障破坏,调节肠道菌群有关,从而维持机体血糖稳态.

目的 对17株来源于我国华东与华南地区的养殖鱼类迟缓爱德华氏菌(Edwardsiellatarda)分离株进行多样性分析.方法 通过菌体血清凝集试验及16S rRNA与hsp60部分基因序列的聚类分析.结果 菌体血清凝集试验结果显示,鳗源迟缓爱德华氏菌ETY的抗O血清可凝集大部分鱼源迟缓爱德华氏菌;人源迟缓爱德华氏菌标准株ATCC15947的抗O血清仅与鱼源迟缓爱德华氏菌WY37有交叉凝集;鲶鱼爱德华氏菌EIV的抗O血清与鱼源迟缓爱德华氏菌无交叉凝集.2株鱼源迟缓爱德华氏菌AL60306NA1和E29L与以上3种爱德华氏菌抗O血清不发生凝集反应.基于16S rRNA及hsp60部分基因序列构建的系统发育进化树显示,来源于不同地区的绝大部分鱼源迟缓爱德华氏菌分离株进化同源性较高,在基于16 S rRNA构建的系统进化树中,山东地区分离自大菱鲆的迟缓爱德华氏菌聚为一支.3株鱼源迟缓爱德华氏菌AL60306NA1、E29L、GK4与人源迟缓爱德华氏菌ATCC15947及人源鲶鱼爱德华氏菌EIV有一定亲缘关系.结论 我国华东、华南地区的鱼源迟缓爱德华氏菌分离株普遍具有相似的血清型和较高的进化同源性,并与人源的迟缓爱德华氏菌、人源的鲶鱼爱德华氏菌有明显差异.个别鱼源迟缓爱德华氏菌血清型与分子系统进化分析结果不一致,提示在防控鱼类爱德华氏菌病时,应将菌体表面抗原的免疫原性与分子聚类分析相结合.

目的 探讨银杏内酯K(GK)调节AMPK/mTOR/ULK1信号通路对乳腺癌细胞自噬和凋亡的影响.方法 取对数生长期的MCF-7细胞,设置分组为对照组、GK低浓度(GK-L,12.5 μg/mL)组、GK中浓度(GK-M,25 μg/mL)组、GK 高浓度(GK-H,50 μg/mL)组、GK-H+AMPK 抑制剂(Compound C,50 μg/mL GK+50 μmol/L Compound C)组.观察各组细胞形态以及细胞增殖、凋亡、自噬状况并分析自噬相关基因LC3、P62、Beclin1 mRNA表达以及AMPK、p-mTOR、mTOR、p-ULK1、ULK1、LC3、P62、Beclin1 表达.结果 与 对照组相比,GK-L、GK-M、GK-H 组细胞自噬泡数量增多,增殖率、p-mTOR/mTOR、p-ULK1/ULK1、p62表达显著下降,凋亡率、LC3、Beclin1表达、AMPK蛋白表达显著增加(P＜0.05);与GK-H组相比,GK-H+Compound C组细胞自噬泡数量减少,增殖率、p-mTOR/mTOR、p-ULK1/ULK1、p62显著增加,凋亡率、LC3、Beclin1表达、AMPK蛋白表达显著降低(P＜0.05).结论 GK可以诱导乳腺癌细胞自噬和凋亡、抑制其增殖,可能与激活AMPK/mTOR/ULK1信号通路有关.

为探究谷氨酸(Glu)和α-酮戊二酸(AKG)对鳜(Siniperca chuatsi)摄食和氨排泄的影响,实验以鳜[初始体重(26.28±0.99)g]为研究材料,将Glu和AKG分别添加到鳜的基础日粮中(添加量2％),进行了60d的养殖实验,前40d等量投喂,后20d饱食投喂.通过设置对照组、Glu组和AKG组,比较了3种不同饲料饲喂下鳜的摄食与氨排泄差异情况.实验结果表明,在等量饲喂期间添加Glu、AKG显著提高鳜生长和降低饵料系数,且在一定程度上降低鳜的体外氨排泄量.在饱食投喂阶段,Glu、AKG组的血液中的葡萄糖含量增加,肝糖原、肌糖原含量降低.两个投喂阶段结果都表明,饲料中添加谷氨酸和α-酮戊二酸能显著促进鳜脑中npy表达并抑制poinc表达,显著提高蛋白质效率比和特定生长率,增加鱼体体重,促进鱼体生长且降低饲料系数.同时,肝脏中gdh表达及肌肉ampd表达均提高,脱氨代谢供能水平升高,最终导致其氨排泄量升高.此外,饲料中添加Glu和AKG可促进肝脏pepck、g6pase、pk和gk基因表达量增加,糖代谢增强,减少蛋白质的分解供能.综上所述,在饲料中添加谷氨酸和α-酮戊二酸均能促进鳜的摄食并降低氨的排泄.研究结果将应用于鳜的低氨排放养殖,并推进谷氨酸和α-酮戊二酸在鳜饲料中的应用.

