目的:观察蜗神经发育不良（cochlear nerve deficiency，CND）患者人工耳蜗植入后蜗神经对电刺激的反应，并比较其与蜗神经形态正常植入者之间的差异，探讨CND患者蜗神经损伤特点。方法:研究对象为2012年1月至2020年1月在山东省耳鼻喉医院接受人工耳蜗植入的患者，分为CND组及对照组。CND组51例，其中男20例、女31例，CI植入年龄（2.7±1.5）岁，4例双侧植入，共计55耳，术前均经影像学检查诊断为CND，其耳蜗结构正常；对照组21例，其中男10例、女11例，CI植入年龄（3.0±1.9）岁，1例为双侧植入，共计22耳，术前影像学检查耳蜗结构及蜗神经形态均正常。除3例（3耳）CND患者植入澳大利亚Cochlear公司CI422电极外，其余患者均植入CI24RECA或CI512电极。所有患者均开机6个月以上，采用Customer Sound EP软件记录耳蜗内电极的蜗神经电刺激复合动作电位（electrically evoked compound action potential，ECAP），并绘制耳蜗不同部位电极的ECAP增益曲线。采用广义线性混合效应模型分析分组及电极位置对ECAP诱发阈值、最大振幅、潜伏期及增益曲线坡度的影响。结果:对照组所测电极周围均可记录到ECAP反应，引出率为100%；而CND组ECAP总引出率为71%（859/1 210），且由1号电极至22号电极ECAP引出率逐渐降低。与对照组相比，CND组患者ECAP诱发阈值提高、最大振幅降低、增益曲线坡度减小、ECAP潜伏期延长，差异有统计学意义（ P值均<0.01）。统计分析显示，电极位置对CND组患者ECAP诱发阈值、最大振幅及增益曲线坡度有显著影响（ P值均<0.01），但对ECAP潜伏期无明显影响（ P>0.05）；而电极位置仅对对照组ECAP阈值有影响（ P<0.05）。CND患者由1号电极至22号电极ECAP诱发阈值呈逐渐增高趋势，而最大振幅及增益曲线坡度呈逐渐降低趋势。 结论:与蜗神经形态正常的感音神经性听力损失患者相比，CND患者不仅残余螺旋神经节细胞数量减少，其对电刺激的反应也存在不同程度的下降。CND患者蜗神经损伤程度个体间差异较大，总体上由耳蜗底转至耳蜗顶转呈逐渐加重趋势。

目的 探讨圆窗膜挑开前后健康豚鼠听功能的变化.方法 选取健康豚鼠30只(60耳),吸入异氟烷麻醉后打开听泡挑开圆窗膜挑开前后分别行听性脑干反应(ABR)、耳蜗电图(electrocochleogram,ECochG)、电诱发复合动作电位(electrically evoked compound action potentials,ECAP)及电诱发听性脑干反应(electrically evoked auditory brainstem responses,EABR)检测,进行统计学分析.结果 豚鼠54耳记录到分化良好且稳定的以Ⅲ波为主的ABR、ECochG、ECAP及EABR波形.圆窗膜挑开前后ABR阈值分别为36.67±7.76 dB SPL、98.81±10.74 dB SPL,二者之间有显著差异(P＜0.05);ECochG中CAP阈值分别为28.73±9.72 dB SPL、68.48±11.21 dB SPL,二者之间有显著差异(P＜0.05);ECAP阈值分别为0.35±0.11 mA、0.46±0.13 mA,二者之间有显著差异(P＜0.05);EABR阈值分别为0.21±0.05 mA、0.30±0.07 mA,二者之间有显著差异(P＜0.05).结论 圆窗膜挑开前后健康豚鼠的听功能出现明显变化,表现为听力下降.

