目的:建立并优化人冠状病毒NL63参考株(HCoV-NL63-NC_005831)的体外富集方法。方法:以恒河猴肾细胞系(LLC-MK2)培养HCoV-NL63，以离心力135 000× g、分别离心病毒培养上清4 h、6 h、8 h、10 h和12 h以富集病毒，并以商品化PEG沉淀试剂盒富集方法作为对照。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、半数组织培养感染剂量(TCID 50)和空斑实验对原始病毒液、富集病毒液分别进行病毒核酸和病毒生物活性定量检测，评价病毒富集效果；通过透射电镜负染观测病毒富集前后的形态。 结果:经层超速离心法及经PEG沉淀法分别进行体积100∶1富集处理，两种方法获得的富集病毒液相较于原液的病毒核酸浓度及活病毒浓度均有提高( P<0.001)。超速离心方法富集前后，电镜下观察到的病毒颗粒呈正常的负染形态；4 h、6 h、8 h、10 h和12 h超速离心后活病毒浓度平均分别是原病毒液的(7.35±1.62)倍、(13.98±1.71)倍、(36.36±10.41)倍、(48.16±9.38)倍、(54.26±7.02)倍，PEG沉淀后活病毒浓度是原病毒液的(3.39±0.16)倍，经超速离心法获得的富集病毒液的核酸浓度及活病毒浓度显著高于PEG沉淀法( P<0.05)；8 h、10 h、12 h超速离心后病毒浓度显著高于4 h和6 h( P<0.05)，但8 h、10 h、12 h之间病毒含量差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:超速离心法相较于商品化的PEG沉淀法能更有效富集HCoV-NL63病毒；离心力为135 000× g时，选择8 h的超离时间可获得较优的体外富集效果。

目的:探讨在肺腺癌中含SAM域和HD域蛋白1（SAMHD1）与程序性死亡配体-1（PD-L1）表达的相关性。方法:通过在线数据库GEPIA和Kaplan-Meier Plotter分析SAMHD1在肺腺癌中的表达及对预后的影响。通过实时荧光定量PCR（qPCR）和蛋白质印迹法检测SAMHD1在多个肺腺癌细胞株中的表达。利用小干扰RNA转染及慢病毒感染技术分别对H1975、H1299及LLC细胞进行SAMHD1基因沉默，通过qPCR、蛋白质印迹法检测对照组、siSAMHD1-1组和siSAMHD1-2组肺腺癌细胞中PD-L1 mRNA及蛋白表达水平，用流式细胞术检测细胞膜PD-L1的表达水平。构建小鼠肺腺癌移植瘤模型，用免疫组织化学法检测对照组和shSAMHD1组移植瘤组织中PD-L1的表达。用CCK-8检测对照组、siSAMHD1-1组和siSAMHD1-2组肺腺癌细胞增殖活力。结果:GEPIA数据库结果表明，SAMHD1 mRNA在肺腺癌中的表达较肺正常组织低（4.81±0.90 vs. 5.99±0.76， t=20.67， P<0.001）。SAMHD1高表达患者中位总生存期明显长于低表达患者（109.0个月 vs. 87.7个月， χ2=26.83， P=0.002）。A549、PC9、H1299和H1975细胞中SAMHD1 mRNA相对表达量分别为1.00±0.02、0.75±0.05、3.49±0.19和7.25±0.38（ F=589.00， P<0.001），蛋白相对表达量分别为1.00±0.06、0.34±0.07、1.67±0.22和2.11±0.63（ F=15.79， P=0.001）。H1975细胞中，对照组、siSAMHD1-1组和siSAMHD1-2组的PD-L1 mRNA相对表达水平分别为1.00±0.00、1.54±0.26、2.89±0.13（ F=102.30， P<0.001），蛋白相对表达水平分别为1.00±0.01、1.50±0.10和1.52±0.33（ F=6.65， P=0.030）；H1299细胞中，3组的PD-L1 mRNA相对表达水平分别为1.00±0.08、1.63±0.03和2.14±0.03（ F=368.80， P<0.001），蛋白相对表达水平分别为1.00±0.07、1.88±0.35和2.05±0.38（ F=10.66， P=0.011），siSAMHD1-1组和siSAMHD1-2组PD-L1表达水平均高于对照组（均 P<0.05）。流式细胞术结果表明，H1975细胞中，对照组、siSAMHD1-1组和siSAMHD1-2组膜PD-L1荧光强度分别为246.83±27.59、325.60±8.00和308.93±7.60（ F=17.56， P=0.003）；H1299细胞中，3组的荧光强度分别为959.00±6.25、1 084.33±7.64和1 085.33±21.22（ F=86.74， P<0.001），siSAMHD1-1组和siSAMHD1-2组荧光强度均高于对照组（均 P<0.05）。