目的:对自制冷冻片微型载体（Strawtop）法与麦管法冷冻保存人微量精液的冻存效果进行系统评价。方法:采用前瞻性研究分析2018年5月1日至2018年6月30日期间于同济大学附属东方医院生殖医学中心行卵胞质内单精子显微注射（ICSI）助孕治疗的患者捐献的部分精液样本，比较自制Strawtop法与麦管法冷冻人精子复苏后的冷冻复苏率、DNA碎片指数（DNA fragmentation index，DFI）、超显微结构和受精能力与胚胎发育情况。结果:Strawtop法冻存人精子的冷冻复苏率（46.8%±17.1%）显著高于麦管法（23.1%±13.7%， P=0.001）；与冷冻前（18.9%±11.6%）相比，麦管法（33.5%±15.0%）冷冻精子复苏后的DFI显著增加（ P=0.019），而Strawtop法冻融人精子的DFI（23.4%±11.7%）与冷冻前相比差异无统计学意义（ P=0.375）；Strawtop法对冷冻精子超显微结构的损伤低于麦管法；Strawtop法冻融精子、麦管法冻融精子和新鲜精子的正常受精率、卵裂率和受精后48 h（第2日）的优质胚胎率差异均无统计学意义（ P>0.05）。 结论:Strawtop法冷冻人微量精液冷冻复苏率高于麦管法，复苏精子的损伤较小，且复苏后无需离心洗涤即可直接用于ICSI，具有较高的临床应用价值。

《WHO人类精液检查与处理实验室手册》是人类精液检查与精子评估程序和方法的重要参考文献。在手册第6版，精子活力采用4级分类系统评定，精子形态使用结构化顺序分析，不再表述精液参数参考值范围、限值和精液质量术语，强调实验室的质量保证和质量控制，删除了精子与宫颈黏液、卵透明带和卵母细胞相互作用试验，以及去透明带仓鼠卵穿透试验；新增加检测精子DNA损伤、精子染色质、精子非整倍体和精液白细胞介素的试验，新介绍玻璃化冷冻精子、计算机辅助精子分析（computer-aided sperm analysis，CASA）系统评价精子超活化运动、磁激活细胞分选术制备精子和检查射精顺序的方法。手册第6版中保留、修订的内容，在一定程度反映了国际上现今精液检查与精子评估的标准化、实用性和发展方向，对我国男科学实验室的发展有指导和促进作用。

目的:通过meta分析方法评价使用精子库冷冻精液助孕出生的子代出生缺陷情况，为精液冷冻在辅助生殖中应用的安全性和可靠性提供科学依据。方法:检索中国期刊全文数据库（CNKI）、万方数据库（Wanfang）、维普中文科技期刊数据库（VIP）、中国生物医学文献数据库（CBMDisc）及PubMed数据库截止至2019年10月1日所有收录的使用精子库冷冻精液行辅助生殖中有关子代出生缺陷的文献资料，严格按照纳入与排除标准筛选文献、提取资料，并根据STROBE声明中横断面研究评价标准进行文献质量评价。结果:最终共纳入13篇文献，总样本量为33 398例，出生缺陷率为1.09%（95% CI=0.85%~1.32%），低于国家卫健委（原卫生部）发布的检测数据（1.53%， P<0.001）。供精人工授精（artificial insemination by donor，AID）组出生缺陷率为1.06%（95% CI=0.78%~1.35%），体外受精（ in vitro fertilization，IVF）组为0.60%（95% CI=0.03%~1.22%），卵胞质内单精子注射（intracytoplasmic sperm injection，ICSI）组为1.35%（95% CI=0.06%~2.75%），差异无统计学意义（ P=0.785）。出生缺陷类别中，以循环系统先天性畸形发生率最高，其次为肌肉骨骼系统先天性畸形和变形、泌尿生殖系统先天性疾病等。 结论:使用精子库冷冻精液助孕未增加子代出生缺陷的风险，但受纳入研究的质量限制，上述结论尚需开展更多高质量研究予以验证。

微量精子样本不仅获取难度大(睾丸/附睾穿刺手术或显微外科取精术)、数目少且质量差,采用传统的冷冻方法还容易导致精子复苏率和回收率低下.为改善微量精子的冷冻保存效果,对现有冷冻保存技术进行了多方面改进,如新研发的多种微量精子冷冻载体在提高活动精子复苏率、精子回收率和操作便利性方面取得了较大进步.抗冻蛋白、卵磷脂、纳米颗粒和抗氧化剂等精子冷冻保护剂辅助因子在一定程度上改善了精子冷冻效果.精子玻璃化冷冻保存技术逐渐展现其发展潜力.综述微量精子冷冻保存技术在冷冻载体、冷冻保护剂和冷冻方案的优化方面的研究进展.