目的 分析电镫骨肌反射阈值(electrically evoked stapedius reflex threshold,ESRT)、电刺激听性脑干反应(electrically evoked auditory brainstem response,EABR)阈值、电刺激听神经复合动作电位(electrically evoked auditory nerve compound action potentials,ECAP)阈值与人工耳蜗心理物理量测试中的最大舒适阈值(maximum comfort threshold,C值)及最小反应阈值(minimum response threshold,T 值)之间的关系,为力声特人工耳蜗植入者调试时参数设置提供参考.方法 选择 14 例具有一定响度辨别经验及言语交流能力且配合良好的语后聋力声特人工耳蜗植入者,平均年龄22.47±13.37岁,植入体型号为 LCI-20PI.在每个患者开机后 6±1 个月时,选取人工耳蜗低频(1 号)、中频(11 号)、高频(19 号)区域电极各一个,分别测试其 T 值、C 值、ESRT、EABR 及ECAP阈值,并进行相关性分析.结果 1、11 及 19 号电极 ESRT 引出率均为 100%;EABR 阈值引出率分别为100%、100%、78.57%;ECAP阈值引出率分别为 100%、100%、71.43%.各电极 ESRT与C值均存在显著相关性(P<0.05),相关系数分别为0.76、0.73、0.70,与 T 值均没有显著相关性(P>0.05).各电极 EABR 阈值、ECAP阈值与T值、C值均无显著相关性(P>0.05).结论 ESRT可以作为力声特人工耳蜗植入者调试中 C 值设置的首选参考指标.

目的 本研究旨在研究Waardenburg综合征(Waardenburg Syndrome,WS)患者的耳蜗中螺旋神经节细胞(spiral ganglion neuron,SGN)的数量与非综合征性感音神经性聋(Nonsyndromic sensorineural hearing loss,NS)患者相比是否具有差异,以及耳蜗不同位置之间的数量分布差异.方法 本研究采用横断面研究,收集2000年至2020年间就诊于中国人民解放军总医院行人工耳蜗植入的WS患者,收集患者相关信息,包括植入年龄、植入侧别、植入电极型号以及人工耳蜗植入术中的电刺激复合动作电位(Electrical compound action potential,ECAP)测量数据以及其幅值增长曲线(amplitude growth function,AGF).为控制植入年龄,植入电极类型等混杂因素带来的偏倚,制定对照组患者纳入标准,通过采用窗函数的计算方式,应用Matlab(R2016a)计算两组中不同刺激电极的slope值.依据刺激电极在耳蜗中的位置,将电极分为近蜗顶组,中间组以及近蜗底组,应用采用t检验比较两组患者中不同位置之间的slope值.结果 依据纳入以及排除标准,最终纳入16名WS患者以及16名NS患者,经两独立样本t检验证实两组之间具有可比性.WS患者与NS患者的总体slope具有显著差异(P=0.007＜0.05;Cohen's d = 1.022＞1),在不同位置中,以中间组以及近蜗底组的slope值具有显著差异(P=0.001＜0.05;P=0.026＜0.05,Co-hen's d_=1.302＞1;Cohen's d =0.828＞0.8).结论 WS患者SGN的数量明显少于NS患者,并且在耳蜗的不同位置数量改变不同,尤其以底回以及中回的数量改变尤为显著.

食道癌是我国常见的恶性肿瘤之一,其中90％的食道癌是食道鳞癌.目前的主要治疗手段为手术治疗及化疗.但是,在化疗治疗过程中,很多人会对化疗药物产生耐药,影响治疗效果.为了探求肿瘤细胞的耐药机制及为肿瘤耐药治疗提供实验模型,我们用顺铂反复诱导的方法建立了人食道癌细胞Ecap-109耐药细胞模型,为进一步研究奠定基础.