在小鼠移植瘤模型中，shSAMHD1组PD-L1的H-SCORE评分高于对照组（7.99±1.10 vs. 4.49±0.43， t=5.13， P=0.007）。H1975细胞中，对照组、siSAMHD1-1组和siSAMHD1-2组72 h细胞增殖活力分别为0.50±0.02、0.75±0.05和0.73±0.06（ F=25.01， P=0.001）；H1299细胞中，3组72 h细胞增殖活力分别为0.80±0.01、1.00±0.04和0.93±0.07（ F=13.90， P=0.006），siSAMHD1-1组和siSAMHD1-2组细胞增殖活力均高于对照组（均 P<0.05）。 结论:在肺腺癌中，沉默SAMHD1可以提高PD-L1的表达。

目的:探讨Beclin1对肺癌细胞紫杉醇耐药的影响及其分子机制。方法:人非小细胞肺癌A549和小鼠LLC Lewis肺癌细胞采用梯度递增法建立紫杉醇耐药细胞株A549/DOX和LLC/DOX。采用蛋白质免疫印迹(Western blot)分析耐药和非耐药细胞株Beclin1蛋白表达水平。采用对照慢病毒和Beclin1慢病毒感染A549/DOX和LLC/DOX，建立A549/DOX组、A549/DOX/Beclin1组、LLC/DOX和LLC/DOX Beclin1组，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色、克隆形成实验和体外移植瘤分析紫杉醇对4组细胞增殖的影响。采用流式细胞仪分析紫杉醇对4组细胞凋亡的影响；Western blot分析4组细胞凋亡和自噬相关蛋白表达水平。计量资料比较采用 t检验。 结果:A549/DOX组和LLC/DOX组细胞48 h吸光度( A)值(1.63±0.05、1.72±0.13)明显高于A549/DOX/Beclin1组和LLC/DOX Beclin1组(1.09±0.13、1.21±0.06)，差异有统计学意义( t＝9.895、9.624， P<0.05)。EdU染色结果显示，A549/DOX组和LLC/DOX组细胞EdU染色阳性率[(93.71±2.81)%、(95.29±3.54)%]明显高于A549/DOX/Beclin1组和LLC/DOX Beclin1组[(62.14±7.52)%、(70.14±6.09)%]，差异有统计学意义( t＝10.410、9.435， P<0.05)。克隆形成实验结果显示，A549/DOX组和LLC/DOX组细胞克隆形成数量[(115.43±10.75)、(142.57±23.71)个]明显高于A549/DOX/Beclin1组和LLC/DOX Beclin1组[(71.57±7.98)、(86.14±3.13)个]，差异有统计学意义( t＝8.667、6.224， P<0.05)。A549/DOX组和LLC/DOX组细胞肿瘤体积[(823.71±44.89)、(1 144.86±106.45) mm 3]明显高于A549/DOX/Beclin1组和LLC/DOX Beclin1组[(585.57±41.80)、(774.14±48.95) mm 3]，差异有统计学意义( t＝8.667、6.224， P<0.05)。A549/DOX组和LLC/DOX组肿瘤重量[(2.53±0.27)、(2.87±0.41) g]明显高于A549/DOX/Beclin1组和LLC/DOX Beclin1组[(1.15±0.09) g、(1.46±0.13) g]，差异有统计学意义( t＝12.660、8.730， P<0.05)。A549/DOX组和LLC/DOX组细胞凋亡水平[(33.16±3.31)%、(29.32±3.62)%]明显低于A549/DOX/Beclin1组和LLC/DOX Beclin组细胞[(56.00±3.87)%、(62.05±4.15)%]，差异有统计学意义( t＝12.660、8.730， P<0.05)。A549/DOX和LLC/DOX细胞p62蛋白表达水平(2.82±0.19、2.59±0.33)明显高于A549/DOX/Beclin1组和LLC/DOX Beclin1组p62蛋白表达水平(1.01±0.10、1.21±0.10)，差异有统计学意义( t＝22.400、10.500， P<0.05)。A549/DOX组和LLC/DOX组细胞半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3蛋白表达水平(0.65±0.12、0.78±0.06)明显低于A549/DOX/Beclin1组和LLC/DOX Beclin1组(1.49±0.14、1.56±0.12)，差异有统计学意义( t＝11.470、15.280， P<0.05)。 结论:Beclin1通过调节细胞凋亡和自噬，介导肺癌细胞对紫杉醇的耐药性。

