维甲酸诱导基因-I编码抗病毒先天免疫应答中重要的细胞内模式识别受体，其识别病毒RNA后，启动抗病毒信号通路，诱导干扰素和促炎细胞因子的产生。肾脏是人体重要的器官，儿童期肾脏疾病的发生对患儿的生长发育及日常生活造成极大的影响。新近研究表明，维甲酸诱导基因-I可参与肾脏的炎症及免疫反应过程，促进肾脏疾病的发生及进展。该文就维甲酸诱导基因-I在肾脏疾病中的研究进展作一综述，探讨其作为肾脏疾病生物标志物及治疗靶点的应用前景。

本研究通过对呼吸道合胞病毒（RSV）毛细支气管炎患儿血白细胞进行RNA测序，探讨与发病机制及疾病严重度相关的生物学特征。本研究是一项病例对照研究，以2019年10月至2022年4月于温州医科大学附属第二医院儿童呼吸科住院临床诊断为毛细支气管炎，RSV抗原阳性和（或）RSV核酸阳性的87例患儿作为病例组，将病例组按病情分为轻、中、重三组，按有无特应征分为特应征组和无特应征组，选择同期40名健康体检儿童作为对照组，提取病例组和对照组儿童的全血白细胞RNA进行测序，分析数据得到差异表达基因（DEGs），再通过基因本体论（GO）注释、京都基因和基因组百科全书（KEGG）注释、蛋白质相互作用网络（PPI）构建筛选与发病机制、病情以及特应征相关的免疫生物学通路及基因。通过加权基因共表达网络分析（WGCNA）构建共表达网络，寻找与疾病严重度相关的潜在生物学指标。结果显示，病例组与对照组相比DEGs共有1 782个，其中上调基因1 586个，下调基因196个，这些DEGs的GO通路富集显示在分子功能中主要富集在过氧化物酶活性、氧化还原酶活性等过程，在细胞学组分中主要富集在细胞质囊泡腔、分泌颗粒腔中，在生物学过程中主要富集在中性粒细胞激活参与免疫反应、中性粒细胞脱颗粒、中性粒细胞激活等过程。DEGs的KEGG富集分析显示主要富集于病毒蛋白与细胞因子及其受体的相互作用信号通路。构建PPI网络后得到 CCL2、 IL-10、 MMP9和 JUN共4个处于核心位置的基因。不同病情组与对照组比较所得DEGs主要富集在逆行内源性大麻素信号转导和细胞凋亡通路上。WGCNA分析显示与血氧饱和度相关的棕色模块与病情关系最为密切，其基因主要富集在RNA解旋酶维甲酸诱导基因-I（RIG-I）样受体信号通路上。特应征组的特异性DEGs有230个，无特应征组的特异性DEGs有444个，KEGG富集分析结果显示两组均富集到NF-κB信号通路上，特应征不会导致RSV毛细支气管炎儿童免疫反应和转录组特征发生明显改变。综上，中性粒细胞激活、脱颗粒途径以及病毒蛋白与细胞因子及细胞因子受体的相互作用信号通路参与RSV毛细支气管炎宿主的免疫反应。 CCL2、 IL-10、 MMP9和 JUN基因可能与发病相关。在RIG-I样受体、细胞凋亡及内源性大麻素相关的信号通路中可能存在与疾病严重度相关的潜在生物学标志物。