目的 分析Waardenburg综合征(Waardenburg Syndrome,WS)患者人工耳蜗植入效果与耳蜗残余螺旋神经节细胞衰退特征的相关性.方法 搜集2001年至2017年于解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科进行人工耳蜗植入手术并明确诊断为Waardenburg综合征的患者为病例组,根据电极型号及手术时术耳年龄,选取非综合征耳聋患者为对照组.分析术后1-4年调机数据T值(Threshold Level,T Level)、C值(Comfortable Level,C Level)以及动态范围(Dynanmic range,DR),作为耳蜗植入效果评价数据.以术中eCAP电刺激量-振幅函数线性回归分析的Slope值及预测阈值(Threshold,T)为指标,评价螺旋神经节细胞(Spiral Ganglion Cells,SGC)衰退特征.分析实验组与对照组的差异及两者之间的相关性.结果 术中eCAP测试:WS患者Slope值明显低于NS患者(t=-5.60,P<0.01),阈值明显高于对照组(t=2.09,P<0.05),且在4岁以上患者中差异更显著.WS患者中,4岁以上患者Slope值低于4岁以下患者(t=2.63,P<0.05),阈值T则高于4岁以下患者(t=-3.62,P<0.01).术后1-4年调机数据:WS患者T值明显高于NS患者(t=2.82,P<0.05),DR值明显低于NS患者(t=-8.86,P<0.01).两组患者术后1-4年的T、C值均无显著差异,而第3、4年的DR值高于第1、2年.结论 Waardenburg综合征患者SGC随着年龄的增加而减少,术后4年的调机数据两组患者变化趋势一致,表明人工耳蜗植入后的电刺激可能减缓SGC的衰退.早期植入可以使Waardenburg综合征患者获得更好的听觉植入效果.

目的 分析听神经发育不良患者人工耳蜗植入后引发听神经反应的刺激电量与正常者的区别以及听神经发育不良患者耳蜗不同区域听神经的功能状态是否相同.方法 听神经发育不良人工耳蜗植入患者11例,其中男6例,女5例,平均年龄3.94±2.18年,术前均行颞骨HRCT和内听道MRI检查,明确诊断为听神经发育不良;筛选年龄相近的听神经发育正常的人工耳蜗植入患者8例作为对照组.全部患者均单耳植入澳大利亚CI24 RECA植入体,应用Custom sound EP(4.0)软件,分别对3,6,9,12,15,18,21号电极进行ECAP阈值的测试.结果 1.CND组与对照组间在3,12,21号电极处ECAP阈值刺激电量均存在明显的统计学差异(P<0.05),即CND组ECAP阈值处刺激电量明显高于对照组;2.CND组3,12,21号电极之间引出ECAP阈值所需的刺激电量差异明显(P<0.05),且21号电极刺激电量高于12号电极刺激电量,12号电极刺激电量高于3号电极刺激电量;而对照组三个电极之间差异不明显(P>0.05)3.CND组内各个电极ECAP阈值引出率亦不相同,3号电极引出率100％(11/11),6、9号电极ECAP引出率72.7％(8/11),12、15、18号电极ECAP引出率45.4％(5/11),21号电极ECAP引出率27.2％(3/11).结论 听神经发育不良的患者,需要采用较高的刺激电量才能引起听神经的反应;听神经发育不良患者低频区域听神经的功能明显低于高频区域,低频区域需要比高频区域更高的刺激电量;听神经发育不良患者在调试编程时需要采用较低的刺激速率及较大的脉宽.

目的 比较随机引物与精确引物PCR扩增实施绿脓杆菌芳香硫酸酯酶(Pseudomonas aeruginosa arylsulfatase,PAAS)定点饱和突变的整体效率及成本,以建立高效实用的定点饱和突变方案.方法 以大肠杆菌碱性磷酸酶(Escherichia coli alkaline phosphatase,ECAP)与PAAS融合表达质粒为模板,分别用针对PAAS目的位点的随机引物、精确引物等量混合物及单个精确引物,进行全质粒PCR扩增构建定点饱和突变体库;碱裂解细胞后高通量测定PAAS突变体与ECAP活性比值进行筛选,比较3种定点饱和突变建库方案需筛选的单克隆数量、所获突变体种类、整体耗时、整体成本及影响因素.结果 用随机引物PCR对M72位定点饱和突变有明显密码子偏好性,筛选超600个单克隆仅获得10种预期突变体,但对G138位定点饱和突变未见明显的密码子偏好性且筛选不到150个单克隆获得18种预期突变体;精确引物等量混合物对M72位实施定点饱和突变,筛选不超过190个克隆成功获得19种预期突变体;单个精确引物对M72位逐个PCR实施定点饱和突变,仅各筛选2个单克隆就获得19种预期突变体.单个精确引物逐个PCR实施定点突变所获饱和突变体库完整,需筛选的单克隆数最少,总耗时和总成本最低;相比之下,用随机引物和精确引物等量混合物实施定点饱和突变时,所需筛选的单克隆数、整体耗时及成本均显著增加.结论 解析序列-活性关系时,用单个精确引物逐个PCR实施定点饱和突变有显著整体成本和效率优势;仅筛选阳性突变体时,用精确引物等量混合物进行PCR建库在成本和效率上更有优势.