目的:筛选表达量高且具有血凝抑制活性的B/Yamagata系流感病毒血凝素(HA)重组蛋白.方法:以B/Singapore/IN-FTT-16-0610/2016的HA为基础,在HA胞外区C末端分别融合GCN4pLL三聚化基序、GCN4pLL-半胱氨酸及GCN4pLL-七鳃鳗可变淋巴细胞受体-B(VLR-B)抗体C端的肽段序列,分别获得HA突变体基因BY-T、BY-LLc及BY-PLc;分别插入pFast-Bac1,采用杆状病毒昆虫细胞表达系统进行表达.表达鉴定后,Strep-Tactin亲和层析纯化,然后鉴定纯化突变体蛋白的寡聚程度及血凝活性.突变体蛋白免疫小鼠,检测免疫血清HA特异性IgG抗体和血凝抑制(HAI)抗体水平.结果:各HA突变体均能够有效表达,BY-T突变体表达水平最高,易于纯化,纯度好,呈多聚化形式存在;BY-LLc及BY-PLc表达水平次之,呈高聚化形式存在.三种HA突变体蛋白的血凝活性相当,均可有效诱发的HA特异性结合的IgG抗体和HAI抗体.结论:HA蛋白胞外区C端融合寡聚化基序GCN4pLL的突变体易于纯化,具有血凝活性,可诱发小鼠产生HA特异性抗体和HAI抗体.研究为B/Yamagata系流感病毒重组蛋白疫苗的研发策略提供了参考.

目的:探讨长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)1010001N08Rik和GATA6在高氧暴露小鼠肺癌细胞(Lewis lung carcinoma cell,LLC细胞)中表达量的变化与相关性,及其介导Wnt/β-catenin信号通路参与高氧肺损伤的机制.方法:(1)将LLC细胞分为空气组、高氧暴露24 h组和高氧暴露48h组,应用RT-PCR和Western blot法分别检测lncRNA1010001N08Rik、GATA6、Wnt及β-catenin的mRNA及相关蛋白表达水平.(2)将LLC细胞分为无干扰空气组、无干扰高氧组、NC-siRNA干扰高氧组、siRNA 干扰高氧组.应用 RT-PCR 和 Western blot 法分别检测 lncRNA1010001N08Rik、GATA6、Wnt 及 β-catenin 的 mRNA及相关蛋白表达水平,流式细胞术检测各组细胞凋亡.(3)利用GraphPadPrism 9.4.1进行数据可视化.(4)采用SPSS 26.0统计软件进行数据处理,两组间数据比较采用两独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析.(5)将Wnt、Fzd2、GATA6等相关基因输入string11.0数据库构建PPI网络并导出PPI网络图.结果:(1)与空气组相比较,高氧暴露24h组和48h组GATA6的mRNA表达量下降,lncRNA1010001N08Rik、Wnt、β-catenin的mRNA表达量增加,差异具有统计学意义(P＜0.05).(2)与空气组相比,高氧暴露24h组和48h组GATA6蛋白表达量下降,Wnt、β-catenin蛋白表达量增加,差异具有统计学意义(P＜0.05).(3)与无干扰空气组相比,无干扰高氧组、NC-siRNA干扰高氧组的GATA6的mRNA表达量和蛋白表达量下降,1010001N08Rik的mRNA表达量、Wnt、β-catenin的mRNA表达量和蛋白表达量增加;无干扰高氧组与NC-siRNA干扰高氧组的比较差异无统计学意义;与干扰高氧组与NC-siRNA干扰高氧组相比,siRNA干扰高氧组GATA6的mRNA表达量和蛋白表达量增加,1010001N08Rik的mRNA表达量、Wnt、β-catenin的mRNA表达量和蛋白表达量下降,差异均具有统计学意义(P＜0.05).(4)与无干扰空气组相比,无干扰高氧组、NC-siRNA干扰高氧组细胞凋亡率增加;无干扰高氧组与NC-siRNA干扰高氧组的比较差异无统计学意义;与无干扰高氧组与NC-siRNA干扰高氧组相比,siRNA干扰高氧组的细胞凋亡率下降,差异均具有统计学意义(P＜0.05).(5)根据string11.0数据库导出Wnt、Fzd2、GATA6等相关基因的PPI网络图显示,GATA6与Wnt有密切相关.结论:高氧暴露下,LCC细胞中lncRNA1010001N08Rik可能通过下调GATA6的表达激活Wnt/β-catenin信号通路的传导,从而促进高氧肺损伤的形成过程.