目的·利用冷冻电镜技术分析人源性赖氨酸乙酰转移酶7(lysine acetyltransferase 7,KAT7)的全长蛋白结构,获得人源KAT7的轮廓信息.方法·使用pGEX-4T1载体和人源KAT7全长基因构建重组蛋白表达质粒pGEX-4T1-GST-KAT7,在原核蛋白表达体系BL21(DE3)中表达KAT7蛋白,使用GST亲和层析获得GST-KAT7重组蛋白;在利用TEV蛋白酶去除GST蛋白标签后,通过HiLoad 16/600 Superdex 75 pg体积排阻色谱进一步分离纯化KAT7蛋白.将获取的蛋白样品利用蛋白质印迹法(Western blotting)对KAT7进行鉴定,使用负染电镜筛选样品并初步观察蛋白形貌;使用冷冻电镜收集数据,利用冷冻电镜数据分析软件CryoSparc挑选蛋白颗粒并分析KAT7全长蛋白的空间结构;通过UCSF Chimera软件将蛋白质数据库(Protein Data Bank,PDB)中KAT7的MYST结构域模型(5GK9)、AlphaFold预测模型与生成的结构模型进行匹配分析.结果·利用亲和层析成功纯化人源性KAT7的全长蛋白,并通过体积排阻色谱获得高纯度的KAT7蛋白;在通过Western blotting鉴定KAT7后,利用负染电镜、冷冻电镜及单颗粒重构技术初步解析了KAT7全长蛋白的空间结构,并通过三维优化处理获得了分辨率约为10A的初步三维结构模型;KAT7全长蛋白空间结构呈不规则的半环状,已有的MYST结构域模型(PDB:5GK9)可匹配入KAT7全长模型的C端部分,调整后的AlphaFold预测模型也可匹配KAT7全长结构模型.结论·利用冷冻电镜技术初步分析了人源性KAT7的全长蛋白空间结构模型.

目的 研究银杏二萜内酯葡胺注射液(Diterpene Ginkgolides Meglumine Injection,DGMI)及其银杏二萜内酯成分抗人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells-T1,HUVEC-T1)氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤的潜在作用通路.方法 采用CCK-8法分别测定不同浓度银杏内酯A(ginkgolideA,GA)、银杏内酯B(ginkgolide B,GB)、银杏内酯K(ginkgolide K,GK)和DGMI对HUVEC-T1细胞的毒性,明确药物处理细胞浓度;采用转录组测序技术对溶剂对照组(二甲基亚砜)、模型组(OGD/R4h/24h)及给药组(造模+不同剂量DGMI、GA、GB、GK处理)的细胞样本分别进行转录组测序;通过生物信息学分析方法,以GEO数据库中缺血性脑卒中患者转录组数据为参考,采用基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)、差异基因富集等分析方法完成对HUVEC-T1 OGD模型及不同浓度药物抗OGD损伤能力的评价,阐明DGMI及其功效成分的潜在作用机制.结果 GSEA分析显示,临床缺血性脑卒中患者血液转录组数据分析获得的疾病富集通路与本实验细胞模型测序结果获得的富集通路相似度为55.6％;DGMI、GA、GB、GK处理组与模型组相比,显著富集的主要信号通路包括FceRI、NOD样受体、有丝分裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)等.差异基因分析显示,与对照组相比,模型组共筛选出439个差异基因,差异基因的基因本体(gene ontology,GO)分析主要富集在应激反应过程,京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)分析主要富集在磷脂酶D、FceRI、NOD样受体和血小板活化等信号通路;与模型组相比,给药组差异基因的GO分析主要富集在造血和代谢过程,KEGG分析主要富集在血小板活化、磷脂酶D等信号通路.结论 HUVEC-T1OGD模型模拟了部分缺血性脑卒中的病理特征;DGMI、GA、GB、GK均具有抗OGD损伤作用,发挥抗OGD损伤作用的关键基因及信号通路主要集中在抗炎、抗凋亡、调控血小板活化等生物学过程,可能通过下调FceRI、NOD样受体、MAPK和VEGF信号通路,干预血小板活化、磷脂酶D等信号通路发挥作用.

目的 探讨细胞间黏附分子1(ICAM-1)基因单核苷酸多态性(SNP)与糖尿病周围神经病变(DPN)的相关性.方法 选取2013年6月—2014年12月我院收治的607例2型糖尿病患者,其中DPN组295例,非DPN组312例.采用TaqMan等位基因分型法测定患者rs5498(A/G K469E)和rs1799969(G/A R241G)基因型,分析组间2个SNPs位点的基因型分布以及不同遗传模型对DPN患者发病的影响.结果 2组rs5498(A/G K469E)和rs1799969(G/A R241G)基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡.非DPN组与DPN组rs1799969(G/A R241G)主要以GG型为主,分别为96.8%和99.0%;rs5498 A/G K469E以AA型和AG型为主(非DPN组:AA 48.7%,AG 39.4%;DPN组:AA 51.5%,AG 41.7%).2组rs5498(A/G K469E)和rs1799969(G/A R241G)基因型分布和等位基因频率比较差异无统计学意义(P>0.05).遗传模型分析显示rs5498(A/G K469E)显性模型(AA+AG)/GG和加性模型GG/AA中,携带A等位基因与DPN的易感性有关(校正OR分别为1.585和1.575,均P<0.05),rs1799969(G/A R241G)与DPN发病无明显关系.结论 ICAM-1基因SNP rs5498(A/G K469E)与2型糖尿病的DPN并发症相关,携带A等位基因可能是一个危险因素.