目的:检测遗传学及生理学实验室蛋白2(LGP2)、维甲酸诱导基因I(RIG-I)和黑色素瘤分化相关基因5(MDA5)在手足口病(HFMD)患儿的表达水平，探索其在HFMD中可能的临床意义。方法:选择2020年5月至2021年5月西安交通大学第二附属医院、西安市儿童医院和西安市中心医院就诊的50例HFMD患儿作为研究对象，并以同期同年龄段体检儿童20例作为对照组。HFMD患儿按病原学检测结果分为肠道病毒71(EV-A71)型和柯萨奇病毒A6(CV-A6)型，再根据疾病轻重程度分为轻症、重症患儿。比较并分析各组LGP2、RIG-I和MDA5的mRNA相对表达量及三者相关性。结果:50例HFMD患儿中EV-A71型26例(轻症16例，重症10例)，CV-A6型24例(轻症17例，重症7例)。HFMD组患儿与对照组儿童的年龄、性别差异均无统计学意义( P>0.05)。LGP2 mRNA在EV-A71型和CV-A6型HFMD患儿中的相对表达量分别为2.37(1.78，3.25)%和1.88(1.35，3.13)%，均低于对照组2.97(2.61，3.55)%，CV-A6型HFMD患儿与对照组间差异有统计学意义( Z＝－2.310， P＝0.021)；RIG-I mRNA在EV-A71型和CV-A6型HFMD患儿中的相对表达量分别为9.95(7.79，14.62)%和9.78(7.04，15.83)%，均低于对照组18.47(13.00，21.07)%，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；MDA5 mRNA在EV-A71型和CV-A6型HFMD患儿中的相对表达量分别为4.41(2.82，5.99)%和3.98(2.18，7.41)%，均低于对照组5.10(3.52，7.71)%，但差异均无统计学意义。LGP2、RIG-I和MDA5 mRNA在EV-A71型和CV-A6型HFMD患儿轻症、重症间表达水平差异均无统计学意义。LGP2、RIG-I和MDA5 mRNA表达量具有较高相关性(均 P<0.001)。 结论:LGP2、RIG-I和MDA5 mRNA相对表达量在HFMD患儿中呈不同程度降低，且三者具有相关性。

目的:观察小青龙汤和清气化痰丸对白细胞介素-1β（IL-1β）诱导的人肺癌细胞H292黏液高分泌模型及核转录因子-κB/微小RNA-494（NF-κB/miR-494）信号通路相关分子的影响，探讨两者改善病理性气道黏液的作用机制。方法:采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测不同浓度小青龙汤、清气化痰丸对IL-1β诱导的H292细胞活性的影响并选择合适浓度进行后续实验。将细胞随机分为空白组、模型组（5 μg/L IL-1β）、NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸铵（PDTC）组（5 μg/L IL-1β+100 μmol/L PDTC）、小青龙汤组（5 μg/L IL-1β+1 000 mg/L小青龙汤）和清气化痰丸组（5 μg/L IL-1β+1 000 mg/L清气化痰丸）；采用5 μg/L IL-1β诱导H292细胞24 h建立气道上皮黏液高分泌细胞模型。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞分泌黏蛋白5AC（MUC5AC）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-8水平及细胞内MUC5AC和囊性纤维化跨膜转导调节因子（CFTR）蛋白含量；采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测MUC5AC mRNA、CFTR mRNA和miR-494的表达；采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测NF-κB信号通路关键蛋白p65和NF-κB抑制因子（IκB）的蛋白表达。结果:选择浓度为1 000 mg/L的小青龙汤和清气化痰丸进行后续实验。与空白组比较，模型组细胞分泌MUC5AC、TNF-α和IL-8水平显著升高，细胞内MUC5AC蛋白含量和mRNA表达也显著升高，细胞内CFTR蛋白含量和mRNA表达均显著降低，且细胞内p65蛋白表达显著上调，IκB蛋白表达显著下调，miR-494表达显著升高。与模型组相比，PDTC组、小青龙汤组和清气化痰丸组细胞分泌MUC5AC、TNF-α、IL-8水平显著降低，细胞内MUC5AC蛋白含量和mRNA表达也显著降低，且细胞内p65蛋白表达均显著下调，IκB蛋白表达均显著上调，miR-494表达均显著降低；PDTC组和清气化痰丸组细胞内CFTR蛋白含量和mRNA表达均显著升高。与PDTC组相比，小青龙汤组细胞分泌TNF-α水平显著升高（ng/L：22.77±3.14比11.09±3.37， P<0.05），细胞内CFTR蛋白含量和mRNA表达、IκB蛋白表达均显著降低〔CFTR蛋白（ng/L）：97.38±6.62比227.04±19.48，CFTR mRNA（2 -ΔΔCt）：0.99±0.08比1.21±0.08，IκB/β-actin：1.69±0.11比2.00±0.18，均 P<0.05〕；清气化痰丸组细胞分泌TNF-α水平显著升高（ng/L：19.08±3.71比11.09±3.37， P<0.05）。与小青龙汤组相比，清气化痰丸组细胞内CFTR蛋白含量和mRNA表达、IκB蛋白表达均显著升高〔CFTR蛋白（ng/L）：235.01±22.71比97.38±6.62，CFTR mRNA（2 -ΔΔCt）：1.32±0.15比0.99±0.08，IκB/β-actin：1.94±0.16比1.69±0.11，均 P<0.05〕。 结论:小青龙汤改善气道上皮黏液高分泌炎症的机制可能与抑制NF-κB/miR-494炎症信号介导的MUC5AC高分泌有关，而清气化痰丸则可能与抑制NF-κB/miR-494炎症信号介导的MUC5AC高分泌及CFTR功能障碍有关，因此，二者治疗病理性气道黏液的机制差异主要在对CFTR基因和蛋白的调控上。