目的 观察真武汤加地龙联合顺铂给药对恶性胸腔积液模型小鼠血清白细胞介素7(IL-7)、血管内皮生长因子(VEGF)的影响.方法 选取8 周龄的雌性C57BL/6 小鼠40 只,适应性喂养1 周后随机均分为空白对照组、模型对照组、顺铂组、真武汤加地龙组、真武汤加地龙+顺铂组,每组8 只.除空白对照组外,其余4 组的32 只均采用LLC小鼠肺癌细胞建立小鼠恶性胸腔积液模型.建模成功3 天后,顺铂组予顺铂溶液6 mg/kg腹腔注射,隔3 日1 次,共3 次;真武汤加地龙组予33.78 g/kg的真武汤加地龙溶液灌胃,每日 1 次,连续 10 天;真武汤加地龙+顺铂组予顺铂溶液6 mg/kg腹腔注射,隔3 日1 次,共3 次,联合33.78 g/kg的真武汤加地龙溶液灌胃,每日1 次,连续10 天;空白对照组和模型对照组分别予等容积0.9%氯化钠注射液灌胃,每日1 次,连续10 天.给药结束后,常规麻醉小鼠,暴露胸腔,用注射器抽取胸水,精确到0.1 mL,记录胸水量.采用酶联免疫吸附法检测各组小鼠血清中IL-7、VEGF含量.结果 与空白对照组比较,模型对照组和各药物治疗组胸水量均升高(P<0.05);与模型对照组比较,各药物治疗组胸水量均下降(P<0.05).真武汤加地龙+顺铂组效果最佳,优于真武汤加地龙组和顺铂组(P<0.05).与空白对照组比较,模型对照组和各药物治疗组血清VEGF水平均升高(P<0.05);与模型对照组比较,各药物治疗组血清VEGF水平均降低(P<0.05);真武汤加地龙+顺铂组血清VEGF水平低于真武汤加地龙组和顺铂组(P<0.05).与空白对照组比较,模型对照组和各药物治疗组血清IL-7 水平均降低(P<0.05);与模型对照组比较,真武汤加地龙组和真武汤加地龙+顺铂组血清IL-7 水平均升高(P<0.05),顺铂组血清IL-7 水平降低(P<0.05);真武汤加地龙组和真武汤加地龙+顺铂组血清IL-7 水平高于顺铂组(P<0.05);真武汤加地龙组血清IL-7 水平高于真武汤加地龙+顺铂组(P<0.05).结论 真武汤加地龙联合顺铂对小鼠恶性胸腔积液疗效良好,可以显著降低小鼠胸水量,这可能与下调血清VEGF、上调IL-7表达有关,且真武汤加地龙可以逆转顺铂引起的IL-7 下降.

目的:探讨谷胱甘肽S-转移酶P1(GSTP1)对小鼠路易斯肺癌细胞放射敏感性的调控作用。方法:使用shRNA干扰表达慢病毒和阴性对照病毒分别感染路易斯肺癌(LLC)细胞，并筛选出稳转株；应用RT-PCR和蛋白免疫印迹(WB)法检测LLC细胞GSTP1 mRNA和蛋白质表达水平，验证敲低效果；使用细胞增殖检测(CCK-8)法检测照射后细胞活力；使用克隆形成实验检测照射后细胞克隆形成能力；使用流式细胞术检测照射后细胞的凋亡水平。构建荷瘤小鼠并进行照射，检测照射后肿瘤体积变化；TUNEL染色检测照射后肿瘤细胞凋亡水平；免疫荧光检测照射后肿瘤内CD 4+CD 8+T细胞数量。 结果:RT-PCR和WB结果显示shRNA慢病毒干扰后，GSTP1的mRNA和蛋白表达水平均明显下降。下调GSTP1能降低照射后细胞活力及克隆形成能力，并提高照射后细胞凋亡率。GSTP1敲低组荷瘤小鼠照射后肿瘤体积明显小于对照组，而肿瘤凋亡水平高于对照组，肿瘤内浸润CD 4+CD 8+T细胞数量亦高于对照组。 结论:下调GSTP1能够显著增加LLC细胞的放射敏感性，并增加肿瘤组织中淋巴细胞的浸润。