目的 分析四川地区供精志愿者染色体筛选结果,为精子库排除志愿者遗传缺陷提供依据.方法 选取2013年1月至2022年12月于四川大学华西第二医院生殖男科/人类精子库进行精液筛查的2 754例供精志愿者,分析其染色体核型结果.据染色体结果将供精志愿者分为染色体正常组(2 661例)、染色体核型异常组(7例)及染色体多态性组(86例),比较3组间的人群特征及精液参数.结果 2 754例供精志愿者中,有93例供精志愿者为染色体核型异常或染色体多态性,检出率为3.38％(93/2 754).染色体正常组、染色体核型异常组及染色体多态性组3组间的年龄、身高、体重及体质量指数(BMI)均无显著差异(P＞0.05);3组间冷冻前及复苏后的精液质量也均无显著差异(P＞0.05).93例染色体核型异常或染色体多态性的供精志愿者中,染色体核型异常的志愿者有7例,占比7.53％(7/93);染色体多态性86例,占比92.47％(86/93).染色体多态性中以D组(13、14、15号)和G组(21、22及Y)染色体随体区变异最多,多态性占比34.88％(30/86);其次为25例1号、9号、16号染色体次缢痕增加,多态性占比29.07％(25/86);9号染色体臂间倒位24例,多态性占比27.91％(24/86);Y染色体多态性变异7例,多态性占比8.14％(7/86).结论 对供精志愿者的染色体结果进行分析,严格把握其遗传学筛查标准,当志愿者出现染色体核型异常或染色体多态性时需将志愿者淘汰,以降低供精子代的遗传风险及出生缺陷.

目的 比较精液冷冻前、复苏后精子参数以及精子质膜蛋白磷脂酶C-zeta(Phospholipase C-zeta,PLCζ)表达水平的变化,探究冷冻保存对人类精子PLCζ的损伤作用.方法 选取2022 年2 月—2023 年7 月在本中心进行辅助生殖技术(Assisted reproductive technology,ART)治疗的不育男性患者30 份正常精液标本.将每份精液均分为冻前新鲜组和复苏后冷冻组.比较分析冷冻前、复苏后精子的活力(PR级),存活率和形态变化;密度梯度离心处理两组精液标本,通过免疫荧光和Western blot技术检测精子PLCζ表达水平.结果 与新鲜精子相比,冷冻保存明显降低精子的前向运动精子百分率(31.8%±5.5%)vs(59.3%±7.4%)(P<0.01),精子活动率(38.7%±4.6%)vs(69.07%±6.7%)(P<0.01)和精子存活率(48.2%±6.1%)vs(83.4%±7.2%)(P<0.01),精子正常形态率也发生改变(3.4%±0.7%)vs(12.4%±3.3%)(P<0.01),尾部卷曲的异常形态比例增多;冷冻复苏精子PLCζ荧光免疫反应减弱(33.08±9.74)vs(114.1±12.92)(P<0.01),染色为散在红色点状荧光,且特征性的染色定位缺失;Western blot实验中,精子PLCζ蛋白表达明显减弱.结论 冷冻保存不仅对精子参数有负面影响,同时对精子质膜蛋白PLCζ有损伤作用.

目的:探讨胰激肽原酶治疗对夫精宫腔内人工授精反复失败患者体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕结果的影响.方法:选取本院2016年1月-2020年12月因男性因素夫精宫腔内人工授精反复失败的192例患者作为研究对象,按照随机数字表法分为对照组和观察组各96例.对照组给予维生素E治疗,观察组给予胰激肽原酶治疗,两组连续治疗3个月后行IVF-ET.比较两组治疗前后精子质量、患者配偶的促排卵相关指标、胚胎体外发育情况以及妊娠结局.结果:治疗后两组精液量、精子浓度均升高,但两组比较无差异(P＞0.05);两组前向运动精子率、正常形态精子率均升高,且观察组高于对照组(P＜0.05);DFI降低且观察组低于对照组(P＜0.05).两组患者配偶的Gn使用时间及用量、hCG日子宫内膜厚度及雌二醇水平,以及获卵数、MⅡ卵数均无差异(P＞0.05).观察组受精率、2PN率、卵裂率、优胚率、囊胚形成率均高于对照组(P＜0.05).两组流产率无差异(P＞0.05);观察组新鲜移植和冷冻移植的临床妊娠率(90.9％、75.7％)、总累积活产/继续妊娠(74.0％)均高于对照组(46.2％、58.6％、45.8％)(均P＜0.05).结论:反复夫精宫腔内人工授精失败患者进行IVF-ET前给予胰激肽原酶治疗,能够提高临床妊娠率,且治疗时间短、成本低,有临床推广价值.