目的:探讨新型冠状病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2）非结构蛋白1（nonstructural protein 1，NSP1）对I型干扰素（type I interferon，IFN-I）应答的影响及其作用机制。方法:为研究SARS-CoV-2的NSP1对I型IFN产生的影响，构建NSP1表达质粒，并通过免疫荧光检测其蛋白表达能力。通过双荧光素酶报告基因实验检测NSP1对IFN-β启动子激活的作用。构建NSP1突变体M1（K163AH164A）和M2（△161-180），验证突变位点对IFN-β启动子激活的影响。结果:NSP1显著抑制维甲酸诱导基因蛋白I、黑色素瘤分化相关蛋白5、线粒体抗病毒信号蛋白、TANK结合激酶1、干扰素调节因子3、干扰素调节因子7诱导的下游IFN-β启动子的激活，并对I型IFN通路的各关键分子的蛋白表达具有抑制作用，NSP1 C端的KH基序是其发挥抑制作用的关键位点。结论:SARS-CoV-2 NSP1能够拮抗宿主I型干扰素免疫应答，实现病毒的天然免疫逃逸。

目的 观察维甲酸相关孤核受体α(RORα)过表达病毒载体尾静脉注射对多柔比星(DOX)诱导小鼠心脏毒性(DIC)的影响,并探讨其可能的机制.方法 将80只雄性C57BL/6小鼠随机分为Con组、DIC组、DIC+RORα组、DIC+RORα+EX527组,每组20只.DIC+RORα组和DIC+RORα+EX527组经尾静脉注射过表达RORα基因的腺相关病毒9型(AAV9)载体,DIC组经尾静脉注射AAV9空白对照载体;AAV9载体注射3周后,除Con组外均采用尾静脉注射DOX的方法建立DIC小鼠模型;DIC+RORα+EX527组每次DOX注射后腹腔注射沉默信息调节因子(SIRT1)信号通路特异性阻断剂EX527.各组分组处理后4周,经胸超声心动图检查测算左心室射血分数(LVEF)和左心室缩短分数(LVFS),处死后取眼眶血和心肌组织.采用HE染色观察心肌组织病理情况,ELISA法检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌钙蛋白I(cTnI)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α),TUNEL染色后计算细胞凋亡率,二氢乙锭法检测心肌组织活性氧(ROS)表达,比色法检测心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)表达,免疫荧光染色观察心肌组织巨噬细胞浸润和NF-κB p65表达,Western blotting法检测心肌组织cleaved Caspase-3、RORα、SIRT1蛋白表达并计算Ac-NF-κB p65/NF-κB p65、Ac-Foxo1/Foxo1,实时荧光定量PCR法检测心肌组织RORα、SIRT1 mRNA表达.结果 与Con组比较,DIC组小鼠心肌纤维排列紊乱且断裂明显,心肌细胞空泡化显著;与DIC组、DIC+RORα+EX527组比较,DIC+RORα组小鼠心肌纤维断裂及心肌细胞空泡化均减轻.LVEF、LVFS及心肌组织SOD、GSH-Px:Con组>DIC+RORα组>DIC组、DIC+RORα+EX527组(P均<0.05).血清CK-MB、LDH、cTnI、IL-1β、IL-6、TNF-α及心肌组织细胞凋亡率、cleaved Caspase-3蛋白、ROS、MDA、巨噬细胞浸润、NF-κB p65:Con组DIC组(P均<0.05).SIRT1 mRNA及蛋白:Con组、DIC+RORα组>DIC组、DIC+RORα+EX527组(P均<0.05).Ac-Foxo1/Foxo1、Ac-NF-κB p65/NF-κB p65:Con组、DIC+RORα组