目的·探究叶酸循环代谢对髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)免疫抑制作用的调控机制.方法·在C57BL/6小鼠骨髓细胞的培养体系中加入细胞因子粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6),体外诱导MDSCs.利用流式细胞仪检测诱导MDSCs的程序性死亡受体配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)表达水平和活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生水平.采用磁珠分选出小鼠脾脏CD8+T细胞并用Celltrace violet或CFSE标记,再与MDSCs共培养,72 h后用流式细胞术检测CD8+T细胞增殖情况.通过实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)检测MDSCs中叶酸循环相关代谢酶的表达水平.采用叶酸循环代谢酶亚甲基四氢叶酸脱氢酶 2(methylenetetrahydrofolate dehydrogenase 2,MTHFD2)抑制剂DS18561882(DS18)和叶酸拮抗剂培美曲塞(Pemetrexed)处理MDSCs,并用流式分析检测MDSCs产生ROS和线粒体ROS的水平.将DS18或培美曲塞处理后的MDSCs与磁珠分选出来并用Celltrace violet或CFSE标记的CD8+T细胞共培养,72 h后用流式细胞术检测CD8+T细胞增殖情况.利用RNA测序(RNA-seq)检测DS18和培美曲塞处理后MDSCs在转录组水平的变化.建立小鼠结肠癌(mouse colon cancer cells,MC38)和Lewis 肺癌(Lewis lung carcinoma,LLC)皮下瘤模型.造模后第10天开始,采用Isotype抗体、抗CD8单抗(1 mg/kg,清除CD8+T细胞)、培美曲塞以及抗CD8单抗联合培美曲塞处理MC38荷瘤小鼠;利用Isotype抗体、抗Gr1单抗(1.25 mg/kg,清除MDSCs)、培美曲塞以及抗Gr1单抗联合培美曲塞处理MC38荷瘤小鼠;分别给予MC38和LLC荷瘤小鼠培美曲塞(50 mg/kg)、抗PD-1单克隆抗体(250 μg/kg)以及培美曲塞联用抗PD-1单克隆抗体治疗;第14天收集小鼠肿瘤组织,记录肿瘤大小,绘制肿瘤生长曲线.结果·流式结果显示诱导后的骨髓细胞PD-L1的表达升高,ROS的产生也增加,且明显抑制CD8+T细胞的增殖.qPCR结果显示MDSCs中叶酸循环相关代谢酶MTHFD2等表达升高.给予DS18和培美曲塞处理MDSCs会影响MDSCs的累积,抑制MDSCs的ROS产生,并解除对CD8 T细胞的免疫抑制.RNA-seq结果表明2种叶酸循环抑制剂处理后,与MDSCs分化相关基因S100钙结合蛋白a8(S100 calcium binding protein a8,S100a8)等下调,与MDSCs抑制功能相关基因如与ROS产生有关的基因细胞色素b-245β链(cytochrome b-245 beta chain,Cybb)等也有所下调.与对照组相比,培美曲塞处理组的小鼠肿瘤生长明显受到抑制.与培美曲塞处理组相比,抗CD8单抗联合培美曲塞处理组肿瘤进展加剧;与抗CD8单抗处理组相比,抗CD8单抗联合培美曲塞处理组肿瘤进展受到限制.清除MDSCs能显著抑制肿瘤生长,然而在清除MDSCs的荷瘤小鼠中,培美曲塞的抗肿瘤作用显著低于培美曲塞单独处理的小鼠.与抗PD-1抗体单独治疗相比,培美曲塞联用抗PD-1抗体治疗组的肿瘤生长限制更为显著.结论·培美曲塞依赖CD8+T细胞发挥抗肿瘤作用,并通过重编程MDSCs为抗肿瘤表型,进一步阻碍肿瘤生长.通过调控MDSCs叶酸循环阻断其免疫抑制能力,可增强免疫检查点阻断剂治疗肿瘤效果.