目的 探讨影响辅助生殖技术(ART)出生婴儿性别比及出生缺陷发生率的相关因素.方法 回顾性分析2012年1月-2016年7月在河北省计划生育科学技术研究院生殖医学中心接受ART治疗并成功分娩的患者396例,出生婴儿504例.分析年龄、受精方式、精液来源、胚胎来源和分娩胎数等因素对于出生婴儿性别及出生缺陷的影响.结果 ①504例出生婴儿中,男婴270例,女婴234例,性别比为115∶100,不同因素对出生婴儿性别比均无显著影响(P＞0.05).②出生缺陷儿9例,出生缺陷率为1.79％,其中年龄20 ～ 24岁组出生缺陷率显著高于25～29岁组(P＜0.05),冷冻胚胎移植组出生缺陷率低于新鲜胚胎移植组(P＜0.05),双胎分娩组出生缺陷率显著高于单胎分娩组(P＜0.05).③双胎出生缺陷儿占出生缺陷儿总数的88.89％(8/9),补救-卵胞浆内单精子注射(R-ICSI) 20 ～ 24岁组较25 ～29岁组双胎出生缺陷率高(P＜0.05),冷冻胚胎移植组双胎出生缺陷率显著低于新鲜胚胎移植组(P＜0.05).结论 患者年龄、受精方式、精液来源、胚胎来源和分娩胎数等因素不影响ART出生婴儿性别比,冷冻胚胎移植和单胎妊娠均能一定程度上降低出生缺陷风险.

目的 探索一种安全、便捷、有效的用于微量精子冷冻的方法.方法 选择内径130 μm的玻璃剥卵针50支作为冷冻载体,进行10个周期的反复冻融,检测其完整性,计算不同冷冻周期中载体折损率.选取50例经检测合格的精液标本,将密度调整至(0.5 ～1)×106/ml,使用精子冷冻保护剂按照1∶1体积混合预平衡10 min,每份标本装载2支载杆,计算装载时间,其中1支载杆作为快速冷冻组,迅速投入液氮中冷冻保存,另1支载杆采用液氮熏蒸30 min后再投入液氮中保存,比较两种方法解冻后精子的复苏率.结果 50支冷冻载体中,其中有36支完成全部10轮的冷冻-复苏周期测试,折损率为28.0％,损坏原因中78.6％为金属镊子直接夹持导致玻璃剥卵针破裂.玻璃剥卵针至少可耐受4个周期反复冻融,但之后约4％～6％的会出现自发破损.100支冷冻载体装载精子时间为45～398 s,平均为(112.3±94.1)s.冷冻前平均精子活力为65.6％±9.9％,快速冷冻复苏后平均精子活力为36.64％±8.7％,熏蒸法冷冻复苏后平均精子活力为23.48％±6.2％.快速冷冻法精子复苏率为55.9％±11.0％,熏蒸冷冻法精子复苏率为36.3％±9.8％,两者比较,差异具有统计学意义(F=18.31,P＜0.01).结论 采用剥卵针作为冷冻载体,并配合快速冷冻法,冷冻保存微量精子是一种安全、有效、简便的方法,适合临床广泛开展.

目的 探讨维生素E(Vit E)和Vit B12对冷冻精子活力和DNA的保护作用.方法 收集在我院生殖医学中心就诊的32例正常男性精液标本,按照添加维生素的不同分为3组:对照组:精液中只添加常规冷冻保护剂;Vit E组:添加常规冷冻保护剂和5 mM的VitE;Vit B12组:添加常规冷冻保护剂和0.5％的Vit B12.比较3组精子复苏后的精子活动力、存活率、顶体酶活性、精子DNA碎片率(SDF)等指标.结果 经液氮冷冻72 h复苏后,Vit E组活动力(a+b)级的精子数、精子存活率均显著高于对照组(P＜0.01);顶体酶活性在各组间比较无显著性差异(P＞0.05);Vit E组和Vit B12组的SDF[分别为(12.16±0.50)％、(13.02±0.48)％]均显著低于对照组的(15.18±0.78)％(P＜0.01);Vit E组的精子DNA平均晕轮直径[(6.76±0.14)μm]显著高于对照组[(6.09±0.18)μm](P＜0.01),Vit B12组与对照组比较无显著性差异(P＞0.05).结论 精子冷冻保护剂中添加适当浓度的Vit E可以缓解冻融过程对精子造成的伤害,在一定程度上提高冻融后精子活动力、存活率及精子DNA完整性.