目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)对肝星状细胞(HSCs)活化及氧化应激的作用和潜在机制.方法 应用10 ng/ml的血小板源性生长因子(PDGF-bb)诱导HSCs活化,以 5 μmol/L剂量的ATRA处理 48 h.检测细胞生长活力和表型标志物表达的变化,评价ATRA对HSCs活化的影响;检测细胞内活性氧(ROS)、还原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)、抗氧化基因表达的变化,评价ATRA对HSCs氧化应激的影响;检测自噬标志物表达和自噬流的变化,评价ATRA对HSCs自噬活性的影响.结果 与PDGF-bb组相比,ATRA处理的HSCs生长活力显著降低(P＜0.01),α-SMA和Collagen I蛋白的表达明显减少(P＜0.01),细胞内ROS和MDA显著减少(P＜0.01),GSH显著增加(P＜0.01),抗氧化基因NRF2、HO-1和ATF4的表达明显增加(P＜0.01);同时自噬标志物Beclin 1和LC3 II/I的表达明显减少(P＜0.01),自噬流信号显著降低.结论 ATRA显著抑制PDGF-bb诱导的HSCs活化,降低HSCs的氧化应激水平和自噬活性,对肝纤维化的防治具有潜在应用价值.

目的 分离、培养、鉴定小型猪牙周膜干细胞(PDLSCs)并使用不同浓度的维甲酸(RA)对其进行成骨方向诱导,观察各浓度RA诱导后小型猪PDLSCs的碱性磷酸酶活性、相关成骨基因表达的差异.方法 采用组织块法获得小型猪PDLCs,有限稀释法纯化小型猪PDLSCs,免疫荧光法检测STRO-1、免疫细胞化学法检测波形蛋白、角蛋白鉴定小型猪PDLSCs.分别使用0.5 μm、1 μm、2 μm RA对小型猪PDLSCs进行成骨诱导,14 d后行ALP染色,诱导21 d后,茜素红染色检测矿化结节.诱导14 d后对比各组细胞ALP活性.Real-time PCR定量分析各组RA诱导小型猪PDLSCs第21天ALP、OPN、OCN、Col I基因表达情况.结果 纯化后小型猪PDLSCs STRO-1,波形蛋白阳性表达,角蛋白阴性表达,各组RA诱导14 d后,ALP染色阳性,诱导21 d后各诱导组细胞茜素红染色阳性.ALP活性检测显示,小型猪PDLSCs诱导至第14天,ALP活性随RA浓度增高而增高(P＜0.001).Real-time PCR分析成骨相关基因表达结果显示,ALP、OCN基因表达与RA浓度呈剂量依赖关系.结论 0.5 μm、1 μm、2 μm三种浓度的RA均可诱导小型猪PDLSCs分化为成骨样细胞,并且其成骨诱导的能力在一定范围内随着RA浓度增高而增强,可以认为RA可能是一种更优秀的成骨诱导剂.