目的:探讨雷公藤内酯甲(Wilforlide A,WA)对肺癌细胞增殖和侵袭及巨噬细胞M2极化的影响.方法:(实验一):将肺癌细胞LLC按照WA处理浓度分为0、0.01、0.1、1和10μg/L组.WA孵育48h后,采用MTT法、Annexin V-FITC/PI染色法和Transwell法检测细胞增殖、凋亡和侵袭.采用Western blot检测Bcl-2、Bax、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平.(实验二):将单核巨噬细胞RAW264.7按照WA处理浓度分为0、0.01、0.1、1和10 μg/L组.采用MTT法检测细胞增殖.然后再将RAW264.7细胞为Control组、IL-4组、WA组和IL-4+WA组.使用10 ng/mL的IL-4和1μg/L的WA培养细胞24 h.采用ELISA法检测细胞培养上清液中CD206、Arg-1和IL-10水平.(实验三):细胞分组如下:Blank组、RAW264.7组、IL-4 RAW264.7组、WA组和IL-4 RAW264.7+WA组.按照分组方案,将LLC细胞分别与RAW264.7细胞、IL-4诱导RAW264.7细胞以及10μg/L的WA共培养24h,然后检测细胞增殖、凋亡、侵袭及细胞培养上清液中的M2型巨噬细胞标志物水平.流式细胞仪检测CD86和CD206阳性百分比.结果:(实验一):与0 μg/L组比较,0.1、1和10μg/L组LLC细胞的相对细胞活力降低(P＜0.05),细胞凋亡率和Bax蛋白相对表达水平均升高(P＜0.05),侵袭细胞数量以及Bcl-2、MMP-2和MMP-9蛋白相对表达水平均降低(P＜0.05).(实验二):与0μg/L组比较,10 μg/L组RAW264.7细胞的相对细胞活力降低(P＜0.05).与Control组比较,IL-4组RAW264.7细胞的CD206、Arg-1 和 IL-10 水平升高(P＜0.05),WA 组 RAW264.7 细胞的 CD206、Arg-1 和 IL-10 水平降低(P＜0.05).与 IL-4 组比较,IL-4+WA组 RAW264.7 细胞的 CD206、Arg-1 和 IL-10 水平降低(P＜0.05).(实验三):与 Blank 组比较,RAW264.7 组和 IL-4 RAW264.7 组的相对细胞活力和侵袭细胞数量均升高(P＜0.05),细胞凋亡率降低(P＜0.05).与RAW264.7组比较,IL-4 RAW264.7组的相对细胞活力和侵袭细胞数量升高(P＜0.05),细胞凋亡率降低(P＜0.05),CD206、Arg-1和IL-10水平升高(P＜0.05),CD86百分比降低,CD206百分比升高(P＜0.05).与IL-4RAW264.7比较,IL-4RAW264.7+WA组的相对细胞活力和侵袭细胞数量降低(P＜0.05),细胞凋亡率升高(P＜0.05),CD206、Arg-1和IL-10水平降低(P＜0.05),CD86百分比升高,CD206百分比降低(P＜0.05).结论:本研究表明雷公藤内酯甲具有抗NSCLC作用,其机制与抑制巨噬细胞的M2型极化有关.

目的 观察miR-888-5p对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、侵袭能力的影响,并探讨其可能的机制.方法 采用实时荧光定量PCR法检测NSCLC细胞系(A549、NCI-H1299、PC-9、LLC、NCI-H1650)及人正常肺上皮细胞系(BEAS-2B)miR-888-5p相对表达量,选择NSCLC细胞系中miR-888-5p相对表达量升高最明显的A549细胞用于后续实验.将A549细胞分为miR-888-5p mimics组、miR-888-5p inhibit组及scramble组,分别转染miR-888-5p mimics、miR-888-5p inhibit、scramble序列.取各组细胞,采用实时荧光定量PCR法检测细胞miR-888-5p相对表达量,MTT法检测培养0、24、48及72 h的细胞增殖能力,Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力(以侵袭细胞数表示).StarBase在线预测网站预测miR-888-5p的靶基因为Tob1,并经荧光素酶实验进行验证,采用Western blotting法检测细胞Tob1及上皮—间质转化相关指标E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)蛋白相对表达量,并计算p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3.结果 miR-888-5p mimics组、miR-888-5p inhibit组及scramble组miR-888-5p相对表达量分别为48.9±1.78、1.06±0.24、8.23±0.90,组间两两比较P均<0.05.随着培养时间的延长,三组细胞增殖能力均呈升高趋势;miR-888-5p mimics组、scramble组、miR-888-5p inhibit组同时间点细胞增殖能力、侵袭细胞数依次下降,组间两两比较P均<0.05.miR-888-5p mimics组、scramble组、miR-888-5p inhibit组细胞Tob1、E-cadherin蛋白相对表达量均依次升高,Vimentin蛋白相对表达量及p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3均依次降低(P均<0.05).结论 miR-888-5p可增强NSCLC细胞的增殖和侵袭能力,其机制可能与激活JAK2/STAT信号通路、靶向下调Tob1表达从而促进上皮—间质转化有关.