目的 采用缝状开窗经迷路入路对内耳共同腔畸形患儿进行定制电极人工耳蜗植入术并评估术后效果.方法 回顾性分析2016年4月至2017年12月就诊于首都医科大学附属北京同仁医院进行人工耳蜗植入术的10例共同腔畸形的双耳重度或极重度感音神经性聋患儿临床资料(采用缝状开窗经迷路入路及定制电极),作为试验组,进行术中监测,并随访其术后效果;同时收集10例年龄及性别匹配的内耳结构正常的双耳重度或极重度感音神经性聋患儿作为对照组,收集两组患儿进行术前及开机6个月、1年的四种问卷评分,不同评估时间点间的比较采用Wilcoxon符号秩和检验,试验组与对照组的比较采用两独立样本的秩和检验.结果 所有患儿手术过程顺利,试验组患儿均未出现面瘫、脑脊液耳漏等并发症;试验组有8例患儿的平均阻抗在5kΩ以下;试验组患儿术中所有刺激电极的听觉神经反应遥测(ART)总引出率为55％(33/60),不同位置电极的电诱发复合动作电位(ECAP)反应幅值范围50.69～170.3μV;试验组患儿的手术平均时间46.4 min,与传统面隐窝入路植入非定制电极相比较短.试验组患儿的四项问卷评分在术前与开机6个月、开机1年比较,差异均有统计学意义;开机6个月与开机1年评分比较:听觉行为分级标准量表(CAP):2.0(2.0,3.0)分比4.0(3.8,4.0)分,Z=-3.109,P=0.002;言语可懂度分级标准量表(SIR):2.0(2.0,2.3)分比3.0(2.8,4.0)分,Z=-2.952,P=0.003;有意义使用言语量表(MUSS):4.0(3.3,6.0)分比9.0(6.0,11.8)分,Z=-3.421,P=0.001;有意义听觉整合量表或婴幼儿有意义听觉整合量表(MAIS或IT-MAIS):5.5(3.8,9.0)分比15.5(10.8,18.5)分,Z=-3.522,P=0.000).开机6个月和1年后,试验组四项问卷评分均差于对照组(P值均<0.01);术后1周及术后1年高分辨率颞骨CT显示电极贴壁良好,无移位.结论 采用缝状开窗经迷路入路对共同腔畸形患儿进行人工耳蜗植入术安全有效,术中操作难度较低,并发症发生率低,手术时间短;可用术中ART监测辅助判断听觉通路完整性,共同腔畸形患儿术后听觉康复周期较长,言语康复效果个体差异大,明显差于结构正常患儿.

目的 探讨细胞因子活化的杀伤细胞(CIK细胞)对耐药肿瘤细胞的杀伤作用.方法 选用人食管癌细胞株Ecap-109作为实验细胞,用顺铂(cDDP)反复刺激建立人食管癌细胞耐药细胞模型,检测cDDP对Ecap-109的抑制率和药物半数抑制浓度(IC50)确定诱导耐药效果,之后用CIK细胞对耐药的Ecap-109细胞进行体外杀伤实验,并与未诱导的Ecap-109细胞杀伤活性进行比较.结果 经长期反复诱导后,检测诱导的Ecap-109细胞IC50为70.869μmol/L,而亲本Ecap-109细胞为20.561μmol/L,两者相比有统计学意义(P<0.01).用此细胞做耐药细胞,同时用亲本Ecap-109细胞做对照,检测杀伤活性.CIK细胞对耐药细胞Ecap-109和亲本细胞Ecap-109的杀伤活性分别为83.01％和80.43％,两者比较没有显著差异.结论 CIK细胞对耐药肿瘤细胞Ecap-109的杀伤作用与对正常Ecap-109细胞的杀伤作用没有明显差异,证明CIK细胞可以杀伤耐药肿瘤细胞.