目的 探讨香雪抗病毒口服液对甲型流感病毒的活性及其在炎症免疫应答中的潜在作用机制.方法 采用噻唑蓝(MTT)染色法检测香雪抗病毒口服液对MDCK细胞和A549细胞的细胞毒性作用.采用细胞病变抑制法(CPE)及空斑减少实验对香雪抗病毒口服液进行抗病毒活性检测.采用免疫荧光法检测 NP 蛋白.实时荧光定量PCR测定炎症细胞因子的表达情况.采用蛋白印迹实验检测香雪抗病毒口服液对炎症相关信号通路的蛋白表达的影响.结果 香雪抗病毒口服液对甲型流感病毒 A/PR/8/34(H1N1)和 A/Aichi/2/68(H3N2)均有一定的抗病毒抑制作用,半数细胞毒性浓度(TC50)分别为42.12、79.36 mg/mL,半数抑制浓度(IC50)分别为 8.665、5.260 mg/mL,并可减少H1N1 病毒空斑形成.香雪抗病毒口服液能呈剂量相关性地降低H1N1诱导的A549 细胞炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、视黄酸(维甲酸)诱导基因蛋白I(RIG-I)、趋化因子(CC基序)配体 5(CCL5)、巨噬细胞炎症蛋白-1β(MIP-1 β)、干扰素诱导蛋白-10(IP-10)、白细胞介素-10(IL-10)、λ干扰素(IFN-λ)、β干扰素(IFN-β)、白细胞介素-8(IL-8)mRNA的表达(P＜0.05、0.01、0.001).在流感病毒单复制周期中,香雪抗病毒口服液在早期阶段 0～2 h干预,具有良好的抗流感病毒效果.香雪抗病毒口服液能显著抑制Toll样模式识别受体 3(TLR3)、RIG-I、黑色素瘤分化相关基因 5(MDA-5)受体的表达,下调核转录因子-κB亚基p65(NF-κB p65)、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、信号转导和转录激活因子 1(STAT1)、STAT2、STAT3 的磷酸化水平,且在 20 mg/mL浓度下明显下调这些蛋白的表达.结论 香雪抗病毒口服液不仅能有效抑制甲流感病毒在人宿主细胞中复制,降低流感病毒诱导的炎症因子表达,而且能显著抑制流感病毒诱导天然免疫信号通路的相关蛋白表达,表明香雪抗病毒口服液具有防治流感病毒的潜力.

目的 探讨乙型肝炎病毒e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)对Bewo细胞维甲酸诱导基因-I(retinoic acidinducible-Ⅰ,RIG-Ⅰ)和线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)表达的作用.方法 首先以终浓度2 μg/mL的RIG-Ⅰ配体poly(dAT∶dAT)处理Bewo细胞24 h,观察RIG-Ⅰ、MAVS mRNA的表达.然后将5μgHBeAg重组质粒pcDNA3.1 (+)-HBe转染Bewo细胞,转染48 h后,以2μg/mL的poly(dAT∶ dAT)刺激24 h.采用实时荧光定量反转录PCR和酶联免疫吸附测定分别检测细胞RIG-Ⅰ、MAVS mRNA表达及上清干扰素-β(interferon-β,IFN-β)水平.并采用免疫荧光染色法观察HBeAg对细胞核因子-κB (nuclear factor-κB,NF-κB)p65入核的影响.结果 poly(dAT∶ dAT)可诱导Bewo细胞RIG-Ⅰ、MAVS mRNA表达(27.86±9.49,21.75±8.04),高于对照组(14.51±6.27,11.59±4.73)(P＜0.01).转染5μg HBeAg重组质粒组poly(dAT∶ dAT)可诱导Bewo细胞RIG-Ⅰ、MAVS mRNA表达(13.33±4.23,10.48±3.17)及IFN-β产生[(14.20±5.01)pg/mL],低于对照组[27.86±9.49,21.75 ±8.04;(47.69± 14.3)pg/mL](P＜0.01),但与pcDNA3.1-HBe-5组[11.82±3.58,9.39±3.22;(10.82± 3.75)pg/mL]比较,差异无统计学意义(P＞0.05).且HBeAg可干扰poly(dAT∶dAT)诱导Bewo细胞NF-κB p65入核,抑制NF-κB的激活.结论 HBeAg可下调Bewo细胞RIG-Ⅰ、MAVS mRNA的表达,并抑制NF-κB入核及IFN-β产生,这可能是乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)逃避宿主免疫应答的一种重要策略.